Седиментационные диаграммы

Рис. 4.28. Седиментационные диаграммы для полистирола в циклогексане полученные методом скоростной седиментации

Рис. 14. Седиментационные диаграммы каталазы печени быка (4,63 мг/мл) в 5М гуанидингидрохлориде с 0,1 М меркаптоэтанолом [54].

Рис. 15. Седиментационные диаграммы глутаматдегидрогеназы печени быка в 67 мМ калий-натриевом фосфатном буфере при pH 7,6 и температуре

Для того чтобы разница молекулярных весов была единственной причиной этого расслоения и чтобы функция распределения д М) могла быть получена непосредственно из седиментационной диаграммы, необходимо соблюдение ряда условий. [c.132]

Для получения правильного значения функции распределения Ф, (в) важно провести экстраполяцию данных, полученных в ультрацентрифуге, к бесконечному разбавлению. Для этого приходится ставить серию опытов при убывающих концентрациях. Затем, выбрав одну из седиментационных диаграмм, полученных при конечной концентрации ф ( ), преобразуют ее к функции распределения по истинным константам седиментации при бесконечном разбавлении Ф (во). Чтобы осуществить это преобразование, находят 5=/(5о) путем сопоставления коэффициентов седиментации, полученных при конечной концентрации, с экстраполированными значениями Зд. Когда из эксперимента получена функциональная зависимость /( о), преобразование легко осуществляется [c.135]

Рис. 133, а. Седиментационная диаграмма, полученная с помощью наклонной щели. [c.281]

Взаимодействующие системы- могут быть исследованы количественно также с помощью аналитической ультрацентрифуги, если за связыванием лиганда можно проследить с помощью абсорбционной оптической системы [105, 107]. На рис. 9 представлены седиментационные диаграммы серии опытов с различными смесями НАД-Н (ДПМ-Н) лактатдегидрогеназы. Диаграмма, относящаяся к раствору НАД-Н (слева), показывает, что весь материал, поглощающий свет при длине волны 340 нм, мигрирует медленно, тогда как после добавления фермента часть или весь кофермент, в зависимости от концентрации фермента, седиментирует с тем же коэффициентом седиментации, что и нативный фермент. Из распределения поглощения света в кювете ультрацентрифуги в процессе седиментации можно рассчитать концентрацию связанного и свободного кофермента на основе этих данных рассчитывается среднее число связанных с ферментом молекул кофермента и по уравнению (3)—число связывающих, участков и константы диссоциации. [c.409]

Рис. 9. Седиментационные диаграммы смесей лактатдегидрогеназы (ЛДГ) сердца цыпленка и НАД-Н, полученные через 40 мин после достижения скорости 59 780 об/мин с помощью абсорбционной оптической системы при длине волн

В соответствии с теорией концентрационной зависимости седиментационных коэффициентов [42] это заставляет ожидать, что концентрационные эффекты будут еще сказываться при очень сильных разбавлениях и малых абсолютных значениях 8 данные Кригбаума и Котляра [163] и наши собственные подтверждают это. Кроме того, для обсуждаемой системы довольно неблагоприятно соотношение показателей преломления, что снижает точность ана-.лиза седиментационных диаграмм при малых концентрациях. Наконец, вследствие малых абсолютных значений сильны диффузионные эффекты [c.215]

Рис. III. 8. развертка седиментационных диаграмм во времени для фиксированной коор [c.205]

Опыты по скоростной седиментации полиамидокислот проводили при 25° С и скорости 50 ООО об мин. Измерения коэффициентов седиментации при различных концентрациях растворов показали их значительную концентрационную зависимость. Поэтому помимо стандартных преобразований седиментационных диаграмм была про- [c.208]

Wi и Sqi—параметры весового распределения образца по константам седиментации, определяемые из седиментационной диаграммы. [c.106]

Унимодальные симметричные седиментационные диаграммы могут обрабатываться в гауссовом приближении, когда реальная кривая распределения дС/дх моделируется гауссовой кривой [аналогично уравнению (II. 1)] [c.112]

Рис. 73. Седиментационные диаграммы исходных 70S рибосом Е. oli и продуктов их диссоциации на 30S и 50S субчастицы при понижении концентрации Mg ,+ в среде

Рис. 75. Седиментационные диаграммы рибосомных 50S субчастиц по мере их разворачивания путем понижения ионной силы (по L. Р. Gavrilova et al. J. Mol. Biol., 1966, V. 16, p. 473-489) предварительно 50S субчастиц были обработаны высокой концентрацией NH l для обеднения Mg2+ разворачивание прослеживается (сак дискретные переходы в состояния с пониженными коэффициентами седиментации, без деградации частиц концентрации NH4 I указаны слева коэффициенты седиментации приведены под каждой диаграммой.

На ультрацентрифуге, измеряется коэффициент седиментации, определяющий скорость перемещения седиментационной границы. На рис. 3.15 показана седиментационная диаграмма для белка р-лактоглобулина. В ультрафиолетовом свете сфотографированы последовательные во времени положения седименти-рующей границы. Измерив 5, коэффициент диффузии О, а также рм и ро, можно определить М. Величина 5 зависит от концентрации раствора вследствие гидродинамического взаимодействия макромолекул. Значение 5, экстраполированное к нулевой концентрации, [c.151]

Пример. На рис. 4.28 приведены седиментационные диаграммы полистирола в циклогексане (ро = 0,7783 г мл) при 34° С, полученные в стандартной односекторной кювете с высотой столба раствора 2—3 мм при скорости вращения ротора 8000 об/мин в течение 2,5 час. Для расчета определяется высота седимента-ционной диаграммы см) и заштрихованные площади (в см ) (рис. 4.29 и 4.28), ограниченные градиентной кривой в опыте но приближению к седиментационному равновесию (АтПа) и в опыте по скоростной седиментации т ). В нашем случае Дд = 3,5 см, Ша = 3,14 см Аша = 0,65 см , Га = 6,46 см, (о = 2пп1%0 = = 839 сек , V = 0,94 см /г. Коэффициент увеличения изображения Ky = 10. [c.149]

Пример. Для нахождения о были использованы четыре концентрации (0,40 0,30 0,20 и 0,15 г/100 см ) раствора фракции сополимера стирола с 20 мол. % метакриловой кислоты в тетра-гидрофуране. Через определенные промежутки времени фотографировали седиментационные диаграммы вместе с индексными полосами, которые затем проектировали через фотоувеличитель на миллиметровую бумагу (рис. 4.31). По данным рис. 4.31 определяли Гт — истинное расстояние от оси вращения ротора до максимума пика седиментограммы за время В табл. 4.13 приведены [c.153]

Рис. 4.31. Седиментационные диаграммы сополимера стирола с 20 мол.% метакриловой кислоты в тетрагидрофуране

Реакции в гетерогенных условиях и полимеризация в массе при более высоких степенях превращения могут привести к кинетическим осложнениям, хотя причины для последних не должны быть одинаковыми в обоих случаях. Как впервые наблюдалось в случае полимеризации метилметакрилата, а затем и для других виниловых мономеров, особенно метилакрилата, увеличение скорости нри упомянутых превращениях происходит одновременно с увеличением среднего молекулярного веса, который изменяется с изменением природы полимера [45]. Этот эффект означает уменьшение скорости обрыва по сравнению со скоростью роста цепи его приписали уменьшению доступности концов радикалов по отношению друг к другу вследствие осаждения радикалов или образования сшитых структур и (или) снижению, подвижности радикалов, вызванному высокой вязкостью среды. В случаях полимеризации стирола, метилметакрилата, метилакрилата и дека-метиленгликольдиметакрилата [46—48] действительно наблюдалось уменьшение величин двух констант скорости. Эти измене-нЕся, естественно, влияют также на распределение молекулярного веса. Остается выяснить, могут ли многочисленные ники, наблюдаемые на седиментационных диаграммах [49], произойти от влияния геля. Необходимые кинетические уравнения можно получить при допущении разумных эмпирических выражений для изменения параметров скорости со степенью превращения и размером реагирующего радикала [50]. Однако до сих пор не получено никаких числовых результатов. [c.178]

Для гомодисперсного вещества седиментационные диаграммы будут выглядеть так же, как кривые нижней части рис. 128, а, [c.270]

Всех этих трудностей удается избежать, применяя фазо-контрастную пластинку. На круглую плоскопараллельную пластинку напылением наносятся два тонких слоя — обычно окисла металла — таким образом, чтобы сдвиг фазы света, проходящего через два по-разному напыленных полукруга, равнялся 180°. Благодаря этому граница раздела полукругов, могущая считаться бесконечно тонкой, оказывается в то же время линией нулевой интенсивности, а сдвиг фазы (именно на 180° ) практически снимает всяческую дифракцию, и на фотопластинке получается изображение градиента в виде очень тонкой линии. При желании границу между полукругами можно подчеркнуть , наклеивая на нее волосок [13] дифракция при этом все равно не имеет места. На рис. 133,6 изображена седиментационная диаграмма, полученная с помощью фазо-контрастной пластинки (вместо наклонной щели). Такая диаграмма может уже конкурировать по точности с ламмовской, при почти десятикратной экономии времени обработки. [c.282]

Рис. 11. Седиментационные диаграммы а-амилазы Ba illus subtilis с разным содержанием цинка [129]. а—55% ассоциированных молекул (s2o=6,OS. М 97 000 с содержанием цинка 1 г-атом на моль фермента и 457э диссоциированных молекул (s2o=4,2S, М 48 000) с содержанием цинка 0,6 г-атом на моль фермента

Скорость вращения ротора 50 740 об/мин, угол наклона фазовой диафрагмы 65 границеобразующая кювета клапанного типа интервалы между седиментационными диаграммами 2 мин. [c.430]

Представление о том, что такие вещества должны быть гигантскими молекулами и не могут существовать в более простой форме, начало распространяться в 20-х годах этого столетия. Штаудин-гер указал, что такие полимеры, как полистирол и натуральный каучук, сохраняют свой высокий молекулярный вес во всех растворителях в противоположность коллоидным частицам, являющимся физическими агрегатами, которые как таковые существуют только в определенных растворителях. Сведберг опубликовал свои замечательные седиментационные диаграммы белков, из которых было видно, что даже сравнительно плохо очищенные белки состоят в основном из идентичных молекул, что никак не ожидалось для соединений со слабой ассоциацией. [c.12]

Поскольку д , (з) можно рассматривать как прерывное распределение, образованное весьма большим числом гомодисперсных фракций, характеризуемых коэффициентами и для каждой из этих фракций соотношения (2.19) верны, легко убедиться, что фушщия (2.18) меняется с течением времени и истинная функция распределения д ( ) получится, только если предварительно привести распределения 9, (х) к исходному состоянию , что достигается умножением ординат седиментационной диаграммы [c.59]

Обычно при проведении опытов па ультрацептрифуге Хо 6 см и опыт прекращается, когда максимум седиментационной диаграммы проходит около % пути до дна кюветы ( 7.2 см). Имеем из (2.17) [c.60]

Заметим еш,е, что время I, отсчитываемое с момента достижения полной скорости, не соответствует истинному времени, протекшему с момента образования границы. Поэтому следует рассчитывать истинное время о по экспериментальному графику g х= —f 1). Поскольку положение х может быть точно измерено, получается простой экстраполяцией до точки пересечения с прямой lga д. В таком виде метод пересчета седиментационной диаграммы на оказывается вполне самокоптролируемым точки д ( ), рассчитанные при разных о, должны ложиться на один контур систематический дрейф точек означал бы, что должны быть приняты во внимание какие-то дополнительные эффекты ([42], гл. VI). Сказанное иллюстрируется рис. 6—8, заимствованными из [42]. [c.61]

В работе [56] была предпринята попытка рассмотреть влияние вторичных реакций на МВР, однако сейчас нам представляется, что эта проблема не поддается строгому анализу. Деструкция и межцепной обмен понижают М , но, принимая во внимание лемму, не должны менять характер МВР. Поперечное связывание должно приводить к образованию разветвленных фракций с удвоенным, утроенным и т. д. среднечисленным молекулярным весом. Как и нрп обычных разветвлениях (гл. 4), в МВР при этом не должно появляться новых максимумов. Не исключено, однако, что такие сателлитпые максимумы в принципе могут быть наблюдаемы на седиментационных диаграммах илп на графиках ([т] ), так как экспоненты в формулах и [т]]=ЛГ,М могут существенно [c.132]

Рис. VIII.6. Седиментационные диаграммы фракции поливинилхлорида в диоксане при 25 °С (а) и при 76 °С (б). Направление седиментации справа налево .

Но особенно важное применение находит седиментационный анализ при изучении полидисперсности полимеров. Поскольку в ультрацентрифуге спектр масс преобразуется в спектр смещений, то, зная закон этого преобразования, можно по седиментационным диаграммам найти ММР образца. Седиментационно-диффузионный анализ представляет собой абсолютный метод изучения полидисперсности и не требует, как большинство других методов, предварительной калибровки поэтому он незаменим в органическом синтезе полимеров при исследовании процессов полимеризации путем изучения полидисперсности продуктов синтеза и их ММР. Седиментацию используют также для исследования неоднородности состава полимеров, избирательной сольватации, для разделения микроколичеств биологически-активных веществ, а также для анализа концентрационнозависимой обратимой ассоциации биополимеров. [c.14]

Рис. 39. Седиментационные диаграммы, полученные методом абсорбции ультрафиолетового света (а), и их схемы б) для пяти последовательных моментов опыта (ЗсЬасЬшап, 1959).

Рис. 40. Седиментационные диаграммы (а), полученные методом скрещенных диафрагм, и их схемы (б) для пяти последовательных моментов опыта (ЗсЬасКшап, 1959).

Обычно опыты по седйментационному равновесию проводят при небольших скоростях вращения ротора, например при 8000 об/мин, что соответствует небольшой силе ускорения (порядка 5000 g). Поэтому на седиментационной диаграмме не происходит появления пика, а имеет место характерное распределение концентраций или градиентов концентраций (рис. 41). По указанным седиментационным диаграммам могут быть определены расстояния 2 и Х] и концентрации Сг и Сь Вместе с тем благодаря незначительной скорости центрифугирования для достижения седиментационного равновесия требуется очень длительное время центрифугирования, которое достигает нескольких суток. Помимо неудобств, возникающих от столь длительной работы ультрацентрифуги, имеется опасность денатурационных изменений нестойких белков в процессе опыта. Рекомендуется поэтому для ускорения достижения равновесия создавать в кювете градиент концентраций белка еще до центрифугирования, переслаивая растворы разных концентраций. [c.149]

Рис. I. Интегральные (а) и дифференциальные (б) седиментационные диаграммы гомодисперсного (полидисперсного) вещества, а также седиментационная диаграмма гетеродисперсного вещества (в). Смещение в направлении х обусловлено оседанием макромолекул в поле ультрацентрифуги, расширение — диффузией относительно подвижной границы (и полиднсперс-и остью).

Частично проблема учета эффекта автосжатия в общем виде решена для случая унимодальных седиментационных диаграмм, [c.114]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология