Аминокислоты окислением нингидрином

При нагревании с нингидрином (трикетогидринденгидрат) растворов аминокислот, продуктов распада белков, первичных или вторичных аминов возникает темно-синее окрашивание. Химизм этих цветных реакций довольно сложен вследствие возникновения различных побочных реакций. При взаимодействии а-аминокислот с нингидрином вначале происходит окисление аминокислоты, сопровождающееся восстановлением нингидрина (I) СООН [c.370]

Существенные экспериментальные трудности, которые до последнего времени ограничивали исследования в области белковой химии, в значительной степени обусловливались отсутствием простых и надежных способов анализа аминокислот. Лишь благодаря развитию за последние два десятилетия ионообменной и распределительной хроматографии удалось разработать автоматический метод количественного анализа аминокислот с использованием окисления аминокислот нингидрином и фотометрирования продуктов реакции [9]. Однако стремительное развитие химии белков и пептидов, среди которых обнаружены важнейшие биорегуляторы и антибиотики, уже сейчас предъявляет новые требования по чувствительности и быстроте анализа. Сложность аппаратурного оформления и дороговизна эксплуатации, безусловно, ограничивают применение автоматического анализатора Мура и Штейна и в значительной степени обусловливают интерес к разработке новых методов аналитического определения аминокислот, свободных от указанных недостатков. [c.252]

Этот метод обычно используется для количественного определения аминокислот методом жидкостной хроматографии. Вместе с тем полученные из аминокислот альдегиды могут быть определены и методом ГЖХ [110—113]. Однако имеются сведения о том, что глицин окисляется нингидрином до формальдегида, который в условиях газохроматографического анализа полимеризуется 1114], а альдегиды, полученные из фенилаланина и метионина, обладают низкой летучестью [115]. При окислении нингидрином валина, лейцина, изо лейцина, аланина были получены соответственно изомасляный альдегид, 3-метилбутанол, 2-метилбутанол и ацетальдегид [110 . [c.41]

Для анализа предложено превращать аминокислоты в соответствующие альдегиды (окисление нингидрином) или декарбо-ксилировать до аминов. Реакция окисления при.менена при определении аланина, 2-ами-номасляной к-ты, валина, лейцина, изолей-ципа, норлейцина, метионина и фенилаланина. [c.133]

Определение общей биологической активности почвы по методу Мишустина, Вострова и Петровой (по интенсивности разложения полотна). Чем выше в почве содержание подвижного азота и других элементов питания, тем активнее идет окисление целлюлозы. Целлюлозоразрушающие микроорганизмы, разлагая клетчатку, синтезируют и частично выделяют в среду аминокислоты. При обработке остатков полуразрушенного льняного полотна 0,5 %-м раствором нингидрина в тех местах, где активно развивалась микрофлора и разлагалась целлюлоза, образуются сиреневые пятна - продукты реакции аминокислоты с нингидрином. [c.123]

При окислении альфа-аминокислот нингидрином при pH 1 образуется аммиак, двуокись углерода, восстановленный нингидрин и другие продукты. При pH выше 3 аммиак, восстановленный нингидрин и невосстановленный нингидрин образуют окрашенное в синий цвет соединение. Оно гидролизуется при pH 11 с выделением азота в виде аммиака, который затем, после аэрации, определяют реактивом Несслера. Метод применяют для определения альфа-аминного азота, хотя он дает некоторую ошибку вследствие того, что оксипролин, пролин и триптофан взаимодействуют с нингидрином при pH 1 не количественно. Из 23 исследованных альфа-аминосоединений для 14 точность результатов количественных определений находилась в пределах 5%, а для 16 соединений — в пределах +10%. [c.115]

Аминокислоты анализируют также, превращая сначала альдегиды, полученные при окислении нингидрином, в эфиры [3]. Летучие альдегиды отгоняют в щелочной раствор перманганата и окисляют до соответствующих карбоновых кислот. Кислоты извлекают в виде натриевых солей и затем подвергают этерификации. Эфиры разделяют методом ГЖХ на колонке с поли-(пропиленгликольадипатом) при 150° и скорости потока азота 10 мл/мин. Метилтиопропионовый альдегид, полученный из метионина, при окислении расщепляется, а эфиры, образовавшиеся из лейцина и изолейцина, не отделяются друг от друга. При таких условиях приготовления определяют только аминокислоты, образующие летучие альдегиды. Поэтому метод ограничен определением аланина, валина, норвалина, лейцина с изолейцином и фенилаланина. Перед хроматографическим разделением эти вещества выгодно превратить в эфиры, поскольку они химически устойчивее альдегидов. Однако их лучше превращать в метил ацетали, если только будет найден простой метод получения безводных альдегидов. [c.539]

Бир и Тейтельбаум [8] описывают микрометод для окисления аминомасляной кислоты, валина и лейцина перед анализом методом ГЖХ. Аминокислоты обрабатывают нингидрином в запаянной ампуле и продукты экстрагируют растворителем, представляющим собой хлорированный углеводород. Затем раствор, содержащий альдегиды, анализируют на колонке с силиконом при 78°. Для количественного определения этих аминокислот строят стандартные кривые после хроматографического разделения соответствующих альдегидов при известной их концентрации. [c.538]

Алифатические аминокислоты, полученные из белков, включая аланин, валин, лейцин и изолейцин, удовлетворительно определяют при окислении нингидрином и хроматографическом разделении получающихся альдегидов. Ни один из имеющихся методов не является пригодным для всех аминокислот, но, вероятно, это положение улучшится в ближайшем будущем. [c.542]

Аминокислоты Окисление до альдегида под действием нингидрина 148 [c.156]

Проба, содержащая водный раствор аминокислот, вводится в микрореактор для окисления нингидрином до альдегидов, альдегиды разделяются на колонке и после крекинга до метана во 2-м реакторе детектируются по теплопроводности. Разделялись аланин, а-аминомасляная к-та, валин, норвалин, лейцин, изолейцин, норлейцин. НФ для разделения альдегидов смесь эти-ленкар онат — пропиленкарбонат. [c.134]

Определение аминокислот путем окисления нингидрином с последующим разделением методом газовой хроматографии. [c.133]

На II стадии образовавшийся аммиак реагирует с эквимолярными количествами окисленного и восстановленного нингидрина, образуя синефиолетовый продукт, интенсивность окраски которого (при 570 нм) пропорциональна количеству аминокислоты [c.41]

Проба 0,5 цл 0,1 н. солянокислого раствора, содержащая по 0,5 цг каждой кислоты растворитель метилэтилкетон — пиридин — вода — ледяная уксусная кислота (70 + 15 + 15 4- 2) время анализа 4,5 час обнаружение нингидрином. При наличии метионина необходимо окисление яад-муравьиной кислотой [44]. Для надежной идентификации лейцина и изолейцина параллельно хроматографируют каждую из этих аминокислот в качестве эталонных веществ. [c.402]

Златкис и сотр. [111] применили метод реакционной газовой хроматографии для анализа смеси семи аминокислот. В нагреваемом микрореакторе при 140° С аминокислоты окисляются 30%-ным раствором нингидрина до альдегидов, которые разделяются при 25° С на хроматографической колонке. Перед альдегидами из колонки элюируется двуокись углерода, образующаяся при окислении аминокислот нингидрином. После выхода из колонки альдегиды поступают во второй реактор, где под влиянием никелевого катализатора при 425° С происходит реакция превращения их в метан и воду. Вода удаляется на высушивающей колонке, а метан детектируется по теплопроводности. [c.41]

Для обнаружения и количественного определения аминокислот по окончании разделения высушенные хроматограммы обрабатывают 0,5%-ным раствором нингидрина в ацетоне. Аминокислоты проявляются в виде фиолетовых пятен пятна вырезают, окрашенный комплекс извлекают спиртовым раствором сернокислой меди и интенсивность окраски измеряют при длине волны 575 ммк. По калибровочным кривым, построенным для каждой аминокислоты, находят концентрацию компонентов смеси. Определение цистина производят после превращения его в цистеиновую кислоту путем предварительного окисления белка надмуравьиной кислотой (см. гл. IV, 1). [c.44]

Этим методом изучали также процесс окисления содержащихся в пиве аминокислот. Аминокислоты предварительно превращали в соответствующие альдегиды действием нингидрина [55]. [c.70]

Проф. Кэйт Кэннан уведомил нас, что дикарбоновые аминокислоты могут быть количественно выделены из гидролизата, освобожденного от катионов по Блоку [107] с помощью синтетических анионных обменивателей. Цеолит сперва тщательно промывается водой для удаления некислых аминокислот, а потом дикарбоновые кислоты количественно. выделяются из нега крепкими щелочами или путем обмена с минеральными кислотами (см. Блок [107]). Ван-Сляйк и др. [536, 637] указали на возможность определить глютаминовую и аспарагиновую кпслоты в смеси (но в отсутствие других аминокислот) на основании того, что при окислении нингидрином глютаминовая кислота образует 1 моль СОз, а аспарагиновая — 1,9 моля. [c.309]

Нейбергер и Зангер [474] нашли, что аспарагиновая кислота не образует заметных количеств ацетальдегида при окислении нингидрином. Поэтому они не считают нужным проводить исходное осаждение дикарбоновых аминокислот по Рит-гаузену — Фореману. [c.332]

Количественно а-аминокислоты могут быть определены дезаминированием азотистой кислотой по методу Бан-Слайка [4], титрованием карбоксильной группы после связывания аминогруппы формальдегидом (формольное титрование), титрованием в 90— 97%-ных растворах этилового или пропилового спирта, окислением нингидрином по количеству выделяющейся двуокиси углерода, колориметрически или иодометрическим титрованием в виде комплексных соединений меди, реакцией с пери-нафтиндаптрион-2,3,4-гидратом по количеству выделяющегося аммиака или образующегося альдегида и т. д. [c.6]

Метод позволяет после окисления нингидрином смеси двух сахаров идентифицировать 2—5 мкг одного из них в присутствии 100 мкг другого [194]. Образующиеся пентозы идентифицируют хроматографией иа бумаге (например, в смеси к-бутапол — спирт — вода, 4 1 1, по объему) или распределительной хроматографией на колонках [133]. При этом нет необходимости в предварительном отделении аминосахаров от нейтральных сахаров и аминокислот. Метод можно использовать для количественных определений ясно, однако, что таким способом нельзя отличить в-глюкозадшн от в-маппоза-мина или D-галактозамин от о-талозамина. [c.213]

Определение концевых М-аминных групп разработано достаточно детально. Самым простым, хотя и не совершенным, является метод дезаминирования пептида азотистой кислотой, хлористым нитрознлом, или же окисления бромноватистой кислотой или нингидрином. В результате аминогруппа заменяется гидроксильной или карбонильной и после гидролиза пептида и разделения аминокислот на хроматограмме одна аминокислота исчезает. [c.510]

Большие трудности представила идентификация этого так называемого нингидрин-реагирующего вещества, отделяемого хроматографией на бумаге от других продуктов кислотного гидролиза витамина В а- Этот алифатический осколок не являлся аминокислотой, и его нельзя было отделить от искусственной смеси с 2-а.минопропанолом-1. Однако хроматографией на бумаге его нельзя было отделить и от 1-аминопропанола-2 [88]. Так как 2-аминопропанол-1 при окислении дает а-аланин, а нингидрин-реагирую-щее вещество аланина ке дает, то вопрос об их идентичности отпал. [c.585]

Л. Златкис с сотр. 1711 применил окисление нын1идрином (трикетогидринден) совместно с последующим газохроматографическим разделением для анализа а-аминокислот, образующих при окислении летучие альдегиды, молекула которых содержит на один углеродный атом меньше, чем исходная кислота. Окисление аминокислот проводят при 140° С в стеклянном реакторе (15 X 0,6 см), заполненном нингидрином, нанесенным на огнеупорный кирпич (30% нингидрина). Одна набивка используется для пяти анализов. Для обеспечения полноты проведения реакции аминокис.лоты перед вводом в реактор дополнительно обрабатывают нингидрином. При анализе смешивают 1 часть водного раствора нингидрина с 1 частью 0,28 М раствора аминокислоты и вводят шприцем (— 1 мкл) в реактор. До анализа смесь храпят в ледяной бане. [c.86]

Нингидрин, реактив на аминокислоты ( R, 60, 39), получается с выходом 35% при окислении нндандиона-1,3 двуокисью селена [c.193]

Основы метода. Все аминокислоты, за исключением гликоколя, при окислении трикетогидринденгидратом (нингидрином) в слабокислой среде переходят в NHs, СО2 и блилгайший низ-щий альдегид (Руэман [559]). [c.331]

В 1951 г. Дата и Харрис [114] опубликовали сообщение, в котором говорится, что моча кошек и оцелотов содержит вещество, дающее нингидринную реакцию. Это вещество было изучено Весталлем [115]. Было установлено, что на двухмерных хроматограммах на бумаге в системах фенол — аммиак и коллидин — лутидин оно перекрывается лейцином и изолейцином. Одномерным хроматографированием с использованием грет-б-утилового спирта удается получить индивидуальное пятно, которое после обработки перекисью водорода уже нельзя обнаружить на прежнем месте. Казалось вероятным, что имеют дело с новой аминокислотой, содержащей серу в таком случае исчезнование пятна объяснялось бы окислением этой аминокислоты до сульфоксида или, что более вероятно, до сульфона. В соответствии с этим было изучено поведение в аналогичных условиях ряда аминокислот. [c.79]

Этот метод позволяет проводить одновременно анализ 50 фракций. После развития пурпурной окраски фракции разбавляют 5 мл смеси этанол—вода (1 1), охлаждают перед электрическим вентилятором и встряхивают в течение 30 сек для окисления большей части оставшегося гидриндантина. Измеряют величины экстинкции при 570 ммк (и 440 ммк для пролина и оксипролина). В реакции с нингидрином, изображенной на стр. 78, все аминокислоты, за исключением цистеина, дают один и тот же окрашенный продукт — дикетогидриндилиден-дикетогидриндамин [14]. [c.77]

Аминокислоты следует превращать в летучие соединения перед разделением их методом ГЖХ. К производным, которые исследовали с этой целью, относятся метиловые эфиры, М-ацетилалкиловые эфиры, эфиры соответствующих оксикислот и продукты окисления, получаемые действием нингидрина. Наиболее перспективный метод заключается в хроматографическом разделении М-ацетил-н-амиловых эфиров на двух колонках, содержащих 0,5 и 1,0% карбовакса 1540, нанесенного на хромосорб У, при температуре 125—140°. им методом можно разделить 18 аминокислот, но нельзя анализировать производные гистидина, аргинина и триптофана. Метод пока еще не является количественным. [c.541]

Большинство г. выделено в кристаллич. виде. Г. хорошо растворимы в воде и р-рах кислот с к-тами образуют соли. Г. дают реакции восстанавливающих сахаров (восстановление Фелинга реактива и аммиачного р-ра AgNOз, окисление до соответ-ствуюш,их к-т) и аминов. С нингидрином Г., подобно аминокислотам, дают цветную реакцию. Для колич. определения ряда гексозаминов обычно используют Элсона — Моргана реакцию (цветная реакция, к-рую дают продукты конденсации гексозаминов и ацетилаце-тона с п-диметиламинобензальдегидом). [c.477]

Общее содержание цистина и цистеина можно, однако, определить, окисляя интактный белок надмуравьиной кислотой, которая превращает оба типа остатков в цистеиновую кислоту. Белок затем гидролизуют и сильную цистеиновую кислоту отделяют или на сильноосновной анионообменной смоле, такой, как дауэкс-2 [108], или на сильнокислотной катионообменной смоле типа, обычно используемого для разделений аминокислот [102]. Последний способ более удобен, так как цистеиновая кислота вымывается в виде пика с нулевым удерживаемым объемом (фракции 3—10 на колонке длиной 15 см), но первый метод дает возможность более строгой хроматографической идентификации и отделения цистеиновой кислоты от других сильнокислых соединений, реагирующих с нингидрином. Скорость окисления остатков цистина в белках сходна со скоростью окисления свободной аминокислоты. Нерастворимые белки для полного окисления требуют более продолжительной обработки. [c.148]

Нингидрин, гидрат индантриона (VI), находит весьма широкое применение как реактив на а-аминокислоты, полипептиды и белки и в последнее время обычно получается окислением индандиона селенистой кислотой [24, 25]. Метод довольно долог и кропотлив, не легко освободиться и от следов коллоидного селена, образующегося во время реакции. Казалось возможным получить нингидрин и из нитроиндандиона, который, как известно, может существовать в форме нитроновой кислоты, а последние при окислении [26] переходят в соответствующие кетоны. При окислении нитроиндандиона действительно можно констатировать образование нингидрина, но выхода очень малы. При нагревании нитроиндандио-на в ледяной уксусной кислоте получается гидриндантин (VII) [3]. [c.87]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология