Амилаза, адсорбция

Комплексный амилолитический ферментный препарат полу- чают путем выращивания плесневых грибов на твердой питательной среде с последующей сушкой и измельчением полученной массы. Более активный препарат фермента получают путем экстракции такого грибного солода с последующим выпариванием и сушкой. Еще более активные ферментные препараты можно выделить из культуральной жидкости путем осаждения амилазы ацетоном и дальнейшим высушиванием коагулята при температуре 27—28°С. Для осаждения фермента часто используют и сульфат аммония. Предварительно культуральную жидкость выпаривают при температуре 40°С до 40%-ного содержания сухих веществ. Коагулят сушат вместе с наполнителем. В Японии для пищевых нужд используют технический препарат амилазы, полученный адсорбцией фермента из культуральной жидкости особо обработанным крахмалом. Затем амилазу вместе с крахмалом лиофилизируют. [c.194]

Препарат, содержащий панкреатическую амилазу, извлекается из поджелудочной железы водным глицерином, или же-получается в сухом виде (сухой панкреатин). В том и другом случае препарат содержит, наряду с амилазой, много липазы и протеазы, которые, если хотят препарат очистить, удаляют адсорбцией с помощью глинозема и каолина. [c.49]

В 1974 г. был предложен метод разделения компонентов крахмала при помощи обезжиренной целлюлозы [80]. Из 2М раствора мочевины целлюлоза не связывает ни амилозы, ни амилопектина. Однако при прибавлении к системе этанола наблюдается заметная обратимая адсорбция амилозы на целлюлозе, достигающая максимума при концентрации этанола 32— 35% (повышение концентрации спирта не увеличивает связывания амилозы). Полное осаждение крахмала из 2М мочевины происходит при концентрации этанола 38—40%. Путем повторной адсорбции амилозы на целлюлозе можно получить раствор очень чистого амилопектина и осадить его спиртом. Такой амилопектин имеет голубое число 0,16, расщепляемость его Р-амилазой 50—51%. [c.128]

Молекулярная сорбция некоторых ферментов определенными ионитами может быть резко повышена за счет процесса высаливания (адсорбция высаливанием), что, как будет показано ниже, проявляется при сорбции амилазы силикагелем и крахмалом. [c.86]

Химическая индивидуальность поверхности может также играть известную роль. Как было установлено Адамсом и Холмсом , наряду с общей тенденцией адсорбировать катионы благодаря своим кислотным свойствам, синтетические смолы, получаемые из разных фенолов, обнаруживают индивидуальные различия. Что касается смол, получаемых из ароматических оснований, то они адсорбируют преимущественно анионы. Эти адсорбционные свойства имеют важные технические применения, например, при очистке воды. Различия в адсорбционной способности разнообразных твёрдых тел дают ценное средство разделения смесей, как сложных органических соединений, так и неорганических ионов. Эти различия успешно используются для выделения веществ, имеющих большое значения в биохимии, в особенности энзимов и пигментов. Использование для этой цели адсорбентов имеет большую давность. В 1862 г. Данилевский выделил амилазу из трипсина, сока поджелудочной железы, путём адсорбции на свеже-осаждённом коллодии. В более позднее время гидроокиси железа и алюминия, а также каолин и древесный уголь весьма успешно при- [c.188]

А.Я.Данилевский использовал для отделения трипсина от амилазы панкреатического сока метод адсорбции на коллодии. Это был интересный и перспективный прием, но эти замечательные исследования не были продолжены, как писал Дж,Б.С,Холдейн (И). Для получения чистого трипсина Данилевский измельчал поджелудочную железу собаки в ступке с песком и водой. Полученный фильтрат он насыщал магнезией и удалял осадок. В фильтрате оставалась панкреатическая амилаза и трипсин, которые Данилевский разделяя взбалтыванием со смесью спирта и эфира с растворенным в ней коллодием. Коллодий адсорбировал трипсин, а амилаза оставалась в растворе. Данилевский таким образом получил почти полностью очищенный от примесных белков трипсин. Диализируя остаточный раствор амилазы, он показал ее коллоидальную природу (15). [c.119]

В 1862 г. А. Я. Данилевский (1838—1923) выделил методом избирательной адсорбции легко разрушающиеся вещества из сложных смесей, отделив амилазу от трипсина . В качестве исходного материала он использовал панкреатический сок, а в качестве адсорбента—свежеосажденный коллодий (нитро клетчатку). [c.9]

Отделение амилазы от трипсина производится двукратной адсорбцией каолином из слабого уксуснокислого раствора . [c.165]

Для адсорбции липазы и амилазы рекомендуется тальк для липазы и трипсина—боксит отдельно для липазы—графит для трипсина—карборунд и для амилазы и трипсина—силикат магния. [c.166]

Удалить полисахарид с помощью обычного процесса фракционирования иногда бывает трудно. Из инвертазы дрожжей его удаляют адсорбцией на бентоните [171], а из каталазы печени — действием амилазы [172]. Для удаления нейтрального полисахарида, который не перемещается в электрическом поле, можно воспользоваться электрофорезом [173]. [c.37]

Иногда применяли органические адсорбенты, например бензойную кислоту [350, 351], хинин и крахмал. Подобно фосфату кальция, бензойная кислота может растворяться (в эфире или при изменении раствора рН), что упрощает операцию. Было показано, что многие, но не все, образцы продажного маисового крахмала адсорбируют амилазу [352, 353] причины такого различия в поведении разных препаратов крахмала не выяснены. Вследствие этого оказалось невозможным проверить правильность заманчивого предположения о том, что в данном случае адсорбция обусловлена теми же силами, которые вызывают взаимное притяжение фермента и его субстрата. Дальнейшее расширение подобных исследований было бы в высшей степени желательным. Для разделения белков, обладающих специфическим сродством , особенно подходящими могут оказаться нерастворимые полимеры известного состава. [c.75]

Сок поджелудочной железы так же, как водный экстракт из этой железы, обладает способностью расщеплять белки, жиры и крахмал. В 1862 г. Данилевский сообщил, что ему удалось соответствующей обработкой экстракта из поджелудочной железы отделить трипсин от амилазы. Он впервые применил метод адсорбции (связывание иа поверхности) ферментов с последующей их элюцией (освобождение с поверхности). Метод адсорбции и элюции широко использовался Вильштеттером в первой четверти нашего столетия в его работах по очистке ферментов. [c.167]

По данным Орещенко, после трехчасовой обработки бентонитом, который следует добавить в количестве 5% к объему раствора, происходит адсорбция 81% имеющейся протеазы, а амилолитическая активность при этом почти не изменяется (потери амилазы составляют не более 2%). При более длительной обработке бентонитом происходит потеря активности амилазы, а сорбция протеазы не увеличивается. [c.74]

Вскоре эту способность угля начали использовать в препаративных и аналитических целях. Адсорбционный метод был освоен в промышленном масштабе уже в конце XVIII века для очистки сахара. С тех пор применение его в технике и исследовательской работе все возрастает, главным образом для очистки растворов и смесей газов от нежелательных примесей. Адсорбционный метод также широко применяют для выделения легко разрушающихся веществ из сложных смесей. Первые работы в этом направлении принадлежат Данилевскому. В 1862 г. ему удалось в панкреатическом соке отделить амилазу от трипсина адсорбцией на свежеосаженном коллодии. [c.7]

Первое применение) адсорбции для разделения и очистки ферментов было осуществлено русским биохимиком А. Я. Данилевским в 1862 г. С помощью свежеосажденного коллодия, использованного в качестве адсорбента, он отделил в панкреатическом соке амилазу от трипсина. Однако эта работа не давала общего метода анализа, который можно было бы применять для тонкого разделения сложных смесей. Такой общий адсорбционный метод анализа бьш впервые разработан М. С. Цветом. В основу метода М. С. Цвет положил избирательность адсорбции, т. е. способность разных веществ удерживаться на поверхности адсорбента при одинаковых условиях с разной интенсивностью. Он писал Для того, чтобы два находящихся в растворе вещества могли быть разъединены адсорбционным методом, необходимо, чтобы они занимали неодинаковый ранг в адсорбционном ряду , иначе говоря, имели бы разные коэффициенты адсорбции. М. С. Цвет обнаружил, что при фильтрации раствора растительк-ых пигментов через колонку с адсорбентом пигменты располагаются по длине колонки в виде отдельных зон. Исходя из этого, он сделал вывод, что зональное распределение составных частей раствора выражает относительное положение последних в адсорбционном ряду . Даже разница в таких свойствах двух веществ, как, например, молекулярная масса. [c.5]

В своей диссертации О специфически действуюших телах натурального и искусственного соков поджелудочной железы (12), в которой им впервые было описано применение метода адсорбции для выделения и очистки ферментов панкреатического сока, он выразил наиболее распространенную в те годы среди ученых,исследовавших природу ферментов, точку зрения. В выводах он писал Натуральный и искусственный поджелудочные соки обнаруживают вне организма, нормальным образом, три специфические физиологические реакции а) они превращают крахмал в сахар б) растворяют характерным образом створоженное белковое тело (фибрин) в) разлагают нейтральные жиры (на соответствующие жирную кислоту и глицерин). Каждая из этих реакций зависит от особенного специфического вещества (12, стр.61). В данном случае речь идет об амилазе, трипсине и липазе сока поджелудочной железы. Относительно их химической природы Данилевский делает вывод Оба специфические тела, [c.124]

Теория адсорбции разрабатьшалась параллельно с этими исследованиями. Этим объясняется частично несовершенство некоторых трактовок процессов адсорбции и элюции, принадлежащих Вильштеттеру и его сотрудникам. В значительной степени объяснения основьгоались на эмпирических данных. В качестве примера можно привести процесс очистки перок-сидазы из хрена, разработанный Р.Вильштеттёром и А.Што-лем (74). В случае пероксидазы Вильштеттеру удалось достичь максимальной эффективности разработанного им метода очистки. Если в случае других ферментов удавалось добиться повышения активности в сотни раз по сравнению с активностью исходного препарата (панкреатическая амилаза [c.137]

Первые успехи в очистке ферментов были достигнуты Э.Брюкке (20), разработавшим метод очистки ферментов с помошью адсорбции. Первое по-настоящему успешное разделение ферментов (трипсина и панкреатической амилазы) было осуществлено в 1862 г. А.Я.Данилевским (21) путем адсорбции на коллодии. [c.173]

Метод дробного высаливания основывается на признании за ферментами белковой природы. Метод адсорбции впервые был предложен А. Я. Данилевским (1862) и впоследствии разработан Вильштеттером. Он основан на адсорбировании ферментов каолином, глиноземом, гидратом окиси железа, белками, тристеарином, холестерином и другими абсорбентами. Этим способом удается не только очистить ферменты от примесей, но и отде- лить их друг от друга. Так, например, из сока поджелудочной железы, содержащего липазу, трипсин и амилазу, липазу адсорбируют гидратом (жиси алюминия (у-модификация глинозема) трипсин извлекается - -модификацией глинозема, а в растворе остается, главным образом, амилаза. Избирательную адсорбцию дополняют избирательной элюцией, т. е. сниманием фермента с адсорбата различными растворителями при соответственно недобранных условиях. Для этой цели могут быть использованы фосфорнокислые соли. Так, например, из смеси сахаразы и мальтазы, адсорбированных на у - иноземе, сначала полностью элюируется первичным фосфатом 1KH.2PO4) мальтаза. [c.339]

Лучшим примером процесса, в котором успешно используются иммобилизованные ферменты, является производство кукурузного сиропа с высоким содержанием фруктозы. Он широко используется в США и Японии в качестве подсластителя, например во фруктовых напитках, так как он значительно дешевле сахарозы. Сироп готовят из относительно дешевого источника углеводов — крахмала, получаемого из кочерыжек кукурузных початков. Процесс осушествляется с участием трех ферментов. Сначала получают крахмальную массу путем перемалывания (растирания) кукурузы, затем две амилазы превращают крахмал в глюкозный сироп. Обесцвеченный и сконцентрированный сироп добавляют в различные пищевые продукты и напитки. С помощью фермента глюкозоизомеразы можно превратить этот сироп в смесь, содержащую равные количества глюкозы и фруктозы. Для этого сироп пропускают через колонку, в которой содержится фермент, иммобилизованный путем адсорбции на целлюлозном ионообменнике (метод 3, рис. 12.28). Активность фермента со временем постепенно снижается, поэтому обычно используют несколько колонок, работающих одновременно. Фруктоза слаще глюкозы, хотя обе содержат одинаковое число калорий на единицу массы. Это означает, что, используя кукурузный сироп с высоким содержанием фруктозы, можно [c.91]

Результаты исследований первой половины XIX в. были предпосылкой к разрешению важных проблем во второй половине того же века. Был открыт ряд новых катализаторов животного и растительного происхождения. Ферментативные процессы стали широко применяться в промышленности (получение уксусной кислоты и др.). Среди исследований этого времени особое место по своей значимости занимают работы А. Я. Данилевского, который в 1862 г. впервые применил метод избирательной адсорбции (связывание на поверхности) ферментов с последующей их элюцией (освобождение с поверхности). При обработке экстракта из поджелудочной же.т1езы он отделил фермент амилазу от фермента трипсина. Метод избирательной адсорбции в дальней- [c.121]

Один из основоположников отечественной биохимии. Осн. работы посвящены химии белков, ферментов, вопросам питания. Впервые разделил амилазу и трипсин поджелудочной железы, применив разработанный им метод избирательной адсорбции на частицах коллодия. Предоожил (1888) теорию строения белковой молекулы. Экспериментально доказал, что действие сока поджелудочной железы на белки представляет собой гидролиз и установил обратимость этого процесса. Изучал белки мышц (миозин), печени, почек и мозга. Предложил разделять белковые фракции иа глобулиновую, строминовую и нуклеиновую. Изучал вопрос о связи различных белковых фракций между собой и с др. в-вами в цитоплазме живой клетки. Обнаружил антипепсин и антитрипсин. [c.143]

При изучении многокомпонентной системы иммобилизованных ферментов для определения а-амилазы в биологических жидкостях [35] было продемонстрировано связывание субстратов с кималом. В этой системе был использован крахмал, присоединенный к активированному кислотой кималу по методике, описанной для ферментов [36]. Количество связавшегося субстрата определяли по адсорбции иода или термогравиметрическим анализом. В табл. 8 приведены данные по количеству субстрата, связанного с оксидом алюминия, для некоторых образцов. [c.40]

И существуют некоторые готовые нерастворимые материалы имитирующие субстрат или являющиеся настоящими субстрата-тами, например крахмал (для амилаз — ферментов, участвующих в метаболизме гликогена), целлюлоза (для целлюлаз) и. фосфоцеллюлоза (см. выше), во всех остальных случаях аффинные адсорбенты необходимо синтезировать, ковалентно соединяя лиганд с подходящим носителем. При выборе носителя руководствуются теми же соображениями, что и при использовании его в качестве ионообменника — а именно носитель должен быть пористым гидрофильным полимером, который можно производить в виде частиц нужного размера, что обеспечивает свободный доступ макромолекул к соединенному с носителем лиганду и адекватный поток буфера в наполненной этим носителем колонке. При работе с глобулярными белками очень широко используются сферические гранулы агарозы, имеющие предел исключения, равный примерно 10 дальтон однако применяются и другие адсорбенты, которые в ряде случаев могут обладать теми или иными преимуществами. В настоящее время все большее распространение получают поперечно-сшитые гранулы агарозы, так как они не разрушаются и сохраняют свои размеры как под давлением, так и при смене буфера или растворителя. Обычно применяются сефароза-4В и сефароза L6B (Pharma ia), а также агарозы фирмы Bio-Rad. Здесь мы только кратко коснемся методов присоединения лиганда к матрице более полно этот вопрос освещен в последних публикациях, посвященных исключительно технике аффинной адсорбции [71—73]. Ниже перечислены основные требования к аффин-ной адсорбции. [c.147]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология