Подвижность электрофоретическая определение

Отсюда следует, что существует такое значение кислотности среды (pH), при котором аминокислота в растворе находится в виде цвиттер-иона, т. е. суммарный заряд молекулы равен нулю. Значение pH, при котором это имеет место вследствие определенного положения протона в молекуле), называется изоионной точкой (p/ ). Точно так же, если при определенных экспериментальных условиях молекула не несет электрического заряда (например, не обладает электрофоретической подвижностью), значение pH, при котором это происходит, называется изоэлектрической точкой (р/е). Для водных растворов аминокислот [c.32]

Он выполняется следующим образом. На середину полоски плотной, гомогенной фильтровальной (хроматографической) бумаги, пропитанной буферным раствором с определенным значением pH, наносят каплю исследуемого коллоидного раствора. Затем на полоску бумаги накладывают разность потенциалов. Под влиянием образующегося электрического поля отдельные компоненты, содержащиеся в капле, обладающие разными электрофоретическими подвижностями, передвигаются по полоске с различными скоростями. Через некоторое время компоненты распределяются на бумаге в виде стольких зон, различно удаленных от исходной точки, сколько компонентов содержалось в растворе. Полоску высушивают и прогревают для денатурации и фиксации находящихся на ней белков и после этого окрашивают подходящими красителями. В результате проявляется распределение компонентов по длине полоски. Роль бумаги в этом методе сводится к устранению диффузионного и конвекционного перемешивания белков при электрофорезе. [c.210]

В кондуктометрическом методе анализа измеряемым аналитическим сигналом является электропроводность раствора. Зависимость этого параметра от концентрации представлена на рис. 2.1. По мере увеличения концентрации растворенного электролита увеличивается количество ионов-переносчиков заряда, т. е. растет удельная электропроводность. Однако после достижения определенного максимального значения удельная электропроводность начинает уменьшаться, поскольку для сильных электролитов усиливаются релаксационный и электрофоретический эффекты, а для слабых электролитов уменьшается степень их диссоциации. Электропроводность бесконечно разбавленного раствора Коо определяется подвижностью ионов в отсутствие тормозящих эффектов X ОО. и Хоо.. [c.103]

До сих пор не существует строгой экспериментальной проверки теории, что ставит под сомнение выводы о величине -потенциала (или заряда) коллоидных частиц, сделанные на основе их электрофоретической подвижности. Несмотря на это, из-за простоты метод идентификации по электрофоретической подвижности находит широкое применение, особенно для биологических объектов. Поэтому ниже мы подробнее остановимся на методах определения электрофоретической подвижности. [c.140]

Электрические свойства растворов полиэлектролитов. Электрокинетический потенциал, как известно, с большей или меньшей точностью может быть подсчитан по уравнениям Гельмгольца — Смолуховского или Генри только для коллоидных частиц, размер которых значительно превосходит толщину двойного электрического слоя. Для частиц же, диаметр которых мал по сравнению с толщиной двойного электрического слоя, при расчете электрокинетического потенциала следует вводить ряд поправок и в первую очередь поправку на электрическую релаксацию. Кроме того, если макромолекулы находятся в растворе в виде рыхлого клубка, то должно быть принято во внимание движение среды через петли свернутой цепи. К сожалению, до сих пор теория электрофореза для свернутых в клубок макромолекул отсутствует. Поэтому в настоящее время распространено определение электрофоретической подвижности не отдельных макромолекул, а макромолекул, адсорбированных на достаточно крупных частицах кварца или угля или на капельках масла. В этом случае электрокинетический потенциал легко определить с помощью микроэлектрофоретических методов. Как показали многочисленные исследования, при достаточной толщине слоя полимера, покрывающего частицу, подобный прием дает вполне воспроизводимые результаты. [c.477]

Экспериментальные методы определения электрофоретической подвижности [c.155]

В начале этой главы описаны явления электрофореза и электроосмоса в самом общем виде. Рассмотрим элементарную теорию электрокинетических явлений и применяемые на практике методы определения электрофоретической подвижности и скорости электроосмотического переноса более подробно, поскольку эти величины позволяют вычислить весьма важную характеристику коллоидных систем — -потенциал. [c.197]

Для определения электрофоретической подвижности пользуются следующим уравнением [c.201]

Микроскопический и ультрамикроскопический методы. Эти методы определения электрофоретической подвижности заключаются в определении скорости передвижения индивидуальных коллоидных частиц в электрическом поле при помощи микроскопа или ультрамикроскопа. Преимущество этого метода перед методом подвижной границы состоит в том, что при исследовании с помощью микроскопа частицы находятся в одной и той же окружающей их среде и отсутствует поверхность раздела между коллоидной системой и боковой жидкостью. Другое преимущество этого метода заключается в том, что для определения достаточно очень малое количество раствора. Недостаток этого метода тот, что нельзя исследовать электрофоретическую подвижность частиц в растворах с более или менее значительной концентрацией дисперсной фазы, так как в таких растворах наблюдение за перемещением отдельной частицы невозможно. Разбавление же системы чужеродной жидкостью всегда влияет на -потенциал. [c.210]

Как правило, фенотипы трансферрина различают с помощью электрофореза в крахмальном или полиакриламидном геле. В норме трансферрин сыворотки не насыщен железом, но для определения фенотипа его необходимо полностью насытить ионами Fe +, поскольку свободный белок и комплекс его с железом имеют разные изоэлектрические точки [669], и, следовательно, при неполном насыщении белка будут получены ошибочные результаты. Загрязнение препаратов сыворотки бактериями может приводить к снижению подвижности трансферрина в результате ферментативного отщепления остатков сяа-ловой кислоты. Различные формы трансферрина слабо различаются по электрофоретической подвижности, поэтому определение фенотипа следует проводить путем тщательного сравне- [c.345]

Электрофорез уже давно использовался в биологии различными авторами для суждения о знаке и величине заряда, главным образом различных бактерий и белков. Определение электрофоретической скорости белков по методу подвижной границы с получением электрофоретических диаграмм, на чем мы остановимся далее подробно, является весьма важным методом не только для изучения сложных белковых систем, но и используется широко для практических медицинских целей. При различных инфекционных заболеваниях специфически изменяется белковый состав плазмы крови, и поэтому электрофоретические диаграммы могут быть успешно применены для диагностики болезней. [c.6]

В заключение следует указать, что описанный метод определения электрофоретической подвижности можно применять и к растворам высокомолекулярных соединений, отдельные молекулы которых в ультрамикроскопе не видимы. Для этого в раствор вводят < малые частицы кварца или угля, которые- адсорбируют на себе высокомолекулярное вещество. Как показали многие эксперименты, электрофоретическая подвижность таких частиц такая же, как и подвижность свободных макромолекул. Это становится понятным, если учесть, что электрофоретическая скорость, согласно уравнению Гельмгольца — Смолуховского, не зависит от размера частиц. Однако всегда следует помнить, что -потенциал, вычисленный по результатам таких измерений, является в некоторой степени фиктивной величиной, так как в этом случае довольно трудно представить себе наличие двойного слоя с более или менее постоянным потенциалом. [c.212]

Значение pH в КЭ является одним из важнейших параметров оптимизации. С помощью значений pH можно не только воздействовать на ЭОП, но и перевести анализируемые вещества в определенную ионную форму. Из этого вытекают различные электрофоретические подвижности, которые приводят затем к разделению анализируемых веществ. Если используются незаряженные ЦД, пара энантиомеров при определенном pH должна иметь такую собственную подвижность, чтобы смогла пройти сквозь псевдостационарную фазу (в данном случае - ЦД). [c.93]

Метод является единственным способом прямого определения абсолютной электрофоретической подвижности. Его применяют для веществ с высокой молекулярной массой, которые обладают слабой диффузией. [c.145]

У этого метода много преимушеств, главным из которых является высокая чувствительность детектирования, не зависящая от химического строения или каких-либо других свойств соединений, кроме тех, которые определяют их характеристическую подвижность в различных хроматографических или зонно-электрофоретических системах. Кроме того, выделение искомых соединений, по крайней мере на начальных этапах исследования, т. е. в небольших количествах, осуществляется непосредственно в процессе детектирования это зависит от эффективности хроматографической или электрофоретической методики, применяемой для разделения смеси на индивидуальные компоненты. Наконец, поскольку первичные предшественники известны, то искомые метаболиты можно сразу отнести к определенному биосинтетическому классу (ср. табл. 28.1.1), что дает полезную информацию об их структуре. [c.365]

Опытные значения электрофоретической подвижности обычно достигают лг5,0-10 м /(с-В), а электрокииетического потенциала до 100 мВ. Эксршриментально определенные значе 1ня подвижности оказываются меньпш расчетных. Следует отметить, что по абсолютному значению величина Иэф одного порядка со скоростью движения ионов в электрическом поле с напряженностью, равной еднпице. Несовпадение экспериментальных и теоретических значений электрофоретической подвижности определяется в основном двумя эффектами, не учтенными теорией Гельмгольца — Смолуховского релаксационным эффектом и электрофоретическим торможением.. [c.224]

Этот метод в применении к коллоидным системам особенно точен благодаря большой массе дисперсной фазы, приходящейся на единицу заряда. Однако этот способ применяется на практике довольно редко. Таттье использовал метод Гитторфа не только для определения электрофоретической скорости, но и для одновременного определения подвижности противоионов. [c.207]

Высоту камеры определяют, как указывалось выше. Значение ширины камеры удобно находить, пользуясь микроскопом Брюнеля. Другой метод определения поперечного сечения, дающий лучшие результаты, состоит в измерении электрофоретической скорости частиц, имеющих определенную, постоянную подвижность и. [c.203]

С. С. Воюцкий и Р. М. Панич еще в начале пятидесятых годов исследовали влияние на устойчивость и одновременно на -потенциал латексов таких факто ров, как крнцентрация латексов, pH среды и валентность коагулирующего иона. Исследования проводили как с недиализованными, так и диализованными син-тетическми латексами, стабилизованными олеатом и нафтенатом аммония. Электрофоретическую подвижность определяли с помощью макроэлектрофореза, поскольку в задачу работы входило определение зависимости -потенциала от концентрации дисперсной фазы. Электрокинетический потенциал вычисляли по форму.те Генри, причем численный коэффициент подбирали в соответствии с известным критерием ка, пользуясь графиками Овербека. [c.382]

На полоски хроматографической бумаги шириной 4—5 см на линию старта наносят ш,елочной гидро лизат РНК (10—20 мкл) и растворы нуклеотидов- свидетелей по 0,1—0,15 мкмоль каждого. Электрофорез проводят в течение 5 ч при силе тока 0,5 мА на 1 см поперечного сечения бумаги. Для определения времени окончания электрофоретического разделения можно использовать окрашенный маркер, например 1%-ный раствор ксиленцианола, который движется быстрее самого подвижного компонента смеси. Локализацию рибомононуклеотидов проводят в ультрахемископе. Подвижность нуклеотидов от катода к аноду возрастает в ряду цитидиловая, адениловая, гуаниловая и уридиловая кислоты. Для количественного определения участки электрофореграмм, поглощающие в ультрафиолетовой области, очерчивают простым карандашом, вырезают, измельчают и элюируют нуклеотиды 4—5 мл 0,01 н. раствора НС1 в течение 4—5 ч. В элюатах определяют поглощение на спектрофотометре при длине волны, характерной для каждого нуклеотида (см. Приложение, с. 499), рассчитывают количество их в микромолях и в процентах по отношению к сумме всех нуклеотидов в щелочном гидролизате РНК. [c.181]

Единственная установленная функция витамина К — это его связь со свертыванием крови. Как удалось проследить, недостаточность витамина К приводит к понижению содержания протромбина (рис. 6-16), некоторых факторов свертывания крови (факторов VII, IX и X) н одного плазматического белка, функция которого пока еще не установлена. В 1972 г. было обнаружено, что дефектный протромбин, образующийся в печени в отсутствие витамина К, не способен связывать ионы кальция, необходимые для последующего связывания протромбина с фосфолипидами и активации его в тромбин. Основываясь на этих сведениях, удалось локализовать структурные различия между нормальным и дефектным белком в М-концевом участке этого гликопротеида, содержащего 560 остатков . Из триптических гидролизатов нормального и дефектного протромбина были выделены пептиды, различающиеся по электрофоретической подвижности. Тщательный химический анализ в сочетании с изучением ЯМР-спектров показал, что в нормальном протромбине остатки в положениях 7, 8, 15, 17,20, 21, 26, 27, 30 и 33, которые при определении аминокислотной последовательности были все идентифнцнро-ваны как глутаминовая кислота, в действительности являются остатками карбокснглутамата. [c.389]

В частицах лиофобных золей всегда содержится компактное ядро, лишенное электрических зарядов. Напротив, в частицах белков и полиэлектролитов подобное ядро отсутствует, и они по всей своей массе несут способные к диссоциации ионогенные группы. В белках ионогенные группы имеют различную химическую природу — кислые карбоксильные, основные амино-группы и др., вследствие чего белки относятся к классу амфотерных электролитов. При крайних рн резко преобладает диссоциация групп одного знака и, например, при рН-2 белковая молекула несет лишь положительные заряды. Однако тот же заряд при кислых рн можно представить, по Бьерруму и Линдер-штрем-Лангу, обусловленным не диссоциацией солеобразных аминогрупп, а адсорбцией Н+-ионов из раствора и подавлением диссоциации СОО -групп на белковой молекуле. При любом предположении белковая молекула при данном pH несет точно определенное число зарядов, а компенсирующие ионы располагаются в растворе с определенной плотностью распределения, что, соответственно, измеряется при помощи кривых титрования и электрофоретической подвижности (см. ниже). [c.105]

Электропроводность коллоидного раствора слагается из электропроводности, обусловленной коллоидными частицами, и электропроводности находящихся в растворе электролитов. Если посторонних электролитов в растворе очень мало (высокоочищенные растворы белков и полиэлектролитов), измерениями электропроводности можно воспользоваться для определения удельного заряда или подвижности частиц, однако, в лиофобных золях определить собственную электропроводность коллоидных частиц довольно трудно. Существенное влияние на собственную электропроводность частиц оказывает структура двойного электрического слоя, так как подвижность компенсирующих ионов ограничивается электрофоретическим торможением со стороны коллоидных частиц (более медленно передвигающихся в поле, чем ионы) и скоростью перестройки ионной атмосферы в переменном поле (эффект релаксации). В свою очередь, измерениями электропроводности в широком диапазоне частот (дисперсия электропроводности) пользуются при изучении структуры двойного слоя. В растворах полиэлектролитов (например, полиакриловой кислоты) измерения эквивалентной электропроводности X при различных концентрациях представляют интерес для характеристики формы молекул, так как значения X падают в той области концентраций, в которой расстояния между молекулами полимера становятся велики по сравнению с толщиной двойного электрического слоя (Каргин). Измерения электропроводности коллоидных растворов при их взаимодействии с нейтральными солями (метод кондуктометриче-ского титрования) широко применялись при исследовании состава двойного слоя и процессов вытеснения из коллоидных частиц, например, подвижных Н+-ионов (Паули, Рабинович). [c.131]

Электрофорез проводят в присутствии додецилсульфата натрия (ДСН). Таким путем можно определить молекулярные массы субъединиц олигомерных белков [74 — 76]. Молекулы ДСН образуют за счет гидрофобного взаимодействия комплексы с полипептндными цепями, характеризующиеся постоянным отношением ДСН белок. Тогда электрофоретическую поднижность можно выразить как функцию молекулярной массы и сравнить с подвижностью стандартного белка. Метод отличается высоко скоростью (2 — 4 ч) и требует для одного определения, как правило, лишь 10 — 50 мкг белка. В последнее время ДСН-электрофорез проводят также на стеклянных шариках с контролируемым размером пор (120 — 200 нм). Комплекс ДСН — белок не адсорбируется на носителе, интервал определяемых молекулярных масс 3 500 — 12 ООО [77]. [c.362]

В большинстве случаев при капиллярном электрофорезе на электрофоретическое перемещение ионов накладывается ЭОП. Этот поток зависит от распределения зарядов вблизи поверхности капилляра. Почти все поверхности несут на себе определенный заряд. В случае кварцевых капилляров - это отрицательные заряды, обусловленные диссоциацией силанольных групп. Этот поверхностный заряд локализуется в жидкости напротив соответстующих противоионов с противоположным зарядом. В таком двойном электрическом слое, схематически изображенном на рис. 3, преобладают положительные ионы, которые распределены между неподвижными и подвижными слоями. [c.10]

Метод капиллярного электрофореза постоянно совершенствуется. Предложены методы разделения нейтральных молекул, ионов с одинаковой электрофоретической подвижностью. Для этого используют взаимодействия разделяемых компонентов с псевдонеподвижной мицеллярной фазой в буферном электролите (мицеллярная электрокинетическая хроматография). Для повышения чувствительности определения используют дфугие способы де-текпфования флуоресцентное, электрохимическое, масс-спекгрометрическое. [c.255]