Аспарагиновая кислота определение методом

Наиболее общим методом определения концентрации пептидов является колориметрия продуктов реакции с нингидрином [2]. Это один из наиболее чувствительных колориметрических методов. Для обнаружения аминокислот и пептидов разработаны как обычный, так и полностью автоматизированный варианты, причем нингидриновый реагент не вызывает коррозии и его можно подавать обычным микронасосом. Реакция идет по свободным аминогруппам, но в некоторых случаях хромофор образуется с низким выходом. Данные по окрашиванию дипептидов можно найти в работе [3]. У всех дипептидов, содержащих в качестве Ы-концевой аминокислоты аргинин, треонин, серин, глутаминовую кислоту, глицин, фенилаланин, метионин, лейцин и тирозин, интенсивность окраски составляет 1,6-10 у лейцина эта величина составляет 1,7-10 . У дипептидов с М-концевым лизином и аспарагиновой кислотой интенсивность окраски несколько выше (на 20 и 29% соответственно), а дипептиды с Ы-концевым гистидином и триптофаном проявляются несколько слабее (42 и 67% соответственно от средней интенсивности). Дипептиды с М-концевым пролином, валином и изолейцином окрашиваются очень слабо [2,7 6,4 и 8,5% от средней (1,6- 10 ) интенсивности]. [c.391]

Совершенно очевидно, что при изучении метаболических путей с помощью радиоактивной метки необходимо соблюдать определенные условия опыта и учитывать возможные ограничения этого метода. В процессе равновесно и непрерывно действующих метаболических превращений концентрации и количества различных биохимических промежуточных соединений достигают постоянных величин. Пул определенного метаболита достигает постоянного размера, когда между скоростью образования и убыли этого метаболита устанавливается равновесие, т. е. когда в системе устанавливается стационарное состояние. Так осуществляется регуляция метаболических путей у микробов, когда деление клеток протекает с постоянной скоростью при неизменяющейся внешней среде. В этих условиях радиоактивность начнет включаться в первый метаболит, удельная радиоактивность этого метаболита будет повышаться, пока не сравняется с удельной радиоактивностью источника изотопа, вводимого в клетки. Тем временем изотоп начнет включаться в следующий метаболит, и там быстро установится та же удельная радиоактивность, хотя количество включенной радиоактивности, как и в первом случае, будет зависеть от величины пула этого метаболита. Таким образом, определяя радиоактивность, можно выяснить последовательность реакций, но только в том случае, если равновесные концентрации метаболитов остаются постоянными. Ясно также, что в ходе данной последовательности реакций может происходить образование какого-то промежуточного продукта, кинетика образования и распада которого будут таковыми, что его пул будет очень незначительным. Тогда радиоактивность пула может оказаться настолько незначительной, что это соединение будет невозможно идентифицировать на хроматограмме. С другой стороны, не исключено, что меченое соединение, не являющееся членом рассматриваемой последовательности реакций, будет быстро образовываться из какого-нибудь промежуточного соединения. Так, щавелевоуксусная кислота может быть настоящим промежуточным соединением, а при радиоавтографии все-таки будет обнаруживаться аспарагиновая кислота. Этот может произойти в результате быстрого обмена углеродными скелетами между щавелевоуксусной и аспарагиновой кислотами, если пул последней будет значительно выше. Данные о существовании определенного метаболического процесса, полученные с помощью изо- [c.37]

Для определения малеинового ангидрида в сополимере стирол-малеиновый ангидрид или винилацетат-малеиновый ангидрид кипятят образец в буферном растворе с рН=3 (фосфорная кислота— вода—гидроокись лития) и затем снимают полярограмму, определяя малеиновую кислоту, образовавшуюся при гидролизе малеинового ангидрида ". Гидролитический метод разложения применяют таклсе для полярографического определения аспарагиновой кислоты в гидролизатах белков. С этой целью гидролизат упаривают до малого объема, обрабатывают щелочным раствором диметилсульфата, а затем подкисляют концентрированной серной [c.48]

Кретович В. Л., Бундель А. А. Раздельное определение аспарагиновой и глютаминовой кислот хроматографическим методом. Докл. АН СССР , 73, 137, 1950. [c.181]

Порядок чередования аминокислот в небольших полипептидных цепях, содержащих 5—10 аминокислотных остатков, может быть установлен прн помощи весьма трудоемких и сложных аналитических методов. Таким путем была установлена, например, структура циклопептида — грамицидина С (см. гл. XV). Структура различных пептидов, получаемых при частичном гидролизе инсулина и гемоглобина, была установлена главным образом путем метки концевых групп динитрофторбензолом [17,89]. Результаты этих анализов показали, что как инсулин, так и гемоглобин построены из гетерогенных фрагментов. Так, например, пептид А, полученный из инсулина, содержал глицин, изолейцин, валин и тирозин. Определение аргинина, гистидина, лизина, фенилаланина и треонина в этом пептиде дало отрицательные результаты. Пептид В, выделенный из того же препарата инсулина, содержал фенилаланин, валин, аспарагиновую кислоту, глутаминовую кислоту, лизин, треонин и аланин [89] (см. гл. 111 и ХП1). Полученные данные указывают на то, что в пептидах, выделенных из инсулина, нет того периодического чередования аминокислот, о котором говорит Бергман [90]. [c.135]

СКОС определение аспарагиновой кислоты в белках. И. И. Жуков и А. В. Маркович глубоко разработали теорию электродиализа и б связи с этим успешно применили метод электродиализа для разделения белков. Чрезвычайно много сделали советские ученые в разработке хроматографического анализа, открытого знаменитым русским ученым М. С. Цветом (1903 г.) и получившего за последние годы исключительно важное значение для разделения смесей аминокислот, углеводов, органических кислот, пигментов и многих других веществ в частности, необходимо отметить разработку теории молекулярной хроматографии М. М. Дубининым, ионообменной хроматографической адсорбции Е. Н. Гапоном, распределительной хроматографии Н. А. Фуксом и др. [c.10]

Тогда в случае необходимости можно было бы просто выразить остатки аминокислоты (а-аминоазот) в виде доли от общего количества аминокислотных остатков белка (общий а-аминоазот). Последний может быть определен с помощью метода нингидрин — СОг (исправленного на аспарагиновую кислоту) или методом Чибнела [176] (по разности определяемого общего азота и не-а-аминоазота), или другими подходящими методами (формольное титрование с поправкой и пр.). [c.61]

Пептидные связи по обеим сторонам остатка аспарагиновой кислоты в молекуле белка особенно легко гидролизуются разбавленными кислотами [233], приче степень гидролиза зависит от pH раствора, а не от концентрации используемой кислоты [32, 189]. Так, из альбумина сыворотки крови быка за 18 час при 100° и pH 2,14 выделяется 44% остатков аспарагиновой кислоты в виде аминокислоты, в то время как при pH 3,15 освобождается всего 26% остатков кислоты [189]. При экстракции эластина 0,25 М щавелевой кислотой при 100° был получен растворимый белок единственной выделенной свободной аминокислотой оказалась аспарагиновая кислота [235]. Однако присутствие в продукте реакции пептидов с короткой цепью и результаты определения концевых груМп [24, 234] указывают на значительную степень гидролиза и других пептидных связей. Исследования, проведенные на модельных соединениях [73], позволили сделать вывод о лабильности связей остатков серина и треонина. Применение описанного выше метода гидролиза для исследования цепи А окисленного [c.226]

Не менее важными направлениями исследований являются иммобилизация клеток и создание методами генотехники (генного инженерного конструирования) промышленных штаммов микроорганизмов —продуцентов витаминов и незаменимых аминокислот. В качестве примера медицинского применения достггжений биотехнологии можно привести иммобилизацию клеток щитовидной железы для определения тиреотропного гормона в биологических жидкостях или тканевых экстрактах. На очереди-создание биотехнологического способа получения некалорийных сластей, т.е. пищевых заменителей сахара, которые могут создавать ощущение сладости, не будучи высококалорийными. Одно из подобных перспективных веществ —аспартам, который представляет собой метиловый эфир дипептида—аспартилфенилаланина (см. ранее). Аспартам почти в 300 раз слаще сахара, безвреден и в организме расщепляется на естественно встречающиеся свободные аминокислоты аспарагиновую кислоту (аспар-тат) и фенилаланин. Аспартам, несомненно, найдет широкое применение [c.164]

Метод определения, а) Осаждение аспарагиновой кислоты. Аспарагиновую кислоту осаждают из белкового гидролизата по методу Ритгаузена — Форемана. [c.314]

Основы метода. Все встречающиеся в природе я-аминокис-лоты, за исключением гликоколя, дезаминируются и декарбо-ксилируются при нагревании с водным раствором нингидрина. (трикетогидринденгидрата) (Руэман [559]) в разбавленной кислоте при этом образуются NHa, СО2 и соответствующий низший альдегид. Этой реакцией воспользовались Ван-Сляйк и др. [636, 637, 638] для определения лизина в осадке фосфорновольфрамовой кислоты (см. гл. I) также для определения глютаминовой и аспарагиновой кислот в смесях (см. гл. VI) Виртанен н др. [662, 663] использовали эту реакцию для определения аланина (см. гл. VII). [c.355]

Специфичность и точность метода. При помощи этого метдда определяется только /-аспарагиновая кислота -аспарагиновая кислота по этому методу не определяется, и ее присутствие не влияет на определение. Наличие других аминокислот не мешает определению. Благодаря наличию в бактериальном препарате активной аспарагиназы, с большой скоростью дезаминирующей аспарагин в аспарагиновую кислоту, определяется не только /-аспарагиновая кислота, но также и /-аспарагин. [c.385]

Методы иммобилизации не требуют обязательного выделения определенного фермента. Интактные клетки, содержащие нужный фермент, можно иммобилизовать на твердой поверхности. Например, интактные клетки бактерий Е. соН использовались после иммобилизации для катализа химического превращения фумаровой кислоты и аммиака в аспарагиновую кислоту — один из аминокислотных строительных блоков белков. Кроме того, иммобилизованные клетки дрожжей могут применяться при ферментации в производстве этилового спирта. Этот процесс был реализован в крупном опытном производстве. [c.122]

Кретович В. Л. и Бундель А. А. Раздельное определение аспарагиновой и глутаМино- вой кислот хроматографическим методом. ДАН СССР, 1950, 73, № 1, с. 137—140. Библ. 7 назв. 7512 [c.285]

Некоторые из этих аминов очень ядовиты, как например тирамин> образующийся из тирозина (стр. 300), или гистамин — из гистидина (стр. 346). Интересно, что некоторые декарбоксилазы отличаются резкой специфичностью действия и способны декарбоксили-ровать только одну какую-нибудь аминокислоту. Так, например, аспартикодекарбоксилаза, выделяемая My oba terium nsp декар-боксилирует только /-аспарагиновую кислоту. Эта особенность микробов может быть использована как для препаративного получения некоторых биологически важных аминов из гидролизатов соответствующих белков, так и для количественного определения аминокислот по измерению количества выделившегося СО2. Метод определения аминокислот с помощью препаратов специфических декарбоксилаз при наличии соответствующей аппаратуры очень прост, отнимает мало времени, а главное, позволяет определять процентное содержание отдельных аминокислот, без предварительного выделения их из сложной смеси. [c.248]

На силиконовых НЖФ типа ОУ диацетилпроизводное гистидина элюировалось вместе с производным аспарагиновой кислоты. Для количественного определения гистидина был применен расчетный метод, а именно из площади пика, соответствующего сумме производных гистид11на и аспарагиновой кислоты, на сорбенте с силиконом ОУ-22 вычиталась площадь пика, соответствующего производному аспарагиновой кислоты, на сорбенте с этиленгликольадипатом. В качестве внутреннего стандарта был применен орнитин. [c.71]

ЭЛЕКТРОФОРЕТИЧЕСКИЙ МЕТОД КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ Ь-ГЛУТАМИНОВОЙ И Ь-АСПАРАГИНОВОЙ КИСЛОТ В ГИДРОЛИЗАТАХ ПРИРОДНОГО БЕЛКОВОГО СЫРЬЯ [c.250]

Нами разработан простой, удобный, быстрый электрофоретический метод количественного определения Ь-глутаминовой и Ь-аспарагиновой кислот в гидролизатах природного белкового сырья в среде ацетатно-пиридинового буферного раствора. [c.250]

Электрофоретический метод количественного определения Ь-глутаминовой и Ь-аспарагиновой кислот в гидролизатах природного белкового сырья. Л. М. Буторина. [c.512]

В работе с. Р. Мардашева и В. В. Мамаевой (С. Р. Мардашев и В. В. Мамаева, Биохимия, 15, 465, 1950) описан метод количественного определения аспарагина, который, по данным авторов, позволяет достаточно точно определять содержание аспарагина в различных животных объектах. В экстрактах печени, освобожденных от белков, авторы нашли 3,6 мг% аспарагина по отношению к весу свежего органа в почках же содержание аспарагина равно 7,3 мг%. Определение аспарагина в ферментном гидролизате казеина показало, что около половины аспарагиновой кислоты, входящей в состав этого белка, находится в молекуле в виде аспарагина. — Прим. ред. [c.37]

Подобные же затруднения возникают при определении числа свободных концевых карбоксильных групп. В этих случаях также необходимо отличать концевые с -карбоксильные группы от р-кар-боксильных групп аспарагиновой кислоты и г-карбоксильных групп глутаминовой кислоты (группы Б и Г в формуле на стр. 122). Значительная часть карбоксильных групп последних двух типов входит в состав амидных группировок СОЫНг (см. табл. 1). Остальная часть их, однако, находится в виде свободных карбоксильных групп и электрометрически титруется вместе с концевыми -карбоксильными группами. Попытки определить число концевых -карбоксильных групп путем вьиитания из общего числа карбоксильных групп, определяемого электрометрически, числа р- и у-карбоксильных групп, определенных отдельно, наталкиваются на затруднения. Эти затруднения связаны с тем, что число концевых -карбоксильных групп очень невелико по сравнению с общим числом карбоксильных групп поэтому даже небольшая ошибка в определении дикарбоновых кислот может повести к большим неточностям при установлении числа концевых -карбоксильных групп. Из сказанного ясно, что важный вопрос о том, является ли пептидная цепь разветвленной или нет, не может быть разрешен окончательно при помощи указанных прямых методов определения числа концевых групп. В связи с этим был предложен другой путь, а именно метка концевых групп при помощи каких-либо производных аминокислот и определение последних после гидролиза белка. Наибольшее затруд- [c.123]

Более или менее полное структурное исследование было проведено в 1955 г. [69] для рацемата аспарагиновой кислоты. Кристаллы относились к пространственной группе 121а с размерами элементарной ячейки а = 9,18 А-, Ъ = 7,49 А с = 15,79 А р = 96 Z = 8. Удовлетворительная модель структуры была выведена из проекций функции межатомных векторов при широком использовании метода проб и ошибок. Некоторое уточнение структуры проведено по проекциям электронно плотности. Однако изнза большого перекрытия атомов в них точность определений координат низка (окончательные значения факторов расходимости R(Okl) = 25%, R(hOl) = 20%) и имеет смысл говорить только об общих чертах структуры. Предварительные координаты базисных атомов приведены в табл. 25. [c.67]

Изучение последовательности аминокислотных остатков в рибонуклеазе практически началось с работ К. Анфинсена и его сотрудников, которые в 1954 г. при помощи метода динитрофенилирования установили, что ее молекула представляет собой одиночную пептидную цепь, на М-конце которой имеется следующая последовательность аминокислотных остатков лиз.глу.-тре.ала. [1]. Немного позже к изучению химической природы рибонуклеазы приступила группа исследователей Рокфеллеровского института в США, во главе которой стояли Мур, Стейн и Хирс. Группа этих ученых провела определение химического состава рибонуклеазы и установила, что составляющая ее полипептидная цепь содержит 124—126 аминокислотных остатков, которые были определены количественно [413]. Следующим этапом изучения химического строения рибонуклеазы явилось окисление ее надмуравьиной кислотой при низкой температуре, что исключало возможность модификации тирозина. При этом происходил разрыв дисульфидных связей с образованием восьми сульфоновых групп и переход четырех остатков метионина в соответствующее сульфоновое производное. После гидролиза трипсином изучали тринадцать наиболее крупных пептидов, содержавших все 124 аминокислотных остатка, входивших в состав рибонуклеазы [255]. Для выяснения порядка соединения этих пептидов друг с другом было проведено параллельное исследование пептидов пептического и химотриптического гидролизатов, что позволило построить неполную формулу окисленной рибонуклеазы, которая была дополнена сведениями о расположении амидных групп глютаминовой и аспарагиновой кислот [39]. [c.136]

Простейшая установка для хроматографии аминокислот состоит из герметической камеры , внутри которой устанавливается ванночка с растворителем, а над ней укрепляется кусок бумаги, опущенный одним концом в растворитель. Бумага не должна касаться стенок камеры. Рекомендуется изгибать бумагу в форме цилиндра, опустив его в растворитель таким образом получается восходящий поток растворителя по бумаге. Если, кроме этого, на полоску бумаги наложить еще определенную разность потенциалов, то можно добиться разделения аминокислот, в обычных условиях дающих смешанные зоны. Таким методом отделяют глютаминовую кислоту от аргинина, а аспарагиновую кислоту—от лизина. В этом случае пользуются амфионным характером аминокислот, так как при данном значении pH часть [c.157]

Блоу [34] недавно предложил классифицировать полипептиды на три группы. Группа I, в которую входят полипептиды со стандартными оптическими свойствами, характеризуется тем, что к Р-углеродному атому остатка аминокислоты присоединен оптически неактивный радикал насыщенного углеводорода. Все остальные полипептиды делятся на две группы. В группу II входят полипептиды, у которых заместителем у Р-углеродного атома является любая другая группа, кроме — СНг—, например тирозин и аспарагиновая кислота. Пролин и оксипролин принадлежат к группе III, которую можно рассматривать как подгруппу группы II. Полипептиды, принадлежащие к последним двум группам, имеют необычные оптические свойства. Это рабочее правило в дальнейшем нашло поддержку в исследованиях Шеллмана, который подробно изучал влияние р-заместителей на оптическое вращение отдельных аминокислот [60]. Карлсон и др. [53] показали также, что спираль полипептидов, принадлежащих к группе I, более устойчива, чем спираль полипептидов группы II. В сополимере, таком, как, например, сополимер Ь-глутамата и Г-аспартата, именно те аминокислотные остатки оказывают доминирующее влияние на направление закручивания спирали, которые имеют стандартные оптические свойства. Этот факт является решающим для определения спираль-ности белков методом ДОВ (раздел Г-4). Исключительное поведение полипептидов групп II и III фактически подтверждает то, что величина Ьо, равная приблизительно — 630 (Яо = 212 мц), является непосредственно мерой стандартной правой спирали. [c.107]

Для газохроматографического анализа аминокислот предложено несколько других методов, но их практическая ценность не установлена столь определенно, как у изложенных выше методов. Согласно Либерти (см. [6]), аминокислоты дезаминируют до оксикислот с помощью раствора нитрата натрия в уксусной кислоте и ион натрия удаляют на колонке с катионообменной смолой. Затем оксикислоты метилируют диазометаном и полученные эфиры подвергают хроматографическому анализу. Колонка имеет длину м я заполнена стерхамолом, на который нанесено 30 % силикона D. С. 550. Скорость потока газа-носителя (природа не указана) составляет 60 мл мин, а температуру программируют от 80 до 140°. В этих условиях метиловые эфиры оксикислот, полученных из глицина, валина, аланина, лейцина, серина, аспарагиновой кислоты и глутаминовой кислоты, элюируются Б указанном порядке, причем последний выходит спустя [c.540]

По аналогии, анионные обменные адсорбенты типа амберлита IR-4 должны связывать преимущественно дикарбоновые кислоты. Это действительно имеет место. Смесь аминокислот и соляной кислоты, которая перемешивалась 1—3 часа с достаточным количеством смолы до получения конечного pH 6—7, полностью адсорбирует кислые аминокислоты, оставляя без изменения нейтральные и основные аминокислоты. В чистой фракции, вымытой со смолы соляной кислотой, Кеннан [4] определил отдельно аспарагиновую и глю.таминовую кислоты, комбинируя метод электрометрического титрования в водных и формальдегидных растворах с газометрическим нингидриновым определением. [c.165]

Объектами определении бериллия могут быть как природные материалы, так и продукты нх переработки, содержащие щелочноземельные элементы [1]. Прямое комплексометрическое титрование является одним из достаточно точных и чувствительных методов массовых химических анализов [2]. Однако известные в настоящее время титранты не отличаются высокой избирательностью или образуют с бериллием малоустойчивые комплексные соединения [3]. В связи с этим, ассортимент органических реактивов на ионы Ве(П) не включает подобного рода реагенты [4]. С другой стороны — литературные данные [5] свидетельствуют о том, что аснарагинаты бериллия, в отличие от аналогичных комплексов Mg, Са, Sr и Ва, имеют прочные пяти- и шестичлен-иые циклы. Последнее обстоятельство дает возможность использовать аспарагиновую кислоту как селективный реагент по отнощению к бериллию. [c.85]

Смотреть страницы где упоминается термин Аспарагиновая кислота определение методом: [c.350] [c.948] [c.347] [c.414] [c.291] [c.37] [c.221] [c.549] [c.36] [c.264] [c.196] [c.291] [c.592] [c.226] [c.467] [c.225] [c.69] [c.84] [c.98] [c.99] [c.180]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология