ДНФ-аминокислот на ионообменниках

Амфолиты могут обмениваться как с катионами, так и с анионами. Такие диполярные ионообменники можно получить, связывая с матрицей аминокислоты, например аргинин. [c.605]

Рааделение амино слот на ионообменниках основано на способности аминокислот образовывать соли с кислотами и щелочами. Подбирая соответствующие катиониты или аниониты, можно быстро и с успехом разделить гидролизат белка, пользуясь для этого 2,5—3,5 мг белка. Ионообменную хроматографию хорошо сочетать с элюционным или вытеснительным анализом. Мур и Штейн пользуются для этого катионитной смолой сульфополистирольного типа Дауэкс-50, через колонку которого пропускают аминокислоты последние вымывают затем соответствующими буферными растворами. Для разделения достаточно 3 мг аминокислот. [c.481]

Таким образом, в зависимости от pH среды поведение различных групп аминокислот будет различным, их ионы будут обладать разным знаком и числом зарядов. Это свойство и позволяет применять ионообменники для разделения смеси аминокислот. [c.106]

На ионообменниках легко разделяются аминокислоты, нуклеозиды и нуклеотиды, белки, алкалоиды и углеводы (в виде боратов). [c.20]

Ионообменники могут быть выполнены как на основе силикагеля, так и на полимерной основе. Механизм разделения в ион-эксклюзионной хроматографии определяется эксклюзией по Доннану, стерической эксклюзией и сорбционными процессами [3]. В этом методе в качестве ионообменника используется сульфированный полистирольный материал высокой емкости. Ион-эксклюзионная хроматография применяется для разделения слабых неорганических и органических кислот. Сильные кислоты не удерживаются и элюируют неразделенными, как несорбируемые компоненты. В комбинации с подходящими методами детектирования этот метод может применяться для разделения и определения аминокислот, спиртов, альдегидов и сахаров. [c.326]

Хорошее разделение всех соединений тиамина (даже в больших количествах и в присутствии многих примесей) обещает хроматография на слоях ионообменников [43] и электрофорез в тонких слоях, которые оказались пригодными в случае фенолов, фенолкарбоновых кислот [41] и аминокислот [25]. [c.239]

Ионообменники, адсорбирующие аминокислоты, пригодны также для удаления белков протеины из-за пространственных препятствий адсорбируются очень слабо, л поэтому основная часть проходит с углеводами, и неорганическими катионами или анионами (сравни обессоливание). [c.397]

Извлечение аминокислот прн фильтровании чере.з кислый ионообменник [c.398]

Поведение аминокислот на синтетических ионообменниках [224]. [c.218]

Разработка автоматических анализаторов аминокислот с применением ионообменников и элюированием буферными растворами с возрастающими значениями pH позволяет в настоящее время работать с приборами, производящими за несколько часов полный количественный анализ любого белка (для навески в 5 мг) с точностью до 1%. [c.509]

В. Ионообменники и другие материалы для разделения аминокислот [c.330]

Большим шагом вперед в развитии хроматографического метода было применение в качестве адсорбирующего материала катионных ионообменников, папример сульфированных полистирольных смол (дауэкс. 50). Элюирование производится буферными растворами с прогрессивно возрастающим pH. При этом получается непрерывная кривая, причем каждая аминокислота проявляется в виде пика (рис. 27). Для анализа необходимы 3—6 мг белка, при этом метод является практически количественным (Мор и Штейн, 1951 г.). Для выполнения этих анализов применяются автоматические приборы. [c.419]

Для смешанных полиамидов, содержащих преимущественно дикарбоновые кислоты, может оказаться, что некоторое количество дикарбоновых кислот проходит через ионообменник, что приводит к заметным ошибкам при определении аминокислот. В этом случае рекомендуется выделять из гидролизата возможно большую долю кислот кристаллизацией при низкой температуре. Точность определения К составляет 1,5%. [c.98]

Можно попробовать разделить все три аминокислоты и прп pH 6 на любом из двух ионообменников. Вопрос лишь в том, достаточно ли глицин отстанет от яаряжоиной одноименно с сорбентом и выходящей в свободном объеме колонки аминокислоты. Можно ожидать, что отставание окажется достаточным, во-первых, за счет дополнительного эффекта гель-фильтрации (нейтральный глицин легче входит внутрь гранул, чем одноименно заряженная аминокислота), а, во-вторых, за счет того, что каждый цвиттерион глицина будет все же иногда цепляться одним из своих зарядов за противоположные по знаку заряды неподвижных ионов обменника. Тем не менее создается впечатление (его можно проверить на опыте), что условия для фракционирования трех аминокислот в этом модельном эксперименте будут более благоприятными при pH 3,5 или pH 8,5. [c.264]

Методом тонкослойной хроматографии (ТХ) можно быстро разделить аминокислоты метод требует несложного оборудования и малых исходных количеств. Для изготовления слоев толщиной 0,1 — 0,3 мм применяют стандартные носители, такие, как сипикагепь, оксид алюминия, поро-щок целлюлозы, ионообменники на основе целлюлозы, попиамиды, а также полиакриламидный и декстрановый гепи. В зависимости от материала носителя ТХ бывает адсорбционной (например, разделение на силикагеле и оксиде алюминия) или распределительной (например, разделение на слоях целлюлозы). В качестве подвижной фазы применяют те же системы, что и для бумажной хроматографии. [c.58]

В качестве ионообменников применялись смолы дауэкс и амберлит. Разделение аминокислот проходило в колонке 9,9x150 см с помощью непрерывно прокачивав- [c.59]

Сравнительно недавно стали применять лигандный обмен в подвижной фазе, перемещающейся по колонке. В этом случае неподвижная фаза не обязательно должна быть ионообменником, она может быть и неполярной, как, например, силикагель с привитыми октадецильными группами, являющийся самой распространенной насадкой в обращенно-фазовой хроматографии. Ионы металла добавляют в подвижную фазу, и если при этом лиганды образуют незаряженные комплексы, то последние распределяются между неподвижной и подвижной фазами. Аминокислоты относятся именно к таким лигандам, и поэтому метод лигандного обмена в подвижной фазе в настоящее время щироко используется для анализа смесей энантиомеров аминокислот, т.е. Ь- и Б- оптических изомеров. [c.211]

Силънокислые ионообменники. Только недавно найден метод, позволяющий количественно определить после кислого гидролиза триптофан, а также, например, лизерги-новую кислоту. Этот метод имеет и другое преимущество — практически исключено образование гумина. По методу М. Пома [15] в стеклянной колбе сплавляют околО 0,05—0,2 г пептида с 1 г амберлита IR-112 вЗ—10жл 80%-ного этанола в атмосфере азота и нагревают 6—10 час при 90—95°. После охлаждения аминокислоты вымывают из ионообменника 10%-ным раствором аммиака. [c.396]

Волее ранние опыты по гидролизу с дауэксом-50 в 0,05 и. соляной кислоте [16] показали, что аспарагиновая кислота, серин и треонин выделяются очень быстро, а валин и изолейцин — медленно по сравнению с гидролизом 6 н. соляной кислотой. Связи цистин — п цистеиновая кислота — пептид должны быть очень устойчивы по отношению к такому типу гидролиза. Приблизительно 25% глутаминовой кислоты превращается в пирролидонкарбоновую кислоту. Основные аминокислоты неполностью элюируются с ионообменника разбавленным раствором аммиака. [c.396]

Для проверки извлечения проводили анализ после пропусканрш через ионообменник, с одной стороны, аликвотной части сыворотки и соответствующей аликвотной части ыворотки с добавкой известного количества аминокислот. С другой стороны, анализировали смесь аминокислот, по составу аналогичную сыворотке. [c.397]

Использование ионообменников для разделения некоторых аминокислот, образовавшихся при энзиматической деградации цистеинсульфиновой кислоты. Применение для выделения гипотаурина (2-аминоэтансульфиновая кислота) [191]. [c.216]

В книге достаточно детально рассмотрены основные преимущества и недостатки классического метода определения аминокислотного состава белков с помощью ионообменной хроматографии по Муру и Стейну даны указания относительно выбора ионообменников, подготовки реактивов и численной интерпретации результатов. Значительное место также уделено изложению принципов анализа аминокислот методом газожидкостной хроматографии. Применение этого метода, обладающего на 2—3 порядка большей чувствительностью по сравнению с нингидринной реакцией по Муру и Стейну, позволяет значительно снизить количества белка, требуемые для определения его состава. Анализ аминокислот с помощью газожидкостной хроматографии пока еще не находит широкого применения, однако имеющиеся в ли-Фературе данные позволяют считать этот метод весьма перспективным. Кроме того, обсуждаются возможности использования газожидкостной хроматографии в сочетании с масс-спектромет-рией для определения состава и аминокислотной последовательности в пептидах. [c.4]

Хьюп и Байер [124] сконструировали детектор для жидкостной хроматографии, который основан на изменении теплоты адсорбции (АН) вещества на ионообменнике. После соответствующей калибровки он может быть использован для количественного анализа. Применение этого типа детектора не ограничивается анализом аминокислот или пептидов его можно приспособить для анализа любых соединений, которые можно разделять, используя жидкостную хроматографию на колонках. [c.27]

Существует значительный разрыв между числом статей, описывающих газохроматографические методы, и числом работ, посвященных приложению этих методов. Качественные анализы или же анализы, ограничивающиеся измерением лишь нескольких аминокислот пептидных или белковых гидролизатов . были выполнены уже давно [25, 69, 88, 147]. Наиболее полными являются данные Герке проведенное им газохроматографическое определение аминокислот в гидролизатах бычьего сывороточного альбумина, каппа казеина, белка бобов [41] и рибонукле-азы [43] прекрасно согласуется с результатами, полученными на ионообменниках. В табл. 5, 6 и 7 приведены некоторые экспериментальные данные, полученные ГХ н-пропиловых эфиров ацетиламинокислот из нескольких пептидных гидролизатов. Для гидролизатов фибриноиептидов те же молярные соотношения (табл. 6) найдены на ионообменниках [62]. С помощью ГХ контролировался синтез брадикинина (табл. 7). [c.130]

После полного гидролиза белка производится количественное онределе-ние каждой из аминокислот, присутствующих в гидролизате. Для разделения аминокислот чаще всего применяется метод ионообменной хроматографии. В качестве ионообменника обычно используют сульфополистирольный катионит. Смесь аминокислот вносится в верхнюю часть колонки при pH 3 в этих условиях индивидуальные аминокислоты полонштельно заряжены. Аминокислоты в форме катионов сорбируются на сульфополистирольной смоле (содержащей группы — SOg Na ), замещая часть ионов натрия, и удернги-ваются на материале колонки электростатическими силами. Очевидно, что прочность сорбции аминокислоты возрастает с увеличением ее основности. После внесения смеси начинается элюция аминокислот при постепенном увеличении pH и 1тонной силы буферных растворов, пропускаемых через колонку. В этих условиях положительный заряд на аминокислотах постепенно нейтрализуется и ионные взаимодействия ослабляются. Первыми с колонки снимаются кислые аминокислоты (глутаминовая и аспарагиновая кислота), затем нейтральные и, наконец, основные. С помощью этого метода можно разделять все аминокислоты, обычно встречающиеся в белках, поскольку прочность сорбции аминокислоты смолой зависит как от ионных, так и от неионных взаимодействий. Сульфополистирольный катион адсорбирует аминокислоты достаточно избирательно, так что все нейтральные аминокислоты, которые нельзя разделить с помощью ионного обмена, тем не менее элюируются с колонки в разных фракциях. Индивидуальные аминокислоты, элюируемые с колонки, собираются автоматическим коллектором фракций. Затем их количественно определяют путем измерения интенсивности окраски, возникающей при действии нингидрина. В настоящее время промышленность выпускает несколько типов автоматических амино- [c.57]

Ионообменная хроматох рафия. Белки, как и аминокислоты, можно фракционировать на колонках с ионообменными смолами. Особенно удобны ионообменники с гидрофильными боковыми цепями, например целлюлоза. Для очистки белков обычно используют ДЭАЭ-целлюлозу (анионообменник, образующийся в результате присоединения к целлюлозе диэтиламиноэтиль-ных групп) и КМ-целлюлозу (катионообменник, образующийся в результате присоедииения к целлюлозе карбоксиметильных групп). Фракционирование белковых смесей, нанесенных на колонки, осуществляется пропусканием через колонку буферных растворов с возрастающей ионной силой или ке растворов с возрастающей (или убывающей) величиной pH. Разрешающая способность таких колонок весьма высока. [c.80]

На бумаге, пропитанной неорганическими ионообменниками, разделяли также и органические ссединения. Кателли [137] приводит значения Rf для двенадцати аминокислот на бумаге с фосфатом циркония, проявленных при псмсщи ацетатных буферов с различными pH. Он разделял смеси из двух или трех аминокислот. Подобные исследовании с алкалоидами проводили Кассио с сотр. [138]. [c.329]

Успехи в использовании равновесия между растворами и твердыми фазами при разделении биологических полимеров связаны с тем, что здесь используются преимущественно водные растворы, в которых эти вещества обладают наибольшей устойчивостью, а также кристаллические и сорбированные состояния, при переходе в которые молекулы биополимеров весьма часто изменяют свои характеристики полностью обратимо. Известно, что сильные воздействия на макромолекулы могут привести к де-натурационным изменениям. В связи с этим в качестве сорбентов применяют мягко действующие на биополимеры карбоксильные смолы, некоторые типы анионитов, ионообменники — производные жесткоцепного полимера целлюлозы и сефадексы — сшитые производные декстрана. В отличие от этого хроматография низкомолекулярных, сравнительно стабильных веществ (аминокислот) [c.7]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология