Трипсин на целлюлозе

В зависимости от механизма действия различают ферменты с относительной (или групповой) и абсолютной специфичностью. Так, для действия некоторых гидролитических ферментов наибольщее значение имеет тип химической связи в молекуле субстрата. Например, пепсин в одинаковой степени расщепляет белки животного и растительного происхождения, несмотря на то что эти белки существенно отличаются друг от друга как по химическому строению и аминокислотному составу, так и по физико-химическим свойствам. Однако пепсин не расщепляет ни углеводы, ни жиры. Объясняется это тем, что точкой приложения, местом действия пепсина является пептидная —СО—КН-связь. Для действия липазы, катализирующей гидролиз жиров на глицерин и жирные кислоты, подобным местом является сложноэфирная связь. Аналогичной групповой специфичностью обладают трипсин, химотрипсин, пептидазы, ферменты, гидролизующие а-гликозидные связи (но не 3-гликозидные связи, имеющиеся в целлюлозе) в полисахаридах, и др. Обычно эти ферменты участвуют в процессе пищеварения, и их групповая специфичность, вероятнее всего, имеет определенный биологический смысл. Относительной специфичностью наделены также некоторые внутриклеточные ферменты, например гексокиназа, катализирующая в присутствии АТФ фосфорилирование почти всех гексоз, хотя одновременно в клетках имеются и специфические для каждой гексозы ферменты, выполняющие такое же фосфорилирование (см. главу 10). [c.142]

Трипсин, диальдегид целлюлоза [c.230]

Целлюлоза — трипсин (Мегск) 1202 [c.338]

Ингибитор трипсина из соевых бобов, ковалентно связанный с КМ-целлюлозой [c.366]

Рис. 12.2. Температурные зависимости гидролиза казеина свободным и связанным трипсином (быка) [5]. Реакционные смеси содержали 10 мкг свободного или 100 мкг связанного на носителе трипсина в 1,6 мл фосфатного буфера (pH 7,5). / — свободный трипсин 2 — трипсин, связанный с КМ-целлюлозой 3 — трипсин связанный с малеиновым сополимером.

Как было показано выше, целлюлоза была первым носителем в аффинной хроматографии. Обзор данных по применению целлюлозы для выделения антител и антигенов приведен в работе [81]. Данные о ковалентном связывании нуклеотидов, полинуклеотидов и нуклеиновых кислот обобщены в статье [33]. Хотя в настоящее время в аффинной хроматографии применяются и другие твердые носители, целлюлоза не потеряла своего значения. Трипсин, связанный с целлюлозой, по-прежнему ис- [c.40]

Овомукоиды, полученные из яичных белков И различных видов птиц адсорбцией и элюированием с колонок, наполненных КМ- или ДЭАЭ-целлюлозой, приблизительно в тех же условиях, какие применялись для получения овомукоидов курицы (см. стр. 25), имели близкую величину общего азота (11—13%) и содержали очень мало триптофана (менее 1%) [12]. Однако по своей ингибиторной активности по отношению к трипсину и химотрипсину они очень резко различались, и на этой основе овомукоиды можно было разделить на следующие четыре класса овомукоиды курицы, фазана, индюка и утки. Физические и химические свойства (включая молекулярный вес) овомукоида утки очень сходны со свойствами овомукоида курицы. Исследование на ультрацентрифуге овомукоидов индюка и фазана показало, что молекулярный вес их также, по-видимому, близок к весу овомукоидов курицы и утки. Исследования, проведенные с учетом весовых взаимоотношений, привели к классификации различных видов овомукоида по количеству фермента, которое ингибируется соответственно одним молем овомукоида [c.38]

Если нельзя провести полный анализ аминокислотной последовательности, то первичную структуру исходных белков можно сравнить по гомологии пептидов, полученных при ферментативном или химическом расщеплении. При структурном анализе чаще всего используют трипсин, так как действие его специфично он разрывает только те пептидные связи, в которых участвуют карбоксильные группы лизина и аргинина. Полученные триптические пептиды разделяют двумерным электрофорезом и хроматографией в тонком слое целлюлозы или силикагеля. [c.83]

Характеристика ферментных ЛС представлена в табл. 12-8. Пепсин (известно несколько видов, активных при разных значениях pH желудочного содержимого) в желудке расщепляет белковые молекулы до пептидов и пептонов, в тонкой кишке ферментируемых трипсином (вырабатывается поджелудочной железой) до полипептидов и аминокислот. Амилаза участвует в расщеплении гликогена и других полисахаридов до дисахаридов. Липаза в присутствии жёлчных кислот катализирует гидролиз жира до жирных кислот и глицерина. Целлюлоза в обычных условиях человеком не переваривается (ферменты целлюлаза и гемицеллюлаза обнаружены лишь у некоторых видов кишечной микрофлоры). [c.244]

Миллипар> Пелликон Эфиры целлюлозы РЗЕ-О 67,8 50 Трипсин, М = 20 ООО 0,69 (7) Концентрирование и очистка. водных растворов белков [c.63]

С к л е р о п р о т е и н ы. Склеропротеины или опорные белки характерны для животных они выполняют ту роль опорных веществ, которую в растительном мире играет целлюлоза. Нерастворимы в воде и солевых растворах. Многие из них не расщепляются пепсином и трипсином. К склеропротеинам принадлежат кератины (вещества волос, перьев, ноггей и т. д.) коллаген костей, хрящей и соединительной ткани, образующий при нагревании с водой желатину и клей эластин, опорный белок жил и других эластичных тканей фиброин шелка и др. [c.399]

Ферменты, разрушающие некоторые незаменимые аминокислоты (например, аспараганаза), используют для борьбы со злокаче-ственньпк ростом опухолей. Протеолитические ферменты (трипсин, химотрипсин, субтилизин, коллагеназа), иммобилизованные на волокнистых материалах (целлюлоза, полиамидные волокна, декстран и др.), применяют для эффективного лечения ран, язв, ожогов, абсцессов, а их белковые ингибиторы — в заместительной терапии для лечения эмфиземы и панкреатитов. [c.103]

Больщая часть иммобилизованных ферментных систем, хотя и необязательно все из них, соответствует этой схеме. Рекомендовано вводить символы ВКЛ, МИК, АДС и КСВ между названием носителя и фермента, характеризуя тем самым любой из четырех классов иммобилизованных ферментов. Так, например, трипсин, ковалентно связанный с карбоксиметилцеллюлозой, следует обозначать как КМ-целлюлоза-КСВ-тр Инсин, уреазу, включенную в капсулу из найлона,— как найлон-МИК-уреаза, а глюкоамилазу, включенную в полиакриламидный гель,— ак акриламидный гель-ВКЛ-глюкоамилаза. [c.421]

Теперь мы знаем, что при обмене веществ кровь играет важнейшую роль транспортного средства. Перенос газов, удаление чужеродных веществ, заживление ран, транспортировка питательных веществ, продуктов обмена, ферментов и гормонов являются главными функциями крови. Вся пища, которую человек съедает, подвергается в желудке и кишечни е химической переработке. Эти превращения осуществляются под действием особых пищеварительных соков — слюны, желудочного сока, желчи, поджелудочного и кишечного сока. Активным началом пищеварительных соков являются, главным образом, биологические катализаторы — так называемые ферменты, или энзимы. Например, ферменты пепсин, трипсин и эрепсин, а также сычужный фермент химозин, действуя на белки, расщепляют их на простейшие фрагменты — аминокислоты, из которых организм может строить свои собственные белки. Ферменты амилаза, мальтаза, лактаза и целлюлоза участвуют в расщеплении углеводов, тогда как желчь и ферменты группы липаз способствуют перевариванию жиров. [c.271]

Этот же принцип был использован при получении продукта химического присоединения фермента (трипсина или каталазы) к цианурцеллюлозе— сложному эфиру целлюлозы и циануро-вой кислоты, получаемому действием цианурхлорида на целлюлозу [c.464]

Параллельно с исследованиями Эллиотта были проведены работы по выделению и очистке брадикинина, образующегося из бычьей плазмы при действии змеиного яда. С этой целью Прадо и сотр. [1764], а также Андраде и сотр. [54] использовали хроматографию на колонке с окисью алюминия и целлюлозой, а Андраде и Роша э Сильва [55] — ионообменную хроматографию на колонке с амберлитом ЩС-50 (ХЕ-64). Наибольшего успеха достигли Хамберг и сотр. [921, 926, 927], применявшие хроматографию на колонке с амберлитом ШС-50 (pH 5), препаративный электрофорез и хроматографию на бумаге. Аминокислотный анализ выделенного таким образом чистого полипептида показал, что последний содержит те же аминокислоты и в таких же соотношениях, что и трипсиновый брадикинин. Тщательное сравнение фармакологических свойств показало, что оба брадикинина, образующиеся при гидролизе белков как змеиным ядом, так и трипсином, идентичны синтетическому бради-кинину. Сообщение о выделении брадикинина из продуктов инкубации бычьей плазмы со змеиным ядом было опубликовано также Зубером и Жаком [2680]. [c.106]

Гиалуроновую кислоту можно освободить от примеси хондроитинсульфатов осаждением цетилпиридинийхлоридом или адсорбцией на ЭКТЕОЛА-целлюлозе. В крупномасштабных опытах при высаливании сульфатом аммония в присутствии пиридина [2] получают продукт, ие содержащий каких-либо сульфатов (содержание 3 << 0,1%). В настоящем разделе описан новый метод [2], предусматривающий растворение ткани при обработке пепсином и трипсином, последующее удаление белка смесью амилового спирта и хлороформа и окончательную очистку осаждением сульфатом аммония в присутствии пиридина. [c.368]

Бурильон и сотрудники также показали, что -кислый гликопротеин может расщепляться протеолитическими ферментами. Изучая действие этих ферментов на препараты, выделенные из плевральной жидкости человека, эти авторы обнаружили, что трипсин наиболее активно расщепляет гликопротеин, а затем в порядке убывания активности идут пепсин, папаин и химотринсин [138]. Смесь, полученная в результате последовательного действия всех трех ферментов, разделялась при зональном электрофорезе на три компонента, а при хроматографии на ДЭАЭ-целлюлозе — на пять компонентов. При определении коэффициентов седиментации этих фракций были обнаружены очень небольшие различия. Найденные коэффициенты седиментации соответствовали молекулярным весам от 3000 до 3500, Содержание углеводных компонентов в них также было очень сходно, за исключением количества гексозамина. Все гликопептиды содержали одни и те же семь аминокислот (кроме валина), но их молярные соотношения сильно варьировали. На ]Ч-концах были обнаружены четыре различные аминокислоты [25]. [c.92]

Карстен и Пирс [27] получили гликопентиды из ТСГ обработкой гормона трипсином и папаином и использовали сефадекс для выделения углеводсодержащих пептидов из инкубационной смеси. Дальнейшее разделение было достигнуто с помощью хроматографирования на ДЭАЭ-целлюлозе. На основании анализа гликопептидов авторы сделали вывод, что все углеводы сосредоточены в одном компоненте, состоящем из 1 остатка фукозы, [c.242]

Иммобилизация трипсина на целлюлозе. 10 мл 6%-ного раствора перйодата натрия смешивают с 0,5 г целлюлозы. Перемешивают смесь в течение 3 ч, затем осадок отделяют и промывают водой. Промытый осадок помещают в 10 мл 0,1 М трисового буфера, pH 8,0, содержащего 10 мМ СаС12 для уменьшения автолиза, и добавляют фермент. Количество добавляемого трипсина зависит от его удельной активности и, как правило, это 100 мг. Смесь инкубируют при перемешивании в течение 1—3 ч. Точное время инкубации устанавливают экспериментально, определяя удельную активность нативного трипсина и активность в супер-натанте для расчета количества фермента, связавшегося с но-сителем. Пробы для измерения активности супернатанта следует отбирать в процессе иммобилизации через каждые 20—30 мин. Полученный препарат иммобилизованного фермента отделяют фильтрованием, промывают буферным раствором и насыщенным раствором мочевины для удаления не связавшегося с носителем фермента. Высушенный на фильтре препарат иммобилизованного трипсина может храниться в течение нескольких месяцев при 4°С практически без потери активности. [c.148]

Хорошо известно, что протеиназы, расщепляя денатурированные белки, способствуют очищению ран, и следовательно, их заживлению. В этом направлении, в клинической практике с помощью иммобилизованных протеиназ сделано многое. В качестве носителей для иммобилизации протеолитических ферментов наиболее употребимы волокнистые материалы на основе целлюлозы, поливинилового спирта, солей альгиновой кислоты, полиамидное и коллагеновое волокно. Готовят препараты, иммобилизованные также на гранулированных материалах — целлюлозных шариках, гранулах декстрана, предварительно гидролизованных шариках капрона. Применяют также препараты, изготовленные нековалентным включением фермента в растворимые целлюлозы, в медленно рассасывающийся коллаген. Готовят нити, в которые при формовании включают фермент и используют их в качестве шовного материала. Сравнительный анализ действия нативных и иммобилизованных протеиназ (в основном а-химотрипсина, трипсина, террилитина, субтилизи-на, коллагеназы) показал, что уже на 2—4-й день рана очищается от некротических масс и по крайней мере вдвое быстрее наступает грануляция. [c.132]

Схема разделения и очистки пептидов, описываемая ниже (включающая гельфильтрацию, хроматографию на ДЭАЭ-целлюлозе или дауэксе-50, высоковольтный электрофорез и хроматографию на бумаге), применима к белкам средней молекуляр-1ЮЙ массы (до 40 000). Крупные фрагмеггты, плохо разделяющиеся на бумаге и элюирующиеся с нее, первоначально отделяют гель-фильтрацией, а основную часть пептидов после фракцио- шрования на ионообменнике очищают окончательно хроматографией на бумаге. Однако эта схема применима далеко ие ко всем типам гидролизатов белков. Например, мембран11ые белки плохо расщепляются ферментами с высокой специфичностью, такими, как трипсин или стафилококковая протеаза гидрофобные пептиды склонны к образованию агрегатов при гель-фильтрации, осаждаются на ионообменных колонках и экстрагируются в охлаждающую среду при высоковольтном электрофорезе на бумаге и в органическую фазу при промывках в реакции Эдмана. Оптимальная схема анализа структуры мембранных белков включает их фрагментацию с помощью химических методов на небольшое число крупных пептидов, разделение в денатурирующих условиях на полиакриламидных гелях и определение аминокислотной последовательности автоматическим методом после присоединения пептида к твердой матрице. Альтернативный вариант основан на использовании протеаз с низкой специфичностью (таких, как пепсин или эластаза). При этом образуется значительное число коротких пептидов, которые [c.352]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология