Мононуклеотиды выделение

В основе метода лежит разделение РНК и ДНК путем гидролиза исследуемого материала слабой щелочью, при котором происходит расщепление РНК по 3, 5 -фосфодиэфирным связям до мононуклеотидов. В этих условиях ДНК устойчива к действию щелочи, что делает возможным выделение ее в виде осадка. [c.164]

Распределительную хроматографию на бумаге используют в качестве быстрого стандартного метода анализа нуклеиновых кислот. Ионообменная хроматография на колонках (см. стр. 446) нашла применение прежде всего для препаративного выделения мононуклеотидов и высокомолекулярных продуктов гидролиза дезоксирибонуклеиновых кислот. Опыты по фракционированию на крахмале [26, 31] или на адсорбенте [55, 56] не привлекли достаточного внимания. [c.442]

Ультрафиолетовое поглощение нуклеииовых кислот зависит от ряда факторов, среди которых ие последнее место занимает характер предварительной обработки препарата. Современные методы выделения рибонуклеиновой и дезоксирибонуклеиновой кислот позволяют избежать большей части условий, которые вызгл-вают денатурацию, например, низких или высоких значений pH, низкой ионной силы или высоких температур, ведущих к необратимым изменениям в спектрах поглощения [263—267]. Для так называемой нативной ДНК значение экстинкции (бмакс), отнесенное к числу фосфатных остатков (т. е. средняя величина экстинкции, приходящейся на один нуклеотид) в 10 Л4 (или выше) растворе хлористого натрия и нейтральном значении pH, лежит между 6000 и 6500. В бессолевом растворе даже при pH 7 происходит глубокая денатурация и между pH 6,5 и 7,5 изменения в ультрафиолетовом поглощении достаточно велики [265], по-видимому, за счет смещения значений рК в результате протонирования адениновых и цитозиновых остатков в этой области значений pH. Экстинкция соответствующей смеси мононуклеотидов должна быть равна приблизительно 10500, и, следовательно, для ДНК характерны значительные гипохромные эффекты. Существенно, что изменения ультрафиолетового поглощения полинуклеотидов в результате изменений pH, температуры и ионной силы отражают большие или малые конформационные изменения (несомненно, наряду с другими физическими свойствами), которые увеличивают или уменьшают гипо-хромный эффект. [c.584]

В мононуклеотидах различного происхождения (входящих в состав нуклеиновых кислот или нуклеотидных коферментов, а также мононуклеотидов, выделенных из различных объектов) найдены только основания пуринового и пиримидинового ряда. Из входящих в нуклеиновые кислоты и нуклеотидные коферменты пиримидиновых оснований в наибольшем количестве обнаружены урацил (I), тимин (II), цитозин (III) в значительно меньших количествах найден 5-метилцитозин (IV) и в некоторых видах ДНК 5-оксиметилцитозин (V). [c.177]

В молекуле нуклеотида гетероциклическое основание связано с остатком моносахарида, N-гликозидом которого является мононуклеотид. Моносахарид, входящий в состав мононуклеотида, освобождается при-гидролизе и может быть выделен и идентифицирован. [c.185]

Мононуклеотиды, олигонуклеотиды и нуклеиновые кислоты, ковалентно связанные с инертными матрицами, пригодны как для целей выделения, так и для исследования физико-химических [c.130]

Молекулярный вес отдельных нуклеиновых кислот также различается довольно резко. Оказалось, что молекулярный вес ДНК, выделенной из ядер различных клеток растений, животных и микроорганизмов, весьма близок и обычно составляет-6—8 миллионов, т. е. в состав ДНК входит приблизительна 20 ООО—25 ООО отдельных мононуклеотидов. Молекулярный вес рибосомальной РНК может достигать 1,2—1,5 миллионов. Мо- [c.230]

Примером таких мононуклеотидов является а д е н и л о в а я кислота, выделенная из д р о ж ж е й [c.57]

Что касается строения нуклеиновых кислот, то, по имеющимся представлениям, отдельные мононуклеотиды в молекуле нуклеиновой кислоты соединены между собой посредством кислородных мостиков, образующихся за счет гидроксильных групп пентозы одного мононуклеотида и фосфорной кислоты другого, соседнего нуклеотида с выделением молекулы воды. [c.59]

Примером таких мононуклеотидов является адениловая кислота, выделенная из дрожжей [c.57]

Хотя на данном этапе методы химического гидролиза не позволяют сделать выбора между 3 —5 - и 2 —5 -межнуклеотидными связями, доказательства, по-видимому, исключительного присутствия 3 —5 -структуры были получены на основании исследований ферментативного гидролиза рибонуклеиновых кислот и простых нуклеотидных производных. Из различных источников был выделен ряд нуклеаз, которые катализируют гидролиз нуклеиновых кислот на более мелкие фрагменты. Панкреатическая рибонуклеаза [93] — один из группы ферментов, обнаруживающих высокую специфичность к рибонуклеиновым кислотам,— была тщательно изучена и дано объяснение механизма ее действия. Ранние исследования показали, что фермент действует по пиримидиннуклеозидным звеньям, так как крупные педиализуемые остатки после ферментативного расщепления рибонуклеиновой кислоты значительно обогащены пуринами [94] кроме того, выделяются пиримидиновые мононуклеотиды, но не обнаружено свободных пуриновых мононуклеотидов [75, 95, 96]. Дальнейшие исследования кислотного или щелочного гидролиза продуктов, полученных в результате последовательной обработки рибонуклеиновой кислоты рибонуклеазой и фосфомоноэстеразой предстательной железы, привели к заключению, что специфичность рибонуклеазы такова, что нуклеиновые кислоты расщепляются ею с образованием смеси пиримидиновых мононуклеотидов и пуриновых олигонуклеотидов, содержащих в качестве концевой единицы пиримидиновый нуклео-зид-2 (или 3 )-фосфат [75, 97]. [c.377]

Нуклеозиды могут быть получены как ферментативным, так и химическим путем из любого встречающегося в природе нуклеотидного материала. Однако главным источником получения этих гли-козидов служат нуклеиновые кислоты, выделяемые из различных тканей и организмов. Расщепление рибонуклеиновой кислоты до смеси входящих в ее состав нуклеозидов может быть достигнуто различными способами, среди которых следует упомянуть гидролиз разбавленным раствором аммиака при повышенной температуре [2], кипячение в течение нескольких дней с водным пиридином [31 и гидролиз, катализируемый ионами различных металлов [4]. Предложенный недавно метод [51 основан на кипячении рибонуклеиновой кислоты (или мононуклеотида) с водным раствором форм-амида в течение нескольких часов при pH 4. Разделение и выделение нуклеозидов было в значительной степени улучшено благодаря использованию ионообменных методов [6]. [c.12]

Нуклеозиды могут быть получены прямым гидролизом нуклеияовы.х кислот, минуя стадию выделения мононуклеотидов и именно этим методом они обычно получаются в препаративных целях. Для этого нуклеиновые кислоты подвергаются химическому или ферментативному гидролизу. Обычно их нагревают с концентрированным аммиаком 3—3,5 часа при 175—180°. Ферментативный гидролиз НК вызывают специальные ферменты, называемые нуклеазами. Ввиду неустойчивости дезоксирибозы и дезоксирибозидов при препаративном гидролчзе ДНК, с целью получения нуклеозидов успеха можно достигнуть только при ферментативном гидролизе. [c.190]

Первым выделенным мононуклеотидом была инозиновая кислота (IMP, 9), которая была получена из гидролизата мяса Либихом в 1847 г. примерно за 20 лет до выделения нуклеиновых кислот из гнойных клеток Мишером. Взаимосвязь между мононуклеотидами и нуклеиновыми кислотами стала понятна в первой половине двадцатого столетия главным образом в результате работ Левина и др. [6]. Инозиновая кислота не является широкораспространенным в природе нуклеотидом она образовалась в процессе выделения по Либиху за счет дезаминирования АМР, который сам по себе был выделен из мышц лишь в 1927 г. Были выделены все обычные нуклеотиды аденина, цитозина, гуанина, тимина н урацила, так же как и многие минорные нуклеотиды, например, образуюш,иеся из псевдоуридина, дигидроуридина и метилированных производных аденозина и гуанозина. [c.134]

Первым выделенным (ещё в 1847 году) мононуклеотидом была инозиновая кислота (9-р-5 -фосфо-В-рибозилгипоксан- [c.113]

Однако значение углеводов далеко не исчерпывается их ролью как главных веществ при создании органических соединений в процессе фотосинтеза, как важных пищевых веществ и сырья для многих видов промышленности. Как было показано в последние годы, передача наследственных признаков, а также биосинтез белка — химической основы г изни — происходят при участии так называемых нуклеиновых кислот (см. том II). Структурными компонентами последних являются мононуклеотиды — производные углеводов. Лабильность углеводных компонентов как раз и создает большие трудности при выделении и синтезе нуклеотидов. [c.622]

Ферменты этой группы вызывают выделение в виде неорганического ортофосфата концевых и моноэтерифицированных фосфатных групп из мононуклеотидов или олигонуклеотидов. 5 -Нуклео- [c.96]

РИБОНУКЛЕАЗЫ (РНК-азы) — ферменты, катализирующие гидролитич. расщепление рибонуклеиновых к-т на олиго- и мононуклеотиды. Р. широко распространены в природе и присутствуют во всех исследованных тканях. Наиболее изучена панкреатическая Р., секретируемая поджелудочной железой [систематич. название полирибонуклеотид — 2-олиго-нуклеотидо-трансфераза (циклизующая) шифр 2.7.7.16 — см. Номенклатура и классификация ферментов]. Р., выделенная в кристаллич. виде из поджелудочной железы быка экстракцией разведенной серной к-той с последующим фракционированием (NH4)2S04 — белок основного характера (р/ 7,8) с мол. в. 13 ООО. Установлена природа и последовательность аминокислотных остатков, входящих в состав Р., и выяснены существенные детали ее пространственной структуры, что дало возможность воссоздать трехмерную модель этого белка. Молекула панкреатич. Р. представляет собой одинарную полипептидиую цепь, состоящую из 124 аминокислотных остатков N-концевой аминокислотой в молекуле Р. является лизин, С-концевой — валин. [c.337]

Первый нуклеотид, инозиновая кислота (по-гречески — мышечная ткань), был выделен Либихом [2] в 1847 г. из мясного экстракта отчасти как результат полелп1ки, поднятой Берцелиусом по поводу наличия креатина в сыром и вареном мясе). С тех пор было выделено большое число мононуклеотидов, как правило, 5 -фосфаты, хотя в яде тигровых змей и родственных видов был найден также аденозин-З -фосфат 13]. Эти соединения выделяют прямой экстракцией тканей или организмов 14—9], в которых они обычно присутствуют в небольших количествах в качестве промежуточных соеди-нени1 обмена. Однако основным источником мононуклеотидов являются их полимерные производные, нуклеиновые кислоты. При щелочном гидролизе в мягких условиях [10, 11] рибонуклеиновой кислоты образуется смесь 2 - и З -фосфатов нуклеозидов, которую можно легко разделить с помощью ионообменной хроматографии 112], Для выделения аналогичных 5 -эфиров требуется применение ферментативного гидролиза, как правило, с использованием фосфо-диэстеразы змеиного яда 113, 14]. Подобная ферментативная обработка дезоксирибонуклеиновой кислоты после предварительной обработки дезоксирибонуклеазой приводит к дезоксинуклеозид-5 -фосфатаы [15—17]. Очищенная диэстераза змеиного яда значи- [c.123]

Значительную ценность представляют собой рибонуклеазы высокой специфичности, так как они не только расщепляют нуклеиновую кислоту на олигонуклеотиды, которые во многих случаях можно разделить и определить их структуру, но и указывают также в общем распределение нуклеотидов. Так, обнаружено, что пропорция пиримидиновых нуклеозид-З -фосфатов (по отношению к общему содержанию пиримидинов в нуклеиновой кислоте), выде ляющихся под действием панкреатической рибонуклеазы, в значительной степени варьирует. Нри известной специфичности фермента высокий процент выделения свободных пиримидиновых нуклеотидов по отношению к общему содержанию пиримидинов указывает на наличие участков цепи, в которых два или более пиримидинов следуют подряд друг за другом, в то время как выделение мононуклеотидов в относительно малом количестве указывает на то, что пиримидиновые нуклеотиды в основном соединены (через 5 -гидро-ксильную группу) с З -фосфатами пуриновых нуклеотидных звеньев. В этой связи представляет интерес факт, что из растворимых в солевом растворе дрожжевых нуклеиновых кислот выделяется около 50% цитидиловой, уридиловой и псевдоуридиловой кислот в расчете на общее содержание каждой из них и только 10—20% тиминовых нуклеотидов [161]. Из рибонуклеиновой кислоты вируса табачной мозаики штамма М после исчерпывающего переваривания панкреатической рибонуклеазой выделено значительно большее количество пиримидиновых нуклеотидов, чем в случае штаммов ТМУ, НК и УА следовательно, распределение пиримидиновых нуклеотидов в РНК из штамма М отличается от распределения нуклеотидов в РНК штаммов ТМУ, НР или УА [162] (ср. с приведенными ниже данными). [c.392]

При обработке РНК вируса табачной мозаики РНК-азой Т1 освобождается в виде мононуклеотида около 26,9% общего содержания гуанина таким образом, такое количество гуаниловых нуклеотидов содержится (как полагают) в нуклеиновой кислоте в виде участков из двух или более гуаниловых остатков [173]. Образуются также ДИ-, три- и тетрануклеотиды с гуанозин-3 -фосфатом на конце. Однако независимое определение гуанозин-З -фосфата и гуанозин-2, З -циклофосфата, выделяющихся при действии очищенной РНК-азы Т1 на РНК вируса табачной мозаики, показало, что освобождается около 55,7% общего содержания гуанина (по сравнению с теоретическим значением 24,0% при расчете на беспорядочное распределение оснований) [174]. При подобной обработке дрожжевой РНК выделяется 48,7% общего содержания гуанина при беспорядочном распределении оснований надо ожидать только 27,5%. Однако приводится также значительно более низкая величина процента выделения [559]. Фракционирование на ЭКТЕОЛА-целлюлозе пуриновых олигонуклеотидов (содержащих на конце пиримидиновый нуклеотид) из гидролизатов РНК панкреатической рибонуклеазой показало, что продукты более высокого молекулярного веса особенно богаты остатками гуаниловой кислоты, т. е. действительно имеются цепочки из остатков гуаниловой кислоты [175]. [c.394]

Эта реакция обратима, и при избытке фосфата тот же фермент ведет расщепление полимера путем фосфоролиза, т. е. внедрения молекул фосфорной кислоты между звеньями и расщепления цепочки на нуклеозиддифосфаты. Поэтому фермент получил название полинуклеотидфосфорилазы. В реакции конденсации нуклеозидди-фосфатов много типичных черт. Понятно, что невозможно в водном растворе связать мононуклеотиды друг с другом эфирной связью такая гипотетическая реакция должна идти с выделением молекулы воды. Подобная реакция термодинамически невозможна, т. е. ее равновесие сдвинуто далеко в сторону распада полимера. Чтобы реакция шла в сторону поликопденсации, необходимо исходить из соединений с достаточно высокой свободной энергией гидролиза отщепление концевых групп, ведущее к одновременной полимеризации остатков, происходит в этом случае с понижением свободной энергии и равновесие в системе сдвинуто в область образования полимеров. Нуклеозиддифосфаты являются подобными соединениями с высокой свободной энергией отщепления концевого фосфата (подобные молекулы называются макроэрги-ческими ). Поликонденсация их происходит с выделением ортофосфорной кислоты. [c.223]

На основании полученных данных можно сделать вывод, что выделенная нами фосфоамидаза специфически гидролизует фосфоамидную связь, образованную мононуклеотидом, содержащим фосфор в 5 -поло-жении рибозы, и аминокислотой. [c.378]

Отсутствие специфичности к основанию, а также постоянство отношения активности фермента к фенилаланиновым производным АМФ и УМФ на всех стадиях очистки при выделении фермента [44] свидетельствуют о том, что фосфоамидаза является одним ферментом, воздействующим на различные нуклеотидоаминокислоты, а не смесью ферментов, каждый из которых гидролизует производные какого-либо определенного мононуклеотида. [c.378]

Последовательность нуклеотидов в транспортной РНК аланина, выделенной из дрожжей и очищенной, устанавливалась путем ее гидролиза двумя разными ферментами — рибонуклеазой поджелудочной железы и рибонуклеазой Т1 такадиастазы. Гидролиз обоими ферментами проводился до предела. Сумма полученных в каждом случае коротких полинуклеотидов и мононуклеотидов разделялась хроматографически эти полинуклеотиды (по большей части ди- и три-, но не более окта-) пдентифици- [c.718]

В случае полинуклеиновых кислот выделение и очистка представляют значительные трудности [855—857]. Осторожное расщепление приводит к олигонуклеотидам [858, 859] и, в конце концов, к мононуклеотидам и их составным частям [860, 861]. В научном отношении важно то наблюдение, что полирибонуклеотиды могут быть построены с помощью энзимов из рибонуклеозид-5-дифосфата [862], Этот искусственный синтез имеет значение в связи с процессом передачи наследственных признаков, который связывают с нуклеиновыми кислотами [863]. [c.126]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология