Распределительная хроматография углеводов

Впервые разделение углеводов методом распределительной хроматографии на ионообменных смолах в смесях растворителей различной полярности было описано в 1952 г. [1]. В последние годы метод был значительно усовершенствован. В обзорной статье [2] приведены данные о влиянии ряда факторов на разделение, а также примеры использования метода. В качестве элюента при разделении сахаров и их производных наиболее пригоден водный спирт, и далее речь будет идти только об этом элюенте. [c.55]

В 1944 г. Мартин и др. [7] предложили заменить инертный носитель фильтровальной бумагой, заложив тем самым экспериментальные основы распределительной хроматографии. Бумага удерживает в порах молекулы воды, сорбируя их из воздуха (неподвижный растворитель). При соприкосновении подвижного растворителя с бумагой, на которую нанесены хроматографируемые вещества, последние переходят в подвижную фазу и перемещаются с различными скоростями, вследствие чего и происходит их разделение. В настоящее время распределительная хроматография на бумаге нашла широкое применение для разделения различных веществ аминокислот, белков, углеводов, антибиотиков, неорганических веществ и др. [2, 3, 4, 7—10]. [c.74]

Распределительная хроматография на бумаге или ка колонках. По хроматографическому анализу углеводов существуют обширные исследования [25, 32, 33, 37]. Разработано несколько приемов разделения (хроматография нисходящая, восходящая, радиальная и др.). Предложено большое количество растворителей и приемов хроматографирования. Четкое разделение компонентов хроматографией на бумаге зависит от применяемой системы растворителей, марки бумаги, времени разделения, температурных условий и природы углеводного состава гидролизатов. Поэтому правильный выбор условий хроматографирования в каждом отдельном случае решает успех наилучшего разделения компонентов. [c.70]

Хроматография на бумаге является одной из форм распределительной хроматографии, где бумага играет роль носителя неподвижной фазы — воды, сорбированной на целлюлозе. В качестве подвижной фазы используют различные смеси органических растворителей с водой. Для разделения углеводов применяют следующие растворители [c.186]

Полный гидролиз полисахарида проводят для установления природы и соотношения составляющих его моносахаридных остатков. Качественный анализ гидролизата в настоящее время неизменно выполняют с помощью распределительной хроматографии на бумаге, что требует лишь микроколичеств сахаров и вместе с тем дает возможность идентифицировать присутствующие нейтральные, основные и кислые моносахариды. По хроматографии углеводов существует обширная литература [91, 97, 127, 131, 162]. Было испытано множество систем растворителей и много обнаруживающих реагентов как специфических, так и неспецифических, и составлены таблицы относительных скоростей движения сахаров на бумажных хроматограммах [131]. Для окончательной идентификации определенного сахара не достаточно одного только хроматографического анализа. [c.303]

В настоящее время распределительную хроматографию на бумаге широко применяют - для разделения аминокислот, аминов, белков, углеводов, алифатических кислот, стероидов, пуринов, фенолов, антибиотиков, витаминов, неорганических соединений и т. д. [c.106]

Использование метода распределительной хроматографии на бумаге для разделения углеводов имеет ряд преимуществ перед, другими способами, так как дает возможность в небольшой пробе провести анализ сложной смеси сахаров. [c.155]

Много работ опубликовано по хроматографии углеводов, особенно В. В. Рачинским, Б. Н. Степаненко. Установив зависимость между структурой и величиной Rf, можно оценить степень полимеризации олигосахаридов, влияние положения оксигрупп. На бумаге из стеклянных волокон, предварительно забуференной, можно четко разделять различные монозы, биозы, триозы, галактуровую и глюкуроновую кислоты. В микроорганизмах можно определять связанные углеводы, свободные MOHO- и дисахариды в растительном материале, также свободные олигосахариды, свободные углеводы в крови и моче, молоке, наблюдать гидролиз и синтез олиго- и полисахаридов, энзиматические превращения моносахаридов в связи с процессами окисления, восстановления, изомеризации, реакции углеводов с азотсодержащими соединениями, контролировать чистоту углеводов и идентифицировать их, определять кислоты и ла-ктоны, уроновые кислоты, кетокислоты, метилированные сахара, дезоксисахара, аминосахара, полисахариды, инозит, сорбит, эфиры фосфорной кислоты, структуру галактоманнана, эремурана, новых галактозидов, проследить превращение сахарозы, синтез олигосахаридов в растущей культуре. Бумажная хроматография применяется в сахарной промышленности, в пивоварении. Мало еще разработана теория распределительной хроматографии углеводов, мало изучены возможности разделения оптических изомеров и антиподов. [c.201]

Работа 52. Качественный анализ смеси углеводов методом распределительной хроматографии на фильтровальной бумаге [c.90]

Частичный гидролиз полисахаридов позволяет выделить фрагменты с промежуточной молекулярной массой и разделить их с помощью таких хроматографических методов, как гель-фильтрация, ионообменная или распределительная хроматография. Строение этих более простых олигосахаридов установить легче, чем строение исходного полисахарида. Если все гликозидные связи в полисахариде гидролизуются с одной и той же скоростью (как, например, в линейных гомополисахаридах), то, например, в случае-амилозы продукт частичного гидролиза будет состоять из глюко.чы и ряда олигосахаридов — мальтозы, мальтотриозы и мальтотетра-озы. В гетерополисахаридах присутствуют гликозидные связи разных типов, и скорости гидролиза их различны. Фуранозиды обычно гидролизуются быстрее пиранозидов в 10—1000 раз, что приводит например, к удалению остатков арабинофуранозы, связанных с остатками ксилопиранозы в арабиноксиланах. Условия гидролиза влияют также на специфичность расщепления полисахарида. (1- 6)-Связи более устойчивы к действию минеральных кислот чем (1- 4)-связи, однако если гидролиз проводился в уксусном ангидриде, содержащем около 5 % серной кислоты, менее устойчивы (1-)-б)-связи. Параллельное использование этих двух методов гидролиза, приводящих к образованию фрагментов разного состава, позволит лучше воспроизвести строение полисахарида. Концентрация углеводов в реакционной смеси должна быть ниже [c.219]

Распределительная хроматография впервые решила задачу полного разделения смесей аминокислот, присутствующих в гидролизатах белков, идентификации пептидов, разделения смесей углеводов, смесей антибиотиков. [c.197]

Разделение производных углеводов методом газо-жидкостной распределительной хроматографии. [c.139]

СКОС определение аспарагиновой кислоты в белках. И. И. Жуков и А. В. Маркович глубоко разработали теорию электродиализа и б связи с этим успешно применили метод электродиализа для разделения белков. Чрезвычайно много сделали советские ученые в разработке хроматографического анализа, открытого знаменитым русским ученым М. С. Цветом (1903 г.) и получившего за последние годы исключительно важное значение для разделения смесей аминокислот, углеводов, органических кислот, пигментов и многих других веществ в частности, необходимо отметить разработку теории молекулярной хроматографии М. М. Дубининым, ионообменной хроматографической адсорбции Е. Н. Гапоном, распределительной хроматографии Н. А. Фуксом и др. [c.10]

Газо-жидкостная распределительная хроматография производных углеводов. Часть 1. Разделение ацетатов многоатомных спиртов и сахаров. [c.137]

Газо-жидкостная распределительная хроматография производных углеводов. Часть II. Разделение метилгликозидов и ацетилированных дисахаридов. [c.137]

При добавлении к элюентам полярных органических компонентов, например спиртов, ионный обмен более или менее подавляется и разделение проходит по механиз.лу распределительной хроматографии. Неподвижная фаза в обменнике при этом состоит из воды, которая адсорбируется в результате гидратации носителей заряда. В то же время элюент состоит из смеси вода — спирт. Такие системы с успехом использовались для разделения сахаров и углеводов (см. [7]). [c.197]

Жидкостная распределительная хроматография на бумаге используется для разделения очень многих типов веществ, включая простые углеводы, липиды, нуклеотиды и пептиды. Кроме того, разработаны различные модификации этого метода, в которых целлюлоза заменена синтетическими полимерами, кремнеземом, окисью алюминия или производными целлюлозы. Для проведения хроматографии могут быть использованы самые разнообразные растворители. В одной из разновидностей этого метода, называемой тонкослойной хроматографией, смесь веществ разделяется с помощью восходящей хроматографии па твердом носителе, нанесенном равномерным тонким слоем на стеклянную или пластмассовую пластинку. [c.150]

ЛИПИДОВ на сефадексе LH-20 с применением с качестве элюента хлороформа и этанола. Первая методика оказалась пригодной для отделения глицериновых эфиров от эфиров гликолей, простых эфиров от сложных эфиров и других нейтральных липидов (рис. 27.1). Для полного разделения использовалась комбинация гель-хроматографии и-тонкослойной хроматографии на кремневой кислоте. Кальдерон и Бауман [31] анализировали смеси липидов этиленгликоля, липидов глицирина, углеводов и восков. Наилучшие результаты были получены путем сочетания гель-хроматографии на сефадексе LH-20 с распределительной хроматографией [32]. [c.201]

II. Устойчив при pH = 1- 8, ВЭТТ до 0,1 мм, 12. Среднеполярный сорбент, пригоден для разделения неполярных и полярных веществ (соответственно методами распределительной хроматографии нормальной или с обращенными фазами), ВЭТТ до 0,1 мм. 13. Для разделения сильнополярных веществ, ВЭТТ до 0,1 мм. Устойчив в области pH от 2 до 8—9, в кислых средах проявляет анионообменные свойства с обменной емкостью 0,3—0,4 мг-экв/г. Сорбент не пригоден для хроматографий перекисей и веществ с карбонильными группами (аминогруппы окисляются первыми и образуют шиффовы основания со вторыми). 14. Для разделения сахаров и полиоксисоединений (возможно, подобен сорбенту № 13), ВЭТТ до 0,5 мм. В сильнокислой и сильнощелочной средах неустойчив. 18. Рекомендуется для разделения биологически активных веществ. 19. Селективен к арои атическим и нитросоединениям. 24 —28. Поставляются только в колонках. 26. Устойчив при pH = 2- 9. 31. ВЭТТ до 0,06 мм. 33. Термостойкость 70 °С. 34—39. Поверхность пористого стекла со средним диаметром пор от 4 (№ 34) до 250 (] Го 39) нм покрыта мономолекулярным (тофциной 1,8 нм) слоем углевода. Удельный объем пор (в см г) не менее 0,1 (№ 34), 0,4 (№ 35), 1,0 (№ 36, 37), 1,2 (№ 38), 1,5 (№ 39). 40. На основе стекла со средним диаметром пор 55 нм. 41, 42. Хелатные сорбенты С высокой специфичностью к неорганическим ионам. Приготовлены на основе аминированного пористого стекла с диаметром пор 55 нм для закрепления лиганда на стекле использована реакция диазотирования. Сорбент № 41 применяют для концентрирования и разделения Со, N1, Си, Ре, А1, 2г, Т1, V и других металлов. 44—48. Содержание привитой фазы 10—40 мкмоль/см , емкость поглощения белков до 10 мг/см . Поставляют в 50%-ной водной суспензии с антисептиком (1% толуола). 49—52. Предназначены для разделение полиароматических (№ 49) и галогенированных (№ 50) соединений, эфиров нитроцеллюлозы (№ 51) и биогенных веществ (№ 52). 57—58. Устойчивы при pH = 2- 9. 59, 60. Содержание привитых фаз около 40 мкмоль/см . [c.214]

Распределительная хроматография была впервые применена для разделения углеводов в 1949 г. [11. С тех пор этот метод широко используется препаративной химии углеводов и ему посвяш ено несколько превосходных обзоров [2, 31. Область применения этого метода в химии углеводов настолько обширна, что нет необходимости рассматривать частные примеры его использования. [c.16]

Из сорбентов, указанных в разд. 7.2.1, только силикагель обладает механической прочностью, обеспечивающей возможность проведения хроматографии при высоких давлениях, характерных для современной ВЭЖХ. Действительно, этот материал является в высшей степени подходящим носителем для ВЭЖХ по ряду причин [9], и в настоящее время подавляющее большинство подобного рода разделений проводится на колонках с тон-коизмельченным силикагелем или его производными подходящей полярности, полученными в результате химической модификации силикагеля. Хроматография углеводов не составляет исключения. Высокая полярность немодифицированного силикагеля препятствует его применению в хроматографии незамещенных сахаров, однако химическая обработка поверхности силикагеля позволяет получить производные, отвечающие всем требованиям ВЭЖХ свободных углеводов. Разработка сорбентов, в которых подходящая для распределительной хроматографии сахаров фаза присоединена к тонкоизмельченному силикагелю, устраняет необходимость получения производных, за исключением тех случаев, когда эта процедура имеет несомненные преимущества (см. разд. 7.2.2.1). Такого рода сорбенты в настоящее время широко используются при анализе углеводов. [c.7]

Несколько прекрасных обзоров, посвященных этому методу и его применению для разделения углеводов, опубликовано в конце 60-х — начале 70-х годов [46, 58, 59]. В распределительной хроматографии существенную роль играют несколько факторов. Наиболее важным представляется характер распределения полярных молекул углеводов между подвижной фазой и смолой, где содержание воды больше, однако взаимодействия этих молекул с противоионами смолы и собственно матрицей также в значительной степени влияют на результат разделения. Все это обусловливает сложность механизма хроматографии и как следствие в некоторой степени непредсказуемость значений времен удерживания для различных сахаров. Как правило, значения коэффициентов распределения увеличиваются с ростом, числа гидроксильных групп в сахарах, однако в некоторых случаях наблюдаются исключения при хроматографии на анионообменной смоле в сульфатной форме о-талоза элюируется в-887о-ном этаноле раньше о-ксилозы [57]. При замене противоиона смолы нередко также происходит обращение порядка элюирования [56]. Значения коэффициентов распределения увеличиваются с ростом концентрации этанола и уменьшаются с повышением температуры, однако изменение перечисленных параметров обычно не сказывается на порядке элюирования сахаров с одной и той же смолы. [c.19]

Бумажная распределительная хроматография. Хроматография на бумаге применяется для разделения микроколичеств смеси веществ. Этот метод приобрел огромное значение в исследовании белков, углеводов, жиров, антибиотиков, гормонов, кароти-ноидов, алкалоидов и многих других природных соединений. [c.129]

Для разделения углеводов по величине их молекул можно использовать активированный уголь [87, 129], но этим способом нельзя отделить моносахариды друг от друга. Часто применяют распределительную хроматографию, в которой стационарной фазой служит вода. Хроматографию на целлюлозе при промывании к-бутанолом, насыщенным водой, содержащей 1 % аммиака, использовали для разделения многих нейтральных и метилированных сахаров [130, 131], хотя Гарделл [132] сообщил, что на таких колонках нельзя получить резких пиков. Автор применил поэтому колонки с крахмалом и смесью к-бутанол — к-пропанол — вода (4 1 1, но объему) в качестве подвижной фазы и получил хорошее разделение смеси рамнозы, фукозы, рибозы, ксилозы, маннозы, глюкозы и галактозы. Выходы составляли 95— [c.208]

Мартин и Портер [611, используя метод распределительной хроматографии, первыми показали, что экстракты поджелудочной железы быка содержат две белковые фракции с рибонуклеазпой активностью. С помощью хроматографии на амберлите ШС-50 [62] было установлено, что эти два компонента, рибонуклеаза А и рибонуклеаза В, содержатся в соотношении 10 1. Из двух форм фермента в настоящее время наиболее полно изучена рибонуклеаза А. Однако недавно Плуммер и Хирс [63] описали метод выделения и охарактеризовали рибонуклеазу В. Интересен тот факт, что рибонуклеаза В является гликопротеином, тогда как рибонуклеаза А не содержит углеводов. [c.243]