Среза контрастирование

Негативное контрастирование. Оно заключается в том, что срез образца обрабатывают растворами солей тяжелых металлов соли подбирают таким образом, чтобы они не присоединялись к исследуемым элементам структуры, а создавали темный фон. На этом фоне располагаются более светлые частицы исследуемого объекта, что позволяет четче выявить структурные особенности. Метод негативного контрастирования применяют для изучения синтетических полимеров и биополимеров. [c.189]

Рассмотрим еще одну электронную микрофотографию (рис. 91). На ней изображен кусочек среза клетки поджелудочной железы летучей мыши (опять-таки искусственно контрастированный). В центре, почти достигая краев изображения, лежит гигантское, видимое даже в световой микроскоп клеточное ядро. Его окружают все те же цистерны эндоплазматической сети, частью располагающиеся параллельно, частью отклоняющиеся от этого направления, обтекая мелкие яйцевидные включения, которые вскоре будут нам представлены особо, — это митохондрии. Сначала кажется, что эта картина не прибавляет ничего нового к нашим знаниям об эндоплазматической сети. Однако всмотритесь внимательнее. Вы заметите, что клеточное ядро окружено двойной оболочкой, которая не является сплошной наоборот, во многих местах в ней имеются дырки — поры. Создается очень отчетливое впечатление, что эта оболочка или же отдельные ее участки представляют собой часть эндоплазматической сети. На некоторых участках можно даже разглядеть, что цистерны эндоплазматической сети непосредственно продолжаются в оболочку ядра. [c.211]

Ценность электронного микроскопа заключается в его способности разрешать объекты, которые не разрешаются оптическим микроскопом в видимом или ультрафиолетовом свете. Короткая длина волны электронов, которая уменьшается в прямой зависимости от подаваемого ускоряющего напряжения, позволяет разрешать, т. е. различать как отдельные объекты, отстоящие друг от друга всего на 2А (0,2 нм или 0,0002 мкм) или даже меньше, в то время как предел разрешения световой оптики лежит вблизи 0,2 мкм (он зависит от длины волны используемого света). На практике самые лучшие современные электронные микроскопы просвечивающего типа в самых оптимальных условиях работы (т. е. при при соответствующих вакууме, центрировке линз, ускоряющем напряжении, чистоте прибора, физической стабильности и качестве приготовленного образца) дают разрешение в диапазоне 0,5—1,0 нм. Но биологические образцы имеют вполне определенную толщину реально предел разрешения для срезов достигает около 2,5 нм, а для негативно контрастированных препаратов — около 1,0 нм. Чтобы улучшить разрешение, нужны мастерство и хорошо налаженный прибор. Образцы и поддерживающие пленки-подложки с большой толщиной увели- [c.92]

В этой главе описывается небольшое число методов, которые мы в соответствии с собственным опытом считаем полезными для исследователя, изучающего анатомию бактерий. Мы делаем акцент на применении негативно контрастированных препаратов и тонких срезов образцов для анализа в просвечивающем электронном микроскопе. Здесь нет описания операций по управлению и эксплуатации электронного микроскопа [15—19], но есть краткая информация о необходимых для работы материалах и их поставщиках (разд. 4.6 и 4.7). Предполагается, что доступны вспомогательные приборы и что помощь в работе могут оказать опытные операторы. Мы поставили своей целью снабдить обучающегося сведениями о методах приготовления образцов и способах интерпретации результатов. Хотя помимо методов и оборудования, на которых делается акцент, будут упоминаться и другие, детальную информацию о них можно найти, лишь обратившись к специальной литературе, другим руководствам и журнальным статьям. В конце главы мы приводим литературу по общим вопросам [1 —14] и перечень источников специальной информации. [c.95]

Электронный микроскоп в отличие от светового позволяет исследовать только неживые высушенные объекты, так как образец находится в условиях высокого вакуума и интенсивного электронного облучения. Принцип возникновения изображения в электронном микроскопе иной, чем в световом. Как уже отмечалось, в световом микроскопе контраст обусловлен избирательным поглощением света различных длин волн элементами структуры объекта (адсорбционный контраст) или изменением фазы световой волны при прохождении света через объект (фазовый контраст), тогда как в электронном микроскопе контраст вызван отклонением ускоренных электронов тяжелыми атомами, входящими в состав тонкопленочного объекта (или искусственно внесенными в него при химическом контрастировании). Такой контраст называют дифракционным. Абсорбционный контраст в электронном микроскопе — явление нежелательное (поглощение энергии электронов приводит к хроматической аберрации, а часто и к тепловому разрушению образца), и с ним приходится бороться, исследуя объект в виде ультратонких (30—100 нм) срезов и пленок. [c.96]

Ход работы. Контроль чистоты фракций плазматических мембран с помощью электронного микроскопа производится методом негативного контрастирования и методом ультратонких срезов. Последний включает следующие этапы [c.227]

Контрастирование срезов осуществляется следующим образом. На поверхность воска в чашке Петри наносят каплю 1 %-го уранилацетата и помещают сетку срезами вниз. Окрашивание продолжается 1 ч. Затем сетку промывают дистиллятом и переносят в каплю красителя по Рейнольдсу, где держат 20—30 мин. После этого сетки промывают 0,05 М щелочью и промокают фильтровальной бумагой. После этого срезы готовы для просмотра в микроскопе. [c.232]

Назовите этапы метода ультратонких срезов. 3. Назовите основные положении метода негативного контрастирования. [c.234]

Рис. 69. Снимок (электронная микроскопия) среза микросфер, полученных в условиях холодной плазмы (контрастирование тетраоксидом осмия заливка в метакрилат).

При прямых методах исс.иедования, т. о. при исследовании непосредственно объекта в виде ультратонких срезов и пленок, часто также прибегают к методам контрастирования, которые ос]юваны на пропитывании объекта веществами, содержащими тяжелые металлы с большой рассеивающей способностью по отношению к электронам. Этот метод, по аналогии со световой микроскопией, применяющей окрашивание животных илп растительных тканей, используют, главным образом, нри исследовании биологических объектов или полимеров для получения сведений об их морфологической структуре. [c.189]

Рис. 9. Микрофотография срезов клеток мицелия фруктозного варианта A t. roseoflavus var. roseofungini (ув. 75000) а — гифы культуры на СР-1 с глюкозой б — на овсяном агаре в — культура на СР-1 с глюкозой вокруг клеток нидно большое количество трубочек, лежащих в различных плоскостях г — тонкая структура отдельных трубочек при негативном контрастировании 0,5% раствором уранилацетата (ув. 150 000) — клеточная стенка ЦМ — цитоплазматическая мембрана М — мембранные образова- иия ОГ — осмиефильные гранулы Н — нуклеоид В — вакуоль Т — трубочки (Черни и др., 1972)

Количество и размер электронно-светлых зон, выявляемых на ультратонких срезах (рис. 20, 6 и аморфных гранул, выявляемых на сколах, значительно увеличиваются при дальнейшем культивировании мицелия и достигают максимума на третьи сутки. В этот период, когда содержание антибиотика достигает максимального значения, наблюдается заметное просветление цитоплазмы и интенсивное развитие мембранного аппарата, окружающего многочисленные гранулы (рис. 20, б). Размеры гранул настолько велики, что в некоторых случаях они заполняют большую часть пространства гифы между двумя смежными септами. Аналогичные по форме п размерам гранулы наблюдаются и на негативно контрастированных препаратах (рис. 20, е). На последних этапах культивирования (7— 8 сутки) цитоплазма полностью просветляется, а содержимое клетки представлено скоплениями мембран и многочисленными крупными гранулами. Электронно-микроскопические исследования показали, что появление гранул, увеличение их числа и размеров коррелирует с содержанием антибиотика в культуре. Обнаружение у гранул люминесценции, характерной для флавофунгина, было прямым доказательством их природы (рис. 20, г). [c.175]

Препараты для ЭМВ готовят методом негативного контрастирования. Для этого смешивают равные объемы вирусной суспензии и 1%-го раствора фосфорно-вольфрамовой кислоты ( негативная краска ) на формваруглеродной подложке. Краска окружает вирусную частицу и контрастирует наружную оболочку вириона, а иногда проникает внутрь капсида, в результате чего получают профильное изображение наружной оболочки. Для выявления вирусов в биологическом материале применяют также метод ультратонких срезов. [c.267]

Из-за трудности препарирования образцов метод электронной микроскопии далеко не всегда может быть использован для анализа полимерных систем [59, 60]. Для рассматриваемых в настоящей работе сополимеров бутадиена и стирола легко осуществить контрастирование полибутадиеновой фазы с помощью 0364 [41]. Тонкие пленки толщиной в несколько десятков микрон отливают из разбавленных растворов и помещают в пары водного раствора 0з04. Аналогичной обработке подвергают тонкие срезы макроскопических образцов. Если представляет интерес морфологическая структура в плоскостях, перпендикулярных к поверхности пленки, такую пленку заделывают в материал одинаковой с ней твердости, в кото- [c.182]

Известны два метода контрастирования улвтратонких срезов и пленок при электронно-микроскопическом исследовании. [c.189]

Другой источник артефактов — неучет особенностей многих препаративных методов подготовки объектов для ЭМ. Для изучения аморфных полимеров был использован очень широкий набор методов, включающий приготовлепие тонких пленок из растворов, ультратонких срезов, различные методы контрастирования и травления, реплики, темнопольная микроскопия и т. д. Кроме того, исследовали большое число полимеров, отличающихся гибкостью макромолекул, различным межмоле-кулярным взаимодействием и т. п. (ПС, ПММА, ПК, стеклообразный ПЭТФ, каучуки, ПАК и т. д.). [c.26]

Комплексное применение совокупности новых препаративных методов ЭМ исследования полимеров (механическая и ультразвуковая диспергация, контрастирование продуктов дробления, использование метода реплик, ультратонких срезов, отражательной и сканирующей электронной микроскопии и т. п.) создали условия для выяснения характера НМС целлюлозы [6, 7]. Оказалось, что если диспергировать в жидкости пеболь-щую навеску волокна, то удается наблюдать распад исходного волокна на удлиненные образования, так как при дроблении полимер разрушается в первую очередь по границам структурных образований. Поперечные размеры продуктов дробления заключены в достаточно широком интервале (рис. П.1,с). Малоконтрастность снимков, не позволяющая обнаружить никаких более тонких деталей, обусловлена тем, что полимерные объекты состоят из слаборассеивающих элементов (в основном углерода), а соседние области мало различаются по толщине. Поэтому препараты для прямого исследования необходимо контрастировать , создавая неравномерное распределение посторонних веществ, содержащих тяжелые атомы. Для этой цели применяют методы косого напыления металлов в вакууме негативного контрастирования, а также пропитку за счет диффузии паров 0з04 или иода [8, гл. 9]. [c.87]

Большинство исследователей, к сожалению, к этому вопросу редко обращаются заново, хотя разрешающая способность электронных микроскопов достигла предела (2 А), а при препарировании возможно напылять бесструктурные конденсаты [ 2], использовать негативное контрастирование [9] весьма совершенной стала техника микротомирования, вплоть до возможного получения срезов с замороженных препаратов и т. д. [c.88]

Тщательный анализ причин возникновения зернистости на снимках микрофибрилл целлюлозы проведен в работе [52]. В микроскопе с высоким разрешением исследовали ультратон-кие срезы, подвергнутые негативному контрастированию. Автор [c.104]

Тонкие срезы силоксановых блок-сополимеров обнаруживают достаточно хороший контраст при исследовании в электронном микроскопе без специального контрастирования [301]. На рис. 6.27 показана структура пленок полимера ВС-1, полученных поливом из раствора и прогретых затем при 500 °С. Темные пятна прерывистой фазы, как было установлено, образованы полидифенил-силоксановыми блоками. В зависимости от состава, условий выделения и отжига можно получить либо прочные кристаллические материалы с хорошо выраженными эластическими свой- [c.180]

Spurr, 1961) проводили в четыре этапа. Полимеризацию вели в сушильных шкафах 24 ч при 35°С, 24 ч при 45°С и 48 ч при 70°С. Ультратонкие срезы изготовляли при помощи микротома Блюма — Портера. Для контрастирования препараты обрабатывали 0,5—3 мин лимоннокислым свинцом (Reynolds, 1963). Срезы просматривали на электронном микроскопе Эльмископ I фирмы Сименс. [c.26]

В практике просвечивающей электронной микроскопии для изучения морфологии таких объектов успешно применяется метод ульт-ратонких срезов в сочетании с контрастированием препарата [1-2]. [c.62]

К сожалению, техника микротомирования не всегда дает воспроизводимые результаты, что связано со спецификой морфологического строения полимеров. Например, есж толщина среза меньше размеров с гтуктурных образований, то вблизи последних при резании появятся напряжения и произойдет переориентация этих образований или их полное разрушение. Кроме того, во многих случаях трудно выбрать методаи г контрастирования. В частности,применение ОзО невозможно, если в состав связующего входит компонент с двойными связями или если модификатор - насыщенный олигомер. [c.63]

Наилучшие изображения получаются после экстракции клеток неионным детергентом-при этой процедуре вымываются фосфолипиды и растворимые белки. Обработанные таким способом, а затем быстро замороженные и подвергнутые глубокому травлению клетки дают поразтельно четкую картину цитоскелета (рис. 10-76, Л). Отдельные актиновые и промежуточные филаменты сохраняют свое первоначальное положение, а при особой методике удается сохранить и микротрубочки. Различные типы белковых нитей можно распознать по их толщине, а в некоторых случаях-по расположению составляющих их субъединиц. Аналогичную картину можно получить, используя метод негативного контрастирования тяжелыми металлами после экстрагирования культуральных клеток детергентом край клетки иногда бывает настолько тонким, что его можно исследовать в электронном микроскопе целиком, не делая срезов (рис. 10-76, Б). Относительно толстые слои цитоплазмы можно изучать с помощью высоковольтной электронной микроскопии (рис. 10-76,5). На таких препаратах белковые филаменты всех трех типов выглядят относительно независимыми они связаны между собой (если вообще связаны) лишь редкими поперечными сшивками. [c.126]

Чаще работают на фиксированном эпидермисе. Для изготовления препаратов на нижней стороне листа под прямым углом к центральной жилке лезвием делают неглубокие надрезы через 2—3 мм и срезают в том же направлении небольшие участки эпидермиса. Такой способ подготовки эпидермальных полосок предотвращает создание высоких натялсений в замыкающих клетках во время изоляции. Полоски эпидермиса помещают в склянку с абсолютным этиловым спиртом, который быстро фиксирует материал. Для контрастирования стенок замыкающих клеток устьиц препарат обрабатывают раствором хлор — цинк — йода. [c.158]

РИС. 10.2. Изображение образцов гликогена печени в зависимости от способа их обработки для электронной микроскопии. А. Негативное контрастирование. Б. Образец высушен на воздухе и за-тем оттенен. В. Образец высушен фильтрацией через агар и затем оттенен. Г. Образец заморожен, лиофильно высушен и затем оттенен. Д. Замороженный образец лиофильно высушен, перед оттене-нием выдержан в водных парах. Е. Гликоген в тонком срезе ткани печени. (Микрофотографии любезно предоставлены Келленбергером, Виллигером и Кистлером.) [c.181]

В обычном электронном микроскопе контраст повышают при помощи тяжелых атомов. Однако, как обсуждалось в гл. 10, такое контрастирование приводит к ухудшению разрешения и может, кроме того, быть причиной сильных искажений в исследуемой структуре. Для тех измерений, о которых идет речь ниже, обычно необходимо использо вать неконтрастированные образцы. Вдобавок к этому надо следить за тем, чтобы струк тура не искажалась в результате высушивания, которое требуется при работе в вакууме Один из способов достичь этого в случае тонких кристаллических срезов состоит в том чтобы заменить водный растворитель, содержащийся в кристалле, нелетучей жидкое тью. Дальнейшее обсуждение касается только такого тонкого образца. [c.429]

Ультратонкие срезы просматривали в электронном микроскопе Phillips ЕМ-200. Дифракцию электронов на отдельных областях не-контрастированных срезов регистрировали, следуя методам, описанным в инструкции к пользованию микроскопом. [c.88]

Обезвоживание в этаноле, заливка в эпон или микро-пал (вестопал). Контрастирование на ультратонких срезах. [c.226]

Возможна дофиксация в 1% 0564 с сахарозой, 1—2 ч допускается также контрастирование срезов. [c.266]

Контрастированные срезы изучают в электронном микроскопе, получая изображение на люминесцирующем экране и фотографируют. Мембранные структуры клетки обнаруживают высокую и постоянную осмиофилию. [c.95]

На основании сравнительного изучения физико-хид1ических свойств вирусного нуклеопротеида и пустой вирусной белковой оболочки, обнаруженной в препаратах вируса желтой мозаики турнепса (ВЖМТ), Маркхэм [1147] пришел к выводу, что РНК вируса долн на находиться внутри белковой ободочки. Эта точка зрения сейчас ун<е широко подтверждена в отношении этого и других вирусов данными рентгеноструктурного анализа. Крик и Уотсон [417] предположили, что белковые оболочки мелких вирусов построены из большого числа идентичных субъединиц, образуюпщх либо палочкообразные частицы со спиральной симметрией, либо сферические структуры с кубической симметрией. Последующие рентгенографические и химические-исследования подтвердили эту точку зрения. Каспар и Клуг [332] сформулировали общую теорию, ограничивающую возможное число и расположение белковых субъединиц, образующих ободочки мелких изометрических вирусов. Наши современные знания о крупных вирусах с более сложной симметрией и структурой основаны на данных электронной микроскопии с использованием методов негативного контрастирования и ультратонких срезов. [c.12]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология