Цитохром получение

Существует несколько способов отделения цитохрома с от митохондрий. Принцип всех этих методов состоит в разрушении внешней мембраны митохондрий с помощью детергентов или гипотонической обработки и экстракции белка солевыми растворами. В настоящей задаче предлагается экстрагировать цитохром с из митохондрий, убедиться в снижении оксидазной активности экстрагированных препаратов и активировать дыхание добавлением цитохрома с. В качестве объекта исследования используются митохондрии печени крысы (получение см. выше). Схематически процесс отделения цитохрома с изображен на рис. 50. [c.419]

ПОЛУЧЕНИЕ СУКЦИНАТ ЦИТОХРОМ с-ОКСИДОРЕДУКТАЗЫ [c.426]

Получение комплекса 1П. Все операции проводят на холоде 0... —4° С). Сукцинат цитохром с-оксидоредуктазу, полученную как описано на с. 426, суспендируют в фосфатном буфере (калиевые соли) с pH 7,4 до конечной концентрации белка 5 мг/мл. Суспензию помещают в небольшую трехгорлую колбу, снабженную насадкой для деаэрирования, рН-электродом (комбинированный электрод, пропущенный через герметически закрытый шлиф) и делительной воронкой. Колбу охлаждают в сосуде со льдом, помещенном на магнитную мешалку. [c.429]

Получение сукцинат цитохром с-оксидоредуктазы (комплекс П-fПI) [c.509]

В виде истинного раствора получен только цитохром с цитохром с из зародыша пшеницы выделен в кристаллическом состоянии. Экстракция цитохромов Ь, с, а я аз затруднительна вследствие их прочной связи с компонентами дыхательной цепи. Как у животных, так и у растений цитохром а всегда связан с цитохромом а,,. Этот комплекс цитохромов а — йз часто называют комплексом цитохромоксидазы . Ни цитохром а, ни цитохром йз не получены в виде истинного раствора, причем эти два соединения так и не удалось разделить. Кроме перечисленных выше цитохромов, имеются еще четыре цитохрома, по-видимому, присутствующие только в высших растениях. [c.216]

Цитохром b-i широко распространен в растениях. Его можно получить в растворе путем автолиза растительных тканей однако-в очищенном виде он не получен. Функция этого цитохрома, локализованного в микросомах, неясна. [c.217]

Лучше всего изучен среди цитохромов цитохром с. Это небольшой белок (мол. масса 12 500) с железопорфириновой группой, ковалентно присоединенной к единственной полипептидной цепи (разд. 8.4). Установлена аминокислотная последовательность белка (рис. 6-14) и выяснены все детали трехмерной структуры его молекул (рис. 8-5). Цитохром с, легко экстрагируемый из митохондрий, был получен в кристаллической форме из многих источников. Ранее мы уже упоминали (рис. 6-14), что цитохром с-один из белков, возникших на заре эволюции. На это указывает сходство многих участков его аминокислотной последовательности у всех эукариот микроорганизмов, растений и животных. [c.521]

Эксперименты описанного типа можно было бы применить и в исследованиях других гемовых белков. Однако следует отметить, что в работах по цитохрому с успеху исследований способствовали данные рентгеноструктурного анализа, хотя результаты, полученные методом ЯМР, и позволили выяснить детали, которые нельзя было непосредственно установить по данным рентгеноструктурного анализа. [c.399]

Цитохром j был обнаружен у дрожжей, а также в митохондриях животных из митохондрий сердца быка он получен в очищенном [c.64]

Цитохромы. Их известно девять, но выделен и получен в чистом виде только цитохром с. Характер связи в нем активной группы с белком раскрыт не до конца. Цитохромы широко распространены в природе. Их нет только в облигатных анаэробах. [c.350]

Большинство изотопных эффектов, которые были изучены до настоящего времени в ферментативных реакциях, является ненормальными и трудно интерпретируемыми. Необычно нормальный и прямой результат был получен при изучении цитохром редуктазы — флавинового фермента, который катализирует восстановление цитохрома и других акцепторов электрона под действием НАДНа [73]. Реакция [схемы (28) и (29)] включает промежуточное восстановление фермента, при котором существует изотопный эффект [c.218]

Вторая группа флавопротеидов гораздо более многочисленна. Эти дегидрогеназы не способны выполнять роль непосредственных акцепторов электронов дыхательного субстрата. Они могут получать только электроны, предварительно мобилизованные анаэробными дегидрогеназами. Окисляя восстановленные пиридиновые дегидрогеназы, они передают получаемые от последних электроны по цепи в направлении к кислороду. Флавиновые ферменты различаются и в отношении акцепторов, которым они способны передавать полученный водород (электроны). Такими акцепторами могут служить другие дегидрогеназы или окисленный цитохром, или, наконец, кислород. Флавопротеиды, способные переносить электроны на кислород, являются, по существу, настоящими оксидазами (например, глюкозооксидаза, оксидаза <1-аминокислот и др.), В результате действия этих ферментов образуется перекись водорода, кислород которой используется пероксидазой. Таким образом, флавиновые оксидазы и перокси- [c.231]

Шмуклер и Шаппелл [35] использовали редокс-смолу дуолит S-30 для получения цитохрома С в восстановленной форме. Как было найдено, цитохром С, полученный этим методом, имел более низкую скорость аутоокисления, чем цитохром, полученный при восстановлении дитионитом, хотя при этом его энзиматическая активность как субстрата для С-цитохромнойоксидазы сохранялась. [c.233]

Для препарата, промытого гипотоническим раствором КС1, определяют зависимость скорости окисления сукцината от количества добавленного в среду инкубации цитохрома с измеряют сукцинатоксидазную активность, как описано выще, но в пробы добавляют цитохром с в концентрациях от О до 100 мкг/2 мл (5—6 точек). Полученные результаты представляют в виде графика. [c.420]

Убихинон цитохром с-оксидоредуктаза катализирует окисление добавленных гомологов убихинола цитохромом с с образованием окисленного гомолога и восстановленного цитохрома с. Комплекс представляет собой липопротеидный ансамбль, содержащий цитохромы Ь, си железо-серный белок, прочносвязанный убихинон и фосфолипиды. В литературе описаны два основных способа получения комплекса. Первый основан на фракционировании НАДН цитохром с-оксидоре-дуктазы солями в присутствии детергентов. Второй — на специфическом расщеплении сукцинат цитохром с-оксидоредуктазы при щелочных значениях pH на сукцинатдегидрогеназу и убихинон цитохром с-оксидоредуктазу. Препараты, получаемые обоими методами, практически не различаются ни по полипептидному составу, ни по каталитической активности. Оба препарата могут быть включены в состав протеолипо-сом, так что катализируемая ими реакция оказывается сопряженной с векторным перемещением протонов через осмотически активный барьер (второй пункт электрохимического сопряжения). [c.429]

Заметим, однако, что для реакций окисления под действием кислорода или любого другого окислителя, отличного от НАО+ и не включенного в табл. 3-3, нельзя использовать непосредственно значения АСох. В этом случае поступают следующим образом. Сначала из значений АСох рассчитывают АС° или АС для рассматриваемой реакции, считая, что окислителем является НАО+, а затем к полученному значению прибавляют свободную энергию окисления кислородом (или другим окислителем) образовавшегося НАВН. Такого типа величины для О2 приведены в табл. 3-7 основываясь на данных этой таблицы, можно оценить их значение и для ряда других окислителей, таких, как Ре + и цитохром с. [c.228]

В качестве объектов для экспериментальной проверки высказанных выше заключений были выбраны гемсодержащие белки (цитохром с, метгемоглобин и др.) полученные результаты сравнивали с выведенным Кузнецовым уравнением, показывающим зависимость перенапряжения разряда АЕу2 от поверхностного давления р, концентрации белка в растворе с, соотношения размеров площадей поры5о и сечения нативной молекулы белка 5 [c.237]

Теория Митчелла получила ряд качественных подтверждений. Либерман и его сотрудники изучили транспорт ионов через искусственные фосфолипидные мембраны. В присутствии синтетических ионов, с зарядом, экранированным гидрофобными заместителями, например тетрабутиламмония N [(СПг)зСПз] 4 или тетрафенилбората В (СвП5)4, существенно повышается электропроводность системы. Эти ионы быстро диффундируют сквозь мембраны. Был изучен транспорт этих ионов через митохондриальные мембраны (ММ) и субмитохондриальные частицы (СМЧ), полученные путем обработки митохондрий ультразвуком. ММ и СМЧ оказываются ориентированными противоположным образом. Цитохром с локализован на внешней стороне ММ и на внутренней стороне мембраны СМЧ. Можно думать, что внутри-митохондриальное пространство заряжено отрицательно, а внутреннее пространство СМЧ — положительно. Энергизация СМЧ добавкой АТФ вызывает поглощение синтетических анионов, а деэнергизация ингибитором дыхания (актиномицином) или разобщителем окислительного фосфорилирования (производное фенилгидразона) вызывает выход анионов. Транспорт электронов в мембранах СМЧ сопровождается поглощением синтетических анионов. В свою очередь их транспорт нарушается ингибиторами электронного транспорта и разобщителями окислительного фосфорилирования. [c.436]

На модельной системе [530] был исследован процесс получения водорода из воды с использованием природных и синтетических катализаторов и солнечной радиации в качестве источника энергии. Солнечный свет поглощается мембраной из хлоропласта в качестве катализатора процесс переноса электронов использовали ферредоксин, флаводоксин, цитохром, красители на основе виологена, синтетические кластеры, содержащие Ре — Мо — 5-центры, а в качестве активатора протонов — гидрогеиазу или РЮг. Основная модельная система состояла из мембраны — буферной суспензии изолированного хлоропласта, энзима гидрогеназы и носителя электронов. При освещении такой системы выделяется водород. Скорость и продолжительность выделения водорода зависит от природы хлоропласта и гидрогеназы, содержания кислорода в системе, природы переносчика электронов [530]. [c.345]

Цитохром Ь- найден в относительно большом количестве в митохондриях, выделенных из початков Arum и Symplo arpus foetidus. Цитохром ft в растворимом виде не получен. Поскольку цитохром b самоокисляется и не реагирует с окисью углерода [c.216]

Цитохромы 6б и f локализованы в хлоропластах они могут играть определенную роль в фотосинтезе. Цитохром не выделен в очищенном состоянии. Цитохром экстрагирован из листьев бузины Sambu as niger) и петрушки. Он получен в высокоочищенном виде и обладает свойствами, подобными свойствам цитохрома с. [c.217]

Может бьггь, и все другие глобулярные белки свернуты точно так же, как миоглобин На этот вопрос ответ уже получен, так как методом рентгеноструктурного анализа установлена третичная структура целого ряда других, небольших по размеру белков, состоящих из одной полипептидной цепи. Особенно интересны результаты, полученные при изучении митохондриального белка цитохрома с, который служит переносчиком электронов. Аминокислотная последовательность цитохрома с была определена более чем для 60 видов (разд. 6.10). Как и миоглобин, цитохром с-это небольшой гемсодержащий белок (мол. масса 12400), имеющий одну полипептидную цепь, состоящую приблизительно из 100 аминокислотных остатков, и одну гемогруппу, которая в этом случае ковалентно связана с полипептидом. Подобно миоглобину, цитохром с тоже свернут в компактную глобулу, причем большинство его гидрофильных К-групп расположено снаружи, а большинство гит дрофобных К-групп-внутри глобулярной структуры. Поскольку и цитохром с, и миоглобин-гемсодержащие белки, можно было бы думать, что они сходны и по третичной структуре. Но это не так. Рентгеноструктурный анализ цитохрома с показал, что он имеет совсем иную трехмерную структуру (рис. 8-5 и табл. 8-2). Если в миоглобине почти 80% аминокислотных остатков содержится в а-спиральных сегментах, то в цитохроме с на долю а-спиралей приходится только 40% остатков. В остальной части полипептидной цепи цитохрома с [c.192]

Лечение авитаминоза синтетической АК на фоне казеиновой диеты приводит к еще большему росту активности Церулоплазмина с 42,1 до 75,0 ед.) и не оказывает за нериод лечения существенного влияния нд,л иженную при авитаминозе активность цитохро-моксйдазы печ и и пероксидазную активность крови. Полученные данные являются подтверждением высказанного ранее предположения о том, что повышение активности церулоплазмина, связано с отсутствием в пище полйфенолов, участвующих в процессе окисления АК увеличение содержания АК в диете приводит к увеличению активности окисляющего ее фермента. [c.401]

Число точек фосфорилирования и их локализация в цепи переноса электронов были установлены с помощью целого ряда прямых и косвенных методов. Прямые измерения обычно проводят с помощью полярографического метода, определяя поглощение кислорода, или же используют изотопную метку (Р ), или, наконец, определяют образование АТФ или убыль АДФ с помощью ферментативных методов. Сравнение полученных при этом значений для отношения Р/0 показало, что для истинного фосфорилирования, обусловленного реакциями в дыхательной цепи, отношение Р/0 равняется 3 (окисление восстановленного НАД и субстратов НАД-дегидрогеназы) и 2 (для субстратов флавиновых ферментов, например для сукцината). Поскольку стадии, следующие за реакциями, которые протекают с участием флавопротеидов, для всех субстратов одинаковы, одна из точек фосфорилирования должна быть локализована в пределах комплекса I. Оставшиеся две точки, таким образом, должны быть расположены на коротком отрезке цепи между коферментом Q (цитохром Ъ) и Ог- Одна из них (точка 2), вероятно, локализована между коферментом Q и цитохромом (или с), т. е. в пределах комплекса III. Такое заключение подтверждается тем, что в системе, в которой цитохромоксидаза блокирована с помощью H N, для окисления восстановленного НАД или В- 3-оксибутирата при добавлении цитохрома с величина Р/2о (то же, что и Р/0) оказывается равной 2. О локализации третьей точки фосфорилирования в области цитохромоксидазы можно судить по результатам только что описанных экспериментов, а также исходя из того факта, что окисление аскорбиновой кислоты — переносчика, способного отдавать электроны только цитохрому с,— в присутствии тетраметил-га-фениленди-амина (ТМФД) характеризуется отношением Р/0, равным единице. Ни скорость, ни стехиометрия этой реакции не изменяются в присутствии антимицина А. В основном к тем же выводам пришли Чанс и Уильямс, исходя из своих экспериментов с использованием ингибиторов (см. стр. 392). Когда к интактным митохондриям добавляют субстрат и Фн, наблюдается явление, получившее название дыхательного контроля] при этом в отсутствие АДФ скорость дыхания становится очень низкой (так называемое состояние 4). После добавления АДФ система возвращается в состояние 3. [c.394]

В нем имеется цитохром а и цитохром С. При добавлении двухвалентного железа вначале происходило восстановление цитохрома С, а затем первого фермента, Бесклеточная система, полученная из названной бактерии, содержала до 90% активности железоцитохромредуктазы и цитохромоксидазы. Железо-цитохром-С-редуктаза оказалась специфичной для двухвалентного железа. Фермент сравнительно устойчив и при pH 5 выдерживает нагревание в течение 30 мин при 100° С, [c.123]

Цитохром С1, полученный из митохондрий, представляет собой полимер, мол. в. 40 ООО, состоящий пз шести субъединиц, содержит четыре геминовые группы на 1 макромолекулу. [c.443]

ДПН-Н при 340лш . Кристаллич. Л., полученная из дрожжей или бактерий (цитохром Ьц), отличается от Л., полученной из животных тканей. Дрожжевая Л. (мол. в. 100000) катализирует окисление 1.-молочной к-ты в пировиноградную СНзСО(ОН)СООН окисленный цитохром С —СН3СОСООН восстановлеп-ный цитохром С. Дрожжевая Л. — белок с двумя простетич. группами флавинмононуклеотидом и геном. Первичным акцептором водорода окисляемой молочной к-ты при ферментативной реакции является флавинмононуклеотид, с к-рого электроны переходят на гем фермента и затем на цитохром С. [c.455]

Важнейшей чертой этого механизма является сопряженность процессов окисления и фосфорилирования— окислительное фосфорилиро-ванне. Переход электронов от ДПН-Н к флавопротеидам, переход от цитохрома Ь к цитохрому с, от цитохрома а к цитохрому Оз сопровождается образованием молекул АТФ из АДФ и неорганического фосфата. В этой системе к двум молекулам АТФ, полученным во время гликолиза из одной молекулы глюкозы, добавляется еще 36 молекул АТФ и таким образом улавливается еще около 400000 кал. [c.107]

В других работах с применением такой же методики получения фр ягментированных частиц разных размеров показано, что в хлоропластах шпината цитохромы f и связаны с фотосистемой I, а цитохром b jg - с фотосистемой II (Б, rdman,Anderson, 1967). [c.190]

Цитохром с изучен лучше всех цитохромов. Для получения чистого цитохрома с используют экстракцию и осаждение различными реагентами, в частности метод солевой экстракции, а также различную ад-сорбируемость восстановленной и окисленной форм окисленное вещество легко адсорбируется на каолине, а при его восстановлении происходит десорбция. Высокая степень очистки достигается хроматографией, Хроматографически чистые препараты, так же как кристаллические соединения, содержат 0,45% железа, что соответствует молекулярной массе 13 000. [c.158]

Хорошо известно, что дрожжи, культивируемые в условиях ферментации, имеют некоторые отличия от дрожжей, культивируемых в аэробных условиях. Эти различия касаются и цитохромной системы. Следовательно, казалось целесообразным определить способность к реактивации большого числа видов дрожжей, различающихся в преобладании того или другого типа энергетического обмена, т. е. дыхания или ферментации. Одновременно исследовали у этих видов дрожжей цитохром-ные спектры. Получили следующие результаты. Все виды с хорошей способностью к реактивации обладали выраженным дыханием и ферментацией. Дрожжи со сниженной дыхательной активностью не реактивировались. Реактивация оказалась невозможной у видов дрожжей с недостаточностью цитохромной системы независимо от того, наблюдалась ли она от природы (штаммы, относящиеся к группе Sa haromy es arlsbergensis) или же у искусственно полученных мутантов, лишенных цитохром оксидазы. [c.222]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология