Иммунные комплексы получение

Рис. 2. Секреция 1дО-подобных иммуноглобулинов восемью клопами одной перевиваемой линии лнмфобластондных клегок человека. Клеточную суспензию культуры (2-10 клеток/мл) метили в процессе биосинтеза в течение 12 ч С-лейцином (1,5 мкКи/мл). Надосадочные жидкости каждой культуры инкубировали в течение ночи при 4°С с кроличьей антисывороткой к б-цепям человека и с убитой суспензией стафилококков, несущих белок А. Клетки стафилококка и иммунные комплексы осаждали и отмывали 3 или 4 раза ЗФР, центрифугируя 10 мин при бОООд. Осадки суспендировали в буфере для нанесения и инкубировали 3 мин при 100°С. Затем проводили электрофорез в 12,5%-НОМ геле при силе тока 20 мА на пластинку. Гель фиксировали, окрашивали, обесцвечивали и высушивали на фильтровальной бумаге. Высушенную пластинку геля экспонировали на медицинской рентгеновской плеике Ко(1 гех. Полученные полипептиды имели приблизительно следующие молекулярные веса а — 63 000 Ь — 55 000 с — 51 ООО ё — 28 000 е — 25 000 / — 24 ООО.

Подобного рода проблемы очень часто возникают, например, при разработке методов иммуноферментного анализа лекарственных препаратов, стероидных и белковых гормонов. В зависимости от способа получения антисыворотки антитела могут быть специфичны либо только к одному лекарственному препарату (гап-тену), либо к целой группе близких по структуре химических соединений. В этих случаях распространен способ оценки специфичности, основанный на сравнении связывания антител в данной концентрации (или в определенном разведении иммунной сыворотки) одного и того же количества гомологичного и гетерологичного гаптена. При этом концентрация образовавшегося иммунного комплекса для гомологичного гаптена принимается равной единице, а связывание всех гетерологичных гаптенов оценивается как доля от соответствующего связывания гомологичного гаптена. [c.37]

Б. Получение иммунных комплексов [c.212]

Для выведения линий животных, устойчивых к возбудителям инфекций, можно использовать другой подход, заключающийся в создании путем трансгеноза наследуемых иммунологических механизмов. С этой точки зрения рассматривают самые разные гены, ответственные за работу иммунной системы гены основного комплекса гистосовместимости, Т-клеточных рецепторов, лимфокинов. Наиболее обнадеживающими на настоящее время являются предварительные результаты, полученные при введении мышам, кроликам и свиньям генов, кодирующих Н- и L-цепи какого-либо моноклонального антитела. Идея этого подхода заключается в том, чтобы снабдить трансгенное животное наследуемым механизмом защиты, позволяющим обойтись без иммунизации с помощью прививок. [c.434]

Данная работа показывает перспективность создания вирусоподобных комплексов, способных экспонировать на своей поверхности чужеродные антигенные детерминанты, для получения безопасных молекулярных противовирусных вакцин. Тем не менее важнейшим направлением научных изысканий остается разработка и совершенствование новых типов живых вакцин, поскольку они индуцируют сбалансированный гуморальный и клеточный иммунный ответ. [c.436]

В описываемых опытах в качестве иммунного комплекса использовали эритроциты барана, обработанные субагглютинирующей дозой IgG-антител кролика против эритроцитов барана. Полученные комплексы дополнительно инкубировали с высокоочищенным lq человека, после чего избыток этого компонента комплемента удаляли. Обработанные с помощью lq иммунные комплексы в отличие от необработанных не фиксировались на перетонеальных макрофагах мыши и на клетках из селезенки мыши. Степень торможения связывания иммунного комплекса клетками прямо зависела от дозы lq. Более того, уже фиксированные на поверхности клеток сенсибилизированные антителами эритроциты отделялись от клеточной поверхности в присутствии lq. Все это может означать, что lq, присоединяясь к антителам в составе иммунного комплекса, не только препятствует связыванию комплекса с Рс -рецепторами клеток (независимо от их происхождения), но и вытесняет присоединенный комплекс. Последнее возможно, конечно, потому, что фиксация на F -рецепторах иммунных комплексов носит обратимый характер. [c.152]

Другая важная задача — выведение трансгенных животных, устойчивых к заболеваниям. Потери в животноводстве, вызванные различными болезнями, достаточно велики, поэтому все более важное значение приобретает селекция животных по резистентности к болезням, вызываемых микроорганизмами, вирусами, паразитами и токсинами. Пока результаты селекщш на устойчивость животных к различным заболеваниям невелики, но обнаде-живающи. В частности, созданы популяции крупного рогатого скота с примесью крови зебу, устойчивые к некоторым кровепаразитарным заболеваниям. Установлено, что защитные механизмы от инфекционных заболеваний обусловлены либо препятствием вторжению возбудителя, либо изменением рецепторов. Вторжению возбудителей, равно как и их размножению, препятствуют в основном иммунная система организма и экспрессия генов главного комплекса гистосовместимости. Одним из примеров гена резистентности у мышей служит ген Мх. Этот ген, обнаруженный в модифицированной форме у всех видов млекопитающих, вырабатывает у Мх -мышей иммунитет к вирусу гриппа А. Ген Мх был вьщелен, клонирован и использован для получения трансгенных свиней, экспрессирующих ген Мх на уровне РНК. Однако данные о трансляции Мх-протеина, обусловливающего устойчивость трансгенных свиней к вирусу гриппа А, пока не получены. Ведутся исследования в целях получения трансгенных животных, резистентных к маститу за счет повышения содержания белка лакто-ферина в тканях молочной железы. На культуре клеток из почек трансгенных кроликов было показано, что клеточные линии, содержащие трансгенную антисмысловую РНК, имели резистентность против аденовируса Н5 (Ads) более высокую на 90 — 98% по сравнению с контрольными линиями клеток. Л. К. Эрнст продемонстрировал также устойчивость трансгенных животных с геном антисмысловой РНК к лейкозу крупного рогатого скота, к заражению вирусом лейкоза. [c.130]

Методы, позволяющие измерить образование иммунных комплексов в растворе, например нефелометрия, также дают возможность определить а видность сывороток. Высокоавид-ные сыворотки быстро образуют стабильные иммунные комплексы. Лишь небольшая часть сывороток, полученных от животных, имеет идеальные нефелометрические свойства. [c.113]

Антитела к ДНК спонтанно появляются в сыворотке у больных системной красной волчанкой (СКВ) и у мышей с аналогичными состояниями, полученными экспериментально (Stollar, 1973). По всей вероятности, тагсие антитела участвуют в патогенезе этой болезни, обусловленной иммунными комплексами поэтому выявление антител к ДНК в сыворотке человека имеет важное диагностическое значение. [c.92]

Выделение иммуноглобулинов, связанных с поверхностью клетки, а также их внутриклеточных предшественников (или предшественников секреторных Ig) всегда сопряжено со значительными трудностями. Радиомаркирование, позволяющее выявить следовые количества Ig, облегчает решение этой задачи. После маркирования клетки солюбилизируют в детергенте и обрабатывают лизаты сывороткой анти-Ig, полученной у другого вида иммунные комплексы обычно осаждают затем второй антисывороткой к Ig первой антисыворотки. Меченые клеточные lg, находящиеся в преципитате, исследуют методом электрофореза в полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия (ДСН) в присутствии восстанавливающих агентов или без них (Laemmli 1970). Меченые полипептидные цепи, разделенные в геле, опре- [c.77]

Хотя гибридомные технологии еще продолжают достаточно активно использоваться, с появлением новых эффективных методов белковой инженерии, в том числе систем отбора белков на основе разнообразных дисплеев и репрезентативных клонотек случайных белковых последовательностей, mAb начинают постепенно сдавать свои позиции. Новые технологии позволяют отбирать антитела требуемой специфичности непосредственно из суспензии фаговых частиц без иммунизации лабораторных животных и при этом получать белки с совершенно новой специфичностью к антигенам, которые неиммуногенны in vivo. Новые подходы дают возможность снять ограничения, накладываемые на производство антител особенностями иммунного ответа живого организма. В последние годы удалось получить большое количество рекомбинантных антител с новыми свойствами значительно уменьшить размер их молекул, а также объединить антитела в поливалентные гибридные комплексы, сильно повысив при этом их авидность. Генно-инженерными методами удалось объединить фрагменты антител с разнообразными аминокислотными последовательностями для обеспечения адресной доставки макромолекул. Такие гибридные молекулы, кроме антител, включают ферменты для активации предшественников цитоток-сичных лекарственных препаратов, токсины, белки вирусных частиц, используемые в генотерапии, и сами могут быть включены в липосомы для повышения эффективности химиотерапии. Рекомбинантные антитела применяют для получения биосенсоров, используемых при мониторинге исследуемых молекул в реаль- [c.409]

Учет полученных результатов. На рис. 11.7 показан результат тестирования четырех неизвестных сывороток. Контроль комплемента подтверждает, что разведение комплемента действительно содержит ЗЕКбо- Контроль клеток свидетельствует об отсутствии спонтанного лизиса сенсибилизированных эритроцитов. Полный лизис в лунках, содержащих контроли антигена и сывороток, свидетельствует о том, что для связывания комплемента необходимо образование комплекса антиген — антитело. Поэтому, если сыворотки содержат иммунные комплексы и инфицированы бактериями, результат реакции может быть искажен. Контроль с заведомо отрицательной сывороткой свидетельствует об отсутствии иммунных антител. Контроль заведомо положительной сыворотки показывает, что она содержит антитела в разведении 1 128. В 256-кратном разведении антитела обнаружить не удалось. Таким образом, титр контрольной положительной сыворотки равен 128. Титры тестируемых сывороток от А до D составляют соответственно 8, 256, 16 и 64. [c.324]

Другим плодотворным приемом оказалось использование двойных и тройных иммунных систем, когда, например, к первоначальным комплексам антиген—антитело присоединяются антитела, полученные от другого животного, иммунизированного сывороткой первого донора. Эти так называемые вторичные антитела узнают антитела, входящие в состав первичного иммунного комплекса, поскольку для второго животного первичные антитела являются антигенами. Кроме того, в систему можно ввести еще и белок А, способный присоединяться к одинарному или двойному иммунному комплексу, поскольку константная часть соответственно первичного или вторичного антитела в этих комплексах остается свободной. Белок А можно иммобилизовать Hii некоей матрице, создав тем самым сорбент для антител и иммунных комплексов. Этот белок можно использовать и прямо в составе бактериальной стенки. Убитые, но не разрушенные бактерии Staphylo o us aureus, за счет белка А способны связывать иммунные комплексы, в результате чего преципитация этих комплексов из раствора сводится к осаждению бактерий низкоскоростным центрифугированием. [c.270]

Классический пример взаимодействия антиген-антитело in vitro - зто реакция преципитации. Для ее получения антиген в возрастающих концентрациях добавляют к раствору антител. Количество осаждающихся иммунных комплексов вначале возрастает, а затем падает. Таким образом, кривая преципитации имеет три зоны. [c.527]

Извесгно, что в ответ на попадание в живой организм чужеродных веществ (ими могуг бьггь и суперэкотоксиканты) в нем вьфабатьшаются антитела, как отклик иммунной системы организма. Последние в высшей степени специфично взаимодействуют с этими веществами с образованием соответствующих комплексов, что в итоге приводит к их нейтрализации и выводу из организма Именно на использовании данных взаимодействий и возможности получения необходимых антител и базируются иммунохимические методы анализа. Стремление создать специфичные и эффективные методы определения в воде, воздухе и почве остаточных количеств токсичных веществ и снизить их стоимость во многом явилось стимулом к разработке указанных методов Многие иммунохимические методы имеют высокую чувствительность и специфичность, а в ряде случаев позволяют определять высокотоксичные соединения даже без вьщеления из матрицы или после минимальной очистки. [c.297]

Попытки проанализировать хим. сущность иммунного ответа сделаны еще в кон 19 нач. 20 вв. При этом были получены первые сведения о том, что в качестве антигенов могут выступать белки или полученные синтетич путем комплексы белка с низкомол соед, в этот же период С Аррениус и Т. Мадсен предложили объяснение хим механизма р-ции антигена с антителом. В 30 50-е гг 20 в благодаря фундам. исследованиям К Ландштейнера, М Гей-дельбергера, Дж. Маррака и др были заложены основы совр. И. получены важные данные по химии прир. и син- [c.218]

Сходные эксперименты с различными инбредными линиями мышей (т.е. линиями, в которых все мыши генетически однотипны) дали результаты, близкие к полученным ранее на морских свинках при иммунизации простым синтетическим полимером некоторые жнии давали сильный иммунный ответ Т-клеточного типа, тогда как другие линии совсем не реагировали. На специально выведенных линиях мышей, различавшихся только ограниченным участками генома (так называемых конгенных линиях), были проведены исследования по картированию геиов 1г, и оказалось, что эти гены расположены в пределах генного комплекса Н-2 в области между Н-2К и Н-20, впоследствии названной 1-областью. Сейчас у мышей описан уже ряд различных генов 1г, контролирующих зависимые от Т-клеток ответы на разные антигенные детерминанты, и определена их локализация в нескольких субобластях 1-области (рис. 17-64). В большинстве таких локусов способность отвечать на антигенную детерминанту определяется доминантным аллелем, однако в отдельных случаях доминирует неспособность к ответу. В этих случаях можно показать, что наследственная неспособность к иммунному ответу обусловлена активностью Т-клеток-супрессоров, и гены, контролирующие ответ этих клеток на специфическую детерминанту, называют ие /г-генами, а генами иммунной супрессии (1з). [c.60]

В рассмотренном методе обнаружения антигенов после электрофореза в ПААГ путем их диффузии в слой агаройы иммунная реакция следовала за окончанием этой диффузии, когда снятую с ПААГ агарозную реплику вымачивали в специфической антисыворотке. Два процесса можно совместить во времени, если антисыворотку заставить диффундировать в гель навстречу диффузии антигена из белковых зон, полученных в результате электрофореза [Grabar, Williams, 1953]. При этом можно ожидать образования полос преципитации комплексов антиген — антитело, подобно тому как это имеет место при двойной радиальной иммунодиффузии по методу Ухтерлони. Для удобства наблюдения раствор антисыворотки следует заливать не сверху, а рядом с треком электрофореза, на некотором расстоянии от него, с тем чтобы оставалась свободная полоса ПААГ, где и будет происходить диффузия антигенов и антител навстречу друг другу. Поскольку расположение полос антигенов после электрофореза заранее неизвестно, антисыворотку, очевидно, придется заливать не в лунку, а в канавку, идущую вдоль всего трека. Кроме того, антисыворотку следует вносить в такую канавку только после окончания электрофореза, иначе преждевременная диффузия антител в гель может помешать завершению процесса электрофоретического фракционирования смеси белков. [c.134]

Были синтезированы искусственные антигены, представляющие собой комплексы хорошо известного синтетического полипептида (Т, Г) -А-Л-сополимера тирозина, глутаминовой кислоты, аланина и лизина, с полиэлектролитами. Сам по себе этогг антиген вызывает иммунный ответ узкой специфичности, контролируемый 1г-1А-геном. Полученные ковалентные конъюгаты (Т,Г)-А-Л с ПАК и С-АК-ВП содержали 90—100 мкг полипептида на 1 мг конъюгата [180]. Для индуцирования первичного антительного ответа на (Т,Г)-А-Л мышей линии СВА и С57ВЬ/6 иммунизировали чистым (Т,Г)-А-Л или конъюгатами (Т,Г)-А-Л с ПАК или С-АК-ВП, или модифицированным сополимером акриловой кислоты и винилпирролидона (м-С-АК-ВП) в дозе 1 мг. Для оценки вторичного иммунного ответа иммунизированным животным через 1 мес. внутрибрюшинно вводили раствор чистого (Т,Г)-А-Л в дозе 40 мкг. [c.215]

Когда инфекционые, или нативные , поливирионы, называемые N-антигенами (или иногда D-антигенами), прогревают в нейтральном солевом растворе в течение 2—3 мин при 56 °С, РНК выходит из частиц и белковая оболочка одновременно приобретает новые антигенные свойства, превращаясь в Н-ан-тиген (от англ. heated — прогретый) (рис. 18.14, этап 4). Между N- и Н-комплексами наблюдается слабый иммунный перекрест (либо вовсе не наблюдается) [261, 262]. Так, сыворотка против Н-антигена не нейтрализует нативные вирионы и даже не связывается с ними. Прогретые частицы более неспособны адсорбироваться клетками. Иными словами, когда нативные вирионы прогревают, практически все их характерные поверхностные свойства утрачиваются. Пустые оболочки, полученные прогреванием вирионов, также не содержат VP4 [185] и называются искусственными пустыми частицами (ИПЧ), или искус ственным верхним компонентом (ИВК). [c.236]

В опытах по изучению взаимодействия Т- и В-лимфоцитов, полученных от конгенных штаммов мышей, установлено, что процессы клеточной кооперации находятся под контролем генов, сцепленных с главным комплексом генов гистосовместимости. Было показано, что за молекулярное распознавание между взаимодействующими Т- и В-лимфоцитами ответственны поверхностные структуры, кодируемые генами 1-области Н-2-комплекса, которые принимают участие также в генетическом контроле иммунного ответа (Katz, 1975 см. раздел VIII). [c.179]

Реакция нейтрализации (PH). Антитела иммунной сыворотки способны нейтрализовать повреждающее действие микроорганизмов или их токсинов на чувствительные клетки ткани. Это связано с блокадой микробных антигенов антителами, т. е. их нейтрализацией. При постановке реакции смесь антиген — антитело, полученную in vitro, вводят животным или вносят в культуру клеток. При отсутствии повреждающего действия микроорганизмов или их антигенов и токсинов говорят о нейтрализующем действии иммунной сыворотки и, следовательно, специфичности взаимодействия комплекса антиген — антитело. [c.179]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология