Нуклеиновые кислоты фиксация

В ТО же время бактерии бобовых растений, микроорганизмы почвы и водоросли в присутствии воды легко переводят атмосферный азот в аммиак при обычной температуре и нормальном давлении. Известно также, что атомы азота входят в состав нуклеиновых кислот и белков, играющих первостепенную роль в жизненных процессах. Долгое время оставалось загадкой, как в природных условиях в водной среде происходит биологическая фиксация азота, каков механизм связывания атмосферного азота с водородом й другими элементами при нормальном давлении и комнатной температуре. Основываясь на сходстве химических связей в молекулах азота и ацетилена, можно было предполагать, что синтез аммиака при обычных условиях может быть осуществлен при последовательном разрыве межатомных связей в молекуле N2 в присутствии соответствующего катализатора по схеме [c.122]

Функция неизвестна возможно, участвует в липоид-иом -обмене, может препятствовать кариесу зубов Действует совместно с инсулином при усвоении углеводов. Соединяется с фосфатами нуклеиновых кислот влияет на синтезы нуклеиновой кислоты, липида и холестерина Осадитель в реакциях окисления — восстановления. (Участвует в фиксации азота в растениях) [c.277]

Рис. аз. Влияние деблокирования нуклеиновых кислот на спектр люминесценции клеточных ядер из основания стебля 10-дневного проростка гороха (фиксация по Беккеру). [c.187]

Выдающееся значение азотсодержащих органических соединений заключается в построении биополимеров (белка, нуклеиновых кислот), без которых невозможно существование живой материи, что сделало очень важной проблему непосредственной фиксации молекулярного азота, являющуюся предметом широких исследований органической, биологической и радиационной химии. Осложняющим обстоятельством является высокая инертность молекулы азота (энергия диссоциации азота равна 950 кдж/моль при 298°К, а энергия разрыва первой связи — 525 кдж/моль). Поэтому известные производственные методы фиксации азота (в виде окислов или аммиака) осуществляются при высоких температурах и давлениях. В то же время в биологических системах по неясному восстановительному механизму азот усваивается в мягких условиях (например, клубеньковыми бактериями). [c.238]

Несмотря на применение защищенных производных нуклеотидов и нуклеозидов, некоторые побочные реакции (например, образование пирофосфатов при синтезе исходя из моноэфиров фосфорной кислоты) все же имеют место вследствие этого требуется тщательная хроматографическая очистка продуктов реакции. Одним из приемов, позволяющих существенно упростить очистку продуктов реакции, является фиксация одного из компонентов реакционной смеси на полимерном носителе Такой полимер может быть легко отделен от других компонентов реакционной смеси. Продукт реакции, фиксированный на полимере, можно подвергать дальнейшим превращениям, что значительно упрощает многостадийные синтезы. Наконец, после выполнения всех стадий продукт может быть отщеплен от полимера и выделен в чистом состоянии. Такой подход к синтезу олигонуклеотидов привлекает сейчас большое внимание . Неспецифичность химических методов создания межнуклеотидной связи, являющаяся недостатком химического подхода к синтезу олигонуклеотидов (получение защищенных производных нуклеозидов и нуклеотидов требует многостадийных синтезов), в данном случае дает ряд преимуществ, поскольку в синтез олигонуклеотидов могут быть введены самые разнообразные производные нуклеозидов, в том числе и синтетические аналоги компонентов нуклеиновых кислот. Это открывает широкие возможности исследования связи структуры и функции природных полинуклеотидов. [c.86]

Для учета содержания нуклеиновых кислот растительный материал фиксировался 96%-ным этиловым спиртом из расчета 5 г сырой ткани на 100 мл спирта. Пробы отбирались через 24, 48 и 72 ч после обработки. Для фиксации брались 10 растений каждого варианта по одному из каждого сосуда, развитые жизнеспособные листья, начиная со второй пары настоящих листьев, и верхняя часть стебля, начиная от третьего междоузлия. Как раз в этой части стебля были обычно наиболее сильно выражены формативные изменения под действием 2,4-Д. [c.10]

Во втором опыте проводилась фиксация растительного материала для определения нуклеиновых кислот через 20 ч после обработки ретардантом, через 44 ч (через день) и через 140 ч (на пятый день после обработки). [c.59]

Основную массу атмосферы составляет инертный динитроген N2. По-видимому, он имеет эндогенное происхождение, хотя определение его содержания в магматических газах особенно ненадежно из-за загрязнения подсасываемым воздухом. Вместе с инертными газами его можно рассматривать как фон. Небольшая часть динитрогена усваивается в процессе синтеза биомассы сообществом и поступает в нее в стехиометрическом соотношении, определяемом содержанием белка и нуклеиновых кислот. Поэтому цикл азота и его летучих соединений жестко связан с циклом органического углерода отношением < 1/6. Единственным входом в цикл азота служит азот-фиксация, осуществляемая только прокариотами (рис. 2.3). Она служит для перевода азота из атмосферного резервуара в преходящий [c.132]

В книге описаны основные методические приемы, используемые в гистохимии. Приведены наиболее употребительные методы подготовки ткан к исследованию (замораживание, лиофильная сушка, заливка В парафин, химическая фиксация и т.п.), методы определения белков, нуклеиновых кислот, углеводов и липидов. Большое внимание уделено гистохимии ферментов, а также пигментов и биогенных аминов. Описаны методы с использованием радиоавтографии и иммунохимии. [c.4]

НО. Максимум поглощения зависит от типа фиксации (560 нм при фиксации в Карнуа и 570 нм при фиксации в формалине). Поэтому при проведении измерений на незнакомом материале рекомендуется сначала снять спектр поглощения на одном или двух ядрах для установления длины волны, при которой следует проводить измерение. Этот же прием используется при анализе гидролиза нуклеиновых кислот. [c.315]

В первоначальных экспериментах после завершения электрофореза гель во избежание диффузии полос ДНК в замороженном виде экспонировали на рентгеновскую пленку. Однако в этом случае присутствующие в геле вода и мочевина способствовали гашению радиоактивных сигналов и полосы ДНК на радиоавтографе получались нечеткими. Введенный впоследствии этап фиксации олигонуклеотидов в геле с помощью 10%-ной уксусной кислоты, кроме перевода нуклеиновых кислот в нерастворимую форму, удалял мочевину. Уже упоминавшийся выше маркерный краситель - бромфеноловый синий - является рН-ин-дикатором и в тех случаях, когда он не успевает выйти и остается в геле, по изменению его окраски с фиолетово-синей на желто-коричневую можно судить об изменении кислотности среды в самом геле. Последу- [c.184]

Разделившиеся зоны биополимеров во избежание их диффузии немедленно фиксируют. Для этого гель извлекают из стеклянной формы и вымачивают в смеси кислоты со спиртом так, что белки или нуклеиновые кислоты выпадают в осадок в том самом месте, где закончилась их миграция в ходе электрофореза. После фиксации (или одновременно с ней) проводят окрашивание зон путем вымачивания геля в растворе красителя, прочно связываюш егося с белком или нуклеиновой кислотой. Излишек красителя удаляют. На фотографии окрашенного цилиндрического ПААГ (рис. 2) хорошо видны четкие, узкие полосы разделившихся компонентов исходной смеси белков. [c.5]

В течение нескольких последних десятилетий химики и биохимики поделили сферы интересов в области молекулярных аспектов биологии. Сферой биохимиков стала динамика живой клетки, ее отдельные функции и их контроль. Интересы химиков-органиков сфокусировались на изучении аккумулирующихся в клетках метаболитов первичных метаболитов (углеводов, белков, нуклеиновых кислот, липидов, стероидов) и множестве вторичных метаболитов (алкалоидов, терпенов, фенолов, хннонов и разнообразных микробных антибиотиков). Это разделение сфер интересов не должно заслонять общие цели. Поэтому, хотя в последующих главах и в тексте всей книги основное внимание при обсуждении биосинтеза уделяется темам, представляющим особый интерес для химиков, мы считаем необходимым рассматривать результаты исследований прежде всего исходя из наших знаний о промежуточном метаболизме и двух фундаментальных биосинтетических процессах — фотосинтеза и фиксации азота, являющихся исходным пунктом и основой для последующего анализа путей биосинтеза. [c.396]

Реакция нуклеиновых кислот с глиоксалем может рассматриваться как специфическая по отношению к гуаниновым звеньям скорость ее взаимодействия с одноцепочечными полинуклеотидами значительно выше, чем с двухцепочечными. Она применялась при изучении первичной структуры РНК как метод ограничения действия гуанилрибонуклеазы. Реакции с альдегидами широко используются для фиксации одноцепочечных участков нуклеиновых кислот при изучении их с помощью электронной микроскопии. [c.390]

Действие тиоТЭФ на рост, на фиксацию из меченных по углероду формиата и аденина-8 сходно с действием циклофосфамида на чувствительные и устойчивые к нему опухоли у хомяка, растущие билатерально [265]. ТиоТЭФ подавлял включение С из формиата в пурины РНК и ДНК в чувствительной, но не в устойчивой опухоли. Включение меченого аденина-8 в ДНК чувствительной опухоли также подавлялось, но включение его в РНК проходило беспрепятственно. В устойчивой опухоли никакой задержки включения меченого аденина-8 в РНК и ДНК не происходило. Был сделан вывод, что тиоТЭФ подавляет синтез нуклеиновых кислот двумя путями, т. е. путем нового подавления синтеза пуриновых рибонуклеотидов и путем подавления превращения пуриновых рибонукле-отидов в восстановительные компоненты ДНК. Схематически это можно представить так [265] [c.173]

Метаболизм далапона- С изучали на органической почве, на смешанных популяциях бактерий Arthroba ter sp.), извлеченных из органических почв, и на чистых культурах [112]. При сравнении метаболизма далапона-1- С и далапона-2- С в названной выше системе обнаружено быстрое выделение СОг из далапона, меченного по карбоксильной группе, тогда как меченый атом углерода, находившийся в положении 2, обнаруживается главным образом в липидах, нуклеиновых кислотах, белках и в растворимых в холодной ТХК фиксациях организма. Изучение растворимых меченых продуктов, извлеченных из инкубированных с далапоном- С микроорганизмов, показало, что метка присутствует в аминокислотах аланине и глутаминовой кислоте [14]. Эти наблюдения согласуются с представлениями о пирувате как одном из первых продуктов метаболизма далапона. Первыми мечеными продуктами метаболического разложения далапона-2- С в присутствии чистых культур Arthroba ter sp., выращенных в аэробных условиях, были пируват и аланин [112]. [c.228]

Предшествующий опыт свидетельствует о том, что метод замещения в замороженном состоянии обеспечивает стабилизацию структуры тканей, особенно в сочетании с подходящей фиксацией. Очень, хорошими фиксаторами оказались четырехокись осмия и хлорид ртути (табл. 2). Метод замещения в замороженном состоянии, обеспечивающий прекрасную сохранность гликогена (табл. 2), можно рекомендовать также для выявления углеводов, белков и нуклеиновых кислот. Сульфгидрильные группы, связанные с белкам лучше всего выявляются после фиксации в 2,5%-ной трихлоруксусной кислоте в 95%-ном этаноле. Этот метод дает также хорошие результаты при выявлении неорганических веществ и ферментов. Весьма успешной оказалась фиксация при низкой температуре, которую можно проводить сразу же вслед за замоцшием [c.24]

При оценке результатов фиксации следует учитывать, что нуклеиновые кислоты существуют в различных полимерных формах. Очевидно, что каждое фиксирующее вещество вызывает изменения как в степени полимеризации, так и в способности вступать в химические реакции. Не рекомендуется применять фиксаторы, блокирующие реакционноспособные хруппы и таким образом ослабляющие окрашиваемость нуклеиновых кислот (например, формальдегид). Хорошую сохранность структур обеспечивают кислые фиксирующие смеси, такие, как этанол-уксусная кислота и смесь Карнуа. Они, кроме того, постепенно разрывают связи между нуклеиновыми кислотами и белками и таким образом увеличивают число реакционноспособных кислых групп, что способствует хорошей окраши-ваемости основными красителями. Следует, однако, учитывать, что длительная фиксация в кислых смесях ведет постепенно к экстрагированию сначала РНК, а затем ДНК. В критических случаях (например, при цитофотоме-трическом количественном определении нуклеиновых кислот) следует согласовывать продолжительность фиксации с величиной объекта и температурой. Наиболее рацио- [c.46]

С ионообменных фильтров ( Whatmann DE-81 ), где ионная фиксация молекул идет во всей толще фильтра, нуклеотиды или короткие олигонуклеотиды лучше элюировать 0,5 М раствором Na l в 1 М НС1. Полимерные нуклеиновые кислоты с этих фильтров элюировать трудно. [c.217]

Уксусная кислота (СНз—СООН)—бесцветная жидкость с резким запахом. Хорошо смешивается с водой, спиртом,, эфиром, хлороформом. Ледяная уксусная кислота имеет 99,87о основного вещества и при охлаждении образует кристаллическую массу. Эта кислота, быстро проникая в ткани, может вызвать их набухание, хорошо осаждает нуклеиновые кислоты. Кроме того, она хорошо сохраняет форму хромосом, но разрушает митохондрии и комплекс Гольджи. Уксусная кислота входит в состав многих ядериых фиксаторов, но может использоваться и самостоятельно. В последние годы ее нередко заменяют при фиксации пропио новой кислотой (СНз—СНг— —СООН), которая способствует лучшей фиксации и окрашиванию объектов. [c.62]

Объекты после фиксации в 10%-м растворе формалина в течение 3—6 ч промывают в проточной воде 10—12 ч, обезвоживают и по обычной методике парафинируют. Краситель готовят, растворяя 100 мг прочного зеленого в 10 мл воды, и доводят pH до 8. Перед окрашиванием срезы помещают в 5%)-й раствор трихлоруксусной кислоты на 15 мин при 100для удаления нуклеиновых кислот, которые могут маскировать окраску иа белки. Последовательность работы следующая. [c.94]

Если обратиться к первичному биосинтезу органического вещества, то легко убедиться в том, что первым стабильным соединением, которое образуется в результате фиксации СО2 на рибулозо-1,5-дифосфате, является 3-фосфо-глицериновая кислота. Уже от этого простейшего соединения начинаются цепи реакций, ускоряемых ферментами, в результате которых синтезируются углеводы, аминокислоты, глицерин, высшие жирные кислоты, полиизопреноиды, стеролы и другие соединения. Из аминокислот, СО2 и ЫНз возникают пуриновые и пиримидиновые основания. Следовательно, прямым продолжением первичной фиксации СО2 сразу являются многообразные процессы создания мономеров, из которых далее строятся биополимеры (полисахариды, белки, нуклеиновые кислоты и т. п.), разнообразные липиды и многие другие органические соединения, входящие в состав растений, животных и микробов. [c.468]

Процессом, под влиянием которого трансформируется в течение почти сорока последних лет экосистема Ладожского озера, является антропогенное эвтрофирование. Инициирующую роль в эволюции экосистемы сыграло изменение содержания фосфора в озерной воде. Фосфор входит в состав нуклеиновых кислот, играет важную роль в записи генетической информации, в синтезе белка, в процессах хранения и передачи энергии и во многих других процессах, необходимых для жизни растений и животных. Природные поверхностные воды умеренной зоны северного полущария бедны фосфором вследствие специфики гидрохимических процессов в условиях повышенной увлажненности. Из трех основных компонентов, необходимых для построения живого вещества автотрофных организмов (первичной продукции), — фосфора, азота и углерода — озерная экосистема строго лимитирована только в отношении фосфора, поступление которого в водоем связано исключительно с водным притоком (речным, грунтовым, атмосферными осадками). Нехватка азота и углерода в воде (S hindler, 1974) компенсируется за счет поступления этих элементов из атмосферы в процессе газообмена (углерод) или фиксации азота водорослями. [c.27]

Как уже упоминалось, ПК в качестве лигандов могут обладать как групповой специфичностью (для белков хроматина, факторов управления трансляцией, нуклеаз и др.), так и индивидуальной (для индивидуальных мРНК, белков-регуляторов транскрипции и др.). Во втором случае на аффинном сорбенте должны быть закреплены вполне определенные участки генома. Это стало возмолшым после создания способов отбора и наработки в достаточных количествах строго идентичных фрагментов ДНК методами генной инженерии. В последнее время возникла еще одна область использования иммобилизованных НК — в качестве праймеров матричного синтеза. Эти приложения предъявляют разные требования к характеру фиксации НК на матрице. В первом случае расположение точек закрепления на молекуле НК может быть произвольным, во втором определенные и достаточно протяженные участки полинуклеотидной цепи должны быть свободны для комплементарного взаимодействия, а в третьем закрепление НК на матрице желательно осуществить лишь по одному определенному концу молекулы. Что же касается возможности реакций с активированными матрицами, то вдоль всей молекулы НК во множестве располагаются химически эквивалентные группы аминогруппы нуклеиновых оснований, гидроксилы сахаров и др. В особом положении находится только концевой остаток фосфорной кислоты или сахара. [c.387]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология