Михаэлиса кажущаяся

Для определения кинетических и равновесных параметров уравнения (6.27) выражение для кажущейся константы Михаэлиса [c.223]

Уравнение (5.6) описывает зависимость скорости ферментативной реакции, протекающей по схеме (5.1), от начальной концентрации субстрата и позволяет определять на опыте значения констант йг и Кз, являющихся важнейшими характеристиками ферментативной реакции. В том случае, когда определяемые из эксперимента константы 2 и К являются эффективными величинами (зависящими от pH среды, присутствия в системе ингибиторов или активаторов, наличия дополнительных стадий в схеме (5.1) и т. д.), их называют соответственно каталитической константой ( кат) и кажущейся константой Михаэлиса (/(т(каш)) данной ферментативной реакции. Тогда уравнение (5.6) выглядит следующим образом [c.78]

Рис. 36. Определение максимальной скорости и кажущейся константы Михаэлиса для гидролиза метилового эфира М-ацетил-Ь-ва-лина, катализируемого а-химотрипсином, в координатах Лайнуивера-Берка

Рис. 68. Влияние концентрации ингибитора на величину кажущейся константы Михаэлиса ферментативной реакции в случае связывания с активным центром фермента двух молекул конкурентного ингибитора

Кинетические параметры У т — максимальная скорость и Кт(кят)— кажущаяся константа Михаэлиса ферментативной реакции— функции констант скоростей индивидуальных стадий (см. соотношения 5.10, 7.2, 7.3). Для раздельного определения этих параметров в общем случае нельзя использовать интегральные методы обычной неферментативной кинетики вследствие смешанного порядка ферментативных процессов. Например, метод Гуггенгейма (см. гл. 2) пригоден для обработки кинетики ферментативных реакций только в случае. т(каж)> [8]о или [Е]о>[8]о, т. е. только при наличии кинетики первого порядка по субстрату или продукту. [c.166]

Таким образом, роль диффузии в кинетике реакций, катализируемых иммобилизованными ферментами, сводится к увеличению кажущейся константы Михаэлиса [c.270]

Величина кажущейся константы Михаэлиса для всех трех случаев имеет одинаковый вид [128] [c.183]

Величины кажущихся констант Михаэлиса для субстратов колеблются в зависимости от природы используемого буфера, pH, температуры, источника выделения фермента и прочих условий. Кажущиеся константы Михаэлиса цитоплазматических креатинкиназ равны для Mg—АТФ—0,5—1,0 мМ Mg—АДФ—0,2—0,8 мМ для креатина — [c.292]

НО отмечалось, что максимальная скорость многих ферментативных реакций, наблюдающаяся при насыщающей концентрации субстрата, а не только кажущаяся величина Кт, зависит от pH. Это заставило предположить, что концентрация ионов водорода определяет не только ионизацию свободного фермента, но также кислотно-основную диссоциацию фермент-субстратного комплекса, причем этот последний процесс влияет на концентрацию активного комплекса Михаэлиса и образование продуктов реакции. [c.109]

При избытке субстрата величина кажущейся константы скорости реакции с ингибитором определится в основном соотношением к 1к+х, с одной стороны, и суммой к+2 VI к-х — с другой. Если лимитирующим скорость реакции звеном (т. е. более медленным процессом) является образование свободного фермента из комплекса Михаэлиса, то кажущаяся константа скорости Ы при некотором избытке [5] станет постоянной и не зависящей от дальнейшего изменения [8]. Это значит, что предельное значение кажущейся константы скорости реакции с ингибитором в этом случае будет равно к-х + А+а). При соизмеримых значениях к и к-х + к+ ) зависимость от [8] при [8] Кт будет сложнее. [c.120]

В этом случае значение кажущейся константы скорости ингибирования приближается к величине константы скорости реакции ингибитора с комплексом Михаэлиса и не зависит от дальнейшего увеличения концентрации субстрата. Это естественно, так как при избытке субстрата практически весь фермент находится в форме Е8. [c.122]

Кт — кажущаяся константа Михаэлиса (величина, обратная длине отрезка, отсекаемого на оси абсцисс при использовании метода двойных обратных величин) [c.12]

В простой формулировке Михаэлиса имеется указание на существование одного комплекса Е5. В более сложных случаях энергетический барьер, определяющий скорость, может меняться, например, при изменении pH [15] или температуры, что приводит к заметному отклонению от уравнения Аррениуса, и кажущаяся энергия активации убывает по мере возрастания температуры [16]. [c.316]

В случае ПА, для которой субстратом является анион бензил-пенициллина, желательно использование положительно заряженной матрицы. В этом случае сорбция субстрата носителем приводит к уменьшению величины кажущейся константы Михаэлиса, т. е. к улучшению связывания субстрата и фермента. Кроме того, при использовании анионитов происходит смещение рН-оптиму-ма каталитической активности фермента в область меньших значений pH раствора. Для большинства биологически активных веществ — лабильных соединений, используемых в качестве субстратов, смещение рН-оптимума каталитической активности фермента в область нейтральных pH является крайне желательным, поскольку это позволяет проводить ферментативную реакцию в более мягких условиях, уменьшающих инактивацию субстрата и продуктов реакции и увеличивающих общий выход процесса. [c.240]

Если имеется достаточно данных для построения кривых титрования при различных потенциалах, то можно вычислить кажущиеся константы ионизации/С1 и /Сг или значения р/С] и р/Сг- Как показано на рис. 4, где Во предполагается равным 0,2 в, К = 0 , /С2 = 10" . кривая зависимости Еср от pH имеет форму, изображенную на рисунке, и приводит к указанным значениям р/С. Чтобы детально проанализировать этот и другие случаи, необходимо обратиться к работам Кларка [13], Михаэлиса [68] и других исследователей. [c.75]

Преобразуя выражение для кажущейся константы Михаэлиса, получим [c.226]

Рнс. 83. Зависимость кажущейся константы Михаэлиса от концентрации ингибитора Ii (при [1а] = onst) в присутствии двух взаимозависимых конкурентных ингибиторов [c.228]

Зависимость кажущейся константы Михаэлиса от начальной концентрации субстрата для гидролиза бензилпенициллина, катализируемого пенициллинамндазой. [c.175]

В таблице 3 приведены результаты кинетического исследования ацилирования папаина ж-нитрофениловым эфиром карбо -бензоксиглицина [10] в условиях [E]oS>[S]o. При изучении этой реакции в стационарном режиме было найдено, что величина кажущейся константы Михаэлиса равна (1,894=0,17) -10 М, а вели-чина кат //Ст(каж) равна (1,15+0,08) -105 сек-. Принимая трехстадийную схему протекания ферментативной реакции (9.7), найти, [c.191]

Из уравнения (88) с учетом (89) и (92) можно получить выражения для кажущихся кинетических параметров ферментативного гидролиза гомополимерного субстрата, снязываюи1,ие классическое уравнение Михаэлиса — Ментен со схемой (84) [c.112]

Во всем исследованном интервале pH значение кажущейся константы Михаэлиса постоянно (см. табл. 40), в то время как рН-завиеимости каталитической константы и константы скорости вто- [c.198]

Кажущаяся величина константы Михаэлиса для субстратов (фрук-тозо-6-фосфата и АТФ) зависит от pH реакционной среды, в которой проводится определение ферментативной активности и от концентрации второго субстрата. В зависимости от условий эксперимента она может изменяться в широких пределах для фруктозо-6-фосфата — от [c.238]

Величины кажущихся констант Михаэлиса колеблются в зависимости от используемого буфера, pH, температуры и других условий. В трнс-НС1 буфере, pH 7,4, Кт для АДФ — 0,25 мМ, для фосфоенолпирувата — 0,048 мМ. [c.270]

Если использовать допущение о стационарности и учесть в уравнении материального баланса для фермента не только свободный фермент и комплекс Е5, но и ком)плекс Е1, то нетрудно убедиться в том, что в случае конкурентного ингибирования зависимость скорости от концентрации субстрата аналогична по виду уравнению (6-15). Однако константа А"м долж1на быть заменена на кажущуюся конста1нту Михаэлиса (/См),. зависящую от концентрации ингибитора [c.27]

Если константа скорости Ьа, в схеме (6-47) не равна нулю, может-иметь место либо ингибирование, либо активация. При = модифи катор либо увеличивает кажущуюся константу Михаэлиса (ингибирование), либо уменьшает ее (активация). Максимальная скорость остаетс неизменной. Моно и др. [35] называют ферментные системы с подобными кинетическими свойствами /С-системами. Если же K = Ki, а то мы имеем истинную К-систему. В общем случае в присутствии модификатора происходит изменение как кажущейся константы Михаэлиса,. так и кажущейся максимальной скорости. [c.31]

Измерение кинетических констант иммобилизованных ферментов не дает истинных констант, эквивалентных полученным в гомогенных растворах, потому что на измеряемые параметры оказывают существенное влияние физические факторы, такие как диффузия. По этой причине максимальная скорость реакции и константа Михаэлиса должны расматриваться как кажущиеся величины V=Vksm и Кт=Кт каж). Кт каж) опрсделяется, следователь-но, как концентрация субстрата, при которой скорость реакции соответствует половине Укаж- Другие кинетические константы должны быть представлены также как соответствующие кажущиеся величины. [c.421]

Поверхность нерастворимого носителя с ковалентно связанным ферментом в водной суспензии окружена неперемешиваемым слоем растворителя [15]. При ферментативной реакции в неиереме-шиваемом слое перпендикулярно к нему устанавливается градиент концентрации субстрата. Насыщение иммобилизованного фермента происходит при концентрации субстрата, более высокой, чем это требуется для насыщения соответствующего нативного фермента в растворе. Это приводит к возрастанию кажущейся константы Михаэлиса Кт(каж). [c.423]

Иммобилизация позволяет изучать ферменты в условиях, которые обычно приводят к нх агрегации. Иммобилизация химотрипсина на стекле позволила Танизава и Бендеру [49] исследовать влияние апротонных дшюлярных органических растворителей на кинетику катализируемого химотрипсином гидролиза в условиях, приводящих к агрегации свободного химотрипсина. В ходе этого исследования было найдено, что кажущиеся константа Михаэлиса Кт(каж) и константа скорости деацилирования з(каж) существенно зависят от концентрации органического растворителя. [c.437]

Следовательно, dSIdt = О, т. е. не происходит превращения субстрата. Это кажущееся противоречие теории Михаэлиса и Ментен разъясняется, если кинетику ферментативного действия анализи- [c.40]

Из этого уравнения ясно видны особенности ингибирования уравнение имеет тот же самый вид (линейность графиков сохраняется), максимальная скорость реакции не изменяется, но кажущаяся константа Михаэлиса возрастает по сравнению с Кт для неингибиро-ванной реакции в (СЯд-ЬО раз. На этом основании значение Кд можно определить экспериментально, поскольку определение в отсутствие Q дает Кт, а в присутствии Р получается /(т(<Э/Сд1)4 Если Р = 0 или /С<з очень мала, что указывает на низкое сродство р к ферменту, то ингибирования не наблюдается и кажущаяся Кт имеет нормальное значение. Далее, если Ао настолько велико, что определяет значение знаменателя в уравнении (17), т. е. если концентрация субстрата достаточна для достижения максимальной скорости реакции, то член QKQ опять-таки не влияет на величину знаменателя и максимальная скорость реакции не изменяется. Таким образом, ингибирование носит конкурентный характер оно выражено в наибольшей степени при высокой концентрации ингибитора или низкой концентрации субстрата и исчезает при очень низкой концентрации ингибитора или очень высокой концентрации субстрата. Это весьма наглядно видно на графиках, изображающих кинетику нормальной и конкурентно ингибированной ферментативных реакций (фиг. 8). [c.69]

Несмотря на кажущуюся сложность реакции, вне зависимости ог числа и природы интермедиатов, принимающих участие в механизме реакции, стационарная кинетика процесса будет описываться уравнением Михаэлиса. Для характеристики ферментативных реакций обычно определяют оба параметра входящие в уравнение Михаэлиса — Ментен максимальную скорость Ут и константу Михаэлиса Кт- Важно отметить, что без детального знания механизма реакции интерпретация йкат и Кт как констант связывания фермента субстратом и константы скорости превращения фермент-субстратного комплекса неправильна, поскольку для разных кинетических схем константы ккат и Кт могут отражать совершенно различные процессы (ом. табл. 1), тем не менее эти характеристики легко определяются экспериментально и в ряде случаев несут весьма важную информацию о свойствах каталитической реакции. [c.14]

Галофильные свойства механизма переноса Na+ у морских беспозвоночных. В контексте этой главы наибольший ннтерес для нас представляет зависимость системы активного переноса Na+ от концентрации Na+. Эта зависимость соответствует кинетике насыщения Михаэлиса — Ментен, что позволяет количественно оценить кажущееся сродство системы к ее главному неорганическому субстрату — Na+. Как выяснилось, кажущаяся величина Кш для Na+ в весьма отчетливой форме зависит от экологии данного вида. [c.146]

Мы видим, что весь эффект конкурентного торможения на кинетике реакции заключается в кажущемся росте второй константы Михаэлиса в (1-[-ЛГ 1) раз. Следовательно, подавляющее действие ингибитора снимается путем соответствующего увеличения концентрации субстрата. В этом и заключается смысл конкуренции молекул субстрата и ингргбитора за места в активном центре фермента. В диаграмме Лайнуивера и Бэрка появле- [c.160]

Эти уравнения определяют кажущиеся константы диссоциации /Сд которые могут быть отнесены к наблюдаемому потенциалу по способу, предложенному Кларком [12, 13] и другими исследователями [27, 33, 68, 83, 85]. Михаэлис и Шуберт [67] приводят теоретические кривые образования димеров типа ВО (рис. 5). Цифра на каждой кривой соответствует величине 5Кл, которая является произведением константы диссоциации на 8 8 выражает сумму молярных концентраций восстановленных и окисленных молекул, т. е. 8 = [0]+[В]+2[В0]. Из этих кривых видно, что если степень димеризации достаточно мала, то экспериментальная кривая окажется почти такой же, как и для неосложненного случая. Если же степень димеризации достаточно велика, то кривая имеет две ступени. Как отмечали Михаэлис и Шуберт [67], само собой разумеется, [c.81]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология