Иммунизация получение сыворотки к IgG мыш

Например, если немеченая антисыворотка была получена путем иммунизации кроликов, то на втором этапе используют меченую антивидовую кроличью сыворотку, полученную путем иммунизации кроличьими гамма-глобулинами ослов или каких-либо других животных. При этом антиглобулиновые меченые АТ покрывают вторым слоем исследуемый АГ (первый слой — за счет немеченых АТ, которые, в свою очередь, служат АГ для анти-глобулиновой сыворотки). В результате этого АГ становится видимым в люминесцентном микроскопе (как и в прямом варианте РИФ). [c.75]

В работах [99-101] для повышения специфичности антител против канцерогенов предложено при получении канцероген-поли-мерного антигена (КПА) использовать в качестве макромолекулярного носителя синтетический полиэлектролит, не имеющий общих детерминант с белками сыворотки крови человека. Иммунизация животных таким антигеном может привести к образованию высокоспецифических антител к канцерогену без появления [c.184]

Таким образом, и при окислении пирогаллола полученные путем иммунизации различными препаратами фенолазы иммунные сыворотки действуют специфическим образом. [c.568]

Для целей анализа подбирают такие условия иммунизации животных, при которых образовывались бы антитела с максимальной специфичностью и прочностью связи с антигеном. В зависимости от структуры антигена и поставленной задачи для получения антител используют различные виды животных от мелких лабораторных (мыши, морские свинки, кролики, куры) до крупных (овцы, козы, лошади). После нескольких инъекций антигена в присутствии стимуляторов иммунного ответа в сыворотке крови накапливаются специфические антитела. При иммунизации крупных животных можно получать большие количества антител для практических целей. В последнее время для иммунизации стали использовать кур, у которых антитела накапливаются в желтке яиц, что упрощает их получение и выделение. [c.103]

Провести внутривенно иммунизацию кролика убитой вакциной для получения имунной сыворотки (первое введение антигена). [c.97]

Иммунизация кролика для получения иммунной сыворотки. Для получения иммунной сыворотки проводят цикл иммунизации кролика убитой вакциной — взвесью убитых бактерий, содержащей 1 млрд. микробных тел в 1 мл. Вакцину вводят в краевую вену уха кролика 3 раза с интервалами в 6 дней. Через 7 дней после последнего введения антигена у кролика берут кровь, из которой готовят сыворотку и титруют для выявления в ней антител. [c.102]

Результаты в этом случае обычно оценивают с помощью понятия 50%-ный титр . На рис. 18 приведены кривые титрования антисывороток к инсулину, полученных иммунизацией морских свинок. Максимальный сигнал, регистрируемый по оптической плотности А продукта реакции окисления перекисью водорода 5-аминосалициловой кислоты, составляет 1,4 оптических единиц. За титр сыворотки принимается такое разведение, при котором оптическая плотность, регистрируемая в ИФА, имеет значение, близкое к 0,7. [c.159]

IV. Антисыворотки к иммуноглобулинам мыши и крысы. Для общих целей анти-IgG, получают путем иммунизации животных фракцией IgG, полученной в результате аффинной очистки на колонке с протеинА-сефарозой (разд. 10.6.1). Для удаления антител к другим классам иммуноглобулинов сыворотки сорбируют моноклональными антителами или сывороткой, лишенной IgG. [c.104]

Для получения сыворотки иммунизацию лошадей производили малыми доза.ми нативйого яда кобры (0,2—0,4—0,7—1—2—4—10 мг) каждые 4—5 дней, [c.209]

После того как в ходе иммунизации активность сыворотки, которую измеряют, отбирая пробы, достигнет нужной величины, животным-продуцентам делают кровопускание для получения максимального количества сыворотки. Если иммунная сыворотка получена в нестерильных условиях, в нее рекомендуется добавить мертиолат в соотношении I 5000. При хранении в холодильнике (по возможности в замороженном состоянии) активность полученных антисывороток может сохраняться в течение нескольких лет. [c.119]

Процесс введения животном) антигена по разработанной схеме называется иммунизацией, а сыворотка крови иммунизированных животных — антисывороткой. В литературе описано большое разнообразие способов иммунизации, зависящих от структуры антигена, его доступных количеств, вида животного и т. д. По этим причинам условия получения йммунных сывороток подбираются эмпирически. Тем не менее имеются общие закономерности,, которые позволяют выбрать условия получения высокоактивных антисывороток. [c.146]

Для выполнения иммунологического анализа необходимо иметь, помимо испытуемой сыворотки, также и антисыворотки, специально полученные путем иммунизации животных различными белковыми фракциями (альбумин, а-, р-, Y глoбyлины и др.) или специфическими белковыми веществами (церулоплазмин, си-дерофилин и др.), — антиальбуминовые, анти-а-, р- или у-сыво-ротки и т. п. [c.241]

Хорошо известная трудность в получении иммунных сывороток состоит в изменчивости иммунного ответа не только у отдельно взятых особей одного и того же вида, но также у одной и той же особи в ходе иммунизации [89]. Так, пробы иммунных сывороток, взятые у нескольких животных или у одного и того же животного в процессе иммунизации, представляют собой гетерогенный набор молекул с разными антигенсвязывающими центрами и различной аффинностью к антигену. Это относится даже к антителам, специфическим к отдельному эпитопу. Практически, чтобы получить достаточный запас однородной иммунной сыворотки, приходится делать смеси сывороток, полученных разными отборами их у иммунизированных животных. [c.96]

Независимо от схемы иммунизации одним и тем же антигеном следует одновременно иммунизировать группу животных, так как обычно наблюдаются весьма большие индивидуальные различия в иммунном ответе. Чем больше группа иммунизируемых животных, тем выше вероятность получения антисыворотки достаточно высокого титра в наиболее короткий срок. Это особенно важно при получении антисыворотки к смеси белков, например при иммунизации кроликов белками сыворотки крови для получения антисыворотки, используемой в] иммунселектрофорезе. Именно в этом случае можно ожидать образования антител к ряду компонентов смеси. Для получения антисыворотки к белковым антигенам вполне достаточно иммунизировать 1%-ными белковыми растворами. Белок обычно растворяют в 0,15 М растворе ЫаС1 этим же раствором разбавляют сыворотку крови для иммунизации. [c.116]

В. Для получения кроличьей антисыворотки к белкам сыворотки человека рекомендуется описанный ниже метод иммунизации, позволяющий приготовить, по-видимому, наилучшую иммунную сыворотку для выявления многих белковых компонентов, в том числе иммуноглобулинов. В этом методе совмещены две схемы иммунизации по Мильгрому и по Проому. [c.117]

Как только титр антиглобулиновых антител достигает указанной величины, иммунизацию продолжают по схеме Проома. Для этого белки человеческой сыворотки адсорбируют на алюминиевокалиевых квасцах 25 мл стерильной сыворотки разбавляют 80 мл дистиллированной воды и к полученному раствору прибавляют 90 мл 10%-ного раствора алюминиево-калиевых квасцов. С помощью 5 н. МаОН подводят pH раствора до 6,5. Образовавшийся осадок собирают центрифугированием и, отбросив надосадочную жидкость, дважды промывают его 200 мл физиологического раствора, содержащего мертиолат (I 10 ООО). Конечный объем суспензии доводят до 100 мл физиологическим раствором и хранят при +4°С не более 14 дней. По 5 мл этой суспензии вводят животным внутримышечно в область бедра 2—3 раза с интервалом в 14 дней. На 9— 10-й день после последней иммунизации у животных берут кровь. [c.117]

Линия гибридомных клеток не истинно нейрональная модельная система, однако она должна быть упомянута здесь, поскольку представляет собой полезный инструмент исследования в нейрохимии. Каждый В-лимфоцит обычно секретирует только один тип антител. Смесь большого числа моноспецифических антител образует нормальную гетерогенную антисыворотку. Для получения высокопродуктивных моноспецифических лимфоцитов, секретирующих антитела, Кёлер и Милштейн проводили слияние В-клеток иммунной мыши с опухолевыми клетками. В отличие от нормальных лимфоцитов, полученные гибридные клетки растут и размножаются практически бесконечно и продуцируют смесь антител против антигена, используемого для иммунизации. Даже если антиген является индивидуальным белком, продуцируемые антитела представляют собой смесь многих антител, каждое из которых направлено против одного специфичного антигенного участка исходной молекулы. Для получения моноспецифической сыворотки, т. е. раствора антител против одной антигенной области и происходящих из одного вида гибридомных клеток, эти клетки необходимо отобрать и клонировать . Теперь клон продуцирует моноклональные антитела , гомогенную популяцию антител против только одной детерминанты антигена. Эти моноклональные антитела можно пспользовать для разнообразных исследований, например для идентификации функциональных участков молекулы. Но что еще более важно, такой метод может использоваться для полу- [c.371]

Недавно было показано, что даже очень незначительные примеси в антигене могут вызвать выработку непропорционально большого количества антител. Так, количество антител против овальбумина в сыворотке лошади, иммунизированной кристаллическим овальбумином, было меньше, чем количество антител г[ротив кональбумина, который находился в качестве примеси в овальбумине ( ohn et al., 1949). Точно так же антисыворотка, полученная в результате иммунизации антигенами, образованными (—)-изомером, содержащим очень небольшое количество (4 )-изомера, может содержать значительное количество антител против (+)-изомера. Может оказаться, что антитела против (—)-изомера будут давать менее специфичную реакцию, чем она является на самом деле, поскольку антитела против (+)-изомера будут давать осадок с контрольными антигенами, образованными примесью (-Ь)-изомера. [c.656]

В силу того что растворимость антигена ТТГ и антител к нему достаточно близки, для получения специфических антител из иммунной сыворотки был применен иммуносорбент — аминоцеллюлоза, и выделение антител к ТТГ проводили по. методу, разработанному Гурвичем в Институте микробиологии и эпидемиологии им. Н. Ф. Гамалея [107, 108]. Иммунизация проводилась стандартизованным импортным тиреотропным гормоном с биологической активностью 5 USP/ is . [c.517]

Полисахариды варианта № 36 также отличаются один от другого количественным составом. Если доминирующим сахаром (54,8%) антигена является сахар с Rf0,49, который мы считаем фукозой, то в слабо связанном полисахариде содержится 34,7% галактозы и только 26% фукозы. Прочно связанный полисахарид содержит главным образом глюкозу — 62,7%. Очень интересным является тот факт, что антиген и слабо связанная фракция варианта № 36 содержат быстро движущийся сахар с К/ 0,62— 0,63, т. е. таким же, как и у бреславльской палочки. Можно было бы предположить, что этим сахаром является также абеквоза. Однако полное отсутствие агглютинации клеток варианта сыворотками, полученными при иммунизации бреславльской и кишечной [c.289]

Хотя в табл. 10 эритроциты группы крови О обозначены как не имеющие антигена, это не совсем так. Они обладают антигенами, относящимися к другим системам групп крови, которые будут обсуждаться ниже, а также имеют антиген, связанный с системой ABO. В плазме человека ангглютинин к этому антигену содержится не всегда иногда он встречается в плазме лиц, кровь которых принадлежит к подгруппе AjB, и в нормальной сыворотке некоторых животных. Этот агглютинин обнаружен в сыворотке некоторых угрей, чаще европейских, чем американских, а также может быть получен при иммунизации коз бациллой Шига. Все эти источники мало доступны, а полученные таким путем агглютинины всегда слабы и ненадежны. Поэтому важную роль в дальнейшей разработке методики определения крови сыграло открытие того, что солевые экстракты семян некоторых растений (например, Ulex europeas, дикорастущее растение из Западной и Южной Европы и Северной Африки) содержат агглютинин, специфически реагирующий с антигеном эритроцитов группы О [4,9]. Этот растительный агглютинин заменил в данном случае все другие реактивы. [c.69]

Получение иммунной сыворотки. Из уха или сердца кролика на 7-й день после окончания иммунизации берут кровь, помещают в термостат при 37°С на 10—15 мин. После свертывания крови сгусток отслаивают от стенок пробирки стеклянной палочкой и выдерживают при 4°С в течение часа для лучщей ретракции сгустка и более полного отделения сьшоротки. Затем сьшоротку осторожно отсасывают пипеткой. [c.109]

Иногда для получения гибридов приходится прибегать к очень массированным схемам иммунизации. В качестве примера можно привести схему, предложенную Стели и сотр. (1980). Авторам не удавалось получить гибридомы против хорионного гонадотропина человека, применяя обычную схему иммунизации, несмотря на то что титр антител в сыворотках животных был высоким. Тогда авторы предположили, что для гибридизации важно, чтобы клетки находились в стадии активной бласттрансформации под действием антигена. Ими была выявлена высокая степень корреляции между числом больших бластных клеток в популяции клеток селезенки и образованием специфических антителообразующих гибридов. Максимальный выход гибридов получался при схеме иммунизации, представленной в табл.. 9. [c.101]

Отбор крови и получение антисыворотки. Иммунизированное животное используется в качестве донора иммунной сыворотки в течение 5—7 мес, за это время удается провести 5—6 циклов иммунизации. Животных, прошедших несколько циклов иммунизации, называют гипериммуиными. Кровь у животных отбирают из вены уха (кролик) или непосредственно из сердца путем кардиальной пункции (кролик, морская свинка) в объеме 50—70 мл у кролика и 5—10 мл у морской свинки в стерильные пробирки, промытые стерильным буферным раствором. [c.153]

Для разных целей требуются сыворотки с различными свойствами, поэтому нельзя разработать единый способ иммунизации животных, который бы гарантировал получение продукта, идеально удовлетворяющего всем требованиям. Тем не менее существуют определенные принципы получения антител, которые могут быть приняты за основные правила . Идеальные антисыворотки получают в определенной степени методом проб и ошибок, поскольку каждый иммуноген отличается от других и процесс образования антител у каждого животного имеет свои особенности. Необходимые свойства антисыворотки — это высокий титр в сочетании с высокой средней авид-ностью, а также специфичность. Первые (на которые оказывают влияние различные адъюванты) зависят от достижения баланса между неограниченной стимуляцией антиген-чувстви-тельных клеток в лимфоидных тканях животных при условии персистирования иммуногена, с одной стороны, и от конкуренции между клетками за лимитированное количество антигена таким образом, чтобы отвечали лишь клетки с наибольшей аффинностью,— с другой. Специфичность же критически зависит от чистоты иммувогена, поскольку даже небольшие примеси могут вызвать непропорционально сильное антителообразование. [c.33]

Для получения поликлональных антисывороток, используемых в повседневных иммунологических методах исследования, особенно в реакциях преципитации, применяют более крупных животных, в частности лабораторных кроликов. Кроликов можно содержать в клетках, они хорошо размножаются в неволе, выносливы и долго живут. Уход, иммунизация и взятие Крови у этих животных не представляют труда. Полученные от кроликов антисыворотки обладают хорошими преципитиру-ющими свойствами и стабильны при хранении, иммуноглобулиновая фракция легко поддается очистке. Кроме того, такие антисыворотки, обладая высокой авидностью/аффинностью пригодны для использования в чувствительных иммунологических тестах. В течение нескольких месяцев в период максимального ответа можно получить не менее 100 мл антисыворотки и еще 150 мл при аутопсии. Аутбредные кролики отвечают на иммуноген по-разному, поэтому следует использовать для иммунизации несколько животных, протитровать их сыворотки по отдельности, затем смешать отобранные пробы, если требуется максимальное разнообразие антител. Кролики достаточно хорошо отвечают на широкий спектр ммуногенов в сочетании с адъювантом Фрейнда образованием IgG. [c.41]

При получении МКА к подклассам IgG человека, специфичных в отношении лишь тех минимальных различий, которые существуют в областях, определяющих антигенность подкласса, оказалось полезным получение толерантности у мышей-продуцентов путем в/б инъекции около 12 мг IgG определенного подласса за неделю до иммунизации другими подклассами [24]. Парапротеины, используемые для создания толерантности, подвергли биофильтрации путем пассажа на мышах, сыворотка которых служила в дальнейшем источником толерогена. [c.54]

Основная проблема использования цельной сыворотки или плазмы в качестве иммуногена заключается в получении эффективного ответа на а-глобулины. Наилучший подход — электрофоретическое разделение белков сыворотки на горизонтальной пластине агарозного геля. Полос. геля затем можно разрезать поперек и заморозить, и компоненты собирать в ходе оттаивания. После этого можно иммунизировать овец различными фракциями в соответствии с их электрофоретической подвижностью. Можно добавить антитела к отдельным компонентам цельной сыворотки, например компонентам комплемента. На рис. 2.7 приведена электрофоре-грамма хорошо сбалансированной овечьей антисыворотки к белкам сыворотки человека, полученной данным методом. Общая схема иммунизации аналогична той, что р-екомендована для отдельных белков. [c.80]

Антисыворотки к подклассам IgA и IgG могут быть получены с помощью гибридомной технологии. Готовые к применению аффинно очищенные антитела могут быть использованы как в качестве им муногенов, так и в качестве сорбирующих антигенов. При этом простота в определении изотипов моноклональных антител сочетается с возможностью успешного получения специфической преципитирующей антисыворотки. Сыворотки получают, вводя животному интактные молекулы Ig илн F -фрарменты, затем их истощают на колонках со смесью других изотипов, содержащих как х-, так и Я-цепи. Получение чистого IgGaa мыши для иммунизации и адсорбции может быть осуществлено физико-химическими методами (разд. 10.6.1). [c.104]

Могут быть использованы животные в возрасте 3—4 мес любого пола. Используемая схема иммунизации зависит от природы иммуногена в такой же степени, как и при получении поликлональной антисы воротки. Важно установить, что у Мышей, клетки которых предполагается ис пользовать в экспериментах по слиянию, в ответ на введение данного иммуногена образуются антитела. Забор крови для контрольного исследования производят из хвостовой вены спустя неделю после заключительной иммунизации. Если в сыворотке обнаруживают антитела в адекватном титре, то за 3—4 дня до извлечения селезенки для слияния клеток производят последнее введение иммуногена. Иногда трудно интерпретировать результаты тестирования крови, поскольку сыворотка содержит сло жную смесь антител. Неоднозначно, что все данные антитела были образованы секретирующими клетками селезенки, а также, что именно эти антиген-реактивные клетки будут преимущественно синтезировать 1 в ходе иммунного ответа [c.121]

У большинства видов, животных агглютинирующими свойствами обладают как IgQ, так и IgM. Антитела класса М более эффективны в реакции агглютинации, поскольку отличаются высокой валентностью. Прямые и пассивные тесты позволяют количественно (по титрам агглютинации) сравнивать между собой различные сыворотки при условии точной стандартизации условий эксперимента. Некоторые антиэритроцитарные антитела, полученные от человека или экспериментальных животных, слабо агглютинируют либо совсем не агглютинируют эритроциты как в лрямых, так и в пассивных тестах. Причина этого может заключаться в недостаточном количестве либо в малой доступности антигенных детерминант на поверхности клеток. Другая причина — принадлежность исследуемых антител к классу G, которые представляют собой неэффективные агглютинины. Такие антитела можно выявить, связывая их с эритроцитами и используя анти-глобулиновые сыворотки к иммуноглобулиновым детерминантам. Такие сыворотки получают путем иммунизации животных соответствующими антителами. Описанный тест был разработан Кумбсом для обнаружения так называемых непол--шых антител, ж которым относятся, например, IgG человека К резус-антигену. Зта реакция, называемая пробой Кумбса, отличается высокой чувствитель Ностью. Она применяется и в других целях например, если в распоряжении исследователя имеются изотипСпецифические антиглобулийы, то с их помо- [c.240]

В центральные лунки триад. Крайние лунки заполняют неразве-денными антиаллотипическими сыворотками. Эти сыворотки не должны содержать перекрестно-реагирующих антител. Так, например, для исследования клеток гетерозиготного кролика Ы, Ь6 следует использовать антисыворотки к Ь4 и Ь6, полученные при иммунизации кролика с аллотипом Ь9. Антисыворотки инактивируют прогреванием (56°С, 30 мин) и истощают бараньими эритроцитами. [c.352]

Кролик чаще других лабораторных животных используется в роли донора иммунной сыворотки. Имея в виду круг проблем, рассматриваемых в этой книге, ограничимся случаем выработки антител против чисто белковых антигенов. Получение иммунной сыворотки против пептидов и низкомолекулярных химических соединений (гаптенов) требует предварительной конъюгации этих антигенов с белком, для чего обычно используют бычий сывороточный альбумин. Конъюгацию осуществляют с помощью глютарового альдегида, карбодиимидов, дифтординитробензола и других бифункциональных агентов. Для пептидов, например, подробное описание конъюгации и иммунизации можно найти в одной из недавних работ [Walter et al., 1980]. [c.105]

Получение mAb. Ключевая идея, лежащая в основе получения mAb (Г. Колер и С. Мильштейн, 1975 г.), как и всё гениальное, очень проста сделать бессмертным В-лимфоцит, который исходно синтезирует антитела одного вида и специфичности, но сам по себе может совершать в культуре лишь ограниченное число делений в течение 10-14 дней культивирования. Практически это достигается путем слияния первичных В-лимфоцитов, секре-тирующих антитела, с опухолевыми миеломными клетками, которые данной способностью не обладают, но могут неограниченно долго делиться в культуре. В результате образуются гибридные клетки (гибридомы), которые приобретают от одной из исходных клеток способность продуцировать антитела требуемой специфичности, а от другой - способность к продолжительному росту и делению в культуре. Реализация данной схемы начинается с иммунизации экспериментальных животных, как правило мышей, антигенами, против которых предполагается получать антитела. Иммуногенами могут быть препараты очищенных макромолекул, их различные смеси, а также целые клетки или субклеточные структуры. После достижения антителами в сыворотке крови мышей необходимого титра селезенку иммунизированных животных используют в качестве источника В-клеток, продуцирующих искомые антитела. [c.404]

После определенного цикла иммунизации животных делают пробное кровопускание (2—3 мл) и определяют титр сыворотки. Если в сыворотке содержится достаточное количество антител, деланя массивное кровопускание или тотальное обескровливание животного. Кровь, собранную в стерильную посуду, сначала помещают в термостат при температуре 37 °С на 4—6 ч для ускорения свертывания, затем — в ледник на сутки. Полученную прозрачную сыворотку отсасывают в стерильную посуду, добавляют консерванты (мертиолат, хинозол), определяют титр антител, проверяют на стерильность и разливают в ампулы. [c.89]

Для получения агглютинирующих сывороток иммунизируют кроликов. При этом им 5—7 раз подкожно, а затем внутривенно с интервалами 2—7 суток в возрастшщих дозах вводят убитые бактерии. Заканчивают курс иммунизации животных 2—3 инъекциями живых бактерий. 4 >ез неделю определяют титр сыворотки — максимальное ее разведение, которое агглютинирует гомологичный микроорганизм. Если титр сыворотки недостаточен, иммунизацию продолжают. [c.90]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология