Разделение нуклеозидов и нуклеотидов

РАЗДЕЛЕНИЕ НУКЛЕОЗИДОВ И НУКЛЕОТИДОВ [c.207]

I. Смесь бутанола, уксусной кислоты и воды (12 3 5). Применяют для разделения смеси оснований, а также пуриновых и пиримидиновых нуклеозидов и нуклеотидов. [c.62]

Рнс. 37.17. Разделение оснований, нуклеотидов и нуклеозидов на колонке с дауэкс 1-Х8 (200—400 меш) [119]. [c.59]

Зональный электрофорез применим для разделения любых ионов как сложных органических, так и неорганических, если только можно подобрать условия, когда подвижности этих ионов (в первую очередь величины заряда) отличаются друг от друга. Этим методом, например, успешно разделяются пуриновые и пиримидиновые основания благодаря различиям в константах ионизации их аминогрупп. Дополнительные возможности появляются при разделении нуклеозидов, если проводить электрофорез в бо-ратном буфере, так как боратный ион по-разному связывается с гидроксильными группами пентоз, сообщая всему иону дополнительный отрицательный заряд. Наконец, нуклеотиды имеют еще две ионогенные группы фосфата, и различия в константах диссо-циации вторичных гидроксильных групп (первичные гидроксилы фосфата диссоциированы во всем интервале pH, в котором нуклеотиды стабильны) можно использовать для разделения сложных [c.105]

Разделение нуклеозидов и нуклеотидов на катионитах [c.332]

Во многих отношениях разделение нуклеозидов осуш,ествляется проще, чем разделение нуклеотидов об этом, в частности, говорит тот факт, что безградиентное элюирование нуклеозидов возможно [c.309]

Разделение нуклеозидов н нуклеотидов на катионитах 80, 92 [c.332]

Наличие фосфатной грунны в нуклеотидах резко отличает последние от нуклеиновых оснований и нуклеозидов. Нуклеотиды — сильные двухосновные кислоты (рК1 1 и рКа 6) [20]. Разделение и анализ микроколичеств нуклеотидов обычно проводят хроматографией на бумаге, для больших количеств или для точного анализа применяется ионообменная хроматография. [c.326]

Сорбенты широкого применения дополняют сорбентами для решения специализированных задач разделение энантиомеров (хиральные), нуклеотидов, катехоламинов, нуклеозидов, гидрофильных и гидрофобных протеинов, биополимеров, в том числе олигонуклеотидов, вирусов, РНК и других аминокислот анализ сахаров, определение анионов в воде, полициклических ароматических углеводородов (РАН) в питьевой воде, биологически активных экстрактов. [c.238]

Применение методов хроматографии на бумаге для быстрого анализа пуриновых и пиримидиновых оснований [76, 77] в гидролизатах небольших количеств рибонуклеиновых кислот вскоре показало, что молярная эквивалентность этих оснований скорее была исключением, чем общим правилом. Еще более важным было наблюдение, что разделение смеси нуклеотидов в щелочном гидролизате рибонуклеиновой кислоты при помощи ионообменной хроматографии дает изомерные пары нуклеотидов, являющихся, как позже было показано, нуклеозид-2 - и пуклеозид-З -фосфатами [78]. Хотя эти изомеры не подвергались взаимопревращению в щелочи, кислота легко катализировала миграцию фосфатного остатка между 2 - и З -гидроксильными группами. Таким же методом были обнаружены 5 -фосфаты аденозина, цитидина, гуанозина и уридина (среди прочих продуктов) после гидролиза кишечной фосфодиэстеразой рибонуклеиновых кислот, предварительно обработанных рибонуклеазой [79]. Со значительно более высокими выходами нуклео-зид-5 -фосфаты получены при действии диэстеразы змеиного яда на рибонуклеиновые кислоты из дрожжей и печени теленка гидролизаты содержали также свободные нуклеозиды и нуклеозид-2 (3 ),5 -ди-фосфаты [80]. [c.373]

Здесь уместно заметить, что разделение оснований (н том числе минорных), нуклеозидов, нуклеотидов и их фосфорных эфиров в аналитических целях чаще ведут. мстодо.м ТСХ, чем на попообмеп-ных колонках. [c.321]

Для разделения сложных смесей, содержащих вещества разных классов (основания, нуклеозиды, нуклеотиды и их поли-фосфаты, олигонуклеотиды, включая олигонуклеотиды, различающиеся порядком основании, и т. п.), с которыми имеют дело, например, при выделении кислоторастворнмой части клеток или тканей или при анализе ферментативных гидролизатов нуклеиновых кислот, применяют исключительно ионообменную хроматографию. В случае необходимости дальнейшее фракционирование проводят по многостадийной схеме, с использованием указанных выше методик. При этом наблюдаются те же закономерности, что и при анализе нуклеотидов (см. предыдущий раздел), поэтому в дальнейшем будет приведено лишь несколько примеров. [c.58]

