Тетрамерный фермент

Различным моделям тетрамерного фермента, рассмотренным в [13] (тетраэдр, квадрат и др.), соответствует это уравнение [c.467]

На кривых насыщения вообще не могут появляться промежуточные плато. Кривизна этих графиков имеет ограничения сверху и снизу (см. [112]). Число точек перегиба на кривых насыщения также ограничено числом центров для п = 1 их нет, для п = 2 возможна только одна точка перегиба, для п = 3 — две, для п = 4 —три точки перегиба. Это легко показать, определяя число положительных корней многочлена методом Декарта (см. [113]). В отличие от функции насыщения график и(8) может иметь экстремумы. Рассмотрим условия появления промежуточных максимумов и 8) для тетрамерного фермента. Положим для простоты, что все константы К одинаковы, т. е. [c.469]

Рис. и. Позиционные изомеры при связывании тетрамерного субстрата с активным центром фермента, состоящим из пяти сайтов, кп,г — гидролитический-коэффициент (п — степень полимеризации субстрата, г — номер сайта, реального или условного, с которым связан восстанавливающий конец субстрата). Черный треугольник соответствует положению каталитического участка [c.63]

Представления о доменной организации молекулы репрессора были подтверждены с помощью биохимических методов. При обработке очищенного нативного репрессора протеолитическим ферментом трипсином N-концевые полипептиды отщепляются от тетрамерного кора . Оставшийся после этого кор-белок может связывать индуктор, но не способен связываться с ДНК. Таким образом, N-концевые участки полипептидных цепей (протяженностью около 50 аминокислотных остатков), вероятно, выступают за пределы относительно компактного тетрамерного кора и могут внедряться в бороздки двойной спирали ДНК, узнавать и прочно связываться с операторной последовательностью. Как мы убедимся в дальнейшем, такой способ структурно-функциональной организации характерен для многих белков, специфически узнающих определенные последовательности ДНК. [c.179]

В соответствии с результатами работы [40] мы полагаем, что стехиометрия связывания 6-фосфофруктокиназы такова одна тетрамерная молекула фермента связывается димером белка полосы 3. Постулируемый гексамер белка полосы 3 должен связывать, таким образом, три молекулы 6-фосфофруктокиназы. [c.179]

Молекула 6-фосфофруктокиназы эритроцитов подобно мышечному ферменту имеет тетрамерную структуру. Однако, в отличие от мышечного фермента, построенного из идентичных субъединиц с молекулярной массой 85 кДа, фермент из эритро- [c.179]

Приведенные в табл. 1 данные показывают, как зависит характер присоединения тетрамерной молекулы глицеральдегид-3--фосфатдегидрогеназы к сефарозе 4В от количества добавленного для активации носителя бромциана. Для определения числа субъединиц фермента, вовлеченных в ковалентное связывание с носителем, мы использовали жесткую обработку препаратов дегидрогеназы 8М мочевиной в течение 3—16 ч [9]. Из данных таблицы видно, что с увеличением степени активации возрастает число субъединиц, ковалентно связанных с матрицей, и одновременно снижается удельная активность фермента. При концентрациях [c.82]

Описанные выше опыты свидетельствуют также, что иммобилизации на матрице в указанных условиях подвергается именно тетрамерная форма фермента, поскольку при низких степенях активации носителя содержание белка на матрице после обработ- [c.82]

Увеличение содержания связанного с носителем белка свидетельствует об образовании в ходе реассоциации тетрамерных форм, однако в случае фермента из мышц не удалось добиться полного восстановления их активности. [c.87]

Мы попытались обнаружить активную тетрамерную форму методом электрофореза в градиенте ПААГ. Для повышения доли активной формы гомогенный препарат фермента а-типа с Мг 180000 инкубировали с субстратами в течение 2 сут при +4° С, [c.155]

Полученные результаты убедительно свидетельствуют, что основной, если не единственной активно работающей формой фермента а-типа как в гомогенных, так и частично очищенных препаратах является тетрамерная форма (04), которая, по-видимому, находится в равновесии с неактивной формой. [c.156]

Примером тетрамерного фермента, т. е. фермента, состояш,его из четырех субъединиц, с показанной на рис. 4-9, Б ярко выраженной диэдрической симметрией может служить лактатдегидрогеназа (гл. 8, разд. 3.2). Структура же растительного агтютинина конканавалина А. напоминает структуру, изображенную на рис. 4-9, В [44, 45]. [c.281]

РИС 6-11 Зависимости степени насыщения (у) п доли фермента, находящегося в конформации ( ), от логарифма нормированной концентрации субстрата (а= = [8]//(в5) для гипотетического тетрамерного фермента (п = 4), механизм действия которого следует модели Моно, Уаймена н Шанже [39] Кривые рассчитаны при с = 0,1 и двух значениях кажущейся аллостерической константы = 4 п =10. [c.37]

Свертывание пируваткиназы обеспечивается L-валином. Влияние аминокислоты ь-валина на ренатурацию пируваткиназы [466f дрожжей и треониндезаминазы Е. oli [468] иллюстрирует две различные функции, которые могут выполнять лиганды в процессе образования активных олигомерных белков. Пируваткиназа [467] — эго тетрамерный фермент, построенный из четырех идентичных субъединиц, каждая из которых содержит одну молекулу невалентно связанного L-валина. Субъединицы диссоциируют и развертываются при действии 6 М гидрохлорида гуанидина. При выдерживании в ренатурирующей среде L-валин служит специфичным инициатором процесса повторного свертывания. Он индуцирует ренатурацию с константой скорости псевдопервого порядка по отношению к мономеру, а это означает, что L-валин влияет на свертывание мономерной формы в ее нативную конформацию и что завершающим процессом является спонтанное образование тетрамерного фермента. ь-Валин остается составной частью всей структуры молекулы Нативного белка [466]. [c.191]

В 1968 г. Эдвин Кребс и его коллеги показали, что сАМР-за-висимая протеинкиназа участвует в стимуляции гликогенолиза. Позже группа Грингарда обнаружила протеинкиназную активность почти во всех животных тканях, и было постулировано, что сАМР осуществляет свои многочисленные физиологические эффекты посредством этого нового класса ферментов (рис. 9.11, а, 9,12). сАМР-Зависимые протеинкиназы являются тетрамерными ферментами, каждый из которых имеет две регуляторные и две каталитические субъединицы (рис. 9.11,6). Связывание сАМР с регуляторными субъединицами вызывает диссоциацию их каталитических субъединиц, и последние, таким образом, активируются. Протеинкиназа, найденная в основном в нервных тканях, так называемая киназа типа П, фактически фосфорилирует свои собственные регуляторные субъединицы такое автофосфорилирование не наблюдается у протеинкиназы типа I. Однако механизмы их активации одинаковы. [c.273]

Глицеральдегид-З-фосфат—дегидрогеназа, тетрамерный фермент с мол. весом 150 ООО, состоит из четырех идентичных цепей он катализирует обратимое окислительное фосфорилироваиие глицеральдегид-З-фосфата до 1,3-дифосфоглицерата с использо ванием в качестве кофермента ЫАО+ [c.357]

Фосфофруктокиназа - наиболее важный регуляторный компонент гликолиза. Этот тетрамерный фермент ингибируется высокими концентрациями АТР, снижающими его сродство к фруктозо-6-фосфату. Если реакция протекает в присутствии высоких концентраций АТР, то кинетика фосфофрукто-киназной реакции описывается не гиперболической кривой, а сигмоидной (рис, 12,9). Этот аллостерический эффект усиливается при связывании АТР с высокоспецифичным регуляторным центром, локализованным отдельно от каталитического центра. Ингибиторный эффект АТР обращается под действием АМР. Следовательно, активность фермента возрастет при снижении отношения [ЛТР]/[ЛМР]. Другими словами, гликолиз стимулируется в условиях низкого энергетического заряда клетки. Как уже упоминалось, гликолиз поставляет также углеродный скелет для процессов биосинтеза. Следовательно, регуляторное действие на фосфофруктокиназу будут, очевидно, оказывать также сигналы об избытке или недостатке строительных блоков. Действительно, фосфофруктокиназа ингибируется цитратом, ранним промежуточным продуктом в цикле трикарбоновых кислот (разд. 13.2). Высокое содержание цитрата [c.34]

Глицеральдегид-З-фосфатдегидрогеназа (ГАФД) представляет собой тетрамер, состоящий из химически идентичных субъединиц, каж- дая из которых формирует один активный центр. Тетрамерная молекула фермента построена по типу димера димеров, т. е. в определенных условиях молекула фермента диссоциирует на два равноценных димера. Это обусловлено тем, что прочность контактов между субъединицами по одной из трех осей симметрии существенно ниже, чем по двум другим, и диссоциация происходит в первую очередь в результате нарушения взаимодействия субъединиц именно по этой оси. При инкубации фермента в растворе в присутствии моновалентных анионов и адениловых нуклеотидов при низкой температуре тетрамерная молекула ГАФД диссоциирует на димеры, которые в растворе достаточно быстро теряют активность. Дальнейшей диссоциации димеров на мономеры в этих условиях не происходит. Своевременное удаление факторов диссоциации ведет к восстановлению тетрамерной структуры ГАФД и ее активности. [c.383]

Полученные иммобилизованные димеры ГАФД могут быть использованы для определения активности фермента и его устойчивости к ряду неблагоприятных факторов, например к действию мочевины. Таким образом, возникает возможность решить вопрос о необходимости тетрамерной структуры для проявления ферментом каталитической активности, а также сделать определенные заключения о роли иммобилизации как фактора, стабилизирующего фермент. [c.383]

Фермент содержится в меланосомах мелановдггов человека и животных, а также у насекомых, растений, грибов и микроорганизмов, где катализирует начальные стадии биосинтеза меланина из тирозина. Известны штаммы микроорганизмов, выделяющие большое кол-во М. в окружающую среду. Св-ва М. у разл. организмов значительно отличаются друг от друга мол. масса субъединицы колеблется от 29 тыс. до 49 тыс. (встречаются моно-, ди- и тетрамерные формы фермента), область pH, в к-рой проявляется оптим. каталитич. активность, варьирует от 5,5 до 7,5 (максимумы оксидазной активности чаще всего наблюдаются при меньших значениях pH, чем максимумы гндрокси-лазной активности) р1 6-9,9. [c.140]

Др. тип регуляции активности ключевых ферментов-их хим. модификация (напр., обратимое ковалентное фосфорилирование, гликозилирование). Нек-рые ферменты активны в модифицированном, а ряд ферментов - в немодифици-рованном состоянии. Хим. модификация и превращение модифицированного фермента в исходную форму катализируются разными ферментами, чаще всего аллостерич. природы, к-рые, т. обр., выступают в роли регуляторов активности ферментов. Так, катализирующая фосфорилирование белков, в т. ч. ферментов, цАМФ-зависимая протеинкиназа-тетрамерный белок, состоящий из двух типов субъединиц (полипептидов). Фермент активен лишь после связывания двух молекул циклич. аденозинмонофосфата (цАМФ) с двумя регуляторными субъединицами в результате такого связывания фермент диссоциирует на две каталитически активные субъединицы и димер, с к-рым связаны две молекулы цАМФ. Т. обр., изменение активности ферментов путем их хим. модификации дополняет аллостерич. регуляцию и составляет часть каскадного механизма регуляции. Хим. модификацию ферментов осуществляют также специфич. протеазы, катализирующие ограниченный протеолиз и тем самым инактивирующие ферменты (напр., разрушая апоформы ферментов) или, наоборот, превращающие неактивные проферменты (напр., проферменты пищеварит. протеаз-пепсина и трипсина) в каталитически активные формы. [c.219]

Многие ферменты, чехлы вирусов и более сложные молекулярные структуры построены из протомерав двух или большего числа типов. Наиболее детально изучен гемоглобин — тетрамерный белок (02 2), построенный из двух хотя и похожих, но не идентичных субъединиц, аир (обе имеют мол. вес, равный 16100). Аминокислотные последовательности субъединиц весьма сильно различаются, и тем не менее укладка полипептидных цепей в обеих субъединицах гемоглобина почти одинакова (и весьма сходна с укладкой полипептидной цепи в мономерном миоглобине) [56]. Если бы не эти различия, молекула гемоглобина была бы высокосимметричной с указанным на рис. 4-9, В типом взаимодействий и тремя осями симметрии 2-го порядка. Принято говорить, что молекула гемоглобина имеет одну истинную ось симметрии 2-го порядка и две оси псевдо-2-го порядка. В ней имеется два набора чисто изологических взаимодействий (между двумя а-субъеди-ницами и двумя р-субъединицами) и две пары несимметричных взаимодействий (между а- и р-субъединицами). На прекрасных рисунках Дикерсона и Гейса [57] ясно видна почти симметричная ориентация различных участков полипептидной цепи. [c.296]

Этот фермент обнаружен во всех растительных и животных тканях, но он отсутствует в некоторых бактериях, приспособленных к определенным условиям. Хорошо изученная альдолаза из мышц кролика представляет собой белок с мол. весом 160 000 это тетрамерная молекула, состоящая из четырех почти идентичных полипептидных цепей [144—146]. [c.163]

Другой пример сильного взаимодействия белка с ДНК—регуляция оперона белком-репрессором. Наиболее изученным примером является 1ас-оперон Е. соИ [25]. Ген-регулятор кодирует синтез белка 1ас-репрессора, который затем связывается с соседним оператором. Связывание с белком-репрессором малой молекулы— индуктора, например изопропилтио-р- )-галактопиранозида, вызывает диссоциацию репрессора с операторного участка. Последующая транскрипция трех соседних генов оперона приводит к биосинтезу трех ферментов — Р-галактозидазы, галактозопермеазы и тиогалактозидтрансацетилазы. 1ас-Репрессор представляет собой тетрамерный белок, состоящий из идентичных субъединиц по 347 аминокислот каждая. Сродство репрессора к последовательности ДНК оператора зависит от ионной силы константа диссоциации в клетке, вероятно, менее 10 " моль/л . Структура участка связывания ДНК в 1ас-репрессоре до сих пор не выяснена, однако удаление трипсином 59 остатков с Л -конца и 20 остатков с С-конца предотвращает связывание. Несколько больше известно об участке связывания индуктора. Измерения флуоресценции показывают, что находящийся в участке связывания индуктора остаток триптофана при связывании перемещается в менее полярное окружение. Изучение изменения флуоресценции методом остановленного потока показывает, что процесс связывания проходит в две стадии. Быстрая начальная стадия подчиняется, как и ожидалось, кинетике второго порядка. Более медленная стадия мономолекулярна и, по- [c.569]

Протеинкиназа-это внутриклеточный фермент, через который цАМФ реализует свой эффект. Протеинкиназа может существовать в 2 формах. В отсутствие цАМФ Протеинкиназа представлена в виде тетрамерного комплекса, состоящего из двух каталитических (С,) и двух регуляторных (К,) субъединиц с мол. массами 49000 и 38000 соответственно в этой форме фермент неактивен. В присутствии цАМФ протеинкиназный комплекс обратимо диссоциирует на одну К,-субъединицу и две свободные каталитические субъединицы С последние обладают ферментативной активностью, катализируя фосфорилирование белков и ферментов, соответственно изменяя клеточную активность. [c.291]

Очищенный фермент содержит прочно связанные ионы цинка и похож в этом отношении на два других гидролитических фермента—карбоксипептидазу (гл. 15) и карбоангидразу (гл. 16). Молекулярная масса нативной фосфатазы равна 80000 [38—40]. В кислом растворе молекула белка диссоциирует на две идентичные субъединицы [40—43]. При высокой концентрации цинка образуется тетрамерная форма, причем положение равновесия димер тетрамер зависит от pH [44]. [c.636]

Важным регуляторным ферментом гликолиза является 6-фосфофруктокиназа (КФ 2.7.1.11). Этот фермент активируют многие регуляторы, например фосфат, АМР, ADP, сАМР, фрук-тозо-6-фосфат и фруктозо-1,6-бисфосфат, но АТР (в комплексе с Mg2+) и цитрат ингибируют его. Активный фермент из мышц млекопитающих имеет мол. массу около 360 000 (хотя он может существовать и в виде полностью активных агрегатов) и является тетрамером, состоящим из четырех идентичных субъединиц (каждая из которых, однако, может состоять из двух полипептидных цепей). Все лиганды, за исключением АТР, присоединяются к ферменту в стехиометрических соотношениях, т. е. по четыре молекулы на тетрамер, и каждая субъединица, по-видимому, имеет центр связывания для каждой присоединяющейся молекулы. Таким образом, фосфофруктокиназа отличается от аспартат — карбамоилтрансферазы, у которой за связывание субстрата и за связывание регулятора отвечают разные субъединицы. Точный механизм регуляции активности фосфофруктокиназы не установлен, но известен факт перехода в физиологических условиях активного тетрамера в неактивный димер, и это обстоятельство частично проливает свет на возможный механизм регуляции. Различные активаторы фермента стабилизируют тетрамер, но цитрат, являющийся ингибитором, способствует реакции диссоциации (см. рис. 4.5). В присутствии ингибиторов кривая связывания субстрата, фруктозо-6-фосфа-та, становится S-образной, но в присутствии активаторов она принимает форму гиперболы, что указывает на уменьшение кооперативности при переходе фермента в тетрамерную форму. [c.126]

Гираза связывается с субстратной ДНК, оборачивая ее вокруг тетрамерного белка. Фермент защищает примерно 140 пар оснований ДНК от переваривания нуклеазой микрококка (подобно защите, обеспечиваемой значительно меньшим по размеру гистоновым октамером). [c.413]

Супероксиддисмутаза (КФ 1.15.1.11, СОД) катализирует реакцию дисмутации супероксидного анион-радикала 2О2 + 2W -> HgOg + Og. Обнаружено несколько изоферментов этого белка, различающихся локализацией, строением активного центра и некоторыми физико-химическими свойствами. Си, Zn-содержащая СОД чувствительна к цианиду и содержится в цитозоле и в меж-мембранном пространстве клеток эукариот. Цианидрезистент-ная Мп СОД (железосодержащий изофермент) локализована в митохондриях эукариот и найдена у прокариот. В плазме содержится цианидчувствительная экстрацеллюлярная СОД, представляющая собой Си, Zn-содержащую тетрамерную молекулу (Мг 120—135 кДа) из четырех гликопротеиновых субъединиц. Предполагают, что экстрацеллюлярная СОД выполняет функцию защиты клеток эндотелия во всем организме. Однако активность СОД в плазме крови намного ниже, чем для цитозольного фермента. По-видимому, это связано с накоплением конечного продукта реакции — пероксида водорода, являющегося ингибитором фермента, В клетках пероксид водорода быстро разрушается внутриклеточными каталазой и глутатионпероксидазой. [c.115]

На рис. 15 и 16 Са-АТФаза саркоплазматического ретикулума представлена в виде тетрамера. Вывод о тетрамерной организации фермента был сделан в результате сопоставления концентрации частиц, выступающих на внешней поверхности мембраны пузырьков и выявляемых при негативном окрашивании, и внутримембранных частиц, обнаруживаемых методом замораживания— скалывания. Первых частиц оказывается в 3—4 раза больше, чем вторых. [c.62]

Во многих случаях показано, что увеличение размеров макромолекул белков путем сшивания повышает их биологическую активность. Так, сшивание агглютинина бобов сои в высокомолекулярный полибелок глутаровым диальдегидом вызывает 100—200-кратное увеличение гемагглютинирующей активности на эритроцитах человека [142]. Митогенная активность одного из гемагглютининов оказалась в несколько раз выше для тетрамерных макромолекул, чем для димерных [143]. По-лимеризованный глутаровым диальдегидом антиген Е пыльцы крестовника более антигенен, чем мономерный белок [144]. Сродство протаминов, имеющих поликатионный характер, к клеточной поверхности повышается при их полимеризации с помощью водорастворимого карбодиимида [145]. Параллельно этому растет и противоопухолевая активность, что вообще характерно для поликатионов. Для других ферментов, например для урокиназы, при гомо- или гетероолигомеризации сохраняется до 100 % каталитической активности в широком интервале молекулярных масс [146]. С ростом М увеличивается стабильность конъюгатов урокиназы, которые длительно циркулируют в кровяном русле и более активны при лечении кровоизлияний у животных, чем исходный фермент. Образование конъюгатов, которые имеют большое число детерминантных групп и способны к множественному взаимодействию с поверхностью клетки, может приводить к увеличению их захвата клетками разных типов. Это показано на примерах сшитой рибонуклеазы [147] и сшитых антител [148]. [c.201]

Непосредственно после иммобилизации с матрицей связывается тетрамерная форма фермента, но 16-часовая инкубация препарата при 4° С приводит к его диссоциации на димеры. Дис социация свежего препарата лактатдегидрогеназы, иммобили зованного на сефарозе, происходит в незначительной степени [11] [c.83]

Иоы металла участвует в образоваЕпш тройного мостикового комплекса (фосфоенолпируват—металл—АДФ), обеспечивающего фосфорилирование АДФ в активном центре фермента координирующей функции иона металла способствует радикал гис, а превращению енолпировиноградной кислоты в пировиноградную— донор протонов ХН ион металла закрепляется в активном центре также радикалом V и гидратируется. Препараты пи1 аткиназы выделенные из разных источников, существенно не отличаются по молекулярной массе (она близка к 200 ООО) молекула фермента в подавляющем больишнстве случаев тетрамерна. Третичная структура субъединицы мышечной пируваткиназы характеризуется наличием трех доменов, на границе двух из них расположен активный центр [c.346]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология