Коллидин, как растворитель в хроматографии

Частным случаем рассматриваемого способа является хроматография на бумаге, или бумажная хроматография. При этом неподвижной жидкой фазой обычно служит вода, адсорбируемая волокнами бумаги в количестве до 20%, или другой полярный растворитель в качестве подвижной фазы чаще всего применяют бутиловый спирт, бензиловый спирт, коллидин, фенол, крезолы. Носителем служит хорошая фильтровальная бумага, достаточно однородная по толщине и плотности. [c.233]

Частным случаем описанного выше способа распределительной хроматографии является хроматография на бумаге, или бумажная хроматография. При этом неподвижной жидкой фазой обычно служит вода, адсорбированная волокнами фильтровальной бумаги в количестве до 18—22%, или же другой полярный растворитель в качестве подвижной фазы чаще всего применяют растворители полярного характера, например бутиловый спирт, бензиловый спирт, коллидин, фенол, крезолы или их смеси (см. ниже). Носителем неподвижной жидкой фазы служит специальная бумага для хроматографии или обычная фильтровальная бумага хорошего качества, достаточно однородная по толщине и плотности. [c.300]

Для тонкослойной хроматографии фенилтиогидантоиновых производных аминокислот в качестве сорбента использовали также силикагель, а в качестве растворителей системы ксилол — метанол (80 10) и гептан — дихлорэтан — пропионовая кислота (45 25 30) [186]. Проявление велось при помощи 1,7%-ного раствора нингидрина в смеси метанол — коллидин — уксусная кислота (15 2 5). Этим методом можно разделять фенилтиогидантоины, имеющие близкие значения Rf. [c.115]

В последнее время при определениях аминокислотного состава белков широко применяется хроматографический метод, открытый русским ученым М. С. Цветом. Особенно большое распространение получил метод распределительной хроматографии на бумаге. Сущность этого метода состоит в том, что на хроматографическую бумагу, которая отличается от обычной фильтровальной большей однородностью и чистотой, наносится небольшая капля раствора, содержащего аминокислоты. Затем конец бумаги с каплей раствора погружают в ванночку с каким-либо органическим растворителем (насыщенные водой бутиловый спирт, фенол, коллидин и др.). Ванночку и бумагу устанавливают в камеру, насыщенную парами воды и растворителя, его пропускают вдоль листа бумаги в течение нескольких часов. Вместе с [c.216]

Бумажная распределительная хроматография. Часто вместо силикагеля в качестве твердого носителя для полярной фазы удобно использовать фильтровальную бумагу - з, и В э ом методе лучше всего применять органический растворитель, частично смешивающийся с водой, например бутиловый спирт или коллидин. Типичным примером применения этого метода является [c.406]

Растворители, которыми чаще всего пользуются для разделения аминокислот,— это водный фенол и коллидин. Водный фенол готовят смешением в делительной воронке равных (по весу или объему) количеств кристаллического фенола и воды. Смесь сильно трясут и дают постоять. Через 6—8 часов смесь расслаивается феноловую фазу используют как проявляющий растворитель, наливают в сосуд, в который погружен низ хроматограммы, а водную — для насыщения воздуха камеры, где производится хроматография,— наливают прямо на дно камеры. Вторым растворителем для разделения аминокислот чаще всего берут коллидин (2-4-6-триметилпиридин). Если коллидина нет, его можно заменить смесью пиридина (66%), хинолина (17%) и воды (17%). [c.152]

Распределительная хроматография. Принцип распределительной хроматографии впервые описан Мартином и Синджем в их работе по аминокислотам. В этом случае, вместо равновесия между твердой и жидкой фазами, устанавливающегося при работе по методу Цветта, равновесие устанавливается между двумя жидкими фазами, причем одна из жидкостей поддерживается в состоянии геля или находится на подходящем субстрате. Сначала был применен силикагель, способный адсорбировать до 70% воды и сохраняющий при этом вид сухого порошка. При пропускании раствора исследуемой смеси в несмешивающемся с водой растворителе (например, в хлороформе) через колонку из силикагеля происходит разделение компонент смеси, обусловленное различиями их коэффициентов распределения. Впоследствии в качестве стационарной фазы стали применять листы фильтровальной бумаги, насыщенной водой. Наиболее подходящими органическими растворителями оказались фенол, н-бутиловый спирт, коллидин и некоторые другие растворители, частично смешивающиеся с водой. Индивидуальные аминокислоты были идентифицированы по цветным реакциям и охарактеризованы величинами Rf, представляющими собой отношения скорости движения зоны адсорбции к скорости движения фронта растворителя. Можно также измерять и использовать для идентификации отношение расстояния, на которое переместилось данное вещество, к расстоянию, на которое перемещается эталонное вещество (например [c.1512]

Глюкозамин и галактозамин были обнаружены как компоненты групповых веществ крови и разделены методом хроматографии на бумаге о применением в качестве растворителя коллидина [175, 176], но использование этого растворителя приводит к большим потерям. Эти сахара лучше разде- [c.211]

Принцип распределительной хроматографии основан на различии в коэффициентах распределения аминокислот между водой и органическим растворителем. Особенность метода распределительной хроматографии на бумаге по сравнению с обычной экстракцией ам.инокислот из водного раствора органическим растворителем заключается в том, что одну из фаз, чаще всего водную, помещают на какой-нибудь инертный твердый носитель, а органический растворитель — подвижная фаза,— проходя через первую, извлекает и распределяет аминокислоты на бумаге в соответствии с их коэффициентами распределения. Положение аминокислот на бумаге определяют по отношению скорости движения аминокислоты скорости движения фронта растворителя и обозначают Rf. Величина за висит в первую очередь от строения аминокислоты, затем от системы растворителей, pH среды и сорта бумаги, Чем полярнее аминокислота, тем меньше она растворяется в органических растворителях и тем меньше ее R . Увеличение длины углеродной цепи повышает . Введение в молекулу полярных групп, например, гидроксильной, аминной или карбоксильной понижает Rf Так, Rf фенилаланина в системе фенол/вода = 0,85, а тирозиит 0,51. Другие примеры изменения в зависимости от строения аминокислоты представлены на рис. 3 и 4. Подбирая соответствующие смеси растворителей, можно провести достаточно тонкое разделение аминокислот. Наиболее часто пользуются для такого разделения системами вода — фенол — аммиа вода — бутапол — уксусная кислота бутанол — аммиак — коллидин и т. д. Разделение можно проводить на одномерной или двумерной хроматограммах. Можно пользоваться также различными типами распределительной хроматографии на бумаге — нисходящей, восходящей и радиальной. Величины Rt для каждой из систем растворителей оказываются постоянными при соблюдении [c.479]

Еще более точные результаты получаются при помощи так называемой двухмерной хроматографии на бумаге. Для этого варианта применяют не полоски фильтровальной бумаги, а прямоугольники размером примерно 400x500 мм. Каплю исследуемого раствора наносят вблизи одной из вершин прямоугольника, а хроматограмму проявляют дважды различными растворителями, например фенолом и коллидином, сперва одним растворителем, а затем, после поворота на 90°,—другим. [c.234]

Бумажная распределительная хроматография. Часто вместо силикагеля в качестве твердого носителя для полярной фазы удобно использовать фильтровальную бумагу. В этом случае лучше всего применять органический растворитель, частично смешивающийся с водой, например бутанол или коллидин. Типичным примером применения этого метода является анализ смеси аминокислот, выполняемый следующим образом. На полоске фильтровальной бумаги размером 2,5X15 см в середине узкой стороны на расстоянии около 2,5 см от одного конца помещают небольшую каплю анализируемого раствора (рис. 18.2). Эту точку отмечают карандашом. Затем растворитель выпаривают и полоску подвешивают за другой конец в высоком сосуде (рис. 18.3). Нижний конец полоски, утяжеленный бумажной скрепкой, погружают в смесь бутанола и воды. Верх стеклянного цилиндра закрывают куском картона, так чтобы висящая полоска бумаги омывалась парами обоих растворителей. Поднимаясь вверх вследствие капиллярности, жидкость компоненты образца переносит с различными [c.257]

В распределительной хроматографии нашли применение следующие подвижные растворители хлороформ, бутиловый спирт, амиловый спирт, изомасляная кислота, крезол, пиридин, коллидин (смесь 2-4-б-триметилпиридина и 2-4-диметилпири-дина), хинолин и некоторые другие менее употребляемые растворители. Часто применяются различные специально эмпирически подобранные смеси. [c.35]

Техника получения бумажных хроматограмм была уже изложена в общих чертах выше. При хроматографировании аминокислот на бумаге было замечено (Консден и др., 1944), что аминокислоты вступают в реакцию с металлами (например, медью), которые способны образовывать соли с аминокислотами. Это обстоятельство мешает получению достаточно четких хроматограмм. Для устранения указанного дефекта к растворителям добавляют в небольшом количестве такие соединения, которые осаждали бы подобные металлы или образовывали с ними комплексные соедипепия. Такими добавками могут служить HgS, H N, NHg, а-бензоиноксим (купрон). Можно также предварительно обработать бумагу слабым раствором K4Fe(GN)g. Наиболее употребительными растворителями для бумажной хроматографии аминокислот и пептидов являются фенол и коллидин, предварительно насыщенные водой. [c.147]

С (примечание 4). Смесь 15,0 г 6, 10-диметилун-декадиен-5, 9-она-2-[Сг ], 10 г 1, 4-дибромбутапа, 2, 3 г магния и кристаллика йода нагревают в атмосфере азота на паровой бане в течение 30 мин. Затем приливают 45 мл абсолютного эфира и кипятят смесь с обратным холодильником в течение ночи, добавляя по кристаллику йода каждые 45 мин. По окончании кипячения реакционную смесь гидролизуют водой и разбавленной соляной кислотой, эфирный экстракт сушат и концентрируют перегонкой. К раствору добавляют 30 мл сухого бензола и 15 мл трехбромистого фосфора и нагревают смесь на паровой бане в течение 12 час. Затем смесь охлаждают, выливают в разбавленную соляную кислоту с ледяной водой, отделяют водный слой и экстрагируют эфиром. Экстракты объединяют, промывают разбавленной щелочью, водой и насыщенным раствором поваренной соли, затем сушат и отгоняют растворители. Остаток кипятят с обратным холодильником в течение 3 час., добавляя 60. чл коллидина. Затем смесь разбавляют водой и экстрагируют четырьмя порциями эфира. Экстракт промывают, сушат и разгоняют, собирая фракцию, кипящую ири 210—212° (1,5 мм рт. ст.) выход 3,1 г (19,7%). Методами хроматографии на бумаге и радиоавтографии установлено, что продукт идентичен сквалену [1], выделенному из гексагидрохлорида, полученного из природного соединения (примечание 5). [c.241]

Вскоре после проведения этого исследования Консден, Гордон и Мартин [372] применили к пептидам свой знаменитый метод хроматографии а бумаге. Выбор подвижной фазы, очевидно, диктуется природой пептидов, подлежащих разделению, вследствие чего необходимы предварительные пробы однако некоторые съедения а выборе подвижной фазы в настоящее время можно найти в литературе [340, 349, 373 и пр.]. Положение пептидов на бумаге следует определять, не вызывая слишком сильного их разрушения. Для этой цели можно прибегнуть к флуоресценции [374] можно также использовать весьма разбавленный (0,02%-ный) раствор нингидрина или концентрированный его раствор, который наносится в отдельных точках специальной щеточкой [375а]. Крупные пептиды обнаруживаются с трудом, но их редко анализируют на бумаге. С помощью специальных цветных реакций (табл. 7) оказывается возможным установить расположение некоторых пептидов на хроматограмме [3756]. Двумерное хроматографирование на бумаге обладает действительно поразительной разрешающей способностью, которую целесообразно использовать для конечного разделения групп , полученных при предварительном фракционировании с помощью ионофореза, ионного обмена или адсорбции. Некоторые исследователи, располагающие очень малыми количествами дорогостоящего соединения, удовлетворены тем, что они могут провести хроматограмму на бумаге, используя для этого количество пептида, не превышающее примерно 1 мг. Другие исследователи сожалеют, что опасность перегрузки бумаги не позволяет им воспользоваться большими количествами, так как последующее разделение пятен и окончательная идентификация пятен, являющихся, повидимому, чистыми, представляет собой довольно деликатную операцию. Эти исследователи, однако, могут обратиться к двум другим методам либо к применению толстой бумаги [376] или хроматопилии [377а], либо к использованию колонок. Для фракционирования пептидов на бумаге можно применять ряд растворителей, в числе которых должны быть упомянуты фенол или крезол с аммиаком, колли-дин, пиридин -f- коллидин, фенол с буферным раствором, бутиловый спирт -f- уксусная (или муравьиная) кислота и фосфатные буферные растворы. [c.155]

Цефалоспорины были разделены с помощью бумажной хроматографии в системах бутанол-1—уксусная кислота — вода [165—168] и бутанол-1—этанол — вода [169—171] различного состава, а также в других системах растворителей, содержащих либо не содержащих буферы i[165, 169—178]. Ряд сложных эфиров цефалоспоринов хроматографировали на пластинках с силикагелем в девяти системах растворителей [179]. Зоны обнаруживали путем опрыскивания хроматограмм раствором нингидрина в смеси этанола, 2,4,6-коллидина и уксусной кислоты и последующего нагревания. Цефалоспорин С хроматографировала [c.150]

В основе его лежит принцип многократного повторения элементарных актов распределения между двумя фазами, из которых одна остается неподвижной (водная фаза, сорбированная бумагой), а другая, неводная (органический растворитель), движется по ее поверхности. Разделение в этом случае происходит за счет различий в коэффициентах распределения веществ между фазами. В качестве подвижной фазы чаще всего используются насыщенные водой фенолы, нормальный бутиловый спирт в смеси с уксусной кислотой, амиловый спирт, пиридин, коллидин, лютидин и другие органические растворители. Само разделение проводится в двух формах одномерной и двухмерной хроматографии. [c.15]

Подбор подходящего растворителя очень важен при хроматографии на бумаге. Для разделения на бумаге растворитель должен до некоторой степени смешиваться с водой, поскольку фронт образуется при адсорбции воды бумагой в процессе продвижения растворителя. Однако использование большого количества воды нежелательно, а применение чрезмерно насыщенных водой органических растворителей может привести к получению плохих хроматограмм. Как правило, растворитель не должен содержать более 10—20 вес.% воды. С другой стороны, имеются растворители, смешивающиеся с водой в любых отношениях, в которых процентное содержание воды может быть выше например, были использованы изопропаноловые смеси, содержащие до 40—50% воды. Растворители с низким давлением пара неудовлетворительны, потому что могут мешать окраске хроматограммы или способствовать распространению растворенных веществ на большую площадь, что приводит к образованию плохих хроматограмм. Коллидин, например, нельзя употреблять с йодоплатиновым индикатором для метионина, потому что, даже если прогреть хроматограмму в течение 1 часа при 120°, следы коллидина, остающиеся на бумаге, обесцвечивают индикатор. Растворители с высоким давлением пара следует употреблять с осторожностью, так как они чувствительны к колебаниям температуры и имеют тенденцию к испарению с бумаги или к конденсации на бумаге, что вызывает фазовые нарушения, если температура тщательно не регулируется. Растворитель не должен быть обязательно однородным веществом. Например, при хроматографии различных сахаров хорошими растворителями являются смесь бутанола с уксусной кислотой и смесь этилацетата с пиридином, насыщенная водой. В табл. 25 приведены некоторые растворители и индикаторы, использующиеся для некоторых типов органических соединений. Более подробную сводку можно найти в литературе [39]. [c.362]