Электрофорез в с хроматографией

Второй раздел практикума ставит своей целью познакомить студентов с особенностями выделения, фракционирования, идентификации и количественного определения различных природных азотсодержащих < оединений. белков, пептидов, аминокислот, нуклеиновых кислот, нуклеотидов и пр Предлагаемые экспериментальные работы включают аиболее широко используемые в лабораторной практике современные методы разделения и анализа этих соединений различные виды электрофореза, хроматографии, спектрофотометрии, колориметрии и др. Работа проводится как на готовых коммерческих препаратах высоко- и низкомолекулярных азотсодержащих соединений, так и на препаратах, выделяемых студентами из различных тканей лабораторных животных. [c.79]

Изучение процессов денатурации и ренатурации, которое проводится с помощью разнообразных физико-химических методов (седиментация, оптические методы, метод ядерного магнитного резонанса, электрофорез, хроматография и др.), позволяет лучше [c.105]

Из возможных методов очистки (экстракция, осаждение, адсорбция, диализ и электродиализ, электрофорез, хроматография) наиболее перспективным методом является хроматография, в частности хроматография в тонком слое. Чаще всего хроматография в тонком слое в целях очистки сочетается с экстракцией. [c.164]

В последние 15 лет были разработаны различные хроматографические методы, позволяющие фракционировать высокомолекулярные нуклеиновые кислоты для этой же цели применяют электрофорез. Хроматографией на бумаге и другими распределительными методами, а также ионообменной хроматографией удалось выделить продукты гидролиза нуклеиновых кислот. Определяя концентрации выделенных оснований, нуклеозидов, моно- и олигонуклеотидов, в настоящее время проводят количественный анализ с очень небольшим количеством гидролизата. [c.437]

Изучение структуры и свойств белков и нуклеиновых кислот шагнуло далеко вперед после создания совершенных методов их выделения и очистки. Помимо ранее широко применявшихся методов осаждения, кристаллизации и диализа, для этой цели стали использоваться методы электрофореза, хроматографии, сорбции и противоточной экстракции. Ввиду того что природа биополимеров как полиэлектролитов проявляется во всех физико-химических процессах, возникает необходимость рассматривать электрохимические свойства белков и нуклеиновых кислот, что удобнее всего осуществлять с помощью потенциометрического титрования. [c.5]

Заключительная оценка полноты очистки и гомогенности белка требует сочетания ряда применяемых методов. Для предварительного вывода о гомогенности необходимы прежде всего данные о невозможности дальнейшего фракционирования препарата всеми применимыми в данном случае методами. Разумеется, имеются в виду не все возможные приемы, а наиболее эффективные варианты основных методов фракционирования— ультрацентрифугирования, электрофореза, хроматографии, молекулярной фильтрации и др., причем не в препаративных, а в аналитических модификациях. При этом приходится считаться с опасностью того, что выявление, новых фракций может быть обусловлено частичной денатурацией белка при некоторых из этих процедур. С другой стороны, невозможность дальнейшего фракционирования может быть обусловлена недостаточным совершенством использованных разновидностей методов разделения. Нередко оказывалось, что применение более совершенных методов позволяло фракционировать белки, считавшиеся ранее гомогенными. [c.35]

В настоящее время в очистке белков, как и во всех других областях белковой химии, произошли огромные изменения. Разработаны методы большой эффективности и универсальности, и задача разделения белков утратила в значительной мере свою исключительность. Выделение новых ферментов превращается в банальную операцию. Все это результат разработки методов хроматографии и препаративного электрофореза. Хроматография — несомненно самый избирательный п общий метод разделения близких веществ — долгое время не могла применяться в должной степени к белкам вследствие трудностей, связанных с денатурацией. При хроматографии акты сорбции и десорбции повторяются сотни раз. Поэтому необходима полная идеальная обратимость процесса сорбции—десорбции. Однако белки благодаря своеобразию структуры частично денатурировались прп сорбции на ионообменных смолах и потому становились нерастворимыми и не могли хроматографироваться. [c.130]

Изоферменты могут быть разделены электрофорезом, хроматографией, гель-фильтрацией. [c.196]

Биохимические методы в лабораторной диагностике наследственных болезней применяются с начала XX века. Биохимические показатели (первичный белковый продукт гена, накопление патологических метаболитов внутри клетки и во внеклеточных жидкостях больного) отражают сущность болезни более адекватно, чем клинические симптомы, не только в диагностическом, но и в генетическом аспекте. Значимость биохимических методов повышалась по мере описания наследственных болезней и совершенствования этих методов (электрофорез, хроматография, спектроскопия и др.). [c.258]

Ввиду того, что различия в растворимостях полипептидов очень невелики, для выделения индивидуальных пептидов и.з смесей требуются специальные методы. К ним относятся фракционный диализ, распределительная хроматография (например, на колонке из бумажного порошка или листе бумаги), адсорбционная хроматография, ионнообменная хроматография, электрофорез и противоточное распределение по Крэйгу (т. е. распределение между двумя ограниченно смешивающимися жидкостями). Для характеристики выделенных пептидов и доказательства их однородности применяют противоточное распределение, количественный анализ аминокислотного состава и определение концевых групп полипептидной цепи. [c.383]

При электрофорезе с последующим хроматографированием на бумагу, пропитанную раствором электролита, наносят каплю анализируемого раствора и проводят электрофорез, подключая концы листа бумаги через электроды к источнику постоянного тока. После окончания электрофореза бумагу вынимают из прибора, сушат и переносят в камеру для хроматографирования по способу восходящей или нисходящей хроматографии. После окончания хроматографирования бумагу проявляют и проводят качественные и количественные определения. Метод раздельного электрофореза и хроматографирования позволяет проводить эти две операции при различных значениях pH, что улучшает возможности разделения. [c.220]

Иногда в литературе этот метод называют электрофорезом или ионофорезом на бумаге (электрофорез — передвижение частиц в электрическом поле). Однако метод имеет сходство не только с электрофорезом, но и с хроматографией на бумаге. Поэтому предложено называть данный метод разделения веществ электрохроматографией на бумаге. [c.348]

Хроматография — колоночная, тонкослойная, бумажная. Электрофорез на бумаге. Г ель-фильтрация [c.230]

Материал учебника несколько шире рамок действующей программы. В него вошли такие разделы физической химии, как основы учения о строении вещества и химической связи, теория спектральных методов исследования. Несколько более широко, чем в обычных курсах физической химии, даны такие разделы, как свойства электролитов, электрохимия, экстракция, перегонка с водяным паром, адсорбция, катализ, получение и стабилизация золей и эмульсий, мицеллообразование и солюбилизация в растворах поверхностноактивных веществ (ПАВ), применение ПАВ в фармации. Рассмотрено влияние дисперсности на свойства порошков. Принимая во внимание аналитическую направленность специальности Фармация и важное значение методов молекулярной спектроскопии для исследования и анализа лекарственных веществ, авторы уделили большое внимание изложению теории физико-химических методов анализа (рефрактометрия, поляриметрия, фотометрия, спектрофо-тометрия, кондуктометрия, потенциометрия, полярография, хроматография, электрофорез и др.). [c.3]

Термодинамические методы основаны на переходах вещества из одной фазы в другую, при этом химический потенциал вещества понижается [2, с. 16]. К этому классу методов очистки относятся перекристаллизация, перегонка (дистилляция), возгонка, хроматография, адсорбция с последующей десорбцией, электролиз, электрофорез, термодиффузия и многие другие. К этому же классу методов можно отнести и отделение одного вещества от другого при помощи химической реакции. Если реакции подвергается нужное вещество, то после отвода его из зоны реакции в виде некоторого нового соединения последнее разлагают для получения исходного вещества. В ряде случаев четкой границы между двумя классами методов провести не удается. [c.99]

Более прост экспериментальный метод, представляющий собой сочетание электрофореза с хроматографией. Он назван зональным электрофорезом. В нем одновременно используются различие зарядов и различие сорбционной активности разделяемых веществ. [c.216]

Разделение и очистка комплексных соединений при помощи хроматографии и электрофореза. Для выделения комплексного иона из смеси инертных комплексов пригодны методы, применяющиеся для лабильных комплексов, но требования к избирательности реакции здесь гораздо выше. Это легко видеть на примере реакции осаждения при обработке избытком осадителя смеси взаимопревращающихся лабильных комплексов получается осадок, образованный только одним из них. Из смеси близких по свойствам инертных ионов выпадает смесь продуктов. [c.417]

Электрофоретические хроматограммы на бумаге получают путем сочетания распределительной хроматографии на бумаге с электрофорезом при проведении их одновременно или раздельно. [c.284]

Радиоактивные изотопы используются также для установления полноты и чистоты разделения многокомпонентных смесей. Контроль разделения при электрофорезе, электролизе, хроматографии, экстракции, разгонке и т. п. легко осуществляется с помощью радиоактивных изотопов, входящих в состав компонентов смеси. При этом можно установить загрязнение одной фракции разделенной смеси другим компонентом и степень разделения вещества, а следовательно, и проверить методику обычного химического анализа. [c.318]

Чрезвычайно затруднено обнаружение соединений — отдельных представителей гомологического ряда — при совместном их присутствии, особенно если имеется избыток одного из компонентов. В. этом случае существенную помощь оказывает лишь применение эффективных методов разделения (разд. 7.1), таких, например, как хроматография в ее различных вариантах, электрофорез или многократное распределение. [c.57]

Критерий чистоты Б.-гомогенность прн электрофорезе, хроматографии и ультрацентрнфугированни. Одноцепочечный Б. должен быть гомогенным прн N- и С-концевом анализе (см. ниже). Примесь сопутствующих ферментов определяют с помощью спецнфич. субстратов высокую чувствительность имеют иммунохим. методы (обычно до 10 мкг/мл примесного антигена) [c.250]

В настоящее время химический анализ выполняется в основном с помощью настольных систем, размером приблизительно с большой телевизор. Как видно из предыдущих глав, существует множество аналитических методов, предназначенных для проведения лабораторного анализа проб с целью выяснения возможной структуры, идентификации компонентов и определения их количеств. Анализ включает в себя стадии пробоотбора, предварительной обработки пробы, разделения компонентов и их последующего определения. Первоначально все эти стадии выполнялись вручную с помощью различных приборов. Однако для анализа в режиме on-line необходима как можно большая автоматизация процесса. Во многих современных оп-Нпе-системах стадии пробоотбора и пробоподготовки, разделения и определения сосредоточены в одном приборе с автоматическим компьютерным контролем большинства стадий. Примерами этих так называемых систем полного анализа (СПА, рис. 15.1-1,6) являются проточно-инжекционный анализ (ПИА), электрофорез, хроматография (гл. 5) и масс-спектрометрия (разд. 9.4). Эти методы используют в режиме ex-situ, т. е. пробу необходимо отобрать и перенести в лабораторию. Как правило, перед началом анализа проба подвергается предобработке, сложность которой определяется решаемой аналитической задачей. Эти системы обладают рядом преимуществ, связанных с высокой степенью автоматизации анализа, возможностью проведения автоматической калибровки и отсутствием необходимости использовать высокочувствительные детекторы, благодаря предварительной [c.639]

Для определения концентрации гормона смешивают меченный, например ИОДОМ-125, гормон с антителами к данному гормону. Образуется комплекс — гормон—антитело. При добавлении исследуемого экстракта немеченный гормон, находящийся в исследуемом растворе, конкурирует с меченым в реакции связывания с антителом, вытесняя последний из комплекса. Далее освобождеиный гормон отделяют от связанного электрофорезом, хроматографией или осаждением и количественно определяют его, измеряя радиоактивность. Из полученных данных можно рассчитать количество исследуемого немеченого гормона, так как радиоактивность свободного гормона зависит от того, насколько много меченого гормона было вытеснено из комплекса антиген — антитело. Более подробно с этим вопросом можно ознакомиться по литературе [582, 591]. [c.240]

Строение гемоглобинов. Существует несколько гемоглобинов кроме гемоглобина А нормального взрослого человека и гемоглобина Р зародыша, различают ряд аномальных или патологических ге моглобинов (С, Е, О, Н, I, 8 и т.д.) на основании их поведения при электрофорезе, хроматографии и по отношению к ферментам. [c.433]

Первая задача химиков, изучающих природные соединения состоит в выделении чистых веществ из сложных смесей, почти всегда получаемых из живых организмов. Эта задача иногда тривиальна, но иногда достигает фантастической сложности так, сердцевина некоторых кедровых деревьев содержит чистые кристаллы карбоновой кислоты с одиннадцатью углеродными атомами, но в то же время некоторые железы животных содержат менее одной миллионной части медицински важных гормонов, смешанных не только с кровью, тканью, клеточной жидкостью и белками, но и с множеством других гормонов, почти идентичных по химической структуре и физическим свойствам. Для решения таких проблем химик должен применять весь арсенал методов разделения, включая перегонку, кристаллизацию, электрофорез, хроматографию и многие другие, а также ему необходимо разработать методы, позволяющие контролировать присутствие нужного вещества, для того чтобы устанавливать, обогащена ли им фракция. [c.166]

В химии и биохимии одной из наиболее часто встречающихся операций является отделение одного вещества от другого. До введения в практику центрифугирования, электрофореза, хроматографии и других современных методов это при возможности достигалось с помощью фильтрования. Первоначально фильтром служила тонкая ткань (например, для отделения творога от сыворотки применяли марлю), и до сих пор марлю иногда испо/1ь-зуют для предварительного осветления экстрактов тканей. Позднее ткань была заменена пористой бумагой, затем были разработаны методы получения бумаги с различными размерами пор, что позволяет контролировать размер задерживаемых частиц. Чтобы задерживать частицы, которые по размеру меньше размера пор самых тонких сортов бумаги, попользуются фильтры на основе ацетата целлюлозы, нитроцеллюлозы и стекловолокна. Еще более тонкой мембраной служит пленка для диализа, которая пропускает небольшие молекулы и ионы, но задерживает лш/сромолекулы н макромолекулярные ассоциаты. Вариантом диализа является так называемый молекулярный фильтр, который отделяет малые макромолекулы от больших. [c.154]

Вопрос о природе связи аминокислотных производных с другими нефтяными компонентами (порфиринами, асфальтенами) пока не решен. Ряд экспериментальных результатов косвенно свидетельствует о возможности их взаимосвязывания или ассоциирования. Известно, что порфррины не удается отделить от аминокислот с помощью электрофореза [761]. После гидролиза заметно меняются характеристики порфириновых компонентов концентрата .несколько увеличивается удельный объем их удерживания при г ель-хроматографии [390], меняются подвижность при тонкослойной хроматографии и И К спектры. Однако убедительных прямых подтверждений наличия химической связи между аминокислотами (пептидными) и порфириновыми молекулами не получено. [c.135]

При растворении Р4О10, в воде наряду с ортофосфорной кислотой образуется смесь различных конденсированных фосфорных кислот. Зти кислоты и их соли, называемые конденсированными фосфатами, можно обнаружить и разделить методами хроматографии на бумаге и электрофореза на бумаге (разд. 38.3.6). [c.549]

Для современной органической химии при решении структурных проблем все большее значение приобретают физические методы исследования. Теплоты сгорания, парахор, дипольные моменты, изучение кинетики, магнитная проницаемость, метод меченых атомов, константы хроматографии и электрофореза, скорость осаждения при центрифугировании, люминесцентный анализ, нефелометрия, по-ляриметрия, масс-спектроскопия, рентгеноструктурный анализ, но особенно, — спектроскопия в видимой, инфракрасной, ультрафиолетовой областях, изучение спектров электронного парамагнитного и ядернОго магнитного резонанса открыли необыкновенно широкие возможности для решения задач установления строения молекул. Физические исследования все чаще оказываются решающими для понимания структуры соединения. [c.19]

Для выделения некоторой части искомого соединения применяют любые методы, позволяющие выделить чистое соединение экстрагирование, хроматографию, перегонку, осаждение, электролиз, электрофорез и т. п. Определение содержания выделенного вещества выполняется колориметрическим, спектрофотометрпческим, весовым, объемным и другими методами. Можно также рассчитать содержание выделенного вещества, ис.ходя из объема и концентрации реагента, примененного для осаждения. [c.353]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология