Разделение липидов на колонке с силикагелем

Часто в качестве материала, которым наполняют колонки, используют силикагель, содержащий большое количество воды разделение компонентов в этом случае происходит за счет их распределения между водной фазой, иммобилизованной силикагелем, и водой, протекающей через колонку. Для разделения липидов применяют колонки с обращенной фазой их наполняют силикагелем, окисью алюминия или другим инертным материалом, пропитанным неполярной жидкостью. В роли подвижной фазы в этом случае выступает более полярный растворитель. [c.160]

Этим методом можно пользоваться и для разделения больших количеств липидов. При этом необходимо соблюдать следующие соотношения массы силикагеля к массе липидов 75 1, высоты колонки с силикагелем к площади ее сечения 5 1. [c.115]

Общий липидный экстракт ткани, содержащий, как правило, нейтральные липиды и фосфолипиды, далее обрабатывают ацетоном для осаждения нерастворимых в ацетоне фосфолипидов или непосредственно проводят разделение нейтральных липидов и фосфолипидов с помощью хроматографии на колонках с различными адсорбентами или в тонком слое силикагеля или кремневой кислоты. [c.187]

С помощью ТСХ на силикагелях различных типов удается достичь практически такого же разделения нейтральных липидов на отдельные классы, как и на колонках с флоризилом [c.140]

Хроматографическое разделение липидов на колонке. 150 г силикагеля, обработанного, как указано на с. 69, суспендируют в 500 мл гексана и вносят в колонку (50X3,5 см), следя за тем, чтобы адсорбент при вытекании растворителя упаковывался равномерно в плотный слой без пузырьков воздуха. Для этого колонку слегка встряхивают постукиванием деревянной палочкой или резиновой трубкой, надетой на стеклянную палочку. Необходимо также следить за тем, чтобы верхний слой силикагеля постоянно находился под слоем растворителя. Колонку промывают 150 мл чистого растворителя, оставляют над поверхностью силикагеля слой жидкости в 1—2 мм и наносят на колонку раствор ли- [c.75]

В настоящее время хроматографические методы в значительной степени вытеснили все другие методы фракционирования липидов в аналитическом и микропрепаративном масштабе. Для разделения сложных смесей липидов на отдельные классы соединений использовали адсорбционную и распределительную хроматографию на колонках с силикагелем, на целлюлозных фильтрах, импрегнированных силикагелем, и на бумаге из стекловолокна. Распределительная хроматография с обращенными фазами использовалась для разделения членов винилогомологического ряда на гидрофобизованной колонке или на гидрофобизованной бумаге. Газовую хроматографию использовали в виде распределительно-хроматографического варианта в первую очередь для разделения метиловых эфиров жирных кислот. Разделение смеси липидов по степени ненасыщенности можно осуществить путем хроматографического разделения на силикагеле комплексных ртутноацетатных соединений ненасыщенных липидов. Для выделения кислот и для фракционирования сильно полярных липидов была использована ионообменная колоночная и ионообменная бумажная хроматография. Методом хроматографии на колонках с мочевиной или на бумаге, пропитанной мочевиной, можно отделить жирные кислоты с прямой цепью от кислот с разветвленной цепью. Эффект разделения основан на образовании соединений включения неразветвлеиных жирных кислот с мочевиной. Разли шые хроматографические методы разделения липидов описаны в многочисленных обзорах [23, 86, 96, 100]. [c.144]

Метод Роузера с сотр. [74] до сих пор широко используется для разделения на фракции фосфолипидов. Незначительные изменения были позднее предложены для разделения окисленных фосфолипидов [75]. Ряд исследователей [76, 77] разделяли фосфолипиды на 13 фракций на целлюлозе, обработанной хлороформом, используя элюирование хлороформом, содержащим увеличивающиеся количества метанола [76, 77]. Ренконен [78] разделил липиды, содержащиеся в сыворотке, на нейтральные липиды, цефалины, лецитины, сфингомиелины и лизолецитин с помощью хроматографии на колонках с силикагелем. Затем эти фракции были разделены на индивидуальные компоненты методом колоночной хроматографии, например, на DEAE-целлюлозе или нейтральной окиси алюминия. Колоночная хроматография на силикагеле может сочетаться с другими методами, например с ультрацентрифугированием при исследовании липо-протеинов [79]. Подобный метод разделения на колонках, заполненных силикагелем, был применен для анализов фосфолипидов, содержащихся в молоке [80]. [c.207]

Кауфман и Висманатан [11] использовали смесь петролейного эфира (35—45°С) и бензола (4 7) и силикагель С. При этом фосфатиды оставались в исходном положении, а за ними в порядке возрастания величин Rf следовали свободные кислоты, холестерин, триглицериды и эфиры холестерина. Мен-голд [12] элюировал пробы липидов смесью петролейного эфира (60—70°С) и диэтилового эфира (92 8) и получил хорошее разрешение. Николс [13], исследуя экстракты липидов из салата и капусты, провел предварительное разделение в колонке с кремневой кислотой, элюируя пробу диэтиловым эфиром. Этот растворитель элюирует нейтральные липиды, к которым относятся углеводороды, сложные эфиры стеринов, триглицериды, свободные жирные кислоты, диглицериды и стерины, тогда как полярные липиды (гликолиниды, фосфолипиды и гликозиды) стеринов остаются вверху колонки. Полярные липиды Николс элюировал смесью эфира с метанолом (1 1) и метанолом, после чего разделял нейтральные липиды на кремневой кислоте, применив смесь гексан—диэтиловый эфир—уксусная кислота (70 30 1) в качестве элюирующего растворителя. Фо- [c.52]

Тонкослойная хроматография (ТСХ) первоначально была разработана для разделения липидов. Хотя хроматография на бумаге быстрее, чем хроматография на колонке, к недостаткам ее следует отнести то, что бумага может быть изготовлена только из материалов на основе целлюлозы, что ие позволяет применять ее для разделения неполярных вендеств. Тонкослойная хроматография сохраняет все преимущества хроматографии на бумаге, но при этом позволяет использовать любой материал, который можно тонко измельчить и получить затем 0д110р0дный слой. Это могут быть неорганические вещества, например силикагель, окись алюминия, диатомовая земля и силикат магния, а также органические вещества, в частности целлюлоза, полиамиды и порошок полиэтилена. [c.187]

Автором [38] описана схема анализа радиоактивно меченных производных липидов методами ХТС, колоночной хроматографии и хроматографии на бумаге. Смеси жирных спиртов, моно- и диглицеридов и других ацетилируе-мых липидов обрабатывают радиоактивным ацетангидридом и ацетильные производные фракционируют на отдельные классы соединений методом адсорбционной хроматографии на пластинах или на колонках с силикагелем. Количественное соотношение классов ацетилированных липидов определяют, проводя радиометрию элюатов. 1<аждую такую группу соединений можно подвергнуть дальнейшему разделению на силиконизованной бумаге. Количественный промер хроматограммы на бумаге радиоактивных производных липидов осуществляют проточным пропорциональным счетчиком, снабженным приспособлениями для автоматического перемещения полос бумаги и регистрации результатов измерений. [c.75]

Шредер [120] обнаружил, что вместо ряда индивидуальных растворителей лучше применять смеси петролейного и диэтилового эфира в различных соотношениях, Мид и Филрап [20, 88, 89], а также Хирш и Аренс [34] описали тщательно разработанную методику адсорбционнохроматографического разделения сложных смесей липидов на колонках с силикагелем при использовании этих двух растворителей. Оба метода были позднее проверены в различных лабораториях и в настоящее время используются в качестве стандартных методов анализа липидных экстрактов человека и животных [86, 96]. [c.149]

Усовершенствованный Хиршем и Аренсом [34] метод хроматографического фракционирования сложных липидных экстрактов на колонках с силикагелем, по мнению этих авторов, не пригоден для разделения алкоксиди-глицеридов и триглицеридов. Однако анализ методом ХТС фракций элюата таких колонн доказывает отчетливое фракционирование этих двух классов липидов. На рис. 75 приведена хроматограмма фракций триглицеридного элюата из человеческого жира. На пластинке видно обогащение двух менее полярных классов липидов в первых фракциях триглицеридного элюата, однако оно отсутствует на соответствующей весовой кривой. [c.155]

Часто образец должен быть очищен перед разделением путем удаления из него воды и нелипидных загрязнений, например с помощью хроматографии на колонке, заполненной сефадексом 0-25 [6], особенно если он был получен экстракцией хлороформом и метанолом. Смеси липидов и белков, которые также могут присутствовать в образце, разделяют путем хроматографирования на гелях сщнтого полистирола [7]. Разделение сильно ненасыщенных липидов желательно проводить в атмосфере азота, так как в противном случае они окисляются в колонке [8]. Силикагель предохраняет полиненасыщенные жирные кислоты и их производные от автоокисления [9]. Фосфолипиды могут гидролизоваться до лизофосфолипидов при хроматографировании на силикагеле [10, 11]. Пропускание через слой амберлита ШЛ-400 приводит к потере некоторых компонентов природных липидов и неполному извлечению свободных жирных кислот из ионообменной смолы [12], Липиды, даже триацилглицерины, могут быть частично метанолизированы и переэтерифицированы [13]. [c.197]

И неполярные липиды (содержание последних довольно велико). Далее эфиром и смесями эфира с ацетоном (с возрастающей долей ацетона) вымывают гликозиды каротиноидов. В этих условиях фосфолипиды остаются адсорбированными в колонке. Гликозиды каротиноидов, выделенные из микобактерий, обычна этерифицируются различными жирными кислотами по одной из гидроксильных групп ГЛЮКОЗЫ. Поэтому эти эфиры необходимо омылить этанольным раствором гидроксида калия. Очень важной стадией является ацетилирование гликозидов уксусным ан-гидридом и пиридином. При этом сахарная, т. е. гидрофильная, часть молекулы становится липофильной и образующиеся ацетилированные гликозиды лучше поддаются дальнейшему разделению. Выделенные фракции повторно хроматографируют на силикагеле, однако полученные в результате фракции все-таки представляют собой смеси трех или более компонентов. Получить фракции индивидуальных компонентов можно, хроматографируя эти смеси на оксиде магния (колоночная или тонкослойная хроматография). В табл. 4.12 приведены все идентифицированные гликозиды каротиноидов, выделенные из микобактерий, а также их величины полученные на тонких слоях оксида магния элюированием смесью петролейный эфир (т. кип. 60—70 °С)—бензол — метанол (40 10 1). Подобную же смесь используют и в колоночной хроматографии. Колонку заполняют смесью (1 1) оксида магния и кизельгура (фирмы Мегск, Дармштадт, ФРГ). Как видно из табл. 4.12, каждая дополнительная сопряженная двойная связь в молекуле уменьшает Я), а циклизация молекулы увеличивает ее. Соединения В, Д и 3, перемещающиеся при хроматографии на силикагеле, как одна зона, легко разделяются этим методом. Различные типы ацетилированных гидроксильных групп (в соединениях А, В, Г я Ж) или карбонильная группа приводят к различному по величине замедлению движения хроматографируемого вещества. Очевидно, характер гликозидной связи также существенно влияет на величину [c.209]

Газовую хроматографию (ГХ) можно использовать для количественного определения липидов, разделенных методов ТСХ. Виоке и Холман [138] анализировали методом ГХ эфиры жирных кислот после хроматографирования их на силикагеле G с различными смесями диэтилового эфира и гексана. Зоны затем элюировали диэтиловым эфиром, объем полученного раствора доводили до определенной величины, отбирали аликвотную часть его и вводили в газовый хроматограф. Бойер и др. [182, 183] таким же методом определяли липиды крови, но сначала эти авторы экстрагировали примерно 5 мг липидов из крови и наносили пробу на слой кремневой кислоты. После разделения пятна обрабатывали 10 %-ной серной кислотой (масса/ /объем) и этерифицировали, добавляя безводный метанол и нагревая 1 ч при 80 °С (сфингомиэлин нагревали 16 ч). К смеси на этой стадии добавляли кристалл гидрохинона, выполняющий роль антиксиданта. После метилирования к пробе добавляли воду и экстрагировали сложные эфиры петролейным эфиром (40—60°С). Экстракт петролейного эфира сушили над смесью безводного сульфата и бикарбоната натрия (4 1), концентрировали и вводили в колонку газового хроматографа. Неподвижной фазой служил полиэфир янтарной кислоты и этиленгли-коля. При разделении указанным способом не следует применять для обнаружения иод, поскольку это приводит к частичной потере ненасыщенных кислот [184]. Аналогичным методом анализируют и стероиды [185, 186]. В этом случае трнметилсили-ловые эфиры можно получить при взаимодействии с гексаме-тилдисилазаном. Описанным способом в суточной пробе мочи определили 15 мкг тестостерона с точностью 7% [185]. [c.338]

Стероиды обнаружены в неомыляемой фракции тканевых липидов. Их отделяют от других неомыляемых липидов, например углеводородов и высших спиртов, жидкостно-адсорбционной хроматографией на окиси алюминия. Стероиды, элюируемые с колонки, заполненной окисью алюминия, подвергают газохроматографическому разделению только после дальнейшей очистки путем осаждения в виде дигитонидов стеринов [9]. Их можно также выделить из общей фракции липидов методом жидкостной адсорбционной хроматографии на силикагеле (см. раздел А,П,а,1). [c.474]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология