Справочник химика 21

Химия и химическая технология

Статьи Рисунки Таблицы О сайте English

Липосомы получение

    Метод моделирования и получения искусственных мембран основан на получении и исследовании моно- и бимолекулярных липидных слоев, везикул, липосом и протеолипосом. Сущ ествует два основных типа искусственных мембран классические плоские и сферические мембраны различного размера. Для получения искусственных мембран используют различные фосфатиды, нейтральные глицериды, смеси липидов биологического происхождения, добавляя к ним холестерин, а-токоферол и другие минорные добавки. Потенциальная ценность искусственных мембран для исследований зависит от возможности включения в них природных белков, в особенности тех, которые обладают транспортными свойствами. Липосомы, со-стоящ ие из белков и липидов, стали получать в 60-е гг. термин протеолипосомы был введен В. П. Скулачевым. В настоящее время разработан целый ряд методов приготовления различных типов липосом и протеолипосом, а также их стандартизации по размерам, структуре, гомогенности, стабильности и другим характеристикам. Липосомы используют для доставки в клетку лекарственных и химических соединений, стабилизации ферментов в инженерной энзимологии, введения в клеточные мембраны молекул зондов, модифицирующих и моделирующих их поверхность. Большой интерес для генной инженерии и медицины представляют работы по введению в клетки при помощи липосом нуклеиновых кислот и вирусов. В липосомы включают митохондриальные компоненты и изучают на таких модельных системах процессы генерации энергии в клетках. Ультра-тонкие искусственные мембранные структуры — полислои Лен-гмюра—Бложе (ПЛБ) — применяют для получения био- и иммуносенсоров. Создаются ПЛБ с иммобилизованными ферментами и компонентами иммунологических систем. При использовании смешанных липид-белковых пленок ПЛБ получают информацию о функционировании белков и о липид-белковых взаимодействиях в мембране. Результаты изучения физических характеристик, проводимости, проницаемости и других свойств искусственных липидных мембран имеют большое зна- [c.216]


    Искусственные мембраны, липосомы и протеолипосомы, методы их получения, строение, свойства, применение в различных областях биологии и медицины. Взаимодействие липосом с клетками. Методы модификации природных и искусственных мембран. [c.283]

    Поставленные задачи решаются на основе современных методов исследования ферментов. Практическая направленность занятий связана с освоением различных методов регистрации скоростей ферментативных реакций, включающих использование сопряженных ферментных систем и метода радиоактивного анализа. С целью определения активности мембранных ферментов осваиваются техника получения различных субклеточных структур и приемы работы с различными типами детергентов. Проблемы структурного анализа ферментов решаются с привлечением методов избирательной химической модификации белков, флуоресцентных методов, а также методов ковалентной и адсорбционной иммобилизации на различных носителях, включая искусственные фосфолипидные мембраны (липосомы). Кроме того, осуществляется практическое знакомство с различными аспектами кинетического исследования ферментов осваиваются различные способы оценки кинетических параметров, ингибиторный анализ, проводится исслс- [c.329]

    Однослойные липосомы можно получить различными методами, например из суспензии многослойных липосом, если обработать их ультразвуком. Диаметр однослойных липосом, полученных этим методом, составляет 25 - 30 нм. Разработаны и другие методы получения однослойных липосом, в том числе диаметром до 400 нм и более. [c.28]

    При исследовании мембран всегда имеют дело с большим числом молекул. Мембраны, встречающиеся в природе, представляют собой очень сложные системы, состоящие из большого числа различных липидов и протеинов, встроенных в липидную мембрану (рис.3.46). В силу этого исключительно сложно получить детальное представление об индивидуальных молекулах подобно тому, как это было сделано для протеинов в растворах. Только для некоторых модельных систем, таких, как мицеллы и липосомы, которые состоят из вполне определенных компонентов, можно надеяться на то, что будут получены надежные ответы на принципиальные вопросы, касающиеся их организации и движения. В дальнейшем результаты, полученные для модельных мембран, могут быть перенесены на мембраны, встречающиеся в природе. [c.156]

    В начале процедуры получают пузырьки, окруженные мембранами (липосомы). Затем липосомы загружают необходимым веществом, смешивая концентрированный раствор этого вешества и суспензию фосфолипидов. Другая модификация этого метода включает на первом этапе нарушение мембраны эритроцитов, приводящее к утрате ими клеточного содержимого, и последующее помещение полученных теней эритроцитов в раствор нужного вещества, где происходит их заполнение и затягивание плазматических мембран. Оба вида носителей (как липосомы, так и тени эритроцитов можно вводить в клетки-мишени за счет слияния мембран под действием определенных вирусных белков (синтезируемых вирусом [c.200]


    Полученный комплекс липосома — антибиотик обладает рядом положительных свойств снижается токсичность препарата, он способен к направленному транспорту, при этом усиливает- [c.466]

    Размеры липосом зависят от метода получения. Мультиламел-лярные липосомы представляют собой везикулы диаметром 0,1— 5 мкм маленькие однослойные — 0,02—0,05 (200—500 А) большие однослойные — 0,06 мкм и больше. [c.61]

    Фосфолипиды, входящие в состав клеточной мембраны и применяемые для получения обычных липосом, имеют амфи-фильную структуру. Они состоят из гидрофобных алифатических цепей и гидрофильной головки (рис. 6.2). Для того чтобы получить полимерные аналоги биологических мембран и полимерные липосомы (ПЛ), в гидрофобную часть или гидрофильную головку фосфолипидов (либо подобно построенных соединений) вводят группы, способные полимеризоваться в ориентированных (упорядоченных) системах (рис. 6.3). [c.233]

    Синтетические катионные липиды и липосомы, полученные на их основе, в настоящее время признаны перспективными системами доставки функциональных генов. Положительный заряд на поверхности частиц обеспечивает слияние с отрицательно заряженными клеточными мембранами. Катионные липосомы нейгрализуют отрицательный заряд цепи ДНК, делают более компактной ее пространственную структуру и способствуют эффективной конденсации. [c.159]

    Липосомы, полученные указанными методами, представляют собой бислойные, униламеллярные, сферической формы везикулы диаметром 25—30 нм. Препараты липосом хранят в атмосфере азота или аргона при —20 °С в течение 1 мес. Перед использованием препарата определяют, возможно ли в нем перекисное окисление фосфолипида. С этой целью на спектрофотометре оценивают индекс окисленности, т. е. отношение поглощения суспензии липосом (2 мкмоль лецитина в 3 мл смеси этанол—эфир в соотношении 3 1) при 233 и 215 нм. Поглощение препарата липосом при 233 нм свидетельствует о присутствии в суспензии продуктов перекисного окисления лецитина. В работе ис- [c.375]

    Липосомы, полученные после удаления детергента из липидно-белкового раствора, очищают с использованием центрифугирования в градиенте сахарозы (Helenius et al., 1977). При этом [c.156]

    Адсорбция гексокиназы на фосфолипидных мембранах (липосомах). Адсорбцию (иммобилизацию) гексокиназы на липосомах проводят суспендированием препарата липосом (3 мг лецитина) в 1 мЛ раствора фермента, содержащего различные количества единиц используемого фермента, а также 15 мМ МдСЬ или 5 мМ глюкозу в качестве адсорбирующих реагентов. Контрольная проба адсорбирующих реагентов не содержит. После 30-минутной инкубации при 0° С мембраны, содержащие адсорбированную гексокиназу, отделяют центрифугированием при 100 ООО я в течение 1 ч и суспендируюг в среде инкубации. Препарат иммобилизованной гексокиназы используют для изучения свойств в день получения. [c.376]

    Большинство Ф. при диспергировании в вещных системах формирует бислойные структуры - липосомы, размер к-рых и кол-во бислоев зависят от способа получения лизофосфо-липиць образуют только мицеллы. На границе вода - воздух или вода - углеводород Ф., если нет ограничений их распро-стаанению, формируют монослои с пол ными головками, обращенными в водную фазу, и гидрофобными остатками -в воздух (углеводород). Ф. (в виде бислойной структуры) с гликолипидами и стеринами образуют основу (матрицу) мембран биологических. Ф. являются главным компонентом поверхностного монослоя липопротеинов крови, а также вирусов, имеющих липидную оболочку. [c.139]

    Близким к инкапсулированию методом иммобилизации можно считать включение водных растворов ферментов в липосомы, представляющие собой сферические или ламеллярные системы двойных липидных бислоев. Впервые данный способ был применен для иммобилизации ферментов Дж. Вайсманом и Дж. Сессом в 1970 г. Для получения липосом из растворов липида (чаще всего лецитина) упаривают органический растворитель. Оставшуюся тонкую пленку липидов диспергируют в водном растворе, содержащем фермент. В процессе диспергирования происходит самосборка бислойных липидных структур липосомы, содержащих включенный раствор фермента. [c.90]

    Природных ДНК-фермептов (дезоксирибо-зимов) пока не обнаружено, но уже синтезированы олигодезоксинуклеотиды, обладающие каталитической активностью. Преимущество дезоксирибозимов состоит в том, что для их получения не нужно использовать экспрессирующий вектор ДНК-ферменты можно упаковать в липосомы и доставить в клетку-мишень. Однако создание эффективных ДНК-фермептов находится пока на начальном этапе развития. [c.509]

    Получен ассоциат липосом, содержащих метатрексат (ингибитор дигидрофолатредуктазы, противораковое средство), и моноклональных антител к антигенам гистосовместимости мышей. Было показано, что он оказывает специфическое влияние на клетки селезенки. Надо сказать, что исследования по направленному введению лекарственных веществ, содержащихся в липосомах, только начинаются. [c.333]

    В качестве примера возможного применения ферментов терапии укажем на предложение вводить инкапсулированные-в липосомах ферменты для лечения некоторых болезней, связанных с накоплением лизосом. Такой способ был испытан на нескольких больных болезнью Гоше, с врожденной недостаточностью по глюкоцереброзид -глюкозидазе. Полученные результаты не позволяют сделать однозначных выводов. [c.342]


    Моноламеллярные липосомы широко и эффективно используют в разнообразных исследованиях биологического и медико-биологического характера. Тем не менее, малый внутренний объем и осмотическая неактивность липосом существенно сужают круг этих исследований. В последнее время разработаны методики получения больших (100 нм в диаметре и более) моноламеллярных липосом, которые лишены этих недостатков. [c.13]

    Процесс переноса электрона между СЫ а и хинонами исследо- вался Чеддаром и др. [203, 2041 и Харли и др. 1437] и полимерных плешка ж и липидных бислоях. Предполагалось, что такие условия лучше моделируют ситуацию в реакционном центре, чем спиртовой раствор. В результате лазерного флеш-фотолиза хлорофилла а в а цетатце л л юл озных пленках и липосомах из фосфатидилхолина яичных желтков образуется только триплетное состояние СЫ а, разностный спектр которого показан на рис. 2.1.7, а (для ацетатной пленки). Этот спектр напоминает соответствующие спектры, полученные в этаноле и холестерине (700). [c.61]

    На основе изучения влияния активации расщепления на инфекционную активность вирусов гриппа и парамиксовирусов высказано предположение о функциональном сходстве N-концов белка F1 парамиксовирусов и N-концов НА2 вирусов гриппа наличие этих окончаний необходимо, для проникновения вируса в клетку [44]. Полученные недавно данные о слиянии вируса гриппа и клеточных мембран при низких значениях pH [21, 29, 62], а также о последовательности аминокислот в N-концах этих полипептидов [14, 55] хорошо согласуются с такой гипотезой. Затем было показано, что липосомы, содержащие нерасщепленный НА, неспособны к слиянию с клетками, однако такое слияние отмечали после расщепления молекул НА in vitro при обработке трипсином [20]. Таким образом, очень вероятно, что потребность в протеолитическом расщеплении НА для проявления инфекционной активности связана с ролью НА2 в процессе слияния мембраны вируса и клетки-хозяина, который осуществляется, по-видимому, в эндосомах [62]. [c.300]

    Хотя гибридомные технологии еще продолжают достаточно активно использоваться, с появлением новых эффективных методов белковой инженерии, в том числе систем отбора белков на основе разнообразных дисплеев и репрезентативных клонотек случайных белковых последовательностей, mAb начинают постепенно сдавать свои позиции. Новые технологии позволяют отбирать антитела требуемой специфичности непосредственно из суспензии фаговых частиц без иммунизации лабораторных животных и при этом получать белки с совершенно новой специфичностью к антигенам, которые неиммуногенны in vivo. Новые подходы дают возможность снять ограничения, накладываемые на производство антител особенностями иммунного ответа живого организма. В последние годы удалось получить большое количество рекомбинантных антител с новыми свойствами значительно уменьшить размер их молекул, а также объединить антитела в поливалентные гибридные комплексы, сильно повысив при этом их авидность. Генно-инженерными методами удалось объединить фрагменты антител с разнообразными аминокислотными последовательностями для обеспечения адресной доставки макромолекул. Такие гибридные молекулы, кроме антител, включают ферменты для активации предшественников цитоток-сичных лекарственных препаратов, токсины, белки вирусных частиц, используемые в генотерапии, и сами могут быть включены в липосомы для повышения эффективности химиотерапии. Рекомбинантные антитела применяют для получения биосенсоров, используемых при мониторинге исследуемых молекул в реаль- [c.409]

    В настоящее время разработано большое количество методов получения липосом, которые могут изменять фосфолипидный состав, заряд, текучесть или многослойность их компонентов. Размеры липосом могут варьировать от 25 нм до 100 МКМ. Функцию белков, встраиваемых в липосомы, контролируют по динамике транспорта или накопления меченых ионов внутри липосом. [c.269]

    Липосомы содержат не более 507о мембранных белков по массе. Это примерно соответствует составу мембран лимфоцитов. Для получения липосом смешивают липиды и мембранные белки в растворе детергента, а затем детергент удаляют. Поскольку удаление тритона Х-100 диализом — процесс весьма длительный, более предпочтительно его удаление с помощью сорбции на полистирольных гранулах SM2. Они представляют собой гидрофобные частицы, способные к сильной адсорбции [c.155]

    Впервые липосомы были использованы для включения ферментов Дж. e ea и Дж. Вайсманом (1970). Значительный вклад в развитие этого направления принадлежит также Г. Гре-гориадису. Существует несколько способов получения липосом, содержащих включенный фермент (рис. 9,д). В одном из инх раствор липида (обычно лецитина) в органическом растворителе (например, в хлороформе) упаривается в вакууме, и липид остается на стенках колбы в виде тонкой пленки. Затем в колбу вносят водный раствор фермента, встряхивают до полного удаления пленки липида со стенок колбы и оставляют на некоторое время. В полученной таким образом дисперсии липида происходит самопроизвольное образование (самосборка) мультиламеллярных липосом, содержащих включенный фермент. Во избежание окисления липида все операции необходимо проводить в атмосфере инертного газа. [c.71]

    Недавно был предложен новый способ иммобилизации ферментов путем включения их в полимерные липосомы. Для получения липосом в этом случае используются липиды, модифицированные путем введения в их молекулу кратной связи (см. гл. 1). После включения фермента в липосомы, приготовленные из модифицированного липида обычным способом, их подвергают облучению ультрафиолетовым светом в присутствии инициатора. При этом происходит полимеризация мономерных молекул липи- [c.71]

    Снижение или полную отмену побочных эффектов при вакцинации связывают с получением вакцин нового поколения. Наметилось несколько технологических подходов к разработке таких вакцин. Один из них состоит в выделении из массы отдельных антигенов инфекционных микроорганизмов тех, которые обладают наибольшим протективным эффектом, т.е. инициируют наибольшее количество соответствующих по специфичности антител или обеспечивают преимущественный рост клона специфических Т-лимфоцитов. Однако подобная процедура приводит к снижению иммуногенности вьщеленных антигенов. Задача состоит в получении такого вакцинного материала, который, с одной стороны, сохранял бы узкую, наиболее характерную антигенную специфичность патогена, а с другой — был бы достаточно иммуногенен для инициации сильного протективного иммунитета. В качестве носителей с адъювантным эффектом для белковых антигенов или пептидов используют иммунологически инертные полимерные молекулы Ь-аминокислот (например, Ь-лизин), химических соединений, а также липиды, организованные в гранулы (липосомы), внутри котсфых содержится антиген. [c.340]

    Методы, зависящие от комплемента. В этих методах лиганд ковалентно связывают с полярным липидом, таким, как фосфа-тидилэтаноламин. Затем этот конъюгат вводят в состав мембран при получении липосом, содержащих молекулы фермента. Хогда специфические антитела против лиганда образуют комплекс с лигандом, находящимся на липосоме, последняя становится чувствительной к лизису под действием системы комплемента. В случае высокомолекулярных антигенов, например белков, сначала получают липосомы с заключенным в них ферментом, а потом к липосомным мембранам непосредственно или с помощью бифункциональных сшивающих агентов ковалентно присоединяют антигены. Принцип анализа схематически показан на рис. 2-8. Лиганд, ковалентно связанный с липосомными мембранами (Л—Лип), конкурирует с определяемым лигандом (Л) за образование комплекса Ат Л—Лип с антителами (Ат) против лиганда (реакция II). В присутствии комплемента комплекс Ат Л—Лип лизируется (реакции III и IV), освобождая захваченный фермент. Если в растворе нет Л, то реакция I не идет, а Л—Лип и Ат соединяются в комплекс Ат Л—Лип по реакции II. Далее этот комплекс разрушается комплементой с выделением захваченного фермента, катализирующего превра- [c.22]

    Липосомы (Bangham et ai., 1985) представляют собой мембранные везикулы, самопроизвольно образующиеся при суспендировании различных липидов в воде. Везикулы можно получить в виде крупных частиц, содержащих воду в нескольких внутренних отсеках, или в виде структур меньшего размера с одной внутренней полостью. В водные области, окруженные двухслойными липидными мембранами, можно заключить вещества-маркеры, например растворимые белки, ионы или флуо-рофоры, если добавить их к суспензии при получении липосом. Кроме того, липосомные мембраны можно метить антигенами или антителами или разрушать с помощью ряда агентов. [c.122]

    Для получения ПЛ сначала получают стандартными методами липосомы из ненасыщенных аналогов липидов. Образующиеся моноламеллярные липосомы по стабильности не отличаются от обычных. При УФ-облучении ненасыщенных липосом происходит полимеризация, причем структура и распределение липосом по размерам не нарушаются. [c.235]

    Определение М и ММР двух полиметакрилоильных липидов, полученных из мономеров (6.1) и (6.2), дало значения М-а,— 1,9-10 5 и М = 3,5-105(Л1 /М = 5,4, п 500) и М =9,5-Ю и М = 3,9-105 (М-а,1Мп = 2,А, п 500) соответственно [44]. В первом случае на моноламелярную липосому приходится 20—600 липидных цепей, во втором 20—160. Степень полимеризации липидов в липосомах зависит от времени облучения при их получении. [c.235]

    В 1973 г. Э. Рэкеру (США) удалось получить липосомы (везикулы из фосфолипидов), в которые была встроена АТРаза, выделенная из митохондрий сердца быка, и хромопротеин галофильной бактерии На1оЬас1епит ка1оЫит — бактериородопсин, обусловливающий создание протонного градиента за счет энергии света. Фосфолипиды для реконструкции мембран этих липосом были выделены из растений (соевые бобы). Полученные таким образом гибридные пузырьки на свету осуществляли фосфорилирование. [c.159]

    Работы в этой области современной мембранологии ведутся весьма интенсивно. Уже имеются примеры успешного лечения липосомными лекарственными препаратами ревматических болезней, меланомы, лейкоза, лимфосаркомы. Предполагается, что липосомы будут использованы для введения в клетки препаратов нуклеиновых кислот с целью направленного воздействия на генетический аппарат клетки. Такая генная инженерия может оказаться весьма эффективной при лечении некоторых наследственных заболеваний. Не исключено, что этот прием явится перспективным для лечения ряда вирусных заболеваний и для направленного изменения генетического аппарата клеток с целью получения новых, высокопродуктивных и устойчивых видов сельскохозяйственных растений и животных, а также микроорганизмов — продуцентов биомассы. [c.80]


Смотреть страницы где упоминается термин Липосомы получение: [c.202]    [c.352]    [c.352]    [c.293]    [c.609]    [c.86]    [c.576]    [c.579]    [c.333]    [c.56]    [c.357]    [c.85]    [c.46]    [c.27]   
Биохимия (2004) -- [ c.315 ]




ПОИСК





Смотрите так же термины и статьи:

Диализ для удаления детергента при получении липосом

Лабораторная работа Л 39. Получение липосом методом ультразвуковой обработки

ПОЛУЧЕНИЕ ЛИПОСОМ, СОДЕРЖАЩИХ МЕМБРАННЫЕ БЕЛКИ ЛИМФОЦИТОВ (Питер Робинсон)



© 2025 chem21.info Реклама на сайте