Эта техника имеет преимущества перед распределительной и адсорбционной хроматографией, когда она используется для фракционирования больших количеств материала, растворенного в воде. Очевидно, что основное использование ионообменной хроматографии состоит в выделении и фракционировании полинуклеотидов и нуклеотидов, но величины рКа гетероциклических оснований таковы, что в интервале pH 4—10 некоторые нуклеозиды могут нести по меньшей мере частичный заряд и, следовательно, могут быть разделены этим методом. Для ионообменника используют два основных типа подложки либо полистирол, либо целлюлозу, и оба типа широко использовались для разделения нуклеозидов. В ероятно, наиболее широко используется метод. [c.73]

Хроматография на бумаге. Впервые в современной форме метод бумажной хроматографии был описан Консденом, Гордоном и Мартином [16]. Хроматографирование на бумаге может быть применено для разделения микрограммовых количеств многих веществ, таких, как алкалоиды, нуклеозиды, нуклеотиды, сахара, аминокислоты, флавоноиды, таннины, стероиды, птеридины и фосфолипиды. Метод имеет много общего с распределительной хроматографией в качестве носителя используется фильтровальная бумага. Однако в этом случае не происходит распределения в истинном смысле этого слова (между несмешивающимися растворителями), так как разделение достигается с помощью растворителей, смешивающихся с водой. Согласно Ледереру [2], вопрос о том, обусловлен ли процесс хроматографирования на бумаге адсорбцией на водно-целлюлозном комплексе или же распределением внутри этого комплекса, рассматриваемого в качестве стационарной фазы, относится скорее к области терминологии, чем к существу дела . [c.21]

И. X. примен. для разделения фенолов и карбоновых к-т (на анионитах), аминосахаров, нуклеотидов, нуклеозидов, пуриновых, пиримидиновых и др. оснований (на сульфо-катионитах). Белки, нуклеиновые к-ты и др. высокомолекулярные соед. разделяют с помощью агарозных и декстрановых гелей и производных целлюлозы (напр., диэтиламиноцеллюлозы, карбоксиметилцеллюлозы). Большое значение имеет автоматич. анализ смесей прир. аминокислот на мелкодисперсных грапулиров. сульфока-тионитах. [c.226]

Рандерат и Струк [70] рекомендуют для фракционирования нуклеозид-монофосфатов, нуклеозиддифосфатов и нуклеозидтрифосфатов на бумаге или слое целлюлозы смесь и-бутанол — ацетон — ледяная уксусная кислота — 5%-пый аммиак — вода (9 + 3 + 2 + 2 + 4) (табл. 114). Если зти же компоненты смешать в соотношении 7 + 5 + 3 + 3 + 2, то получится растворитель, даюш,ий хорошее разделение на слое целлюлозы (табл. 114) и пригодный также для фракционирования нуклеотидов на слое силикагеля Г [71]. Для достижения сравнимых результатов с этой системой в случае слоя целлюлозы достаточно 90 мин, в то время как в случае силикагеля Г необходимо 150 мин. Щелочные растворители, конечно, не могут быть непосредственно использованы на силикагеле Г для разделения сильнокислых нуклеотидов. Рандерат [69] указывает, что добавка 15 г этилендиаминте-трауксусной кислоты на 200 мл растворителя улучшает разделение. [c.443]

При разделении защищенных нуклеозидов, например ано-мерных рибофуранозилпроизводных урацила, в качестве сорбента с успехом используют нейтральную окись алюминия, а в качестве элюента — смеси бензола и этилацетата в разных пропорциях [44, 45, 84, 85]. В табл. 37.6 приведены значения Ка основных нуклеозидов на колонке с сефадексом на основании этих данных можно оценить возможность разделения той или иной смеси методом гель-проникающей хроматографии при использовании элюентов различного состава [47, 48, 67—69]. Хорошие результаты дает разделение на обычных или специально фракционированных биогеле Р-2 [86, 87] и сефадексе 0-10 [88]. Показано, что эти два геля можно использовать для определения нуклеотидного состава нуклеиновых кислот (рис. 37.11). Биогель Р-2 применяют также для разделения нуклеозидов в присутствии большего количества нуклеотидов, которые в этом случае элюируются существенно быстрее, чем на сефадексе 0-10. Хроматографию на биогеле Р-2 или сефадексе 0-10 неоднократно использовали в качестве микроаналитического метода при определении нуклеозидного состава энзиматических гидролизатов ДНК [89—91] и идентификации концевых нуклеотидов [92]. Смесь рибо- и дезоксирибонуклеозидов разделяли на колонке с фракционированным биогелем Р-2 в буферном растворе (pH 10,1), содержащем тетраборат натрия (рис. 37.12) [87]. Для отделения тимидина от 5-бром- и 5-иоддезоксиуридинов предложено проводить хроматографию на сефадексе 0-10 в фос-фатноцитратном буферном растворе с pH 3,5 [93, 94]. [c.53]

Бариевые соли адениловой, гуаниловой, уридиловой и ци-тидиловой кислот являются наиболее удобной формой для выделения, хранения и применения нуклеотидов. Последние находят все больщее применение как для препаративных целей (синтез нуклеозидов, коферментов и т. д.), так и для биохимических исследований и в медицинской практике. Нуклео-зид-2 (3")-фосфаты бария могут быть получены из рибонуклеиновой кислоты щелочным гидролизом с последующим разделением методом ионообменной хроматографии и осаждением в виде бариевых солей. [c.93]

В области разделения веществ с очень малой летучестью (сахара, аминокислоты, нуклеозиды, нуклеотиды, полимеры) без использования производных многого можно ожидать от метода, в котором подвижной фазой является газ, находящийся при температуре и давлении выше критических (при давлениях порядка 2000 атм большинство газов- напоминают жидкости и имеют свойства, аналогичные свойствам жидкостей, и их можно использовать в качестве растворителей) [170]. Следующим шагом в развитии ГЖХ являются последние достижения в области жидкостной хроматографии, такие, как высокоскоростные [171, 172] и высокоэффективные [171, 173] системы, а также новые неподвижные фазы и носители (например, щетки Халаша [174] и носители с контролируемой пористостью [172]). Все зто делает жидкостную хроматографию весьма привлекательной для исследователей, работающих со сложными смесями нелетучих веществ . Специалист по газовой хроматографии не должен предубеждать себя против этих новых методов они наверняка окажутся полезными и интересными. [c.326]

Комбинированное использование потенциометрического метода и двухволновон спектрофотометрии позволяет с высокой чувствительностью определять количественный состав многокомпонентных смесей без их разделения. Подобный анализ основан на зависимости спектров поглощения индивидуальных компонентов от pH среды и позволяет провести определение концентраций компонентов,, имеющих, например, близкие или даже идентичные спектры поглощения в нейтральной среде при обычных условиях. При этом, например при определении количественного содержания различных нуклеотидов в составе ДНК отпадает необходимость в предварительном хроматографическом разделении этих компонентов. Предварительное хрсшатографичеокое разделение вызвано тем, что спектры поглощения нуклеозидов перекрываются между собой настолько сильно, что обычные спектрофотометрические методы определения концентрации компонентов оказываются неприменимыми. [c.279]

Выбор ионита можно ускорить, если воспользоваться таблицами, в которых приведены характеристики ионитов различных типов, имеющихся в продаже (табл. 5.4—5.7). Более подробные таблицы приведены в работах [5, 25, 118, 123, 139]. Для разделения неорганических соединений пригодны ионообменные смолы (табл. 5.4) или неорганические иониты (табл. 5.7). Для хроматографирования низкомолекулярных ионогенных органических соединений (аминов и других оснований, кислот, аминокислот, пептидов, нуклеозидов, нуклеотидов) следует пользоваться ионообменными смолами. Однако они непригодны для анализа белков. Биополимеры (белки, нуклеиновые кислоты и их высокомолекулярные фрагменты) можно успешно разделять на ионообменных производных целлюлозы (табл. 5.5), полидекстрана и агарозы (табл. 5.6). Для высокоэффективной жидкостной хроматографии биополимеров предназначены биополимерные ионообменные производные макропористого стекла (табл. 5.6А) и гидрофильные макропористые оксиалкилмет-акрилатные полимеры (табл. 5.6Б). [c.251]

Нуклеиновые кислоты — составные части сложных белков клеточных ядер — нуклеопротеидов. Продуктами распада нуклеиновых кислот являются пурины, ниримидины и их производные (нуклеозиды, нуклеотиды). Бумажная распределительная хроматография может быть с успехом использована для разделения всех этих органических веществ. Методика разделения остается той же, что и для аминокислот и пептидов. Поэтому здесь можно остановиться лишь на рассмотрении способов идентификации. [c.169]

И. X. применяется для разделения катионов металлов, напр, смесей лантаноидов и актиноидов, 2г и НГ, Мо и W, КЬ и Та последние разделяют на анионитах в виде анионных хлоридных комплексов в р-рах соляной и плавиковой к-т. Щелочные металлы разделяют на катионитах в водных и водно-орг. средах, щел.-зем. и редкоземельные металлы-на катионитах в присут. комплексонов. Большое значение имеет автоматич. анализ смесей прир. аминокислот на тонкодисперсном сульфокатионите.в цитратном буфере при повыш. т-ре. Аминокислоты детектируют фотометрически после их р-ции с нингидрином или флюориметрически после дериватизации фталевым альдегидом. Высокоэффективная И. X. (колонки, упакованные сорбентом с размером зерен 5-10 мкм, давление для прокачивания элюента до 10 Па) смесей нуклеотидов, нуклеозидов, пуриновых и пиримидиновых оснований и их метаболитов в биол. жидкостях (плазма крови, моча, лимфа и др.) используется для диагностики заболеваний. Белки и нуклеиновые к-ты разделяют с помощью И. X. на гидрофильных высокопроницаемых ионитах на основе целлюлозы, декстранов, синтетич. полимеров, широкопористых силикагелей гидрофильность матрицы ионита уменьшает неспецифич. взаимод. биополимера с сорбентом. В препаративных масштабах И. х. используют для вьщеления индивидуальных РЗЭ, алкалоидов, антибиотиков, ферментов, для переработки продуктов ядерных превращений. [c.264]

Проделав обычное разделение нуклеозид-З-фосфатов электрофорезом на бумаге и измерив распределение радиоактивного фосфора по четырем типам нуклеотидов, находят, какие звенья цепи расположены но соседству с адепппом, притом впереди него. [c.247]

Очевидно, что многие нуклеозиды являются интермедиатами в биосинтезе н расщеплении нуклеотидов и полинуклеотидов. В дополнение к так называемым спонгонуклеозидам (термин, применяемый к модифицированным пуриновым нуклеозидам, полученным из карибской губки ryptotethya rypta), которые являются производными арабинозы, многие антибиотики являются производными нуклеозидов, часто имеющих модифицированные углеводные остатки они будут детально обсуждаться позднее. Нуклеозиды сравнительно легко выделить из химических или ферментативных гидролизатов природных полинуклеотидов условия и практические детали этого процесса можно найти в общих учебниках по нуклеиновым кислотам [2, 7, 24]. Все коммерчески доступные образцы основных нуклеозидов получены этим путем. Для выделения больщих количеств таких нуклеозидов наиболее целесообразно применение относительно грубого фракционирования, основанного на различной растворимости, и методов ионного обмена. Для выделения малых количеств модифицированных нуклеозидов либо из природного источника, либо полученных в результате химического синтеза, пригодны многочисленные более эффективные методы, и они будут обсуждаться отдельно. Наконец, следует помнить, что выделение нуклеозидов часто осуществляют дефосфорилированием нуклеотидов [25], выделение и разделение которых не будет рассматриваться в настоящей главе. [c.72]

По мере разделения перекрученных qeneit исходной молекулы к их основаниям, ставшим теперь доступными, присоединяются комплементарные нуклеозид-5 -трифосфаты, но с противоположных концов двух цепей. При взаимодействии трифосфатов с З -оксигруппами предыдущих нуклеотидов в растущих цепях образуются новые 3, 5 -фосфодиэфирные связи и освобождаются молекулы неорганического фосфата. В результате каждая из двух родительских цепей дает начало двойной спирали с новой цепью, когда та становится достаточно длинной. Раньше принято было считать, что раскручивание исходных цепей может происходить только на концах двойной спирали. Сейчас установлено, что эти цепи расходятся в нескольких местах на протяжении всей спирали, а образовавшиеся в каждом месте полинуклео-тидные фрагменты соединяются в процессе еще одной реакции (она здесь не показана), давая законченные нити очень большой длины. ФФ — неорганический пирофосфат. [c.484]

Большое распространение в последнее время получила хроматография на полиамиде (е-поликапролактаме). Было показано, что полиамиды в зависимости от способа получения обладают различной разделительной способностью [154]. В качестве связующего для полиамидных слоев хорошо зарекомендовала себя целлюлоза [43, 154]. Полиамид применяли также и для приготовления незакрепленных слоев [154]. Помимо целлюлозы в качестве связующего можно использовать крахмал. Слои с пре-красны.ми механическими свойствами мол<но получить из смеси полиамида, силикагеля и крахмала [94]. Полиамид пригоден для разделения фенолов. В этом случае при использовании водных систем растворителей характер разделения аналогичен получаемому при применении хроматографии с обращенными фазами, т. е, в системе с гидрофильной неподвижной фазой (см. разд. 3.2.1.3) [154]. Необходимо помнить, что элюотропный ряд растворителей в случае полиамида совершенно иной, чем применительно к другим сорбентам. Это объясняется разным характером взаимодействия между хроматографируемым веществом и сорбентом. Помимо фенолов в тонком слое полиамида хроматографировали антипиретики [54], тиаминовые производные [60], антибиотики [77], консервирующие вещества [57, 90], аминокислоты и их производные, нуклеозиды и нуклеотиды [163, 164] и другие соединения. Хроматографируемые вещества хорошо вымываются из полиамидного слоя, поэтому пластинки с полиамидом можно использовать для повторных разделений [163]. [c.41]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология