Ингибиторы флуоресценции

Цель первой части работы — обнаружение на молекуле ЛДГ участков, способных к взаимодействию с аурамином О демонстрация чувствительности флуоресцентных характеристик связанного аурамина О к взаимодействию ЛДГ с коферментом, субстратом и ингибитором реакции определение значения константы диссоциации (/Сд) комплекса НАД—ЛДГ по флуоресценции аурамина О. [c.340]

Из вышеизложенного следует, что нас не должны удивлять довольно запутанные изменения выхода флуоресценции, наблюдающиеся при ускорении или замедлении фотосинтеза под воздействием внешних факторов, например интенсивности света, концентрации Og и RH или под влиянием различных ингибиторов. [c.504]

Влияние на флуоресценцию и фотосинтез цианида и низкой температуры часто можно объяснить, предполагая, что основное действие этих факторов заключается в замедлении процессов снабжения двуокисью углерода. Однако выше мы видели, что не все экспериментальные данные по ингибированию фотосинтеза цианидом согласуются с этим простым объяснением. То же относится и к измерениям флуоресценции. Неясно, например, почему для заметного подавления флуоресценции нужна гораздо более высокая концентрация цианида, чем для ингибирования фотосинтеза. Эти данные и результаты, полученные с другими ядами и наркотиками, нуждаются в объяснениях, которые мы, однако, в настоящее время не можем обосновать, а потому предпочитаем от них воздержаться. Параллельные измерения газообмена и флуоресценции в присутствии различных ингибиторов представляют собой, повидимому, многообещающий способ для выяснения сложных процессов, происходящих в светочувствительном хлорофилловом комплексе, однако имеющиеся в нашем распоряжении экспериментальные данные такого рода едва ли достаточны для того, чтобы попытаться их использовать для этой цели уже теперь. [c.511]

Существуют две возможности работы газоанализатора на биохимической основе. В соответствии с одной из них воздушный по ток нагнетается насосом в абсорбер, где он тщательно смешивается с раствором фермента. Количество субстрата, разложенного раствором фермента за определенный промежуток времени, измеряют фотометрически, по изменению флуоресценции или электрохимически. При прохождении через прибор чистого незараженного воздуха количество субстрата, разлагаемого данным ферментом, постоянно если же в воздухе находится ингибитор фермента, разложение субстрата уменьшается и получаемое в результате [c.245]

Механизм радиолиза в присутствии кислорода имеет много общего с механизмом фотоокислительной деструкции, поэтому можно ослабить или задержать действие радиационного излучения введением специальных добавок — антирадов. К ним относятся ароматические соединения, особенно такие, для которых характерна резонансная стабилизация (нафталин, фенантрен, антрацен). Будучи сами радиационностойки, они поглощают энергию, выделяемую макромолекулами в возбужденном состоянии, и рассеивают ее (флуоресценция или выделение тепла). Ингибиторами радиационного сшивания являются многие ароматические амины (например, ди-р-нафтил-п-фе-нилендиамин, фенил-а-нафтиламин и др.). [c.34]

Исследование структуры белков. Поскольку некоторые белки содержат флуоресцирующие хромофоры, например тирозин и ФАД, по изменению их флуоресценции можно исследовать связывание белков с такими веществами, как ингибиторы, коферменты и аллостерические факторы. С помощью флуоресценции исследуют также конформацию и полимеризацию белков. [c.162]

Пример 15-Ж. Обнаружение конформационного перехода в ферменте при связывании субстрата. При добавлении к а-химо-трипсину ТНС флуоресцирует и, следовательно, должен с ним связываться. ТИС не является конкурентным ингибитором ферментативного гидролиза различных субстратов, так что он не может присоединяться к участку связывания субстрата. Однако добавление субстрата вызывает уменьшение флуоресценции. Это уменьшение могло быть результатом уменьшения связывания (ТНС флуоресцирует только в том случае, если он связан) или умень- [c.429]

Полная остановка процесса восстановления феррицианида калия наблюдается при внесении диамида (см. рис. 44, 5). Эти данные находятся в согласии с результатами измерения флуоресценции пиридиновых нуклеотидов в суспензии дрожжей при внесении тех же ингибиторов. Из [c.207]

Гидрокси-2-нафталинкарбоновую к-ту примешпот в произ-ве цветных фотоматериалов, ингибиторов коррозии. З-Гидрокси-2-нафталинкарбоновая к-та - промежут. продукт в синтезе азотолов, моноазопигментов, протравшлх азокрасителей азосоставляющая для диазобумаг, краскообразующая компонента цветных лаков комплексонометрич. индикатор для определения А1 при pH 3 (изменение флуоресценции от синей к зеленой), реагент для люминесцентного определения А1, Ве, 8с, 2г. [c.357]

Соединения акридина вызвали значительный технический и научный интерес уже в 1871 г., когда Гребе [2] открыл акридин в высококипящей фракции каменноугольной смолы. Соединения акридина послужили исходным материалом для получения обширного ряда оранжевых и желтых основных красителей, а также красных и пурпурных кубовых красителей. Некоторые из них широко применяются и до настояш,его времени. Кроме того, из соединений акридина получают многие важные химиотерапевтические препараты, которые различаются по своей сложности к числу, их относятся как простые моно- и диами-ноакридины (применяются для профилактики и лечения хронического сепсиса ран), так и более сложные производные, которые оказались эффективными при малярии и лямблиозе (хинакрин и акранил). Интерес к соединениям акридина вызывается еш,е и тем, что многие из них обладают сильной флуоресценцией, а некоторые, например диакридилы,—довольно редким свойством хеми-люминесценции ( холодное свечение ). Наконец, акридины применяют и в других разнообразных областях их используют в качестве ингибиторов коррозии, в качестве реагентов для получения некоторых ферментов и для аналитических определений. [c.373]

Относительную реакционность полициклических углеводородов по отношению к присоединению стирольного радикала исследовали Мага и Бонем [30] по ингибированию термической полимеризации стирола при 37° С. Они установили, что реакционность полициклических углеводородов-ингибиторов убывает в ряду 3,4-бензонирен, 20-метилхолан-трен, 1,2—5,6-дибензантрацен, 2-метилантрацен, фенантрен (хризен и пирен не ингибируют). По флуоресценции полимеров авторы установили, что углеводороды входят в полимерные цепи. [c.233]

Основные научные исследования относятся к химии высокомолекулярных соединений нефти и разработке эффективных методов их исследования. Впервые выделил и изучил вещества, которые обусловливают флуоресценцию нефти и широко используются в качестве люминофоров люминесцентной дефектоскопии в машиностроительной промышленности. Нашел ингибитор фотохимического окисления минеральных масел, который применяется в составе нефитотоксической масляной эмульсии, используемой для борьбы с вредителями цитрусовых. Разработал ряд методов выделения и исследования сернистых соединений и микроэлементов нефти и нефтепродуктов. [c.332]

Флуоресценция является результатом излучательного перехода из возбужденного синглетного состояния в основное состояние. Возбужденное синглетное состояние представляет собой своего рода бирадикси, в котором электроны находятся на незаполненных орбиталях. Можно ожидать, что такие состояния будут чрезвычайно реакционноспособными и будут дезактивироваться при димеризации, при реакции с кислородом, под действием ингибиторов свободнорадикальных процессов и т. д. Следовательно, мы должны ожидать, что все те факторы, которые будут увеличивать вероятность реакций возбужденного синглетного состояния, будут способствовать тушению флуоресценции. Очевидно, фосфоресценция будет подвержена влиянию тех же факторов ожидаемое различие будет определяться различием в реакциях и реакционной способности синглетного и триплетного состояний. [c.805]

Драшел и Саммерс [361] описали методы определения некоторых ингибиторов в этиленпропилеповом каучуке непосредственным измерением их флуоресценции и фосфоресценции. Они привели данные для трех ингибиторов полимерного тригидро-метилхинолина, 2,2 -диметил-5,5 -ди-т ег-бутил-4,4 -диоксидифе-нилсульфида и фенил-2-нафтиламииа. Основная трудность связана с эффектами внутренних фильтров, и для получения количественных результатов при измерениях следует вносить поправку на толщину полимерной пленки. [c.444]

Поглощение энергии возбужденных молекул ингибиторами и рассеяние ее в впде кинетической энергии. К выделению последнего варианта обрыва цепей путем физической дезактивации побудили Бекстрёма работы Приво [25] и Ф, Перрена [26] по тушению флуоресценции. [c.294]

Вынутые из разделительной камеры пластины, после испарения растворителя, помещают на 1 мин для окисления ингибиторов, действующих in vivo, в атмосферу паров брома (для in vitro-ингибиторов эта обработка парами брома отпадает). Пластины оставляют на 5—10 мин на воздухе для удаления избыточного брома и обрызгиванием равномерно пропитывают их раствором фер-метта. Выдерживают 30 мин в сосуде в атмосфере насыщенного водяного пара, после чего тотчас обрызгивают раствором субстрата и рассматривают в свете УФ-лампы. Через 1—2 мин ингибиторы обнаруживаются в виде темных пятен на сильно флуоресцирующем сине-зеленом фоне. По мере ослабления флуоресценции в результате окисления индоксила в индиго фон окрашивается в синий цвет, на котором выделяются белые пятна, образованные ингибитором. Этим способом можно обнаружить до 0,005 мкг ингибитора. [c.208]

Систематических исследований по ингибированию высокомолекулярных соединений комплексообразователями недостаточно, хотя в патентной литературе множество соответствующих соединений предложено в качестве стабилизаторов. Кузминский с сотрудниками [326] исследовали комплексообразование Ре + и Сп + — сильнейших катализаторов автоокислепия высокомолекулярных углеводородов — с 4-гидроксифенил-2-нафтил амином (А), диэтилдитио-карбамидной кислотой (Б) и тетраметилтиурамдисульфидом (В). Природа образующихся комплексов неясна, тем более что стехио-метрический состав некоторых из них с трудом укладывается в рамки обычных представлений о координационных соотношениях (соли А ГРег, 1Сиз соли Б ГаРе, ЬСи соли В 1Ре, 1Си I — молекула ингибитора). Анализ состава проводили по тушению флуоресценции при добавлении к раствору ингибитора стехиометрических количеств соединений металлов. Все три вещества (А, Б и В) — эффективные стабилизаторы натурального каучука, содержащего соли Ре + или Си +, в процессах термоокислительной деструкции. Поглощение кислорода в этом случае утрачивает автокаталитический характер и протекает с незначительной постоянной скоростью. Отсюда авторы делают вывод, что исследованные стабилизаторы не только дезактивируют металлические примеси, но и ингибируют автоокислепие. [c.127]

Весьма высокой чувствительностью характеризуется реакция окисления морина (2, 4, 3,5,7-пентагидроксифла-вона) в аммиачной среде. Скорость реакции измеряют по снижению флуоресценции комплекса морина с Ве + или по снижению светопоглощения морина в области 410 нм [15]. Определению не мешает до 10 мкг Ад+, V , Мо , А1, М , Са, Кроме ионов меди реакцию катализирует Ре, Со, Мп, Сг1 . Ингибиторами являются ЭДТА, нитрилотриацетат, цитраты, тартраты. Определению меди не мешают хлориды, нитраты, сульфаты, фосфаты и ацетаты щелочных металлов, поэтому можно проводить анализ растворов этих солей. Оптимальные концентрации реагентов морина — 2,2-10 М, Ве" — [c.81]

Карбоангидраза быка образует сильно флуоресцирующий комплекс с 5-диметиламинопафталии-1-сульфамидом (ДНСА) [103]. Исследуя усиление флуоресценции лиганда и тушение ультрафиолетовой белковой флуоресценции, Чен и Кернохан [103] показали, что с одной молекулой фермента овязывается одна молекула флуоресцирующего сульфамида. Константа диссоциации этогО комплекса равна 2,5-10 М. Флуоресценция свободного сульфамида имеет пик испускания при 580 нм и квантовый выход 0,055. Соответствующие значения для связанного ингибитора — 468 нм и 0,84. Большое смещение максимума испускания в коротковолновую область можно объяснить сильной гидрофобной природой центра связывания, а также отрывом одного протона от сульфамидной /группы лиганда при присоединении к ферменту [103]. [c.599]

Существует и иная точка зрения. По мнению Дина, биологически активный свет в реакциях таксиса эвглены поглощается флавиновыми пигментами, поскольку спектры действия ее фототаксиса очень похожи на низкотемпературный спектр (77 К) поглощения рибофлавина в этиловом спирте и КЛ — ингибитор таксиса — эффективно тушит флуоресценцию флавинов. Вместе с Фрейлихом Дин получил еще одно указание на возможное участие флавиновых пигментов в реакции фототаксиса. В модельных опытах с бислойными мембранами, содержащими рибофлавин, было обнаружено изменение электрического сопротивления мембран после их облучения видимым светом. Характерно, что фотоответ мембран обнаруживал сходную с фототаксической реакцией зависимость от интенсивности света. [c.157]

Связывание субстратов и ингибиторов ферментами часто приводит к конформационным изменениям белковых молекул, которые можно регистрировать спектральными методами (изменения в УФ-спектрах, спектрах флуоресценции, кругового дихроизма и т.п.), термохимическими методами (по изломам на графинах Аррениуса) и методами рентгеноструктурного анализа. Эти изменения могут быть очень небольшими и затрагивать лишь локальные участки молекулы белка, особенно ориентацию боковых цепей его аминокислотных остатков (см., например [1375,1378,3019-3022]), а могут также быть связаны с изменениями азаимной ориентации доменов в белках [3023]. [c.281]

Концентрация свободного кальция в секреторной клетке может увеличиваться в результате открывания потенциалзависимых Са-каналов в плазмалемме или высвобождения катиона из его внутриклеточных резервуаров, например из эндоплазматического ретикулума и митохондрий, под действием специфических нейромедиаторов. Так, выделение кислоты пристеночными клетками слизистой желудка стимулируется гастрином, карбамилхолином и гистамином. Это сопровождается увеличением концентрации свободного Са + в клетках, что регистрируют по изменению флуоресценции квина-2. Чтобы определить источник Са +, в среду вводят олигомицин (ингибитор митохондриальной АТФазы и, следовательно, энергозависимых процессов аккумуляции ионов митохондриями), а вместо агента, вызывающего секрецию, добавляют кальциевый ионофор. В этих условиях также происходит секреция кислоты. При этом первый ответ клеток на добавление гастрина или антибиотика А23187 не зависит от внешнего Са +, а последующий — определяется уровнем Са + снаружи клеток. [c.97]

Планшет инкубируют 30 мин при 37°С во влажной атмосфере, а затем из каждой лунки осторожно отсасывают антитела. Каждую лунку трижды промывают PBS (250 мкл на 1 лунку) и добавляют в них по 10 мкл разбавленных, конъюгированных с флуоресцеином антител против мышиных иммуноглобулинов (кроличьих либо других в зависимости от используемых первых антител). Флуоресцирующая сыворотка должна быть предварительно адсорбирована клетками HeLa. Для этого отмытую суспензию клеток HeLa инкубируют 18 ч на холоду с флуоресцирующими антителами в присутствии ингибиторов протеаз. Готовые для работы антитела, не дающие фоновой флуоресценции, получают центрифугированием (500 g, 5 мин) инкубационной смеси и фильтрацией супернатанта через нитроцеллюлозный фильтр с диаметром пор 300 мкм. [c.268]

Олигонуклеотиды этого типа объединяют в одной (а) или двух (б) молекулах специфический праймер для ПЦР, расположенный в их З -концевой части, флуорофор на 5 -конце, тушитель флуоресценции, находящийся вне праймера ближе к его 5 -концу, и ингибитор (блокатор) синтеза ДНК, препятствующий использованию 5 -концевой части олигонуклеотида во время ПЦР в качестве матрицы. Кроме того, центральная часть олигонуклеотида комплементарна 5 -концевому участку амплифицируемого продукта ПЦР, что удерживает флуорофор вдали от тушителя флуоресценции после образования петли ДНК в фазе отжига праймеров [c.232]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология