Азид как ингибитор ферментов

Молекула К. из печени быка (мол. м. 250 тыс.) состоит из четырех идентичных субъединиц, к-рые ие обладают ферментативной активностью. Каждая субъединица содержит гем с Fe (см. Гемоглобин). Активность К.-одна из наибольших среди известных ферментов (одна молекула К. способна разложить за 1с 44 тыс. молекул H Oj). Оптим. каталитич. активность проявляется при pH 7,6 р/ 5,6. Ингибиторы К.-мн. соли (напр., сульфиды, цианиды, азиды, фториды). [c.335]

Окисление промежуточных продуктов метаболизма можно искусственно затормозить, прибавляя в реакционную среду вещества ингибиторы азид натрия, цианистый натрий, X, а -дипиридил, ионы тяжелых металлов и др. [20, 161— 166]. Возможно, применение ингибиторов будет полезным при изучении механизма образования и накопления экономически ценных продуктов, а также для. определения роли соответствующих ферментов, принимающих участие в процессе. [c.83]

Блокировать металлы в молекулах ферментов можно под действием цианида, сульфида, азида и окиси углерода. Эти вещества ослабляют активность ферментов, которые содержат в своей молекуле железо или медь. Металлы входят в состав молекул окислительно-восстановительных ферментов, катализирующих процессы дыхания, которое под влиянием перечисленных ингибиторов подавляется, и наступает смерть организмов. [c.48]

Ингибиторы специфические влияют не на белковую структуру вообще, а вступают в реакцию с той группой белка, которая участвует в каталитическом эффекте. Так, если в этой группе имеется ион металла, то СО, КСМ или азиды в очень небольших концентрациях могут тормозить действие подобных ферментов. [c.49]

Азид, цианид или НгЗ проявляют свойства ингибиторов главным образом из-за способности проникать к каталитическому центру и образовывать с ним прочные комплексы, как, например, с медью и железом. Ингибиторный эффект часто связан с их восстановительной способностью по отношению к пиридоксальфосфату, дисульфидным группам или воздействием на карбонильную группу ферментов. Эти ингибиторы также выводят из строя не адсорбционный, а каталитический участок ферментной глобулы. Точно так же действуют ингибиторы-реагенты на тиоловые группы, выводящие из строя соответствующие ферменты путем алкилирования 5Н-групп. Сюда относятся соединения типа иодацетамида, хлорацетофенона и т. п. [c.72]

Действие того или иного ингибитора на активность фермента также основано на доступности свободных координационных мест металла. Чем больше число координационных мест свободно, тем с большей величиной молекулы-ингибиторы могут быть использованы. У порфиринов инактивирующее действие могут оказать только ингибиторы с малой молекулой — моноокись углерода, цианид, азид, но не орго-фенантролин. [c.45]

Биодеградация. Агароза легко разрушается гидролитическими ферментами бактерий, присутствующих в исследуемых растворах. В качестве ингибитора протеаз используют 0,02%-ный раствор азида натрия. [c.183]

Можно считать установленным, что микроорганизмы имеют две системы общей деградации собственных белков. Одна из них активируется в условиях голодания и, видимо, не требует для функционирования затрат метаболической энергии. Другая, постоянно действующая система белковой деградации, служит для гидролиза аномальных белков, которые появляются в результате мутаций или ошибок биосинтеза, а также белков, играющих важную регуляторную функцию, время существования которых должно быть ограничено. Деятельность этой системы подавляется такими энергетическими ингибиторами, как цианиды или азиды. По-видимому, каждая из систем имеет свой набор протео-литических ферментов. Так, некоторые ингибиторы протеиназ подавляют протеолиз в условиях голодания, но не влияют на деградацию аномальных белков. [c.50]

Приготовление среды для инкубации. При выявлении дегидрогеназ и диафораз с помощью образцов нитро-ТС, полученных указанным выше способом, мы пользовались инкубационной средой, рекомендуемой Гессом, Скарпелли и Пирсом [10] и основанной на оригинальной технике Нахласа, Валькера и Зелигмана [8, 9]. При этом оказалось необходимым увеличить концентрацию нитро-ТС до 2—3 мг/.чл, особенно при работе со слабоактивными тканями. Кроме того, мы с успехом пользовались субстратами в начальной концентрации до 0,2—0,5 моль/л. При исследовании тканей с высокой дегидрогеназной активностью добавление к инкубационной среде цианида или других ингибиторов ферментов дыхания (амита-ла, азида натрия) оказалось необязательным, так как их присутствие не изменяло характера образования диформазана. [c.145]

TOB (цианид и азид), подавляли процесс активирования. В то же время ингибиторы ферментов окисления углеводов (малонат и фтор-ацетат) проявляли лишь слабое угнетающее действие. Этот факт находится в соответствии с наблюдением авторов, что активирование in vitro не ускоряется добавлением глюкозы. [c.173]

Карбоангидраза — первый металлофермент, в котором был обнаружен цинк. Данные о том, что в эритроцитах имеется белок, способный катализировать гидратацию — дегидратацию СОг, впервые были получены в лаборатории Рафтона [1—4]. Кейлин и Манн [5, 6] очистили фермент из эритроцитов быка и обнаружили в его препаратах 0,33% цинка. Молекулярная масса этого фермента около 30 000 [7—9]. В расчете на это значение, содержание цинка в белке колеблется от 0,92 до 1,52 г-атом/моль [5, 10, 11]. Было показано, что агенты, связывающие в комплекс металл (особенно анионы — цианид, сульфид, азид [4] и тиоцианат [12] и 2,3-димер-каптопропанол-1 [13]), являются сильными ингибиторами фермента. Эти данные указывали на важную роль ионов цинка для функционирования фермента из эритроцитов. [c.561]

Свойства. Светло-коричневый аморфный порошок, Легко растворим в воде и буферных растворах, не растворим в органических растворителях. Пероксй-даза— фермент, катализирующий окисление пероксидом водорода различных соединений, например. многоосновных фенолов, ароматических аминов, аскорбиновой кислоты и др. Изоэлектрическая точка при pH = 7,5. Оптимальные условия действия температура 37 X pH = 5—7. Ингибиторы синильная кислота, гидроксиламин, азид натрия, дитионит натрия, тиокарбамид, ионы тяжелых г еталлоБ. , [c.312]

Вьшод об искажении электронной структуры иона Со(П) удаленными кислородсодержащими группами позволяет предположить, что спектр Со(П) КАС, наблюдаемый при высоких значениях pH, отражает образование упорядоченной структуры молекул растворителя. Этот вывод подтверждается также спектральными исследованиями [270, 277] Со(П)-замещенного фермента в присутствии анионных и ацетазоламидного ингибиторов в сочетании с кристаллографическими исследованиями [37, 252, 278]. Увеличение концентраций ацетазоламида, анионов азида или цианида в щелочных условиях приводит к исчезновению спектра, характерного для Со(П)-фермента при высоких pH (рис. 25). Кроме того, Линдског [270] указывал, что ингибиторные анионы, такие, как 1 , Вг и С1 , сдвигают величины р/Сд спектральных изменений к более высоким значениям. Данные ЯМР-исследования С1 [254] показывают, что связывание С1 ионом Zn(II) происходит при pH 6, постепенно уменьшается при увеличении pH и полностью исчезает при pH 9. Исследование кристаллов КАС, ингибированной галогенидами, разностным методом Фурье [69,252,278] показывает, что при низких значениях pH ( 7,2) анионы присоединяются вблизи иона Zn(II) и что при увеличении pH расстояние Zn — галоген ид возрастает. Связывание галогенид-ионов вблизи иона Zn(I I) [c.110]

Назовем некоторые группы ингибирующих веществ, имеющих широкое значение. В действии многих ферментов важную роль играют атомы тяжелых металлов эти ферменты, естественно, будут инактивировать вещества, действующие на тяжелые металлы, например H N, H2S, азид или окись углерода. Они подавляют, например, дыхание тканей, так как в цитохромоксидазной системе катализ происходит с участием атомов железа и меди. Активность множества ферментов связана с наличием в них сульфгидрильных групп, и поэтому реактивы, влияющие на эти группы, будут характерными ингибиторами. Такие вещества могут алкилировать тиоловые группы, превращать их в меркаптиды или окислять в, дисульфидные. Таковы, соответственно, галоидопроизводные уксусной кислоты, органические соединения ртути, мышьяка или вещества типа окисленного глутатиона (дисульфиды). Некоторые ферменты могут угнетаться очень небольшими количествами солей тяжелых металлов — серебра, меди, ртути, свинца. Предполагают, что атомы металлов соединяются с тио-ловыми или карбоксильными группами. Высокоспецифичными ингибиторами ряда ферментов являются вещества такого типа, как [c.64]

Система Н202-каталаза используется как источник кислорода в производстве пористых материалов — пенистого каучука или пористого бетона. Важно, что применение фермента позволяет тонко регулировать процесс, равномерно распределять газ. Останавливают действие каталазы, применяя ее ингибиторы, обычно азиды щелочных металлов. Можно отметить, что все время разрабатываются новые технологические варианты использования каталазы при отбеливании и окраске мехов, при окрашивании ч гловеческих волос (специальные фирменные препараты), для удаления избытка Н2О2 при производстве хирургических нитей — кетгута. Установлено, что перекисно-каталазный метод стерилизации молока сохраняет его ферменты, чего не происходит при стерилизации прогреванием, влияет на молекулярную структуру. молочных белков таким образом, что ускоряется созревание сыра и т. д. [c.280]

Примером неконкурентного торможения является действие синильной кислоты, действие химических соедипеявй, связывающих ионы ккталлов. К числу неконкурентных ингибиторов принадлежат ионы тяжелых металлов (угнетают действие ферментов, содержащих SH-группы), фторид натрия NaF (угнетает действие фосфо-глюкомутазы и фосфатаз), азид натрия Na N (угнетает действие окислительных ферментов) и др. [c.131]

НИИ окислительного агента, действующего на 8Н-группы, или при действии цианида, соединяющегося с важными для фермента металлами, такими, как железо. Сильными ингибиторами также являются фтористый натрий, моноиодацетат и азид натрия. Действие таких лекарственных веществ, как сульфамиды и антибиотики, основано на их способности ингибировать некоторые реакции, в которых участвуют ферменты и коферменты. Таким же путем действуют инсектициды и гербициды. Аналогичен этому механизм конкурентного ингибирования, когда происходит конкуренция за фермент между нормальными молекулами субстрата и молекулами ингибитора, причем образуются комплексы фермент — субстрат или комплексы фермент — ингибитор. Примером конкурентного ингибирования может служить влияние амида сульфаниловой кислоты па использование организмом п-амино-бензойной кислоты. Благодаря сходству этих двух соединений может быть связан фермент, участвующий в использовании этого витамина (витамина В). [c.336]

Метаболизм паратиона в организме коровы может протекать по разным направлениям, но основное направление (схема 5) связано с восстановлением ж гидролизом или замещением серы кислородом, или обоими этими процессами [377]. Как уже было показано на примере превращения паратиона в параоксон, протекание реакции замещения серы кислородом — необходимое условие активации соединения in vivo [397, 398]. Процесс активации ускоряется коферментами НАД -Нг и НАДФ -Нг [399]. Следует заметить, что процесс активации катализируется ферментом, и в некоторых случаях скорости процесса различаются в зависимости от пола животного. Например, активация паратиона протекает почти в десять раз быстрее у самок крыс, чем у самцов 1400], что свидетельствует об избирательной токсичности этого соединения по отношению к самкам [401]. Аналогичные реакции активации (хотя и не обязательно связанные с полом) наблюдаются и у насекомых [402, 403]. Не удивительно, что ряд метаболических ядов, таких, как иодацетат, цианиды, хлорпикрин и азид-ион, действуют как ингибиторы процесса активации [403]. [c.180]

Л. X. Рамазанова с соавт. [1971] исследовали влияние некоторых ингибиторов на гемин и белковую часть фермента пероксидазы и показали что цианид и кипячение больше ингибировали пероксидазную активность, а азид и диметилформальдегид — флороглюциноксидазную. Эти исследователи допускают присутствие в молекуле фермента наряду с пероксидаз-ным и оксидазного активного центра. Очевидно, пока нет оснований полностью отрицать предположение указанных авторов. [c.15]

Известно, что изучение влияние ингибиторов на каталитическую активность ферментов является одним из методов, позволяющих исследовать их механизм действия. Ингибиторный метод был использован и ранее для исследования механизма пероксидазного окисления неорганических и органических соединений, катализируемого пероксидазой [Pettigrew et all., 1976]. Ингибиторы пероксидазы могут различными путями влиять на катализируемый ферментом окислительный процесс. Ионы цианида, фторида и азида подавляют каталитическую активность пероксидазы за счет образования прочных комплексов по шестому координационному положению железа гема, предотвращая реакцию с перекисью водорода. Ряд органических соединений ингибируют пероксидазу, реагируя с ее промежуточными Е, и Е соединениями. Некоторые из них, такие как аскорбиновая кислота, НАДН [Лебедева, Угарова, 1997], сахара [Saunders et. al., 1964], тиомочевина [Pettigrew et al., 1976], относятся к медленно окисляемым субстратам пероксидазы, ингибирующий эффект которых в реакции окисления о-дианизидина достигается за счет их прочного связывания в активном центре фермента. Некоторые вещества, реагируя с пероксидазой, инактивируют фермент. Так, необратимое инактивирующее действие фенилгидразина связано с модификацией функциональных групп пероксидазы (предположительно остатка триптофана) свободнорадикальными продуктами его некаталитического и каталитического окис- [c.125]

Однако это не так фактически фосфат активирует АТФазную реакцию [75—77], а его влияние на АТФ-зависимые эндергониче-ские реакции субмитохондриальных частиц сложное и зависит от присутствия АДФ [78]. Такое парадоксальное влияние фосфата на АТФазную активность послужило предпосылкой для наших исследований, в которых было обнаружено сильное воздействие Фн на образование медленного комплекса Е-АДФ. Мы показали, что неорганический фосфат практически не влияет ни на Кт для АТФ, ни на /Сг для АДФ (простой конкурентный тип торможения) в АТФазной реакции, катализируемой субмитохондриальными частицами. В то же время величина константы диссоциации медленного комплекса Е-АДФ в присутствии 10 мМ Фн увеличивается на два порядка. Следует отметить, что предложенная нами ранее гипотеза, согласно которой высокоспецифичное к АДФ место связывания нуклеотида служит активным центром АТФазной реакции [50, 53], количественно плохо согласовывалось с величинами Кт для АДФ в процессе окислительного фосфорилирования. Сильное уменьшение сродства фермента к АДФ в присутствии фосфата, во-первых, сняло это противоречие, а во-вторых позволило дать простую интерпретацию ряду ранее известных, но не объясненных фактов. Давно известно, что азид, будучи ингибитором АТФазы, ингибирует связывание фосфата фактором Рь а сульфит увеличивает это связывание 7]. Образование комплекса р1 с фосфатом — медленный процесс [6, 7], что плохо соответствует представлению о его вовлечении в каталитический цикл окислительного фосфорилирования. Оба этих явления логически вытекают из схемы (12), так же как и не объясненная ранее стимуляция АТФазной. реакции после преинкубации с неорганическим фосфатом [75—77]. Нам удалось показать, что неорганический фосфат, уменьшая сродство АТФазы к АДФ, медленно (с такой же скоростью, как и АТФ-регенерирующая система) активирует АДФ-блокированную АТФазу, и эта активация чувствительна к азиду. [c.38]

Как уже отмечалось (А. Д. Виноградов и др., 1980), нуклеотиды оказывают мощное регулирующее воздействие на Н+-АТФ-синтазу. Оказалось, что АДФ тормозит гидролиз АТФ изолированным фактором р1 двумя совершенно различными способами конкурентно и неконкурентно по отношению к АТФ. В первом случае АДФ взаимодействовал с местом слабого связывания нуклеотидов, во втором — с местом их прочного связывания. Ингибирование в месте прочного связывания усиливалось азидом, эффект которого снимался сульфитом. Азид, а также белковый ингибитор фактора не влияли на синтез АТФ при дыхании. Авторы заключили, что существуют две изоформы фактора Р, одна из которых приспособлена для синтеза, а другая для гидролиза АТФ, и что прочное связывание АДФ фиксирует фермент в его синтазной изоформе. [c.139]

Таким образом, реакции зависят от НАДФН, О2 и микросомальных ферментов. Однако проверка возможности реализации этого предположения in vivo привела к противоречивым результатам. Согласно данным ряда авторов оказалось, что присутствие таких ингибиторов каталаз-ной активности, как азид натрия, цианид и З-амино-1,2,4-триазол, лишь незначительно изменяло скорость независимого от АДГ окисления этанола как в срезах печени, так и на уровне целого организма [128, 132, 360, 390]. В противоположность этому на гепатоцитах и перфузируемой печени показано, что некоторые из эффектов, возникающих при окислении этанола, полностью снимаются при gB-местном действии пиразола (ингибитора АДГ) и амино- [c.159]

Малонат натрия - специфический ингибитор сукцинат-дегидрогеназного комплекса дыхательной цепи (Slater, 1966j и, насколько нам известно, не ингибирует антиоксидантные ферменты. Добавление малоната натрия в суспензию изучаемых нами дрожжей приводило к незначительному подавлению скорости поглощения кислорода (Рис. 43), по сравнению с ингибирующим действием азида и цианида на дыхание этих же видов дрожжей (табл. 6). Малонат в концентрации 10 мМ [c.96]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология