Разделение аминокислот методом хроматографии на бумаге

Разделение аминокислот методом радиальной (круговой) распределительной хроматографии на бумаге [c.235]

Для разделения аминокислот, образовавшихся в результате гидролиза полипептида, еще Э. Фишер предложил использовать фракционную вакуумную перегонку их эфиров. Этот метод требует сравнительно большого количества вещества. В самое последнее время он, однако, вновь становится очень актуальным, так как газовая хроматография позволяет разделить ничтожные количества смеси эфиров аминокислот. Широкое применение для разделения смесей аминокислот нашла за последние годы бумажная хроматография. Если требуется определить качественный состав смеси аминокислот, то проводят двухмерное хроматографирование на листе бумаги и проявляют хроматограмму нингидрином, причем каждая аминокислота дает окрашенное пятно. [c.384]

С помощью распределительной хроматографии легко осуществляется разделение аминокислот и определение их в-смеси. Метод заключается в том, что каплю смеси аминокислот или гидролизата белка наносят на полоску фильтровальной бумаги, конец которой опускают в подходящий органический растворитель. Растворитель насасывается полоской фильтровальной бумаги и увлекает за собой нанесенные на бумагу аминокислоты. Скорость перемещения аминокислот на бумаге зависит от химического строения аминокислот и от их способности растворяться в подвижном и неподвижном растворителе. В качестве подвижного растворителя употребляют, например, водонасыщенный фенол (или н. бутиловый спирт, амиловый спирт и др.). Неподвижным растворителем является вода, пары которой насыщают фильтровальную бумагу (внешне бумага остается сухой). Чем меньше растворимость аминокислот в воде и чем больше их растворимость в феноле, тем быстрее они движутся вслед за фронтом органического растворителя. [c.21]

Разделение аминокислот методом хроматографии на бумаге. Метод хроматографии на бумаге был в сущности разработан и широко развит прежде всего применительно к классу аминокислот Почти все рас- [c.912]

Работа 2. Разделение аминокислот методом хроматографии на бумаге [c.65]

Вопросу анализа аминокислот методом хроматографии на бумаге посвящено большое число работ советских и иностранных авторов. Однако почти все они связаны с разделением аминокислот белков и других биологических препаратов [61. Наша попытка применить их для анализа мелассы не дала положительных результатов, что можно объяснить мешающим действием остальных компонентов мелассы, ио отношению к которым содержание отдельных аминокислот составляет лишь 0,1—3 вес. %. Описанный в литературе метод 17, 81, состоящий в сорбции аминокислот на катионите с последующей их элюцией и идентификацией на бумаге неудобен, так как требует сложной специальной аппаратуры и чрезмерно длителен. Первой частью нашего исследования было хроматографическое разделение искусственной смеси из десяти аминокислот, приблизительно имитирующей аминокислотный состав мелассы [1, 81. Смесь включала лизин, аргинин, серии, глицин, аспарагиновую и глютаминовую кислоты, а-аланин, валин, метионин и лейцин. Растворы аминокислот готовили в 15%-ном этиловом спирте с концентрацией 0,5—1 у аминокислоты в 1 мкл. [c.212]

Для разделения методом ХТС свободных аминокислот можно непосредственно воспользоваться растворителями, известными из хроматографии на бумаге, тогда как для разделения ДНФ-аминокислот они оказались либо совсем непригодными, либо применимыми весьма ограниченно. Определение ДНФ-аминокислот методом хроматографии на бумаге является весьма сложным процессом, поскольку наблюдается образование хвостов и величины Rf сильно зависят от нанесенного количества вещества и присутствия других ДНФ-аминокислот. Хорошим растворителем в хроматографии на бумаге оказалась толуольная система по Бизерте и Осте [45], м-бутиловый спирт — [c.416]

Простой метод разделения аминокислот распределительной хроматографией на бумаге, ДАН СССР, 96, 343—346 (1954). [c.366]

Как можно видеть из схем В я Д (см. фиг. 18 и 19), наилучшее разделение аминокислот получается при электрофорезе в двух направлениях при различных значениях pH. Результаты такого опыта можно сравнить с разделением аминокислот методом двухмерной хроматографии на бумаге. На фиг. 21 и 22 приведены результаты двухмерного электрофоретического разделения аминокислот, полученные Гроссом [14]. При проведении электрофореза в одном направлении при pH 2,0 с последующим кратковременным электрофорезом во втором направлении при pH 9,2 удалось добиться полного разделения 28 аминокислот менее чем за 1 час. После разделения в первом направлении в 0,75 М муравьиной кислоте бумагу высушивают в течение 10 мин при 90° и далее в течение 1 час в струе холодного воздуха для удаления почти всей муравьиной кислоты бумагу вырезают и слегка опрыскивают из пульверизатора 0,05 М. раствором бората натрия при электрофоретического разделе- [c.52]

По разделению и определению производных аминокислот методом ГЖХ проведено сравнительно мало работ, несмотря на очевидные преимущества этого метода. В настоящее время широко применяют методы хроматографии на бумаге и ионного обмена, но они не имеют достоинств, присущих методу ГЖХ, таких, как быстрота, доступность автоматизации процесса или возможность разделения близких по свойствам компонентов. Так, для разделения лейцинов методом хроматографии на бумаге необходимы специальные растворители, а полный анализ гидролизата белка. методом ионного обмена, по Муру и Штейну, занимает 22 час и требует специального оборудования, применяемого в основном только для данного метода. Тех же результатов [c.528]

Разделение оптически активных аминокислот методом хроматографии на бумаге. Этот метод, оказавшийся особенно пригодным для разделения оптических антиподов тирозин-З-сульфокислоты, состоит в одномерном проявлении растворителем, состоящим из равных частей метил- [c.913]

Условия разделения гидролизатов почвы при анализе аминокислот методом хроматографии на бумаге представлены в табл. 8.2. [c.319]

Цель работы разделение аминокислот при одновременном их присутствии в растворе методом распределительной хроматографии на бумаге с последующим их качественным и количественным определением. [c.109]

Качественное и количественное определение аминокислот проводят после их разделения методом хроматографии на бумаге. Разделение основано на различии в скорости перемещения по бумаге компонентов хроматографируемой смеси с растворителем. [c.109]

Качественное определение аминокислот методом распределительной хроматографии на бумаге. Цель работы — определить коэффициент движения лизина и метионина для индивидуальных веществ и для их смеси (с целью разделения их на хроматограмме). [c.528]

Различие изоэлектрических точек аминокислот и особенности их поведе чия при различных pH используются для разделения аминокислот ме тодом ионофореза. Особенно большое значение приобрел метод ионе фореза на бумаге, силикагеле и в сочетании с хроматографией. Титре [c.459]

Радиоизотопный анализ производных жирных и желчной кислот, приготовленных с использованием и разделенных методом хроматографии на бумаге, осуществляли путем непосредственного измерения радиоактивности пятен хроматограммы [91, 94, 95] или путем приготовления из бумажной хроматограммы авторадиограммы и последующего измерения интенсивности хроматографических зон с помощью записывающего микрофотометра [92, 93]. Использовали и жидкостные сцинтилляционные счетчики в комбинации с жидкостной колоночной хроматографией [96]. При использовании жидкостного сцинтилляционного счетчика в комбинации с тонкослойной хроматографией чувствительность метода, в котором применяется для определения динитрофенильных производных аминокислот [97], возрастала в сто раз, достигая 1 пМ 98] при воспроизводимости результатов d=6%. Анализируя аналогичным методом смеси кислот известного состава, можно идентифицировать анализируемые кислоты и оценить их количества. Определенным преимуществом диазометана является отсутствие пространственных эффектов при проведении вышеуказанных реакций. [c.154]

Таблица 20.1. для аминокислот при разделении методом хроматографии на бумаге и подвижности при разделении электрофорезом [c.389]

В медицинских исследовательских лабораториях весьма необходимы простые и надежные микрометоды определения изменений в обмене веществ. Анализы следует проводить быстро и серийно. С зтой точки зрения оказался подходящим метод хроматографии на бумаге, нашедший применение в медицинских лабораториях сразу после того, как были успешно разделены смеси аминокислот. Ценным вспомогательным диагностическим средством при разделении ионогенных смесей оказался затем и электрофорез (ионофорез) на различных слоях носителей . Этот метод нашел широкое применение благодаря высокой эффективности процесса разделения белков. Для количественного расчета состава разделенных смесей, нанесенных в виде полос, используют регистрирующие фотоэлектрические приборы. [c.337]

Цель работы — освоение одного из методов хроматографии на бумаге. Разделение смеси аминокислот основано на образовании отдельных зон компонентов разделяемой смеси при движении растворителя от центра к периферии бумажного диска. [c.335]

Широкое применение в биохимических исследованиях получил метод хроматографии на бумаге, основанный на различной способности компонентов исследуемой смеси веществ распределяться между водой и органическим растворителем. При этом одна из фаз — органический растворитель — подвижная, т. е. свободно просачивается по порам бумаги, а другая — вода — неподвижная. Бумага является инертным носителем водной фазы. При разделении аминокислот в качестве подвижного растворителя можно использовать фенол. Скорость передвижения на бумаге отдельных компонентов смеси будет разная, вследствие их различных коэффициентов распределения, которые выражаются [c.123]

Принцип распределительной хроматографии основан на различии в коэффициентах распределения аминокислот между водой и органическим растворителем. Особенность метода распределительной хроматографии на бумаге по сравнению с обычной экстракцией ам.инокислот из водного раствора органическим растворителем заключается в том, что одну из фаз, чаще всего водную, помещают на какой-нибудь инертный твердый носитель, а органический растворитель — подвижная фаза,— проходя через первую, извлекает и распределяет аминокислоты на бумаге в соответствии с их коэффициентами распределения. Положение аминокислот на бумаге определяют по отношению скорости движения аминокислоты скорости движения фронта растворителя и обозначают Rf. Величина за висит в первую очередь от строения аминокислоты, затем от системы растворителей, pH среды и сорта бумаги, Чем полярнее аминокислота, тем меньше она растворяется в органических растворителях и тем меньше ее R . Увеличение длины углеродной цепи повышает . Введение в молекулу полярных групп, например, гидроксильной, аминной или карбоксильной понижает Rf Так, Rf фенилаланина в системе фенол/вода = 0,85, а тирозиит 0,51. Другие примеры изменения в зависимости от строения аминокислоты представлены на рис. 3 и 4. Подбирая соответствующие смеси растворителей, можно провести достаточно тонкое разделение аминокислот. Наиболее часто пользуются для такого разделения системами вода — фенол — аммиа вода — бутапол — уксусная кислота бутанол — аммиак — коллидин и т. д. Разделение можно проводить на одномерной или двумерной хроматограммах. Можно пользоваться также различными типами распределительной хроматографии на бумаге — нисходящей, восходящей и радиальной. Величины Rt для каждой из систем растворителей оказываются постоянными при соблюдении [c.479]

Метод распределительной хроматографии на бумаге применяется для анализа не только аминокислот, но и ряда других веществ. Большим преимуществом этого метода является то, что он позволяет исследовать ничтожные (порядка микрограммов — миллионных грамма) количества аминокислот или других веществ. Мы описываем упрощенный метод хроматографического разделения аминокислот в пробирке. [c.178]

Сисакян Н. М. и Безингер Э. Н. Разделение и определение аминокислот в вине методом хроматографии распределения на бумаге. ДАН СССР, 1949, 69, № 4, с. 573—576. Библ. с. 576. 8116 [c.306]

Через несколько часов, когда можно ожидать разделения аминокислот, бумагу вынимают из ванночки и растворитель удаляют высуи иванием. После этого для лучшего разделения аминокислот лист бумаги поворачивают на 90° и снова помещают в ванночку и по бумаге пропускают другой растворитель. После вторичного пропускания растворителя бумагу обрабатывают каким-либо реактивом, дающим окрашивание при взаимодействии с аминокислотами, чаще всего нингидрином или изатином. На бумаге появляются окрашенные пятна, соответствующие отдельным аминокислотам. По месту положения пятен и интенсивности их окраски судят о наличии и содержании в гидролизате белка тех или иных аминокислот. Фотография хроматограммы показана на рисунке 21. Метод распределительной хроматографии на бумаге позволяет быстро и точно определить содержание аминокислот. В последние годы хроматографические методы успешно применяются для разделения и определения сахаров, органических кислот и ряда других соединений. [c.218]

Гистидинсодержащие дипептиды определяют в безбелковом экстракте мышц после разделения их методами хроматографии на бумаге, в тонком слое силикагеля или ионообменной хроматографии на колонке (в автоматическом анализаторе аминокислот). Как и все первичные амины, дипептиды можно обнаружить по реакции с нингидрином, флуорескамином и с о-фталевым диальдегидом. Карнозин, кроме того, может быть определен по цветной реакции Паули с диазотиро-ванной сульфаниловой кислотой. [c.191]

Ионофоретический метод разделения аминокислот также базируется на их амфотерности. При различных pH раствора аминокислоты движутся к катоду или аноду, в соответствии с их изоэлектрическими точками и электрофоретической подвижностью Так при pH, близком к б, кислые аминокислоты направляются к аноду, основные к катоду, а нейтральные остаются неподвижными. Ионофорез также можно проводить в растворе или на твердом носителе. Первый метод позволяет раздел5ггь аминокислоты только на сравнительно крупные фракции — кислую, основную и нейтральную. Второй метод, так же как и распределительная хроматография на бумаге, дает возможность разделять любые аминокислоты. В качестве твердого носителя применялись силикагель, крахмал и бумага. Из них самым простым оказался ионо- [c.481]

Хроматографическое разделение аминокислот осуществляется при помощи различных адсорбентов активированного угля, оксида титана, селикагеля, ионообменных смол и др. В последнее время широко применяют метод распределительной хроматографии на бумаге. [c.41]

Важным этапом стало открытие Н. А. Измайловым и М С. Шрайбер метода хроматографии в тонком слое в 1938 г. в Харьковском. химико-фармацевтическом институте. Далее существенным в развитии хроматографии стало открытие Мартином и Сингом в 1940 г. варианта жидкостной распределительной хроматографии на примере разделения ацетильных производных аминокислот на колонке, заполненной силикагелем, насыщенным водой, с использованием хлороформа в качестве растворителя. Тогд же было отмечено, что в качестве подвижной фазы может быть использована не только жидкость, но и газ. Далее эти ученые предложили осуществлять разделение производнцх аминокислот на смоченной водой бумаге с бутанолом в качестве подвижной фазы. Они же осуществили первую двумерную систему разделения. [c.15]

Чтобы иметь возможность осуществить свою распределительную хроматографию в микромасштабе, они перешли к фильтровальной бу] лаге, т. е. к открытой колонке (Консден, Гордон, Мартин [8], 1944 г.). Их результаты в области разделения аминокислот получили всеобщее признание, и метод был широко подхвачен другими исследователями. Начал развиваться метод хроматографии на бумаге. К 1956 г. было опубликовано свыше 10 тысяч работ, в которых описывалось применение этого универсальйого метода [15]. Понятно, что под впечатлением этих успехов, все время пытались обойти трудности, изменяя пропитку, используя новые комбинации растворителей,, применяя обращение фаз и химически обрабатывая целлюлозное волокно. Пытаясь исключить все адсорбционные эффекты, большие надежды возлагали на бумагу со стеклянным волокном. [c.12]

Введение. Метод бумажной хроматографии впервые применили в 1944 г. Консден, Гордон и Мартин [1] при разделении аминокислот. Была сделана попытка заменить в распределительной хроматографии силикагель бумагой. Методом распределительной хроматографии можно разделять гидрофильные вещества, например аминокислоты. Для этого используют колонку с силикагелем, содержащим известное количество воды (стационарная фаза). Разделяемые вещества помещают в колонку и проявляют при помощи органических растворителей петролейного эфира, хлороформа и др. [c.264]

Ионофоретическое разделение смеси веш еств на тонком неорганическом-носителе — ионофорез в тонком слое — было описано независимо друг от друга Пастуска и Тринксом [195] и нами [123]. После того как ХТС была, разработана Шталем [196—200] в виде простой и стандартной методики,, с таким исключительным успехом использованной в первую очередь для разделения липофильных и гидрофильных веществ и превосходящей метод, хроматографии на бумаге, казалось соблазнительным распространить эту методику на метод ИТС. В принципе при осуществлении этой методики не возникает трудностей Консден, Гордон и Мартин [99] уже в 1946 г. успешно применили силикагель в качестве носителя для разделения аминокислот и пептидов методом ионофореза. Их еще слишком сложная методика не нашла широкого распространения по сравнению с ионофорезом на бумаге.. [c.430]

Метод хроматографии на бумаге впервые был применен для анализа смеси аминокислот (Мартин, Кондсен, Гордон, 1944 г.). В настоящее время известно большое количество методов, которые позволяют анализировать сложные смеси аминокислот. При этом используют различные растворители, различные методы проявления, одномерные и двухмерные хроматограммы и др. В данной работе предлагается один из наиболее простых методов разделения и определения смеси двух или трех аминокислот. [c.65]

Для разделения одно- и двухатомных сланцевых фенолов мы решили применить метод экстракции в таком виде, как он применяется при распределительной хроматографии. Этот метод предложен Мартином и Синджом в 1941 г. (1941), которые разделили в аналитических количествах смесь, составленную из производных разных аминокислот. Метод основывается на том, что разделяемые компоненты смеси распределяются по их растворимости между двумя сольвентами в колонне, наполненной адсорбентом. В качестве адсорбента находят применение крахмал, окись алюминия, раздробленная бумага и чаш е всего силикагель. Один сольвент образует на адсорбенте фиксированную фазу, а другой малоадсорбируемый сольвент движется через первый вниз, извлекая отдельные компоненты из смеси по их растворимости. Выбор подходящих сольвентов является одной из самых сложных проблем при этой методике. Известно, что силикагель адсорбирует полярные растворители сильнее неполярных. В литературе (Брукс и др., 1959) приводятся значения индексов адсорбции на силикагеле для некоторых органических соединений [c.283]

Развитие хроматографических методов разделения и идентификации аминокислот значительно облегчило проведение исследований с аминокислотами многие успехи, достигнутые в изучении аминокислот за последнее время, непосредственно связаны с применением хроматографии. Занимаясь разделением аминокислот, Нейбергер [154] в 1938 г. обнаружил, что у ацетил-производных разных нейтральных аминокислот коэффициенты распределения между водой и несмешивающимися с водой растворителями различны. В 1941 г. хМартин и Синг [155] осуществили разделение ацетилированных аминокислот на силикагеле последний служил инертной опорой для водной фазы, через которую протекал неводный растворитель. В дальнейшем эта техника была усовершенствована. Большим достижением явилось использование фильтровальной бумаги в качестве неподвижной фазы [156], что привело к широкому развитию разнообразных методов хроматографии на бумаге (см. Блок и др. [157]). В настоящее время считают, что в процессе разделения веществ на бумаге наряду с распределением между растворяющими фазами играют роль также механизмы адсорбции и ионного обмена. [c.40]

Смеси аминокислот можно фракциопировать также с помощью давно известного метода хроматографии на бумаге, основанного на различиях в коэффициентах распределения аминокислот между органической и водной фазами. Хроматография па бумаге с использованием какой-нибудь одной системы растворителей обычно не дает возможности осуществить полное разделение всех аминокислот. Значительно большей разрешающей способ-ностью обладает метод двумерной хроматографии. При этом после хроматографирования в одном направлении с использованием одной системы растворителей хроматограмму поворачивают на 90° и продолжают разделение с помощью второй системы растворителей. Типичная двумерная хроматограмма гидролизата белка приведена на фиг. 12. Индивидуальные аминокислоты проявляются пршгидрииом в виде пятен сине-фиолетового цвета. Пятна можно вырезать, элюировать и определить оптическую плотность элюатов, которая пропорциональна количеству соответствующей аминокислоты. Этот метод более трудоемок и обычно менее точен, чем автома- [c.58]