Лектины выделение

Для аффинной хроматографии глико протеинов в качестве аффинных лигандов используются антитела или лектины. Использование антител как аффинных лигандов рассмотрено в разд. 6.3. Выделение гликопротеинов с помощью иммобилизованных лек- [c.118]

Эффективность применения моноклональных антител может быть продемонстрирована на примере выделения общего лейкоцитарного антигена (L- -антигена) тимоцитов крысы [7]. На первом этапе с помощью аффинной хроматографии на иммобилизованном лектине чечевицы и гель-фильтрации в присутствии дезоксихолата получают частично очищенный препарат мембранного гликопротеина тимоцитов с молекулярной массой [c.188]

Еще один метод нековалентного введения ферментной метки основан на применении конъюгатов антител с лектинами — растительными белками, способными специфически связываться с углеводными остатками, входящими в состав биомолекул. В связи с этим лектины применяются для очистки и выделения гликопротеидов. [c.107]

М гуанидином-НС1], разрушающим связи в комплексе антиген-антитело. Этим методом можно получить и очищенные препараты антигенов, если использовать иммуносорбент, содержащий антитела. Аффинную хроматографию применяют также для выделения молекул других типов. Так, на поверхности частиц с пришитым лектином будут сорбироваться все молекулы, имеющие остатки определенных сахаридов эти молекулы элюируют буферным раствором, содержащим свободные сахара, которые конкурируют с адсорбированными белками за участки связывания лектина. [c.536]

Избират. выделение гликопротеинов обеспечивают иммобилизованные на носителях лектины - белки, специфически взаимодействующие с концевыми моносахаридными звеньями углеводных цепей. Иммобилизованные субъединицы ряда белков с четвертичной структурой м.б. использованы для извлечения этих белков из сложных смесей вследствие специфич. межсубъединичных контактов. [c.221]

Т. к. раств. в воде, для выделения из клеточной стенки их обычно Экстрагируют 10%-ной трихлоруксусной к-той при 2-4 °С в течение 24 ч с послед, осаждением этанолом или ацетоном. Более продолжит, экстракция может приводить к частичному гидролизу фосфодиэфирных связей или потере О-ацильных заместителей. Иногда Т.к. экстрагируют водным р-ром NaOH или диметилгидраэином, но в этих условиях более вероятна частичная деструкция полимера. Ли-по-Т. к. выделяют обработкой разрушенных клеток водным фенолом. Дальнейшую очистку Т.к. проводят методами гель-хроматографии, ионообменной хроматографии, высоковольтного электрофореза на бумаге и аффшшой хроматографии на лектинах. [c.510]

Некоторые белки листьев проявляют гидролитическую и окислительную ферментативную активность. Другие являются ингибиторами протеаз или лектинов. Они могут проявлять свое действие при выделении белков или придавать им особые свойства. [c.256]

Лектины. От 5 до 10 % массы белков, выделенных из листьев термокоагуляцией, связаны с моносахаридами (6 % у люцерны). Значительную часть определенной фракции этой массы составляют арабиногалактаны [30]. Известно о существовании в листьях белков-арабиногалактанов, которые реагируют с антигеном Ярива (1аг1у [118]) и называются (3-лектинами [12, 13]. Эти белки содержат гидроксипролин, который не был обнаружен в препаратах белков листьев, также как не упоминалось возможное антипитательное действие, отмечавшееся у других лектинов. [c.258]

Два замечания, касающиеся (З-лектинов они образуют комплексы с некоторыми гомополисахаридами или гетерополисахаридами, а в пределах последних — с гликозилированными фла-вонолами [48] они скорее локализованы в цитоплазматических мембранах, тогда как оболочка и ламеллы хлоропластов, по-ви-димому, лишены гликопротеинов и, следовательно, лектинов [54]. Поэтому их реактивность несомненна, но такая субклеточная локализация определенно приводит к уменьшению их содержания в суммарных белковых препаратах, выделенных из листьев. [c.258]

Наиболее распространенный метод — экстрагирование в жидкой среде, которое заключается в переводе белков в растворимое состояние в щелочной среде, куда помещают отщелушенные (лишенные оболочек) и размолотые семена [38]. Нерастворимые вещества отделяют центрифугированием, после чего белки осаждают добавлением кислоты, промывают и высушивают. Часть антипитательных веществ удаляется во время этих операций. Таким образом, большая часть а-галактозидов и почти 70% трипсиновых ингибиторов и лектинов отделяются в процессе экстракции в щелочной среде и промывки выделенных белков гороха и конских бобов [39]. Содержание вицина и конвицина в экстрактах конских бобов всегда меньше, чем в исходной муке [87]. Содержание фитиновой кислоты в экстрактах зависит от pH при экстракции и осаждении у сои осаждаются выделенные белки, более богатые фитиновой кислотой при pH 5 5 чем при pH 4,5 [22]. [c.348]

Неогликопротеинами называются гли ко протеины, полученные химическим синтезом, а именно ковалентным присоединением моно- или олигосахаридов к белкам. Такие искусственные биополимеры могут использоваться для выяснения роли углеводных цепей гликопротеинов, получения антител к углеводным детерминантам заданной структуры, выделения и изучения специфичности лектинов. [c.490]

Из яда скорпиона ВШкиз зр. выделен лектин и ряд коротких токсинов, действующих на возбудимость миелинового нерва. Определена первичная структура 2 токсинов, выделяемых скорпионами, пространственное строение цепи и установлено взаимное расположение ряда боковых цепей в доминирующем, при физиологических условиях конформе нейротоксина Мд. [c.335]

Первоначально передо мною стояла цель сделать обзор выделенных методом аффинной хроматографии веществ, а также кратко обсудить наиболее существенные моменты, знание которых необходимо для усиеплного применения этого метода. Однако изучение литературы привело меня к мысли о том, что аффинная хроматография далеко не ограничивается выделением веществ. В связи с тем что в ее основе лежит образование специфических комплексов, например ферментов с их ингибиторами, антител с антигенами, лектинов с сахарами и гликопротеинами и т. д., аффинная хроматография является весьма полезной также и при изучении этих специфических взаимодействий. [c.7]

Для выделения ряда лектинов использованы продажные препараты полисахаридов, такие, как сефадекс и сефароза. На рис. 6.7 представлены результаты биоспецифической аффинной хроматографии фитоагглютининов из неочищенного экстракта семян кроталярии ( rotalaria jun ea) на E D —сефарозе после [c.117]

Примеры использования лектинов для выделения гликопротеинов и гликопептидов даны в табл. 11.1. Два иммобилизованных лектина, а именно лектин из rotalaria jun ea, специфичный для конфигурации галактозы (он реагирует с углеводами и гликопро- [c.121]

Линдберг и Персон [33] и Ветекам и сотр. [60] использовали сефарозу с ковалентно связанной полиуридиловой кислотой для выделения РНК из полисом клеток животных. Для очистки ДНК Эдельман [15] также применил аффинный сорбент, приготовленный из сефарозы, однако аффинный не к ДНК, а модифицированный лектинами, подходящими для примесей полисахаридов, которые могут быть с большим трудом удалены из ДНК. Наиболее часто используется конканавалин А — сефароза, поскольку наиболее общими полисахаридными примесями являются фракции гликогена или крахмалоподобные вещества. Если присутствуют полисахариды, которые кроме глюкозы, фруктозы или маннозы [c.132]

Додециламип является полезным аффинным лигандом для выделения липидов [12]. При выделении гормонов соответствующие антитела, транспортные белки или лектины служат аффинными сорбентами (см. табл. 11.1). Примером является аффинная хроматография лютеинизирующего гормона овцы на сефарозе с ковалентно связанной иммуноглобулиновой фракцией антител к лютеинизирующему гормону [23]. [c.133]

В общем рассмотренный метод может быть применен не только для выделения рецепторных участков гормонов, передатчиков информации или сигналов, лекарственных препаратов, лектинов и специфических антигенов и антител, но также и для картирования топологии мембраны и клетки. [c.166]

Использование декстрановых гелей частично ограничено из-за их относительно низкой пористости (разд. 5.1). Примеры их использования для аффинной хроматографии даны в табл. 11.1. Они широко применяются непосредственно (без какой-либо модификации) в качестве специфических сорбентов для выделения ряда лектинов. [c.184]

Специфические сорбенты, использующие исключительные свойства биологически активных веществ образовывать специфические и обратимые комплексы, в огромной степени облегчают выделение ряда ферментов, их ингибиторов и кофакторов, антител и антигенов, лектинов, гликопротеинов, гликополисахаридов, нуклеиновых кислот, нуклеотидов, жиров, транспортных и рецепторных белков, гормонов и их рецепторов, клеток и многих других соединений, как это представлено в обзорной табл. 11.1. Наряду с названием выделяемого вещества в таблице приведены также используемые аффинные лиганды, нерастворимые носители и пространственные группы, причем указано, аффинный лиганд или нерастворимая матрица модифицированы данной пространственной группой. Обзорная таблица включает выделения веществ как с помощью типичной биоаффинной хроматографии, так и с помощью гидрофобной или ковалентной хроматографии. [c.367]

Специфическое взаимодействие пыльцевых зерен с рыльцем пестика-хорошо изученный пример функционирования лектинов. Это взаимодействие побуждает клетки рыльца выделять воду, а увлажнение пыльцевого зерна в свою очередь индуцирует образование длинной пыльцевой трубки, необходимой для оплодотворения (рис. 19-26). Около половины всех известных цветковых растений имеют генетически детерминированные механизмы, препятствующие самоопылению и таким образом обеспечивающие аутбридинг. У крестоцветных, например, молекулярные компоненты системы узнавания-крупный гликопротеин, присутствующий в клейком секрете рыльца, и опознающий его лектин, находящийся на поверхности пыльцевых зерен,-кодируются генным комплексом 5. Пыльца прорастает на рыльце и оплодотворяет яйцеклетку только в том случае, если у скрещиваемых растений экспрессируются разные аллели генов этого комплекса. Если пыльцу предварительно обработать очищенным гликопротеином, выделенным из рыльца растения, у которого экспрессируется тот же самый набор аллелей, она не прорастет даже на рыльце совместимого партнера. По-видимому, взаимодействие пыльцевого лектина со своим гликопротеином служит сигналом, эффективно блокирующим прорастание пыльцевого зерна и, следовательно, самооплодотворение. Специфические лектины и их эндогенные рецепторы в настоящее время выделены и охарактеризованы для многих систем узнавания растительных клеток. [c.180]

В некоторых растениях содержатся белки, способные агглютинировать эритроциты. Эти белки были названы фитогемагглютининами. В качестве первого такого белка в 1919 г. Самнером был выделен кон-канавалин А. Самнер предположил, что данные белки связываются с углеводными остатками гликопротеинов или гликолипидов групповых веществ крови, содержащимися в оболочке эритроцитов. Это предположение в дальнейшем подтвердилось. Была установлена настолько высокая специфичность фитогемагглютининов, что при помощи их в серологических исследованиях определяют группы крови. Позже (в 1954) фитогемагглютинины вследствие их высокой специфичности стали называть лектинами (от лат. слова legere — различать, выбирать). [c.97]

Проблема лектинов привлекает внимание во многих аспектах. Так, специфически связывая углеводы и углеводсодержащие биополимеры, лектины оказывают влияние на многие биологические процессы они неоценимы для количественного выделения и тонкой характеристики углеводов и других веществ, содержащих углеводные остатки лектинами стали пользоваться для изучения молекулярной архитектуры клеточной поверхности и ее изменений. Важную роль лектины играют и в процессах узнавания . Так, например, есть данные, что азотфиксирующие микроорганизмы узнают корневые волоски бобовых растений вследствие взаимодействия полисахаридов и липополи-сахаридов оболочек микроорганизмов с лектинами растений. [c.98]

Конканавалин А (Кон. А) — наиболее изученный лектин был выделен из бобов anavalia ensiformis. Этот белок при нейтральных pH представляет собой тетрамер, состояшдй.из четырех одинаковых [c.98]

Лектин виноградной улитки Helix pomatia) был недавно выделен из белковой железы ( части полового аппарата) этого беспозвоночного, где он содержится в количестве до 8% всего белка. Лектин строго специфичен. Он агглютинирует человеческие эритроциты группы А, но не В или О. Строение и свойства его довольно хорошо изучевы. [c.101]

Морган и Уоткинс [8] также получили данные, свидетельствующие о гомогенности лектинов. Они показали, что агглютинин из Sophora japoni a, адсорбированный либо на эритроцитах подгруппы Аь либо на эритроцитах группы В, после элюции снова, как и ранее, агглютинирует те и другие эритроциты, что говорит о невозможности выделения молекул лектина, обладающих индивидуальной специфичностью. [c.94]

Со времени появления в третьем издании обзора по хроматографии углеводов [1] в этом направлении произошли кардинальные изменения, обусловленные быстрым развитием ВЭЖХ. Множество классических методик, которым ранее придавалось большое значение в химии углеводов, в настоящее время вытеснены методами ВЭЖХ, и эта тенденция устойчиво сохраняется. Необходимо также отметить все более широкое применение аффинной хроматографии при выделении полисахаридов и гликопептидов, а также открытие в самое последнее время большого числа специфических лектинов. ГЖХ, особенно в сочетании с масс-спектрометрией, представляет собой один из наиболее важных методов структурного изучения углеводов. Продолжение широких исследований в этой области связано прежде всего с модернизацией способов получения летучих производных, повышением эффективности неподвижных фаз и улучшением других параметров, определяющих степень разрешения в такого рода анализах. Существенный прогресс в плоскостной хроматографии связан в последние годы с появлением пластинок для ВЭТСХ, обеспечивающих гораздо большую скорость и эффективность разделения, чем при использовании ТСХ. В настоящей главе в основном обсуждаются новейшие методики разделения и анализа углеводов и их производных и, кроме того, рассмотрены такие не утратившие до настоящего времени своего значения традиционные методы, как ионообменная и гель-хроматография, особенно с точки зрения их сравнения с различными современными автоматическими системами обнаружения, используемыми при хроматографическом анализе углеводов. [c.5]

ДЛЯ выделения арабиногалактана, связанного с белком (из Gladiolus). Хроматографирование проводили на колонке с носителем, полученным присоединением этого лектина к сефарозе 4В, что демонстрирует потенциальные возможности метода аффинной хроматографии при изучении растительных полисахаридов [195]. Некоторые примеры исследований в этом бурно развивающемся направлении приведены в табл. 7.4. [c.36]

В плазматической мембране количество углеводов невелико по сравнению с белками и липидами и составляет от 2 до 10 % сухой массы мембран. В распределении углеводов также, как белков и липидов, наблюдается асимметрия они локализованы на той стороне мембраны, которая не контактирует с цитозолем. В качестве биохимического маркера для изучения локализации и выделения локусов плазматической мембраны, содержащих углеводы, используют лектины — белки растительного и животного происхождения, специфически связывающие сахара. Их называют углеводраспознающими белками, отличающимися от ферментов и антител и не вызывающими химические превращения в распознаваемом лиганде. [c.57]

Для выделения различных мембранных структур используется и аффинная хроматография. Принцип этого метода заключается в способности выделяемого вещества специфически связываться с лигандом, пришитым к нерастворимому носителю, при пропускании раствора через матрицу. В качестве последней применяют сефарозы (агарозные гели), активируемые путем связывания различных лигандов кофакторов, ингибиторов, субстратов мембранных белков-ферментов, лектинов в случае выделения гликопротеинов гормонов, бромциана, конканавалина А — соответственно при получении мембран, антител или целых клеток, Элюирование исследуемого вещества осуществляют в условиях диссоциации комплекса лиганд — вещество и сохранения нативной структуры выделяемого соединения. [c.221]

Для понимания многих биологических явлений необходимо выделение субпопуляций клеток, находящихся на различных стадиях дифференцировки и в различных формах специализации. Разделение клеток особенно важно для изучения иммунной системы, состоящей из множества клеток, обладающих специфическими фенотипами и функциями. Основные методы основываются на наличии специфических компонентов на поверхности выделяемых клеток, например рецепторов лектинов, антигенов, иммуноглобулинов. Их развитию в большой степени способствовала возможность получения моноклональных антител против детерминант клеточной поверхности. [c.243]

Одним из щироко используемых для этой цели лектином является конканавалин А из бобов конавалии (Мг = 96 000). Ковалентный конъюгат антител с лектином получают с помощью глутарового альдегида. Выделенные конъюгаты могут использоваться для определения антигенов и антител. Одна из возможных схем проведения ИФА антител на основе конъюгата фермента с лектином имеет вид [c.107]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология