Оптические методы детектирования

Одним из наиболее чувствительных методов измерения поглощения фотона является детектирование излучения флуоресценции. Все возбужденные молекулярные и атомные уровни в той или иной степени способны флуоресцировать. Другие процессы, такие, как безызлучательная дезактивация, перепое энергии, тушение за счет соударений и фотохимические реакции, конкурируют с обычной флуоресценцией и в некоторых случаях затрудняют ее наблюдение. С помощью современных оптических методов детектирования можно непосредственно обнаружить 1—10 фотон/с. Разумная эффективность геометрического сбора фотонов достигает 10%. Лазер мощностью 1 Вт в видимой области испускает приблизительно 10 фотон/с, поэтому в принципе возможно детектирование флуоресценции с квантовым выходом порядка 10 для основной массы частиц. И наоборот, можно обнаружить очень малые концентрации частиц, обладающих большими квантовыми выходами. К сожалению, другие факторы, в принципе такие, как рассеяние излучения источника возбуждения, определяют фактически наблюдаемые пределы обнаружения. Несмотря на эти ограничения, недавно было показано, что можно детектировать концентрации вплоть до 100 атом/см и даже еще меньше (см. ниже). [c.563]

ОПТИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ДЕТЕКТИРОВАНИЯ В ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ [c.75]

Оптические методы детектирования в ТСХ характеризуются высокой чувствительностью, многообразием способов осуществления и их комбинаций, возможностью качественной и количественной идентификации большого числа различных веществ. [c.77]

Зависимость чувствительности оптических методов детектирования от величины хроматографических зон [c.86]

Оптические методы детектирования в ТСХ открывают широкие возможности д.ля количественного анализа веществ. Очень важными представляются теоретические исследования по выбору варианта детектирования при различном распределении веществ по толщине слоя сорбента. Использование этого вида детектирования перспективно и в других хроматографических методах, в частности в КШХ и ГХ. [c.104]

Оптические методы детектирования в тонкослойной хроматографии. ................... [c.181]

Оптические методы детектирования [c.104]

Описаны также методы детектирования, основанные на измерении оптического поглощения в инфракрасной [170] или ультрафиолетовой области [82]. Они обладают рядом преимуществ большой чувствительностью, возможностью идентифицировать смеси веществ, которые плохо разделяются на колонке (например, м- и п-ксилолы), отсутствием влияния колебаний давления. [c.504]

Автор имеет в виду только оптические методы. Прецизионное количественное детектирование можно проводить также электрохимическими и исключительно чувствительными ядерно-физи-ческими методами. — Прим. перев. [c.174]

Фотодиодный метод детектирования оптического излучения получил развитие благодаря его широкому применению в системах технического зрения. Одним из устройств, воспринимающих оптические изображения, являются приборы с зарядовой связью (ПЗС). Именно они и обусловили возникновение нового направления в спектрометрии оптических излучений. [c.395]

Тем не менее, методы второй группы используют при исследованиях. В [425, с. 480/504] оптическим методом с помощью лазерного интерферометра наблюдают за смещениями точек поверхности, вдоль которой распространяется УЗ-волна (метод лазерного детектирования, см. разд. 2.3.7). [c.78]

Оптические методы экологического контроля и мониторинга отличаются широким разнообразием по физическим эффектам, по способам детектирования оптических сигналов, по схемам и месту размещения тех или иных технических реализаций методов. Ценным достоинством является их помехоустойчивая совместимость между собой и с другими (неоптическими) методами, что открывает широкие возможности для создания уникальных измерительных комплексов и многофункциональных экологических станций. [c.619]

В конечном счете наиболее удобным методом детектирования белков является определение оптической плотности при 280 нм. Фракции, представляющие интерес, могут быть затем подвергнуты анализу после удаления сахарозы и амфолитов-носителей с помощью диализа. [c.314]

Детектирование в ТСХ почти всегда осуществляют с помощью различных оптических методов, таких, как [c.325]

Впервые в отечественной литературе обобщен материал по инструментальным количественным методам анализа веществ в тонкослойной хроматографии (ТСХ). Основное внимание уделено оптическим, электрохимическим, ядерно-физическим методам детектирования, а также сочетанию ТСХ с масс-спектроскопией. Подробно проанализированы перспективы развития непрерывного ТСХ-метода. Описаны основные характеристики ТСХ и способы автоматизации. [c.2]

Количественное детектирование оптическими методами с учетом неоднородного распределения анализируемых веществ по толщине слоя сорбента [c.82]

Электрохимические методы не применяются пока широко в лабораторной практике для количественной оценки тонкослойных хроматограмм, но со временем, по-видимому, они будут использоваться наравне с оптическими п ядерно-физическими методами детектирования. [c.116]

Количественное детектирование оптическими методами с уче том неоднородного распределения анализируемых веществ [c.181]

Приведенные выше расчеты основаны на измерениях относительных концентраций промежуточного продукта — атомарного кислорода. Измерение расхода [Оз] также позволяет получить абсолютные значения констант скоростей, хотя в этом случае математические выражения сложнее. Однако в действительности большинство современных исследований в области химической кинетики основано на прямом детектировании промежуточных соединений. Для этих целей особенно хороши импульсные методы, поскольку пиковые концентрации промежуточных соединений существенно выше, чем равновесные в случае непрерывного излучения. Широкий набор экспериментальных методов используется для исследования промежуточных частиц, включая различные разновидности оптической спектроскопии, метод электронного парамагнитного резонанса и метод масс-спектрометрии. Само по себе использование этих методов является весьма важным вопросом, и мы будем упоминать некоторые методики по ходу изложения, а более подробно остановимся на этом в разд. 7.4. [c.25]

Хеми- и биолюминесценция особенно привлекательны как способ детектирования, в первую очередь благодаря потенциально вьхокой чувствительности и широкому динамическому диапазону люминесцентного метода, а также из-за простоты требуемого оборудования. Более того, люминесценция имеет дополнительное преимущество перед другими оптическими методами поскольку свет испускается и детектируется только при наличии пробы, нет никаких проблем с контрольным опытом. [c.457]

В высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) наряду с широким применением оптических детекторов за последние 10—15 лет наметился значительный прогресс в развитии электрохимического метода детектирования. Доказательством этого является увеличение числа публикуемых работ по разработке и применению электрохимических детекторов (ЭХД) и, главным образом, увеличение выпуска аппаратуры,,пригодной для практического использования [56, 59]. [c.277]

Для детектирования в ПА используют самые разнообразные оптические (спектрофотометрия, флуоресценция, пламенная атомноабсорбционная спектрометрия, атомно-эмиссионная спектрометрия с индуктивно связанной плазмой) и электрохимические (амперометрия, иономстрия и инверсионная вольтамперометрия) методы анализа. ПА не накладывает каких-либо принципиальных ограничений на выбор метода детектирования. К идеальному детектору в ПА предъявляются следующие требования быстродействие (время отклика не более 5 с) низкий шум и высокая чувствительность воспроизводимость и стабильность отклика [c.417]

Детектирование веществ, разделенных на тонком слое сорбента, оптическими методами позволяет количественно оценивать их содержание в зонах в случае определения многих соединений. Число этих соединений может быть существенно увеличено иредварительными химическими превращениями разделенных комнонентов [4—42]. Де- [c.78]

Электрохимические свойства веществ непосредственно не связаны с их оптическидш и ядерпо-физическими свойствами. Поэтому в тех случаях, когда количественное определение разделенных на топком слое сорбента веществ оптическими и ядерно-физическими методами детектирования почему-либо затруднено, целесообразно непользование электрохимических методов детектирования. [c.107]

Воспроизводимость результатов в методах ядерпо-фи-зического детектирования зависит ог воспроизводимости напесения нробы на тонкослойную пластинку, от скорости сканирования, воспроизводимости хроматографических условий, чистоты материалов, используемых в конструкциях детекторов, и тонкослойных систем, а также от ряда других факторов, присутствующих во всех методах детектирования в ТСХ. Таким образом, в описываемых методах воспроизводимость определения может быть аналогичной воспроизводимости результатов в оптических и электрохимических методах детектирования. [c.120]

Постоянную скорость элюирования задают с помощью перистальтического насоса. Элюат, собираемый на фракционном коллекторе, анализируют в потоке или выборочно по фракциям на содержание белка, для чего обычно регистрируют изменение оптической плотности при 280 нм. Другие методы детектирования используют при отсутствии в белке хромофоров (остатков триптофана и тирозина), при работе иа микроуровне или при слишком высоком поглощении при 280 нм, например благодаря присутствию кофактора. В этих случаях можно определять оптическую плотность при 220 им, интенсивность флуоресценции или радиоактивность (при работе с мечеными белками) [14, 161] наконец, при анализе белковых фракций можно использовать химическую модификацию (разд. 1.4.5.1). Например, определенные объемы (аликвотные части) отдельных фракций можно подвергнуть щелочному гидролизу и последующему анализу по реакции с нингидрином. Для обнаружения белков можно использовать реакцию Лоури или реакцию связывания кра-снтеля. Последний метод вполне можно рекомендовать как наиболее простой и чувствительный, причем этому определению не мешает присутствие химических реагентов. Кроме того, состав фракций можно определять с помощью электрофореза в полиакриламидном геле. [c.23]

Тот факт, что иногда вещество, выделяемое в слишком малых для детектирования оптическими методами количествах, можно хроматографировать благодаря наличию у него биологической активности, часто приводит к двум неверным предпосылкам. Считают, что 1) если удается определить активность и ее распределение строго локально, то этой активности будет соответствовать одиночный пик белка, и 2) если удается выделить одиночный пик активного белка, то можно определить его аминокислотную последовательность. Однако эти ожидания редко реализуются на практике. Например, для детектирования белка по поглощению в ультрафиолетовой области необходимо 50 нг активного белка (разд. VI). Даже если удается получить белковый пик такой интенсивности, это не означает, что количества белка достаточно для анализа состава и последовательности аминокислот (Shively, 1985). Известно, что при использовании газовых анализаторов удается получить определенную информацию, имея 5 пмоль белка, однако в большинстве микрометодов для секвенирования требуется не менее 50—500 пмоль (Hunkapiller et al., 1984), т. е. 1,5—15 мкг для белка с мол. массой 30 ООО. Получение даже минимального количества препарата белка для секвенирования с чистотой 80—90% может оказаться весьма непростой задачей, если в исходном веществе концентрация белка составляет несколько пикомолей. [c.129]

Затухающую волну используют для контроля поверхностных реакций в сочетании с несколькими оптическими методами. Особо отметим два основных способа оптического детектирования. Первый основан на поглощении света или флуоресценции определяемым веществом-это, например, НПВО и НПВОФ. Системы второго типа основаны на описываемом ниже эффекте поверхностного плазмонного резонанса, который обусловлен зависимостью показателя преломления тонких пленок, например иммунохимических, от толщины. [c.522]

Существует значительное число модификаций методов, основанных на детектировании электрохимически генерированных промежуточных продуктов посредством получения их оптических спектров в ультрафиолетовой, видимой или инфракрасной областях поглощения света. Идентификация продуктов реакции производится по длинам волн и интенсивностям характеристических полос поглощения. Наибольшую информацию о природе частиц можно извлечь из данных ИК-спектрометрии, однако ее сравнительно невысокая чувствительность, определяемая небольшими значениями коэффициента молярной экстинции е, требует достаточно высоких концентраций интермедиата, труднореализуемых в случае короткоживущих частиц. Дополнительные осложнения при использовании ИК-спектрометрии связаны с трудностями применения в качестве растворителей воды и других гидроксилсодер-жащих соединений, сильно поглощающих в исследуемой области частот. В силу названных причин ИК-спектрометрия для изучения промежуточных продуктов электродных реакций используется относительно редко. Большим достоинством видимой и УФ-спектро-фотометрии является высокая чувствительность метода. Однако в этой области спектра низка специфичность поглощения, т. е. полосы многих хромофоров перекрываются. Пики поглощения находящихся в растворе частиц, как правило, очень широкие, и спектры сильно искажаются примесями, поглощающими свет в той же области спектра. Поэтому применение УФ-спектрометрии для установления структуры частиц оказывается малоэффективным. Значительно чаще такие измерения используются для изучения кинетики накопления или исчезновения промежуточных продуктов. [c.220]

Стат -методы являются наиболее часто используемым вариантом прн детектировании каталитических реакций в открытых системах. В зтом случае pear гент добавляют в реакционный сосуд с такой скоростью, чтобы характеристическое свойство исследуемой реакции оставалось постоянным. В начале процесса добавляют небольшое количество необходимого рег1гента до тех пор, пока не достигается желаемого значения детектируемого параметра (pH, оптическая плотность). Любое отклонение от этого состояния в результате дальнейшего развития реакции немедленно компенсируется гштоматическим добавлением аналитического реагента. При этом скорость достижения постоянного сигна- [c.353]

Принципы работы с этими оптическими метками во многом те же, что и с радиоактивными метками, за исключением того, что метод детектщ)Ования включает спектрофотометрическое измерение. Однако большинство прямых методов с колориметрической меткой, когда длины волн возбуждения и детектирования совпадают, редко достигают высокой чувствительшсти в иммунном анализе. Но можно получить улучшение на порядок величины, разделив эти длины волн. Существует дна основных класса меток, пригодных для этого флуорофоры и хемилюминесцеитиьш реагенты. [c.585]

Хотя впервые сочетание газовой хроматографии с прямым элемент-специфич-ным детектированием с помощью оптической плазменной эмиссионной спектроскопии было осуществлено в середине 1960-х гг. Мак-Кормаком с сотр. [14.2-12] и Бахом и Диском [14.2-13], серийно вьшускаемый прибор, использующий этот гибридный метод, не был разработан до 1989 г. [14.2-14], после чего атомно-эмиссионный детектор (АЭД) стал самым современным дополнением к семейству спектроскопических газохроматографических детекторов. [c.614]

Миниатюризация таких методов, как жидкостная хроматография, проточно-инжекционный анализ, газовая хроматография и масс-спектрометрия, обеспечит уменьшение расхода реагентов, технологических издержек и стоимости анализатора. Будущие промышленные анализаторы будут также обладать функцией самоконтроля. По-видимому, будут наблюдаться тенденция широкого использования т-Ипе-сенсоров, развитие оптоволоконной технологии для сочетания методов оптической спектроскопиии с сенсорами зондового типа и развитие неразрушающих методов для устранения проблем пробоотбора. Современные тенденции — развитие аппаратуры удаленного детектирования и микроанализаторной/сенсорной технологии. [c.670]