Коллидин-нингидрин

Нингидрин + коллидин Нингидрин + циклогексил-амин или дициклогексиламин Нингидрин + фенол Изатин [c.405]

Для тонкослойной хроматографии фенилтиогидантоиновых производных аминокислот в качестве сорбента использовали также силикагель, а в качестве растворителей системы ксилол — метанол (80 10) и гептан — дихлорэтан — пропионовая кислота (45 25 30) [186]. Проявление велось при помощи 1,7%-ного раствора нингидрина в смеси метанол — коллидин — уксусная кислота (15 2 5). Этим методом можно разделять фенилтиогидантоины, имеющие близкие значения Rf. [c.115]

Приготовление коллидин-нингидрина. 5,0 г нингидрина растворяют в 955 мл ацетона, затем добавляют 25 мл уксусной кислоты и 20 мл коллидина. [c.193]

Нингидрин + нитрат меди -)- коллидин [c.405]

Раствор I. 0,1 г нингидрина растворяют в 50 мл абсолютного спирта и добавляют 10 мл ледяной уксусной кислоты и 2 мл 2, 4, 6-коллидина. [c.487]

Реактив. 0,3 г нингидрина растворяют в смеси 95 мл изопропанола, 5 мл 2,4,6-коллидина и 5 мл уксусной кислоты. [c.261]

Аналогичные наблюдения были сделаны в отношении а-амипо-кислот. При восходящем линейном хроматографировании с помощью смеси фенола с водой (80 20) и окрашивании пятен раствором 400 мг нингидрина и 1,5 коллидина или пиридина в 100 лел 95%-ного этанола были получены величины Rf, приведенные в табл. 105. [c.291]

Указание преподавателю. Растворяют 400. иг нингидрина и 1,5 мл си.и.м-коллидина в 100. чл 95%-ного этилового спирта. Раствор должен иметь щелоч-яую среду, потому что испытуемые растворы кислые коллидин можно заменить пиридином, но окраска пятен будет слабее. Этиловый спирт лучше обычно применяемого бутилового, так как он быстрее испаряется и способствует быстрому проявлению пятен при комнатной температуре. [c.167]

На фильтровальную бумагу наносят 2 капли раствора пролина (а), опрыскивают раствором нингидрина с коллидином и удостоверяются, является ли вещество чистым пролином (желтое пятно). [c.173]

Растворителем служит фенол —коллидин, иидикато1)ом —нингидрин (условия по Денту). Среднее положение пятен основных аминокислот и их производных из белковых гидролизатов на хроматограмме (фенол - коллидин, нингидрин) следующее У — аспарагиновая кислота 2—глутаминовая кислота серин [c.443]

Анализ элюируемых фракций. Содержание пептидов в элюатах можно определять количественно посредством реакции с нингидрином или по Фолину — Лоури, а также одним из реактивов на специфические аминокислотные остатки (см. стр. 129—131). Метод Фолина — Лоури является более чувствительным, особенно в случае длинноцепочечных пептидов. Чувствительность нингидринной реакции на пептиды может быть значительно увеличена путем предварительного проведения быстрого щелочного гидролиза [35]. Если нингидринную реакцию предполагается использовать при анализе фракций с колонок, для элюирования которых будут применяться пиридиновые или коллиди-новые буферы, то соответствующие растворители необходимо предварительно перегнать над нингидрином для удаления взаимодействующих с ним примесей. Если же при анализе фракций, содержащих пиридиновые или коллидиновые буферы, необходимо использовать реакцию Фолина — Лоури, то пробы упомянутых фракций следует предварительно упарить досуха для удаления из них пиридина и коллидина, которые мешают этому определению. Это упаривание удобно проводить путем отбора аликвотных проб соответствующих фракций в аналитические пробирки [c.119]

Для идентификации по окраске используют смесь 50 мл 0,1%-ного раствора нингидрина в этаноле + 2 мл коллидина. В некоторых работах рекомендуется добавлять 10 мл СН3СООН. Чем ниже чистота коллидина, тем лучще окраска. Хроматограмму нагревают, наблюдая за развитием [c.389]

Готовят два раствора 1) 0,2%-ньгй раствор нингидрина в 50 мл этанола + 10 мл уксусной кислоты + 2 мл коллидина 2) 1 %-ный раствор Си(ЫОз)2 ЗН2О. Хроматограмму опрыскивают свежеприготовленной смесью 25 мл раствора 1 и 1,5 мл раствора 2 высушивают и нагревают в течение 1,5-2 мин при 105°С. Таким же образом обрабатывают пластинки ТСХ. Пластинки высушивают, опрыскивают реагентом и подогревают так, чтобы за окраской можно было наблюдать по мере ее появления. [c.390]

Полученные хроматограммы рекомендуется проявлять нингид-рин-коллидиновым реагентом (1,0 г нингидрина, растворенного в смеси 700 мл этанола, 29 мл 2,4,6-коллидина и 210 мл уксусной кислоты). При окрашивании этим реагентом можно обнаружить следующие минимальные количества аминокислот 0,05 мкг для Ала, Асп и Вал 0,1—0,2 мкг для Иле, Сер и Арг 0,3—0,5 мкг для Гис, Лиз, Мет и Тир. [c.235]

Капля образца была нанесена на леоый верхний угол бумаги. Затем бумага была подвешена за широкую сторону и проявлена -коллидином. После этого бумага была высушена и подвешена за другую сторону. Вторично хроматограмма была проявлена фенолом. Затем она была снова высушена, смочена нингидрином и нагрета. Смесь аминокислот в правом нижнем углу хроматограммы можно было бы разделить, если вместо коллидина и фенола использовать бензиновый спирт и бутанол. Однако в этом случае не будут разделены другие аминокислоты. [c.258]

Нингидрин — нитрат меди для аминокислот. Для обнаружения аминокислоты сухую иластинку, прогретую 10 мин. при 100°С, опрыскивают свежеприготовленной смесью (50 3) двух растворов раствора 0,2%о нингидрина в 50 мл абсолютного этанола, 10 мл ледяной ук-суспох ( кислоты и 2 мл 2,4,6-коллидина и 1%-ного раствора Си(ХОз)2. ЗНаО в абсолютном спирте,Затем хроматограмму нагревают 4 мин. при 110°С. Обнаруженные пятна следует тотчас пометить. [c.169]

Приготовление N- N-индикaтopa ). Раствор / представляет собой 0,2% -ный раствор нингидрина в смеси 50 мл абсолютного спирта, 10 мл ледяной уксусной кислоты и 2 лгл 2,4,6-коллидина раствор Я— 1%-ный раствор трехводного гидрата азотнокислой меди в абсолютном спирте. [c.585]

Состав -50 мл 0,2%-ного раствора нингидрина в абсолютном этаноле, 10 мл ледяной уксусной кислоты и 2 мл симм. коллидина (2,4,6-триметилпиридина). Перед использованием к этой смеси добавляют (в соотношении 3 50) 1%-ный раствор u(N03)a-3H20 в абсолютном этаноле. Красные, постепенно выцветающие пятна образуются при нагревании хроматограмм в течение 5—10 мин при ПО °С. [c.374]

Каплю смеси, как указано, помещали в углу листа бумаги и подвешивали его-с длинней стороныГхроматограмму проявляли симм. коллидином. Бумагу затем высушивали и подвешивали с короткой стороны, проявляя фенолом. После вторичного высушивания ее сбрызгивали нингидрином и нагревали. Смесь неразделенных кислот, находящаяся на рисунке внизу справа, может быть разделена, если вместо коллидина и фенола применять бензиловый и бутиловый спирты, но в таком случае другие кислоты не будут изолированы15. [c.408]

В 1951 г. Дата и Харрис [114] опубликовали сообщение, в котором говорится, что моча кошек и оцелотов содержит вещество, дающее нингидринную реакцию. Это вещество было изучено Весталлем [115]. Было установлено, что на двухмерных хроматограммах на бумаге в системах фенол — аммиак и коллидин — лутидин оно перекрывается лейцином и изолейцином. Одномерным хроматографированием с использованием грет-б-утилового спирта удается получить индивидуальное пятно, которое после обработки перекисью водорода уже нельзя обнаружить на прежнем месте. Казалось вероятным, что имеют дело с новой аминокислотой, содержащей серу в таком случае исчезнование пятна объяснялось бы окислением этой аминокислоты до сульфоксида или, что более вероятно, до сульфона. В соответствии с этим было изучено поведение в аналогичных условиях ряда аминокислот. [c.79]

В качестве фиксируюш его реагента применяется нингидрин, обладающий высокой чувствительностью. Высушенные хроматограммы погружают в 0,25 % -ный раствор нпнгидрина в сухом ацетоне. К этому раствору желательно прибавлять 1—2% 2-, 4-лутидина или 2-, 4-, 6-коллидина, что позволяет улучшить дифференциацию цве- [c.26]

Если хроматографирование ведется системами с экстремальными значениями pH, то надо подобрать такой состав нингид-ринового реагента, который был бы оптимальным в отношении образования окрашенных пятен. Для нейтрализации к реагенту добавляют пиридин, коллидин или уксусную кислоту. Нингидрин дает нестойкое окрашивание со временем пятна бледнеют или вообще выцветают. Чтобы повысить стойкость окрашивания, хроматограмму пропитывают 1%-ным раствором нитрата меди (И) в ацетоне [142]. Образовавшиеся на хроматограммах красные комплексы устойчивы в течение нескольких лет. [c.125]

Для проявления хроматограмм опрыскиванием пригодны реактивы а) 0,1%-ный раствор нингидрина в я-бутаноле, насыщенном 0,5 н. цитратным буфером (pH 5,5), и б) 0,1%-ный раствор нингидрина в этаноле, чистом или содержащем 5%-ный раствор коллидина. Хорошие результаты получаются при погружении хроматограмм (методика, описанная Хейнсом) в смесь, состоящую из 125 мг нингидрина в 25 мл ледяной уксусной кислоты, 20 мл коллидина и 955 мл этилацетата. Раствор должен быть свежеприготовленным для фенольных хроматограмм к реактиву перед использованием добавляют немного гидриндантина. В спиртовом растворе нингидрина, содержащем коллидин в виде свободного основания, пятна аминокислот окрашиваются в различные цвета в зависимости от времени развития окраски и температуры. Для этой цели рекомендуют также 5%-ный раствор циклогексиламина или дициклогексиламина [27]. [c.24]

В работах [122—124] описано разделение на слоях силикагеля, нанесенных на пластмассовые полоски. Элюирование при этом проводилось смесями гептан—пропионовая кислота—дихлорэтан (58 17 25) и гептан—бутанол—75 %-ная муравьиная кислота (50 30 9) [122] верхний слой смеси бутилацетат—фор-мамид—пропионовая кислота—вода (160 6 3 3) удобен при разделении кислых аминокислотных ФТГ-производных смеси ксилол—метанол (8 1) полезны при идентификации пролина, а смесь ксилол—изопропанол (7 2) —лучший из этих трех смесей элюент общего назначения. Элюирование всеми перечисленными смесями проводилось в камере с ненасыщенной атмосферой на полосках Eastman hromatogram 6060 [123]. Авторы работы [124] использовали для разделения смеси гептан—дихлорэтан—пропионовая кислота (9 5 6) и ксилол—метанол (8 1). После разделения проб хроматограммы изучали в УФ-свете, обрабатывали их реактивом на основе азида иода и смеськ> 1,7 %-ный нингидрин—коллидин—уксусная кислота (15 2 5). В результате эти авторы смогли идентифицировать продукты семи стадий разложения, протекающих в автомате Эдмана за [c.503]

Вскоре после проведения этого исследования Консден, Гордон и Мартин [372] применили к пептидам свой знаменитый метод хроматографии а бумаге. Выбор подвижной фазы, очевидно, диктуется природой пептидов, подлежащих разделению, вследствие чего необходимы предварительные пробы однако некоторые съедения а выборе подвижной фазы в настоящее время можно найти в литературе [340, 349, 373 и пр.]. Положение пептидов на бумаге следует определять, не вызывая слишком сильного их разрушения. Для этой цели можно прибегнуть к флуоресценции [374] можно также использовать весьма разбавленный (0,02%-ный) раствор нингидрина или концентрированный его раствор, который наносится в отдельных точках специальной щеточкой [375а]. Крупные пептиды обнаруживаются с трудом, но их редко анализируют на бумаге. С помощью специальных цветных реакций (табл. 7) оказывается возможным установить расположение некоторых пептидов на хроматограмме [3756]. Двумерное хроматографирование на бумаге обладает действительно поразительной разрешающей способностью, которую целесообразно использовать для конечного разделения групп , полученных при предварительном фракционировании с помощью ионофореза, ионного обмена или адсорбции. Некоторые исследователи, располагающие очень малыми количествами дорогостоящего соединения, удовлетворены тем, что они могут провести хроматограмму на бумаге, используя для этого количество пептида, не превышающее примерно 1 мг. Другие исследователи сожалеют, что опасность перегрузки бумаги не позволяет им воспользоваться большими количествами, так как последующее разделение пятен и окончательная идентификация пятен, являющихся, повидимому, чистыми, представляет собой довольно деликатную операцию. Эти исследователи, однако, могут обратиться к двум другим методам либо к применению толстой бумаги [376] или хроматопилии [377а], либо к использованию колонок. Для фракционирования пептидов на бумаге можно применять ряд растворителей, в числе которых должны быть упомянуты фенол или крезол с аммиаком, колли-дин, пиридин -f- коллидин, фенол с буферным раствором, бутиловый спирт -f- уксусная (или муравьиная) кислота и фосфатные буферные растворы. [c.155]

Цефалоспорины были разделены с помощью бумажной хроматографии в системах бутанол-1—уксусная кислота — вода [165—168] и бутанол-1—этанол — вода [169—171] различного состава, а также в других системах растворителей, содержащих либо не содержащих буферы i[165, 169—178]. Ряд сложных эфиров цефалоспоринов хроматографировали на пластинках с силикагелем в девяти системах растворителей [179]. Зоны обнаруживали путем опрыскивания хроматограмм раствором нингидрина в смеси этанола, 2,4,6-коллидина и уксусной кислоты и последующего нагревания. Цефалоспорин С хроматографировала [c.150]

Для разделения смесей аминокислот, пептидов и белков Мартин и Синдж применили систему хлороформ — вода. В настоящее время большее значение имеют фенол, лг-крезол в смесях с водой и буферирующими веществами, такими, как фосфаты, аскорбиновая кислота и др. Применяют также органические основания в смесях со спиртами, водой и буферированные. Например, лутидин — этиловый спирт, лутидин — третичный амиловый спирт, лутидин — третичный амиловый спирт — вода, пиколин, коллидин, коллидин с буфером, пиридин — амиловый спирт и др. Бутиловый спирт применяют в смесях с уксусной кислотой, бензиловым спиртом, аммиаком, монохлоргидрином гликоля, третичным бутиловым спиртом и с другими веществами. Применяют также смесь метилоксида с муравьиной кислотой, смесь ацетона с водой и мочевиной. Для обнаружения аминокислот применяют обычный групповой реагент — нингидрин, позволяющий обнаруживать кроме аминокислот пептиды, белки и первичные амины. Применяют также индикаторы — органические красители, например, тропеолин 00 и орцин (реагент на сахара). [c.85]

Наносят на бумагу, как описано выше, капли растворов аланина, метионина, цистина, тирозина и лролина (двойное количество) высушивают бумагу п слегка опрыскивают водным раствором, содержащим 1 % пер.манганата калия и карбоната натрия. На розовом фоне сразу же появляются желтые пятна. Их очерчивают карандашом, и бумагу немедленно отбеливают сернистым ангидридом, помещая ее на короткое время под часовое стекло -над стаканом, в котором проходит реакция бисульфита патрия с соляно кислотой. После удаления избытка ЗОг бумагу опрыскивают раствором нингидрина с коллидином и высушивают. Перманганат окисляет атомы серы метионина и цистина, а также фенольную группу тирозина, но реакция восстановления ЗОг указывает на то, что исходные ами нокиелоты все же остаются. Природа желтого п 11 г м 6 Н та неизвестна. [c.170]

Порядок расположения аминокислот вдоль полосы бумаги различен для различных растворителей. Испошь-зуя это обстоятельство и механические свойства бумаги, удалось разработать двухмерное разделение аминокислот. Капля раствора а-мянокислот помещается около верхнего угла куска фильтровальной бумаги (40 X 55 см). Сначала хроматограмму проявляют в одном направлении коллидином в течение 48—72 часов. Затем бумага высущивается, и производится вторичное проявление, но уже для это1 1 цели применяется насыщенный водой фенол в атмосфере, содержащей МНз. После вторичного проявления полоска снова высушивается. Кислоты растекаются по бумаге характерным образом, и их положение может быть обнаружено путем обрызгивания бумаги раствором нингидрина, с последующим высушиванием 11 нагреванием. Рис. 4 показывает фотографию полученной таким образом хроматограммы. [c.82]

Пары растворителей, способной разделить все аминокислоты на отдельные пятна, пока еще не найдено, по при подходящем выборе растворителей можно отделить любую аминокислоту. Коллидин, фенол, н-бутиловы11 спирт и бензиловый спирт являются наиболее распространенными растворителями. Необходимое количество вещества поразительно мало. Достаточно 0,2—0,4 мг белка для каждой двухмерной хроматограммы и еще меньше для линейного опыта. 1 микрограмм аминокислоты дает с нингидрином ясно видимое пятно. Метод уже получил широкое применение для качественных и, в последнее время, также для количественных исследований. [c.82]

Цветная реакция Фолина—Лоури очень удобна для обнаружения пептидов. Она наиболее чувствительна в случае длинноцеиочечных пептидов, содержащих фенольные группы, однако с ее помощью можно определять и простые пептиды неароматического характера. В отличие от нингидринной реакции реакция Фолина — Лоури не требует нагревания и ее проведению не мешает присутствие аммиака. Пиридин и коллидин затрудняют проведение реакции, поэтому указанные соединения должны быть удалены из образца путем его высушивания. Значение pH образца должно быть близко к нейтральному. Кривая зависимости интенсивности окраски от концентрации не линейна, поэтому для точного измерения концентрации необходимо строить стандартную калибровочную кривую (см. табл. 5). [c.131]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология