Кофакторы выделение

Применение принципа иммобилизации не только к ферментам, но и к их субстратам, ингибиторам и кофакторам, т. е. в-вам, имеющим избирательное сродство к ферментам, позволило создать методы выделения и очистки послед)шх, основанные на аффинной хроматографии. Тем самым существенно расширяются возможности получения чистых ферментов для использования в И. э. [c.236]

ВЫДЕЛЕНИЕ ФЕРМЕНТОВ, ИНГИБИТОРОВ И КОФАКТОРОВ [c.108]

Аффинными лигандами для выделения ферментов могут быть конкурентные ингибиторы, субстраты и их аналоги, продукты, кофакторы и аллостерические эффекторы, а также антитела или соединения, которые содержат ионы металлов или SH-группы, (см. табл. 11.1). [c.108]

Для выделения ингибиторов и кофакторов наиболее часто в качестве аффинных лигандов используются связанные ферменты. На рис. 6.5 сопоставлены данные по выделению ингибитора химотрипсина из неочищенного экстракта картофеля на сфероне с ук- [c.113]

Повышенное выделение лимонной кислоты при недостатке железа объясняется скорее всего тем, что железо выступает в роли кофактора аконитазы, медь же действует по отношению к нему как антагонист. На этом основан новый технический прием, повышающий выход нужного продукта даже в присутствии небольших количеств ионов железа в растворе мелассы (10 мг на 1 л) можно получить максимальный выход лимонной кислоты, добавив к среде избыток ионов меди (150 мг на 1 л). [c.331]

Если добавить к ламеллам минимальный набор кофакторов и растворимых ферментов, выделенных из пластид, то такая система будет катализировать восстановление пиридиннуклеотидов с одновременным образованием АТФ. В присутствии более полного набора растворимых ферментов хлоропласта удается продемонстрировать протекание всех реакций фотосинтеза. [c.315]

Обратимая реакция гидратации — дегидратации фумарат малат катализируется ферментом фумаразой. Были тщательно исследованы кинетика и механизм действия кристаллической фумаразы, выделенной из сердца свиньи. Этот фермент с молекулярным весом 2,2.10 состоит из четырех одинаковых полипептидных субъединиц (мол. вес. 48,5-10 ). Для протекания реакции никаких кофакторов не требуется, но эксперименты четко указывают на участие в реакции кислого (т. е. протонированного) и основного (депротонированного) остатков. Их значения при ионной силе [c.356]

Все расширяющиеся, все более разнообразные способы медицинского применения ферментов, их кофакторов, их ингибиторов стимулируют развитие соответствующих областей медицинской промышленности. Новые возможности, которые открывает использование ферментативных процессов при обработке сырья биологического происхождения — расщепление белков, нуклеиновых кислот, углеводов, очистка и выделение из сырья необходимых компонентов, использование продуктов распада и т. п. могут быть весьма ценными при производстве медицинских препаратов, разнообразных бактериологических сред, витаминов, антибиотиков или лекарственных веществ эндокринного действия. [c.310]

В настоящее время считают, что первичным восстановляющим агентом является кофактор, выделенный из печени крысы, а роль ТПН-Н состоит в восстановлении и регенерировании окисленного кофактора (Кауфман [39]). В этом случае реакцию гидроксилирования можно изобразить следующим образом [c.321]

Одним из наиболее интересных ферментов в человеческом организме является угольная ангидраза, которая катализирует выделение растворенной углекислоты из крови в воздух, находящийся в легких. Если бы не этот фермент, организм не смог бы достаточно быстро освобождаться от СО2, накапливаемого при клеточном обмене веществ. Этот фермент с молекулярной массой 30000, содержащий один атом цинка в молекуле, способен катализировать дегидратацию с дальнейщим переходом в воздух до 10 молекул СО2 в секунду. К какой части этого описания применимы термины голофермент, апофермент, кофактор или число оборотов [c.468]

Первым открытым нуклеотидным коферментом был никотин-амидадениндинуклеотид (NAD+, 10), который был обнаружен в начале XX века Харденом и Янчом как температурно-стабильный кофактор спиртовой ферментации. Вслед за развитием метода радиоактивных меток и техникой мягкого выделения (например, ионообменная хроматография) были обнаружены многие другие коферменты [7]. Они принимают участие в биологических реакциях окисления-восстановления, переноса групп, в реакциях синтеза полимеров. Эти коферменты будут обсуждены в настоящей главе более детально позднее. Другие же важные встречающиеся в природе эфиры фосфорной кислоты, такие как составляющие клеточных мембран (фосфолипиды и техоевые кислоты) или участвующие в биосинтезе природных соединений (таких, как терпены или стероиды) здесь обсуждаться не будут, но будут рассмотрены в других главах, посвященных природным продуктам. [c.134]

Насколько можно судить по имеющимся к настоящему времени данным, катализ рацемазой миндальной кислоты осуществляется по простейшему ферментативному механизму перени-са протона. Этот фермент, выделенный нз Рзеийотопаз риНйа, катализирует реакцию эпимеризации [14], для осуществления которой не требуется присутствие кофактора. [c.151]

В литературе до сих пор употребляются и другие наименования компонентов сложных ферментов, в частности фермент-протеид , белковый компонент (апофермент), кофермент (коэнзим) и простетическая группа . Под коферментом часто подразумевают дополнительную группу, легко отделяемую от апофермента при диссоциации. Предполагают, что простетическая группа может быть связана с белком ковалентными и нековалентными связями. Так, в молекуле ацетилкоэнзим-А-карбоксилазы кофактор биотин ковалентно связан с апоферментом посредством амидной связи (см. главу 7). С другой стороны, химические связи между кофакторами и пептидными цепями могут быть относительно слабыми (например, водородные связи, электростатические взаимодействия и др.). В таких случаях при выделении ферментов наблюдается полная диссоциация обеих частей, и изолированый белковый компонент оказывается лищенным фер- [c.120]

Летучие меркаптаны обладают отвратительным запахом. Так, выделение скунса содержит 3-метилбутантиол. В соке чеснока обнаружен диаллилдисульфид, а лакриматорное действие лука обусловлено 8-оксидомтиопропаналем. Циклический природный дисульфид (а-липоевая кислота) является кофактором для ферментативного окисления (у бактерий) пировиноград ной кислоты до уксусной под действием восстановителя идет обратная реакция [c.304]

При групповом разделении методом гель-фильтрации удается в значительной мере избежать разбавления, если учитывать объемные соотношения, подробно рассмотренные в разделе Обессоливание . При очистке суспензии вируса (выделенного из столовой свеклы) от сопутствующих пигментов путем гель-фильтрации на 4—6-кратном (по отнощению к объему образца) объеме сефадекса 0-75 разделение составляло лишь 20—30% [14]. Свободные от белков катехоламины — адреналин и норадреналин — были выделены без разбавления из 20 мл сыворотки (27% объема колонки) гель-фильтрацией на сефадексе 0-25 (2X25 сж, 78 мл) [15]. Кислюк [16] показал, что с помощью гель-фильтрации на сефадексе 0-50 удается гораздо легче отделить фермент от его кофакторов, чем с помощью диализа. Таким путем удается получить кофакторы в сравнительно небольшом объеме и изучить эффект их вторичного присоединения к ферменту. После гель-фильтрации был выделен совершенно неактивный белок, активность которого вновь восстанавливалась (до 86% исходной) после добавления низкомолекулярной фракции. При диализе активность фермента снижалась только до 38% [16]. Групповое разделение гель-фильтрацией оказалось чрезвычайно удобным методом отделения низкомолекулярных антигенов от антител. Диссоциацию комплекса антиген — антитело часто осуществляют, добавляя избыток гаптена, который затем можно легко отделить от белка гель-фильтрацией [17]. В бактериологии гель-фильтрация на сефадексе 0-75 или биогеле Р-100 может служить для удобного выделения экстрацеллюлярных токсинов. Перед засевом культуральную среду освобождают от высокомолекулярных примесей гель-фильтрацией. Затем на той же колонке после удаления бактерий можно вновь отделить высокомолекулярные токсины от культуральной среды [18]. [c.142]

Обзор аффинных лигандов, используемых для выделения ферментов, ингибиторов, кофакторов, антител, антигенов, агглютининов, гликопротеинов и гликополисахаридов, нуклеиновых кислот, нуклеотидов, транспортных и рецепторных белков, гормонов и их рецепторов, липидов, клеток, вирусов и других веществ дан в гл. 11 (табл. 11.1). [c.104]

Специфические сорбенты, использующие исключительные свойства биологически активных веществ образовывать специфические и обратимые комплексы, в огромной степени облегчают выделение ряда ферментов, их ингибиторов и кофакторов, антител и антигенов, лектинов, гликопротеинов, гликополисахаридов, нуклеиновых кислот, нуклеотидов, жиров, транспортных и рецепторных белков, гормонов и их рецепторов, клеток и многих других соединений, как это представлено в обзорной табл. 11.1. Наряду с названием выделяемого вещества в таблице приведены также используемые аффинные лиганды, нерастворимые носители и пространственные группы, причем указано, аффинный лиганд или нерастворимая матрица модифицированы данной пространственной группой. Обзорная таблица включает выделения веществ как с помощью типичной биоаффинной хроматографии, так и с помощью гидрофобной или ковалентной хроматографии. [c.367]

Исследование промежуточного обмена углеводов было начато почти случайно, когда Бухнер в 1897 г., проводя опыты с целью выяснить, не предохраняется ли сахар дрожжевым экстрактом от порчи, нашел, что не содержащий клеток экстракт сбраживает сахар. Примерно в то же время начало завоевывать признание представление о ферментах как катализаторах обмена веществ, и фермент дрожжей назвали зимазой . Несколько лет спустя Гарден и Йонг показали, что в прокипяченном дрожжевом экстракте содержатся по меньшей мере два фактора, необходимых для действия зимазы. Один из них представлял собой способный к диализу кофактор, который они назвали козимазой , а другой был неорганическим фосфатом. Гарден и Йонг показали, что во время брожения фосфат исчезал, и, кроме того, выделили фосфорный эфир сахара. На этом основании они пришли к выводу, что эфир образовался при брожении. Выделение этого эфира Гардена — Йонга, который, [c.118]

Субстратами для данной пероксидазы служат насыщенные жирные кислоты с длиной цепи от i4 до jg. Жирные кислоты с нечетным числом углеродных атомов довольно активны в этой реакции. Наилучшим субстратом оказалась жирная кислота с 15 углеродными атомами. Имеются данные, что олеиновая кислота также подвергается а-пероксидированию. При использовании в качестве субстрата пальмитиновой кислоты образовывались эквимолярные количества СО2 и высокомолекулярного альдегида жирной кислоты. Альдегид с 15 углеродными атомами выделен и идентифицирован в виде 2,4-динитрофенилгидразона. Для действия пероксидазы высокомолекулярных жирных кислот не требуется никаких кофакторов. Имидазол, азид и цианид служат сильными ингибиторами данной реакции. [c.310]

Ферментативную регенерацию кофакторов, например, можно осуществить при участии ряда имеющихся в продаже ферментов, которые в качестве восстановителя используют дешевые субстраты. В этом направлении была проведена большая работа по использованию формиатдегидрогеназы — фермента, который катализирует восстановление NADH при превращении формиата в углекислый газ. Так как продукт реакции является газом,, он легко удаляется из реакционной смеси и не мешает выделению из нее продукта реакции. Основная трудность здесь — потеря самого кофактора из реакционной смеси. Предпринимались попытки повторного использования регенерированного кофактора в такой системе путем присоединения его к более крупным [c.186]

Глутатион был выделен из дрожжей Гопкинсом [395] в 1921г. Харингтон и Мид [396] установили строение этого пептида путем синтеза он оказался -Г-глутамил-Ь-цистеинилглицином. Глутатион может существовать в восстановленной и в дисуль-фидной форме и широко распространен в природе. Он служит фактором роста для некоторых микроорганизмов [397] и представляет собой кофактор глиоксалазы. Его роль в процессах обмена обусловлена, по крайней мере частично, наличием в его молекуле сульфгидрильной группы (стр. 268 и 315). [c.71]

Применяя очищенную ферментную фракцию из печени голубя, указанные авторы нашли, что реакция (2) требует присутствия ионов магния и АТФ и что эту реакцию ускоряют ионы калия. Из дрожжей также был выделен и обогащен примерно в 5500 раз фермент, катализирующий реакцию (2). Опыты с этим ферментом, как и с ферментом из препаратов печени, не дали никаких указаний на участие в этой реакции других кофакторов или на образование не связанного с ферментом промежуточного продукта. Кроме реакции (2), очищенный фермент катализирует также обмен остатков фосфата между аденозинди-фосфатом (ADP) и аденозинтрифосфатом (АТР) [c.268]

Гидролиз лактона до 6-фосфорного эфира глюконата (реакция XI.46) происходит с выделением значительного количества свободной энергии (АС = — 5000 кал моль) и с большой скоростью tl составляет величину порядка нескольких минут в физиологических пределах pH). Тем не менее специфические ферменты (лактоназы) были идентифицированы в растениях и у многих видов бактерий. Для второй окислительной стадии (реакция XI.47), катализируемой -фосфоглюконат-дегидрогеназой, необходимо присутствие кофактора — катиона двухвалентного металла (Mg или Мп " ). Эта реакция представляет собой обратимую реакцию окислительного декарбоксилирования, аналогичную реакциям, катализируемым НАДФ-зави-симой малатдегидрогеназой (см. стр. 298) и изоцитратдегидрогеназой. В качестве промежуточного продукта в реакции участвует, вероятно, 3-кето-гексоновая кислота. [c.303]

Необходимо кратко остановиться на природе кофактора и свойствах ферментов. Кофактор был выделен из печени крысы (Кауфман и Левенберг [40]), а способность флуоресцировать позволила предположить, что он является [c.321]

Недавно было найдено, что один из пигментов глаза Drosophila melanogaster, а именно птеридиновая сепия, вероятная структура которой соответствует дигидроптеридину, является активным кофактором (Кауфман [41]). Исследование таких его свойств, как чувствительность к свету, поведение при выделении, хроматографическая подвижность (Rf) в различных растворителях и активность в ферментативной системе, показало, что кофактор реакции гидроксилирования из печени крысы и птеридиновая сепия исключительно близки по структуре. [c.322]

Поскольку для указанных реакций не найдено специфических ферментов, дискуссию о природе кофактора реакции гидроксилирования нужно считать преждевременной. Несколько лет назад был выделен из печени крысы и очищен 70—100 раз подлинный гидроксилирующий фермент (Кауфман и Левенберг [40]), который катализировал реакцию (2). Фермент сравнительно специфичен и реагирует с различными птеридинами, являющимися внешними источниками электронов. Его специфичность к ь-фенилаланину значительно выше из других соединений, с которыми он реагирует также специфично, можно отметить 2-, 3- и 4-фторфенилаланины (Кауфман [38]). В последнем случае наблюдается необычный тип реакции происходит дефторирование и образуется тирозин. [c.322]

Второй фермент, включающийся в систему гидроксилирования фенилаланина, обусловливает восстановление окисленного кофактора при помощи ТПН-Н [реакция (3)]. В случае замещенных птеридинов этот фермент катализирует восстановление 5,6-дигидроптеридина в 5,6,7,8-тетрагидропроизводное. Фермент выделен из печени овцы и очищен 80—100 раз (Кауфман и Левен- [c.322]

В животных и растительных тканях широко распространен флавопротеин, катализирующий окисление гликолевой кислоты до глиоксалевой. Он был выделен из шпината и получен в кристаллическом состоянии (Фригерио и Хар-бари [111]). Роль этого фермента в метаболизме фенилмолочной и п-оксифе-нилмолочной кислот в растениях была исследована и описана Гамборгом и сотр. [112]. Фермент присутствует в пшенице, репе, гречихе и шалфее и может катализировать окисление фенилмолочной кислоты до соответствующей кетокислоты. После очистки этого фермента из побегов пшеницы был получен 20—30-кратно обогащенный препарат, способный окислять не только фенилмолочную, но и гликолевую кислоты. Флавинмононуклеотид является кофактором этого фермента, так как активность частично очищенного препарата полностью зависит от этого вещества. Без флавинмононуклеотида фермент неактивен. Фермент специфичен по отношению к ь-изомеру фенилмолочной кислоты. [c.334]

Смотреть страницы где упоминается термин Кофакторы выделение: [c.270] [c.652] [c.120] [c.550] [c.550] [c.517] [c.673] [c.674] [c.60] [c.13] [c.280] [c.308] [c.315] [c.80] [c.137] [c.16] [c.417] [c.286] [c.228] [c.169] [c.82]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология