Ацетилирование пептидов

Кроме хроматографии на силикагеле и бумаге, существует также метод распределительной хроматографии аминокислот на крахмале . Сырой картофельный крахмал служит хорошим носителем для водной фазы, содержащей смеси свободных аминокислот и пептидов. Этот метод позволяет избежать необходимости предварительного ацетилирования смеси аминокислот и дает возможность работать с большими количествами их. В то время как полоски бумаги содержат разделяемые вещества в количестве микрограмм, в колонках крахмала количество разделяемых веществ выражается миллиграммами, что значительно облегчает количественное определение. [c.161]

Решающей стадией синтеза является взаимодействие 2-аминотиазола с сульфонилхлоридом. Однако при действии на сульфаниловую кислоту пятихлористого фосфора аминогруппа реагирует быстрее, чем сульфогруппа. Поэтому ее защищают ацетилированием. Это означает исключение нежелательной конкурирующей реакции. На последней стадии синтеза защитную группу удаляют (снятие защиты). Большую роль введение защитных групп играет при синтезе пептидов (см. раздел З.ЗЛ). [c.617]

При действии на пептиды (СРзСО)аО происходит не только ацетилирование свободных аминогрупп, ной частичное трифтор-ацетилирование азота пептидных связей наряду с этим происходит образование симметричных или несимметричных ангидридов пептидов [551]. [c.219]

Fie природные аминокислоты, а анилиды и ацетилированные аминокислоты. Возможность столь легкого синтеза пептидов из подобных соединений объясняется тем, что продукты, образующиеся в результате этой реакции, нерастворимы в воде и удаляются нз системы в виде нерастворимых осадков. Поэтому равновесие (1) [c.386]

Другое предположение для объяснения механиз.л1а ферментативного синтеза пептидов из анилидов и ацетилированных аминокислот основано на том, что ни одно из веществ, участвующих в этом синтезе, не может образовывать цвиттерионы. Синтез пептидов из соединений, находящихся в неионизированной форме (реакция 1), требует значительно меньше энергии, чем синтез пептидов из соединений, находящихся в ионизированной форме (реакция 2) [21] [c.386]

Большое внимание уделялось рацемизации М-ацетил-(в более общем случае М-ацил- аминокислот и. пептидов. Известно, что вели ацетилирование проводится при помощи уксусного ангидрида в водной сильнощелочной среде [161] или в уксусной кислоте и для реакции взят один эквивалент ангидрида [159], то значительная рацемизация аминокислоты происходить не будет. Если же применяется избыток ангидрида и реакция проводится в уксуснокислой среде [160] или если водная среда является шс-лой или почти нейтральной, то обычно получается рацемическое производное. [c.120]

Ситуация существенно изменилась после того, как стали метилировать Л -ацетилированные пептиды. Такая обработка не только увеличивает летучесть образцов, но и значительно упрощает масс-спектр, так как в нем обычно преобладают ионы ацилия. Из нескольких методов полного метилирования, как правило, выбирают смесь метилиодида, гидрида натрия и диметилсульфоксида 128, 29]. При малом времени реакции (1—3 мин) и небольщом избытке метилиодида достигается метилирование амидного азота как в пептидной цепи, так и в боковых группах аспарагиновых и глутаминовых остатков, при минимальном образовании ониевых производных атомов азота (кватернизация) и серы в боковых группах гистидина, аргинина, метионина и цистеина. Образование ониевых производных понижает летучесть. [c.278]

Внимание Перед тем как применить полученный амино-ацилированный полимер для пептидного синтеза с карбодиимидом в качестве конденсирующего агента, оставшиеся свободными окси-группы полимера следует проацетилировать, как описано ниже. Ацетилирование необязательно, если в дальнейшем используется только метод активированных эфиров. Предлагаемая методика ацетилирования пригодна также для ацетилирования пептидов на полимерном носителе. [c.80]

После первого сообщения о выделении N-ацетилированного пептида из N-концевого участка белка вируса табачной мозаики [273] обнаружено значительное число белков с блокированными а-аминогруппами. N-Ацетилировапные остатки аланина, аспарагиновой кислоты, глицина, серина, треонина идентифицированы у белков, выделенных из различных источников [47, 81] см. также обзоры [2 и 406]. [c.266]

Уже Бергман и др. интенсивно применяли Ы-ацетиламинокислоты для целенаправленного синтеза пептидов. Оптически активные исходные продукты для образования пептидной связи они получали ацетилированием эфиров аминокислот уксусным ангидридом и последующим омылением. Амидная группировка, выступающая в этом случае как защитная группа, структурно аналогична пептидной связи. Поэтому не было неожиданным, что селективное отщепление этого ацильного остатка не удавалось. Подобные эксперименты проводили еще Курциус с бензоильной группой и Фищер с хлорацетильной группой. [c.102]

При синтезе пептидов с О-незащищенными гидроксиаминокислотами все-таки часто наблюдаются нежелательные побочные реакции. Так, в кислых условиях может происходить N — О-аминоацильная миграция [193] с последующими нежелательными реакциями. При деблокировании N"-аминозащитной группы посредством НС1 в уксусной кислоте существует опасность О-ацетилирования. В основной среде, как, например, при гидразинолизе, была отмечена рацемизация гидроксиаминокислот. По этим причинам блокирование гидроксильной функции представляется целесообразным. Некоторые защитные группы приведены в табл. 2-5. [c.132]

Отщепление синтезированного пептида от полимерного носителя , рис. 2-12) составляет последнюю стадию синтеза Меррифилда, а последующая очистка полученной смеси продуктов — самая трудная операция. Снятие полимера осуществляется с помощью реагентов, которые либо селективно расщепляют якорную связь между С-концевой аминокислотой и носителем, либо одновремеино с этим позволяют частично или полностью деблокировать полипептид. Связь типа алквлзамещенного бензилового эфира лучше всего расщепляется ацидолизом. Для этого часто применяются растворы бромоводорода в трифторуксусной кислоте, уксусная кислота меньше подходит в качестве растворителя из-за опасности ацетилирования гидроксиаминокислот. Описаны также многие отщепления при помощи безво- [c.192]

Нингидрин. См. Аминокислоты , разд. 1. Нагревания, если это возможно, следует избегать. Некоторые пептиды, особенно крупные, циклические или ацетилированные, дают слабую окраску. Большинство пептидов, содержащих на Ы-конце глицин, и некоторые пептиды, содержащие на N-кoнцe аспарагин, дают желтую окраску. Пептиды, содержащие на Ы-конце валин и изолейцин, очень медленно проявляются и иногда дают очень слабую окраску. Пептиды, содержащие на Ы-конце пролин, дают очень бледную желтую окраску, которая обычно исчезает. [c.395]

Метод противоточного распределения, разработанный Крейгом [36], был применен для разделения смесей аминокислот и очистки белков [187]. Так как полярные группы, определяющие растворимость аминокислот, одинаковы для различных аминокислот, коэффициенты распределения аминокислот различаются незначительно, и, следовательно, их разделение становится трудной задачей. При ацетилировании [172] или образовании нипсиль-ных производных (/г-иодфенилсульфонилпроизводные) [94] фракционирование облегчается за счет уменьшения влияния полярных групп. Хроматографические методы значительно более эффективны по разрешающей способности, но они ограничены возможностью выделений сравнительно небольших количеств веществ. Успешное применение метода противоточного распределения зависит в значительной степени от подходящего выбора двухфазной системы растворителей. Кроме того, применение этого метода ограничивается возможностью разделения веществ низкого молекулярного веса 10 ООО), за исключением тех случаев, когда пептиды обладают большой устойчивостью к денатураций. В присутствии большинства двухфазных систем растворителей, как правило, легко происходит денатурация белков. Однако при нахождении благоприятных условий противоточное распределение-имеет преимущество по сравнению с другими методами, так как при этом возможно рассчитать коэффициенты распределения компонентов, которые могут быть установлены с большой точностью. Профиль кривой распределения дает хороший критерий чистоты вещества. [c.397]

Ионы типа А при отщеплении СО могут давать ионы типа Б. Обычно в пептидной цепи расщепляются все связи СО—ЫН с образованием фрагментных нонов А и из анализа масс-спектра удается определить аминокислотную последовательность. Свободную концевую аминогруппу пептида обычно ацетилируют, а концевую карбоксильную группу превращают в метиловый эфир. Этерн-фицированный и ацетилированный таким образом трн- [c.122]

Томас и сотр. [94] недавно подробно описали процесс определения аргининовых пептидов, состоящий из 1) обработки гидразином 2) ацетилирования и 3) перметилирования соответствующих орнитиновых пептидов. Производное трипептида (ХУП1), содержащее два остатка аргинина, таким образом, дало метиловый эфир тетраметилтриацетилдиорнитина (XVI). В случае если метиловый эфир аргинина является С-концевым (пептиды, получаемые из белков триптическим гидролизом, часто содержат на С-конце аргинин), образуется лактам орнитина. Таким образом, метиловый эфир пентапептида (XIX) образует перметилированный лактам (XX) (рис. 6) [c.218]

Октадекапептид, выделенный Франеком и сотр. [108] из триптического гидролизата Л-цепи свиного иммуноглобулина, был подвергнут [92] масс-спектрометрированию после ацетилирования N-конца с последующим перметилированием. Интерпретацией основных пиков в масс-спектре можно было определить последовательность десяти аминокислотных остатков с N-конца. Полученные результаты суммированы в табл. 2 и находятся в согласии с результатами, полученными независимо последовательной деградацией по Эдману. Масс-спектр также указал, что пептид содержит приблизительно эквимолекулярную смесь аланина и треонина во втором положении с N-конца. [c.226]

Влиянию растворителя на течение реакции синтеза пептидов было уделено мало внимания. Однако известно, что в аналогичных реакциях с участием более простых несимметричных ангидридов растворители играют существенную роль. Смешанный ангидрид уксусной и пропионовой кислот, вступая в реакцию с анилином в безводной среде, образует пропионанилид с выходом 90%, тогда как в водной среде пронионилирование протекает в меньшей степени и выход ацетанилида повышается до 32% [6]. Подобные же результаты были получены в реакции анилина со смешанным ангидридом уксусной и хлоруксусной кислот отношение хлорацетилирования к ацетилированию значительно снижается с изменением растворителя в следующем порядке бензол, ацетон, водный раствор ацетона [3, 4]. [c.175]

N-Ацетильные производные наряду с трудностью селективного отщепления ацетильной группы обладают еще одним недостатком, связанным со сложностью получения ацетиламино-кислот с помощью уксусного ангидрида или хлористого ацетила без рацемизации [638а, 639] ацетилирование кетеиом [454] также сопровождается рацемизацией. Однако эфиры ацетиламино-кислот можно получить в оптически чистой форме с помощью уксусного ангидрида [192, 468]. Эфиры и амиды пептидов способны ацетилироваться в очень мягких условиях под действием и-нитрофенилацетата [2005] или тиоуксусной кислоты [894]. Ацетильный остаток был использован в качестве N-защитной группы при синтезе пептидов группы МСГ и АКТГ. [c.47]

Вейганд и Штеглих [2501], а также Вейганд и Келике ([2489] ср. [2711]) предложили принципиально новый подход к использованию свободных аминокислот в синтезе пептидов. Как известно, большинство аминокислот растворимо в ледяной уксусной кислоте при этом цвиттер-ионная форма аминокислот в существенной степени разрушается в результате образования комплекса с растворителем. Реакцию конденсации обычно осуществляют методом активированных эфиров с использованием главным образом тиофениловых эфиров. В качестве защитных групп применяют фталильную и карбобензоксигруппы. Реакцию проводят в ледяной уксусной кислоте при повышенной температуре, причем для ее завершения требуется несколько часов. По бочная реакция ацетилирования наблюдается особенно часто при использовании пространственно экранированных аминокислот. В случае дипептидов отмечено образование дикетопиперазинов. На примере тиофенилового эфира N-защищенного дипептида исследована возможность рацемизации в обычно применяемых условиях рецемизация не обнаружена. [c.111]

Хроматографии на полиамиде посвящено много хороших обзорных статей, приведем хотя бы две последние [75, 82]. Полиамид чаще всего применяется при разделении фенольных соединений — простых промежуточных продуктов синтеза или природных соединений, например лигнанов и различных продуктов деструкции лигнина, затем флавоноидов, многоатомных спиртов, кислот, аминокислот, пептидов, азотсодержащих гетероциклических соединений, некоторых алкалоидов, стероидов, желчных кислот, антибиотиков, синтетических красителей, инсектицидов и гербицидов, кумаринов, соединений иридия и т. д. Для хроматографии хинонов и их производных, а также ароматических соединений, нитро- и полинитросоединений используют ацетилированные полиамиды. [c.175]

Образование тиазолиновой системы удобно контролировать по максимуму при 246—250 ммк в УФ-спектре. Циклизацию свободных пептидов проводили путем обработки хлористым водородом, трехфтористьш бором и N, Ы -дициклогексилкарбодиими-дом, однако замыкания кольца в этих условиях не наблюдалось. Характерная полоса поглощения в УФ-области появилась лишь при обработке указанного ранее амида ацетилированного пентапептида хлористым водородом в метаноле при О—10 . [c.557]

Влияние ацетилирования на гидролиз пептидов объясняется главным образом уменьшением кат, хотя Кж тоже может изменяться при этом. Для ацетил-КПА величина Кж для КГФ в качестве субстрата [78] и Ki для этого же пептида в качестве ингибитора гидролиза ГФЛ [100] на порядок выше значения Кж для превращения КГФ нативной КПА. Ранее сделанный вывод о том, что влияние ацетилирования на активность КПА связано с нарушением способности связывать ГФЛ и дипептиды [115], не согласуется с результатами экспериментов по конкуренции и рентгеноструктурными данными об образовании комплекса между Gly-Tyr и ацетил-КПА. Действительно, присоединение гиппурилфенилала-нина и КБЗ-Gly-Gly-Phe почти не изменяется при ацетилировании КПА [76, 78]. Тем не менее из этих данных по модификации не следует, что тирозин непосредственно участвует в катализе. Для проверки постулата об участии остатка Туг-248 в качестве донора протона [2, 3] было бы полезно исследовать кинетические параметры и рН-зависимость гидролиза пептидов арсанилазо-КПА, в которой р/С этой группы понижено по сравнению с нативной КПА [116]. [c.539]

Кахилл и Бертон [26] предложили использовать рацемизацию кетеном или уксусным ангидридом для установления конечных аминокислот в пептидах. Они показали, что рацемизация /-лейцина и /-глютаминовой кислоты происходит быстро, если ацетилирующий агент применялся без нейтрализации кислого раствора, получающегося при ацетилировании натриевой соли аминокислоты. Если сохранялась первоначальная щелочность, рацемизации не наблюдалось. Глицил-/-лейцин рацеми-зировался, тогда как /- лейцилглицин при тех же условиях не рацемизировался. Опыты Кахилла и Бертона не охватили, однако, дипептидов двух рацемизируемых аминокислот, и было бы интересно выяснить, применимы ли те же принципы к таким пептидам. [c.221]

Перечисленные пептиды претерпевают множество дополнительных модификаций. Большая часть N-концевого пептида и АКТГ, з9 находится в передней доле гипофиза в гликозилированном состоянии, а-МСГ обнаруживается преимущественно в N-аце-тилированной и амидированной с С-конца форме деацетилированный а-МСГ намного менее активен. р-Эндорфин в промежуточной доле быстро ацетили-руется ацетилированный Р-эндорфин в противоположность а-МСГ обладает в 1000 раз меньшей активностью, чем немодифицированная форма. Таким образом, Р-эндорфин может находиться в гипофизе в неактивном состоянии. В гипоталамусе молекулы этого пептида не ацетилированы и, по-видимому, присутствуют в активной форме. Р-Эндорфин подвергается также укорочению с С-конца с образованием X- и у-эндорфинов (рис. 45.7). Таковы три главных эндорфина в промежуточной доле гипофиза грызунов. Большой N-концевой фрагмент, вероятно. [c.180]

Смотреть страницы где упоминается термин Ацетилирование пептидов: [c.237] [c.570] [c.191] [c.175] [c.592] [c.175] [c.228] [c.180] [c.107] [c.276] [c.290] [c.399] [c.267] [c.229] [c.276] [c.290] [c.399] [c.546] [c.537] [c.180] [c.105] [c.180]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология