Хроматографическое пятно по размеру

Проведение хроматографического разделения. На листе хроматографической бумаги нужного размера на расстоянии 4 см от нижнего края проводят стартовую линию, на которую наносят исследуемый раствор, содержащий дипептиды. Безбелковый экстракт ткани после упаривания на роторном испарителе чаще всего растворяют в смеси НСООН—СНзСООН—Н2О (7 5 13) или в 10%-ном изопропаноле, чтобы 1 мл раствора соответствовал 1,5—2 г ткани и наносят на хроматограмму небольшими порциями (0,01—0,03 мл), подсушивая бумагу теплым воздухом. На эту же хроматограмму наносят стандартные растворы карнозина и анзерина, содержащие по 0,03—0,05 мкмоль в пятне. Бумагу сшивают в виде цилиндра (следят, чтобы края не соприкасались) и помещают в хроматографическую камеру в строго вертикальном положении. Когда фронт растворителя дойдет до верхнего края бумаги, хроматограмму вынимают и высушивают под тягой в течение 2—3 сут. От следов фенола хроматограмму отмывают горячим ацетоном. Для этого сухую хроматограмму сворачивают трубочкой, перевязывают ниткой, помещают в цилиндр, заливают кипящим ацетоном и оставляют на 10—15 мин промывание повторяют 2—3 раза. Высушивают под тягой. [c.193]

Наиболее распространенной является двухкоординатная денситометрия точечным световым зондом. При этом хроматографическое пятно сканируется вдоль главных осей эллипса пятна. Имеет большое значение размер точечного светового зонда. Обычно он должен составлять меньше 0,1 размера хроматографического пятна. В результате денситометрии получаются кривые типа изображенной на рис. IV. 16. [c.151]

Определение состава смеси сахаров. Исследованию подвергают одну из следующих смесей 1 %-ных растворов сахаров в 15%-ном спирте глюкоза — лактоза ксилоза — лактоза смесь всех трех сахаров. Растворы сахаров наносят, как описано в предыдущей работе, на хроматографическую пластинку размером 25 х75 мм или 45 х 120 мм с закрепленным слоем силикагеля. В качестве элюента используют смесь этилацетата и 65 %-ного водного раствора 2-пропанола 1 1. После хроматографирования высушенную пластинку опрыскивают раствором, приготовленным из 0,93 г анилина, 1,66 г фталевой кислоты и 100 мл насыщенного водой 1-бутанола, затем пластинку нагревают так же, как в предыдущей работе. В тех местах, где находятся сахара, появляются коричневые пятна. Находят значения R , сравнивают их между собой и определяют состав исследуемой смеси. [c.270]

На основе развитых теоретических представлений была разработана количественная тонкослойная хроматография. Из всех возможных методов анализа выбран анализ по размерам хроматографического пятна [9], который хотя и не самый точный, но зато самый быстрый, не требующий для своего осуществления специального сложного оборудования. В этом случае для точного анализа необходимо иметь четкие границы исследуемых пятен, [c.89]

Если взять три пробы одного и того же вещества известного объема, то по размерам соответствующих хроматографических пятен можно построить прямую lgq =/ 1 , 1у)- В дальнейшем любое неизвестное количество этого же вещества можно определить из данного графика. В связи с трудностью (а иногда и невозможностью) точного нанесения строго постоянного объема пробы часто определяют не абсолютное количество вещества по формуле (10), а отношение количеств веществ в двух различных хроматографических пятнах. Логарифм такого отношения связан с размерами соответствующих пятен по формуле [c.90]

При сканирующей денситометрии точечным световым зондом необходимо выбрать оптимальный его размер. Показано [141, что размер зонда должен составлять 0,1 размера хроматографического пятна. [c.271]

Количество вещества в эллипсовидном пятне связано с его размерами по осям X i a) и у 2Ь) зависимостью (VI 1.23). Для отношения количеств дв5 х веществ в хроматографических пятнах, имеющих различные R , справедливо выражение, следующее из (VI 1.23) [c.275]

Для проведения анализа по размерам хроматографического пятна существенное значение имеет точное определение его границ. С этой целью можно использовать метод многократной фотопечати на сверхконтрастных фотоматериалах [36], основанный на экспоненциальной зависимости контрастности изображения от числа отпечатков. [c.275]

Размер пятен пробы на хроматографической пластине зависит от установленного расстояния между иглами шприцев и слоем сорбента, нанесенного на пластину. При минимальном расстоянии можно получить пятно размером не более 3 мм при объеме пробы 100 мкл. [c.19]

Поскольку первый член этого уравнения представляет гиперболическую, а второй — параболическую зависимость от то в целом функция о сначала убывает с уменьшением а затем проходит через минимум. Нетрудно понять, какие физические явления лежат в основе этой закономерности. При уменьшении размера зерна падает сопротивление массопередаче и, следовательно, уменьшается размывание пятна за счет кинетических факторов. Одновременно вследствие увеличения гидродинамического сопротивления слоя уменьшается скорость движения жидкости, увеличивается время опыта, а следовательно, увеличивается диффузия в подвижной фазе. Очевидно, что должен быть такой оптимальный размер зерна, когда суммарное влияние обоих факторов на размывание хроматографического пятна будет минимальным. [c.278]

В последнее время наибольшее распространение получила вторая группа методов. Использование этих методов основано на существовании определенной зависимости между количеством вещества, интенсивностью окраски и размерами хроматографического пятна. [c.301]

Для точного выполнения количественного анализа, основанного на определении размеров пятен, необходимо соблюдать условия, обеспечивающие стандартную величину дисперсии гауссовых пиков, т. е. необходимо стандартизовать время анализа и величину i /, а также кинетические характеристики хроматографической системы (размер зерна и температуру опыта). В описанных выше методах подобная стандартизация достигается за счет нанесения определяемых и эталонных веществ на одну пластинку. В этом случае необходимо стандартизовать лишь два параметра чувствительность детектирующего устройства (фотопластинки) и величину стартового пятна. Нужно иметь в виду, что при нане- [c.304]

Используя две стандартные пробы вещества, можно построить прямую Ig g = / ly) и определять в дальнейшем неизвестное количество этого вещества из графика. В связи с трудностью точного нанесения объема пробы вещества лучше определять не абсолютное его количество, а отношение количеств вещества в двух различных хроматографических пятнах (одно из них является стандартом). Логарифм такого соотношения связан с размерами соответствующих пятен по формуле [c.144]

В качестве растворителя в настоящей работе используется раствор 87% по объему ацетона (или изобутилового спирта), 8% концентрированной соляной кислоты и 5% воды. Изучите влияние изменения концентраций компонентов смеси на показатели хроматографического разделения катионов. Считается, что чем выше концентрация воды, тем больше скорость продвижения пятна. Проверьте это утверждение. Объясните его причину. Изучите влияние концентраций других компонентов на скорость продвижения пятен и фронта растворителя, на размеры и форму пятен и т. п. [c.442]

Наиболее ценные результаты дает применение тонкослойной хроматографии в качестве метода оценки низких уровней примесей в медицинских веществах. Для этой цели вещество наносят на хроматографическую пластинку и после хроматографирования любые вторичные пятна, которые могут быть видны на хроматограмме после соответствующего проявления, сравнивают по размеру и интенсивности с пятнами, которые дают небольшие количества ожидаемых примесей при одновременном хроматографировании на той же пластинке. Для этой методики нужно иметь в наличии ожидаемые примеси, поэтому в некоторых статьях предписывается использование аутентичных образцов примесей. Часто бывает, что в лабораториях этих примесей нет в таких случаях можно сравнивать вторичные пятна, образующиеся от следовых количеств примесей, с пятном, полученным при хроматографировании на той же пластинке соответствующего небольшого количества испытуемого вещества. Этот прием не всегда возможно применить, так как примеси и испытуемое вещество могут по-разному реагировать на метод обнаружения, однако с его помощью можно получить приемлемый критерий, по которому можно судить об уровне примеси в веществе. Третья, иногда рекомендуемая методика состоит в нанесении такого количества испытуемого вещества, при котором после хроматографирования не появляется никаких вторичных пятен, если образец приемлемо чист. Это наименее удовлетворительный из всех трех методов, так как возможность увидеть вторичное пятно зависит от субъективных особенностей наблюдающего, а интенсивность пятен на хроматограмме может значительно варьировать в зависимости от конкретных условий хроматографирования. [c.94]

Линейная регрессия показывает, что величина Ь вещества 1 не коррелирует с другими величинами. Это связано с перегрузкой веществом 1 тонкого слоя сорбента, что подтверждает исследование хроматограммы. Следовательно, ширина пика на половине высоты определяется обменными процессами в ходе хроматографического разделения и не зависит от размеров стартового пятна или диффузии, [c.36]

Влияние размера стартового пятна на результаты анализа было рассмотрено в разделе книги, посвященном теории. Широкие пятна снижают мощность разделения ВЭТСХ. На хроматографическое разделение влияет качество нанесения пробы Q ц. Для оценки этой характеристики можно воспользоваться выражением [c.101]

По сравнению с обычными ТСХ-пластинками уменьшение размеров ВЭТСХ-пластинок с закрепленным слоем не отражается на хроматографических характеристиках. Уменьшение длины пути разделения приводит к сокращению времени разделения на ВЭТСХ-пластинках. Уменьшение диаметра стартового пятна позволяет снизить предел обнаружения при детектировании. Разрешение на этих пластинках в 1,6 раза выше, а соответствующее число теоретических тарелок увеличивается в три раза. [c.218]

Методы, основанные на измерении размера пятна. В обычной ТСХ широкое распространение получили полуколичественные методы, основанные на измерении параметров, характеризуюш,их форму (геометрию) хроматографических зон. Эмпирически было установлено, что в пределах величин, обычно встречающихся в ТСХ, существует линейная зависимость [c.369]

I подготовленной хроматографической пластинке размером 13 X 18 см намечают стартовую линию иа сстоянии 1,5 см от нижнего края. На зртовую линию пииеткоп с оттянутым капилляр носиком наносят два пятна -твора гликозидов по 0,01 мл и пятно [c.37]

Однако для этого определение абсолютного значения Е ничего ие дает, поскольку оно сильно зависит от экспфиментальных условий. Среди них толщина слоя, влажность подвижной и неподвижной фаз, температура, степень насыщения паров 1ЮД8ИЖНОЙ фазой в хроматографической камере, размер пробы и пятна. Сле к ательно, лучше наюльзовать относительный коэффициент [c.296]

Полосу хроматографической бумаги размером 9X35 см расчерчивают вдоль на три равные части и на расстоянии 3 см от нижнего края проводят поперечную линию, на которой в цент ре каждой полосы наносят пятно исследуемого раствора. [c.104]

На полоске хроматографической бумаги размером 17,5X40 см на расстоянии 6 см от края проводят линию старта. По линии старта на расстоянии 2,5 см друг от друга намечают 6 точек, в которые при помощи микропипетки наносят эталонные растворы винилацетата ( свидетели ). Каждый эталонный раствор наносится в объеме 0,1 мл и таким образом получается стандартная шкала от 0,0 до 15 мкг. Аналогично на другой лист бумаги наносят пробы объемом 0,1 мл и свидетель с содержанием 5 мкг. Диаметр пятна не должен превышать 5 мм. Раствор наносят малыми порциями путем неоднократного прикосновения микропипеткой при подсушке теплым воздухом (при помощи электровентилятора). [c.154]

В основе этого лежат следующие физические явления при уменьшении размера зерна надают сопротивление массонереда-че и, следовательно, влияние кинетических факторов на размывание пятна одновременно вследствие увеличения гидродинамического сопротивления слоя уменьшается скорость движения жидкости, увеличивается время опыта, а следовательно, и диффузионное размывание в подвижной фазе. Очевидно, что должен быть оптимальный размер зерна, когда суммарное влияние обоих факторов на размывание хроматографического пятна будет минимальным. [c.83]

Из динамической теории ТСХ вытекают два достаточно точных метода количественного анализа тонкослойных хроматограмм без извлечения веш,ества из пластинки по размерам хроматографических пятен и с помош.ью денситометрии (флюориметрии) точечным световым зондом. Для количественного анализа тонкослойных хроматограмм по размерам хроматографического пятна [23] необходимо иметь четкие границы исследуемых пятен, что достигается путем двойной последовательной контактной фотографии в проходящем свете на рефлексной фотобумаге с сверхкон-трастной характеристической кривой. Интегрируя уравнение (8 ) в пределах + оо, получаем количество вещества, содержащегося в хроматографическом пятне [c.143]

Полоску фильтровальной бумаги (лучше брать Ватман №2 или хроматографическую бумагу) размером 1,5—2X25 см берут пинцетами (во избежание загрязнения жирными пятнами, электролитами и др.) и помещают на лист бумаги. На полоске в центре проводят карандашом поперечную линию. Вдоль линии штриховыми движениями наносят из микропипетки 0,02 мл сыворотки крови. Каждую новую порцию наносят после того, как подсохнет предыдущая. Полоску ос торожно погружают в чашечку с буферным раствором для смачивания. Избыток влаги удаляют, раскладывая полоску на листе фильтровальной бумаги. Полоску переносят в прибор и концы ее погружают в кюветы. В камеру можно уложить 6 полосок. Полоски должны лежать горизонтально и не провисать. [c.34]

Чистоту выделенного продукта проверяют методом хроматографии на бумаге. Для этого на лист хроматографической бумаги размером 25X400 мм, отступя 30 мм от нижнего конца, наносят с помощью микропипетки 0,01—0,015 мл 0,5—1%-ного раствора выделенной глюкозы в 50—80%-ном этиловом спирте. Размер пятна не должен превышать 1 см в диаметре. Пятно подсушивают теплым воздухом и хроматограмму помещают в герметичный стеклянный цилиндр с растворителем (н-бутанол—уксусная кислота — вода в соотношении 4 1 5 берут верхний насыщенный слой). [c.529]

Осадочно-хроматографическая реакция на бумаге. Готовят полоски фильтровальной бумаги, пропитанной 5%-ным раствором хромата или дихромата калия. Размер бумаги 5x5 см или 3x10 см. Бумагу затем подсушивают на воздухе. В центр куска реактивной бумаги наносят каплю раствора соли серебра. Получается кирпично-красное пятно Aga rOi или красно-бурое пятно Aga rjO, [c.181]

Возможно использование комбинации хроматографических методов. Например, пятна, полученные в методе ТСХ, элюируют, концентрируют и анализируют методом газовой хроматографии. Таким способом проведено разделение витаминов, пестицидов, полярных углеводородов. При изучении блок- сополимеров вначале предварительно фракционируют макромолекулы по размерам с помощью гельпроникающей хроматографии, а затем по данным ТСХ оценивают долю гомополимеров в блок- сополимере и состав фракций. [c.106]

Для разделения веществ методом хроматографии в тонком слое сорбента используют хроматографические камеры подходящего размера. На дно камеры наливают подвижную фазу в количестве, достаточном для образования слоя глубиной 0,5 см, камеру закрывают и выдерживают для насыщения парами растворителей 30—60 мин. Стен- ки камеры для полноты насыщения M0ЖJH0 обкладывать фильтровальной бумагой. Анализируемый раствор наносят микропипеткой или микрошприцем на линию старта, проведенную на расстоянии 2—3 см от нижнего края пластинки, так, чтобы пятна образцов отстояли друг от друга и от краев слоя сорбента не менее чем на 2 см. Нежелательное растекание пятен анализируемых проб при нанесении предотвращают путем периодического подсушивания. [c.104]

В описанных ниже экспериментах разделение проводили на ВЭТСХ-пластинках с закрепленным слоем фирмы Мегск (Дармштадт, ФРГ пластинки размером 10 х 10 или 10 X 20 см с силикагелем 60 F-254 или без флуоресцентного индикатора). Благодаря тщательному подбору силикагеля удалось улучшить хроматографическое разрешение. При диаметре стартового пятна не более 1,5 мм оптимальное хроматографическое разрешение было получено на длине пути элюента 3—5 см. При элюировании одним и тем же растворителем длительность разделения методом ВЭТСХ по сравнению с макро-ТСХ сократилась в 5—10 раз и составляла 4—20 мин. Сокращение времени и длины пути разделения привело к уменьшению диффузии пятен в боковых паиравлениях, в результате чего диаметр пятна после разделения в редких случаях превышал 4,5 мм. Это позволило разделить ТСХ-нластинку на участки шириной 5 мм. Таким образом, пластинку размером 10 X 10 см удалось разделить иа 18 участков, а пластинку размером 10 X 20 см — на 36 участков (рис. 8.1), что очень удобно для стандартизации методик в массовых анализах (см. разд. 8.4). [c.178]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология