Эдестин кислот

Метод, а) Гидролиз. 50 г белка (эдестин) гидролизуют 500 мл 20% H I в течение 30 час., пока отношение общего азота к аминному азоту не достигнет максимума. Избыток кислоты удаляют повторной концентрацией раствора в вакууме. Остаток разбавляют до 2 л и прибавляют суспензию влажной AgaO до тех пор, пока проба Косселя (коричневый осадок при добавлении Ва(ОН)г) не сделается положительной. Реакцию поддерживают все время сильно кислой, прибавляя от времени до времени серную кислоту. Осадок Ag l удаляют центрифугированием и тщательно промывают горячей водой. Фильтрат концентрируют в вакууме до 2 л. [c.19]

Полученные тем или иным способом осадки (см. предыдущий раздел) могут служить для количественного определения содержания в них белков по Кьельдалю. При использовании этого метода предполагают, что осадок содержит только белковый азот. Однако это предположение не совсем справедливо, потому что вместе с белками осаждаются и другие высокомолекулярные соединения, такие, как полисахаридные кислоты (например, хон-дроитинсерная кислота) и некоторые азотсодержащие липиды (например, лецитины или кефалины). Метод Кьельдаля основан на переводе имеющегося в навеске белкового азота в сульфат аммония путем кипячения белка с концентрированной серной кислотой и сульфатом калия в присутствии катализатора. Обычно принимается, что содержание азота во всех белках равно 16%. В действительности эта величина значительно варьирует. Например, яичный альбумин содержит 15,75% азота, в то время как эдестин содержит 18,7% [34]. Отсюда ясно, что необходимо знать точно содержание азота в исследуемом белке. Хотя метод Кьельдаля представляет собой один из стандартных методов, употребляемых в биохимических лабораториях, получаемые по этому методу результаты часто слищком занижены. Наиболее точные данные получаются при использовании в качестве катализатора ртути [35, 36]. Нагревание белка с серной кислотой и сульфатом калия в присутствии катализатора должно продолжаться в течение 8 час. [34]. При соблюдении этих условий были получены точные данные для ряда белков, содержание азота в которых было известно. [c.19]

Для частичного гидролиза белков можно использовать также ферменты. Этим способом из эдестина и глиадина можно получить соответственно аспарагин [9] и глутамин [10]. При обычном полном гидролизе оба указанных амида гидролизуются с образованием аспарагиновой и глутаминовой кислот и аммиака. Поскольку отдельные протеолитические ферменты гидролизуют [c.24]

В некоторых случаях денатурация сопровождается образованием больших белковых агрегатов, в других же, наоборот, образуются мелкие молекулы. Осмометрические определения, проведенные Бёрком [153], показали, что денатурация гемоглобина, казеина и эдестина концентрированнымк растворами мочевины ведет к дезагрегации молекул этих белков. Молекулярный вес образующихся продуктов равен соответственно 34 300, 33 600 и 49 500, тогда как молекулярный вес нативного гемоглобина составляет 68 000, а нативного эдестина — 212 000. Сывороточный альбумин, сывороточный глобулин и яичный альбумин обнаруживают один и тот же молекулярный вес в водных растворах и в концентрированных растворах мочевины. С другой стороны, при денатурации яичного альбумина кислотами, щелочами или нагреванием образуются агрегаты, содержащие от 5 до 20 молекул [154]. При небольших сдвигах pH или изменении концентрации солей в растворе, а также при действии ультразвука молекула гемоцианина делится пополам или на восемь частей [155, 156]. Подобным же образом расщепляются пополам при образовании мономолекулярных пленок на поверхности солевых растворов молекулы лактоглобулина с молекулярным весом 35 ООО и молекулы инсулина [157]. Дезагрегация молекул инсулина может быть предотвращена солями меди [158]. [c.150]

В настоящее время нет сомнений в том, что анионные и катионные детергенты притягиваются к белкам при помощи ионизированных групп белковых молекул однако весьма вероятно и то, что неполярные углеводородные цепи детергентов также принимают участие в образовании этих соединений. Неполярная углеводородная группа соединяется, повидимому, с неполярными группами белка, т. е. с алифатическими цепями аланина, валина, лейцина и изолейцина, с бензильной группой фенилаланина и с группами СНг пирролидинового кольца пролина. При помощи этих неполярных группировок белки соединяются с жирами и жирными кислотами [39], а также с простыми углеводородами. Так, например, было установлено, что 2-процентный раствор эдестина в 10-процентном хлористом натрии способен удержать в растворе 5 000 молекул пентана на одну молекулу белка [40]. Адсорбция кишечной стенкой полярных соединений с низким молекулярным весом (например, четыреххлористого углерода) [c.225]

Это отношение иногда очень высоко. Так, например, в преципитате тиреоглобулин—антитиреоглобулин содержится 60 молекул антитела на 1 молекулу тиреоглобулина [98]. Арсанилазоппобу-лин способен связывать около 50 молекул антитела на каждую молекулу антигена [95]. Можно себе представить, что в самом простом случае комплекс антиген—антитело состоит из 1 молекулы антигена, исполняющей роль ядра и находящейся в центре комплекса, и присоединенных к ней многочисленных молекул антитела (фиг. 50). Когда образовавшиеся комплексы достигают известной величины, они становятся неустойчивыми и образуют нерастворимые агрегаты, подобно тому как это происходит с молекулами эдестина и эвглобулина. Надо также отметить, что образование указанных агрегатов тормозится теми же агентами, которые тормозят и образование агрегатов глобулинов, т. е. нейтральными солями, кислотами и основаниями [95]. Нингидрин и некоторые другие неспецифические реактивы способствуют преципитации [99]. [c.343]

В других случаях, однако, увеличение ионной силы вызывает снижение растворимости в более кислой по сравнению с изоионной точкой области. Это приводит к расширению кривой растворимости и заметному сдвигу величины рН, соответствующей минимуму растворимости, в кислую сторону. Подобное явление наблюдалось в случае эдестина [32], сывороточного глобулина [194] и других белков [192]. Его можно объяснить образованием нерастворимой соли белка и находящегося в растворе аниона кислоты. [c.45]

Оба рассмотренных эффекта являются во всех случаях до-вольно слабыми, и. вряд ли можно> ожидать, что они могут быть Практически использованы. Влияние, оказываемое гидроксиль-ньши группами а лабильность пептидных связей серима и треонина, является, напротив, гораздо более заметным оно было подробно исследовано [215] с помощью окисления периодной кислотой и методом ДНФ-производных. Последний метод, разработанный [вначале для изучения ативных белковых молекул, в равной степени применим к исследованию продуктов химического и ферментативного гидролиза. В Юн. НС1 при температуре 30° показатель специфичности для каждого типа связи приблизительно равен 10. Однако в случае эдестина предварительная обработка безводной H2SO4 повышает эту цифру до 70 [445]. [c.178]

Еще более трудным может оказаться выяснение структуры прочих белков. Учитывая возможное присутствие циклопептидов в белках [30], можно полагать, что потребуется разработка новых методов, с помощью которых можно будет осуществлять селективный гидролиз (разрыв) пептидной цепи или цикла. Такие процессы, повидимому, происходят при образовании плакальбумина из яичного альбумина (см. статью IV). Важное значение имеет также работа Партриджа и Девиса 116]. Авторы нашли, что при нагревании белков (например, инсулина, эдестина, яичного альбумина, желатины, овомукоида и овомуцина) с водным раствором уксусной или щавелевой кислот при 100° происходит первичный гидролиз с отщеплением одной лишь аспарагиновой кислоты. [c.256]

Тот взгляд, что остатки глютамина и аспарагина находятся в белках, основанный, вероятно, на их нахождении в природе в свободном состоянии, частично подтверждался количественным соответствием между содержанием ЫНз и дикарбоновых аминокислот в гидролизатах некоторых белков. Более прямое доказательство этого получено теперь при изоляции аспарагина и глютамина из продукта ферментативного переваривания соответственно эдестина и глиадина [72, 73] и при изолировании -ау-дшминомасляной кислоты из кислых гидролизатов 1лиадина, подвергнутого гофмановскому расщеплению [74], [c.52]

Белки благодаря своему большому молекулярному весу находятся в коллоидальном состоянии. Белковые молекулы содержат некоторое количество свободных карбоксильных и аминных групп, и поэтому белки относятся к амфотерным электролитам. В щелочной среде белок диссоциирует, как кислота, в кислом растворе — как щелочь. Отсюда следует, что в щелочном растворе молекулы белка заряжены отрицательно, а в кислом — положительно. При прохождении постоянного электрического тока через щелочной раствор белка молекулы его движутся к аноду, а через кислый раствор белка — к катоду. При определенной для каждого белка концентрации водородных ионов количество положительных и отрицательных зарядов в молекуле белка становится одинаковым, и белки перестают передвигаться в электрическом поле. Концентрация водородных ионов реакция среды), при которой в молекуле белка устанавливается равенство положительных и отрицательных ионов, носит название изоэлектрической точки данного белка. Изоэлектрическая точка для различных белков оказывается неодинаковой. Так, например, для казеина изоэлектрическая точка находится при pH 4,7, для яичного альбумина — при pH 4,8, сывороточного глобулина — при pH 5,4, для эдестина из семян конопли — при pH 5,5, для зеина кукурузного зерна — при pH 6,2 и т. д. [c.36]

Для гидролиза белков в мягких условиях было предложено использование твердой ионообменной смолы в присутствии очень разбавленной кислоты. Однако Паульсон и Дитередж [7] обнаружили, что после обработки сывороточного альбумина быка и эдестина пятикратным (по весу) количеством смолы, содержащей группировки сульфоновых кислот (дауэкс-50), и 50—100-кратным количеством 0,05 н. соляной кислоты при 100° остаются значительные количества пептидов, даже если нагревание продолжалось 100 час. Относительные скорости освобождения различных типов аминокислот были сравнимы с величинами, наблюдаемыми при гидролизе более концентрированной соляной кислотой. Однако реакция, особенно на последних стадиях, идет слишком медленно, чтобы гидролиз с дауэксом-50 стал удобным методом получения полных белковых гидролизатов. Эта методика может быть эффективной для более легко гидролизуемых соединений и была использована при определении гексозаминов [8]. [c.122]

Рис [401 определил избыточный аммиак , образующийся при обработке различных белков кипящей 6 н. соляной кислотой в течение 24 час, вычитая количество амидного азота из общего количества аммиака, выделяющегося в отих условиях. Для эдестина и глобина лошади этот избыточный аммиак лишь немного больше величины, ожидаемой в результате раз-лон еиия серина и треонина, причем неучитываемый избыток составляет всего 0,04% общего белкового азота. Этот факт еще раз подтверждает устойчивость основных аминокислот к кислотному гидролизу. В случае инсулина неучитываемый избыток составил 0,5% общего азота, что, возможно, вызвано разложением тирозина, которого много в инсулине. Некоторые другие белки дают избыточный аммиак порядка 0,3%, и это позволяет предположить, что некоторые типы аминокислотных остатков, в том числе серии и треонин, могут быть более склонны к разложению, находясь в пептидно цепи, чем в свободном состоянии. Далее, некоторые виды связей могут делать остаток аминокислоты более уязвимым, чем другие так, например, остатки серина, несущие фосфоэфирные группы, могут быть особенно склонны к разложению [49]. Избыточный аммиак , освобождающийся при гидролизе горячей соляной кислотой, является в некоторой степени меро 1 деструкции аминокислот за счет взаимодействия с углеводами и продуктами их разложения. Следует принимать во внимание также аммиак, образующийся при разложении сиаловых кислот и гексозаминов (см. гл. 6 и 7). [c.129]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология