Тотальная выделение

Тотальное выделение НК можно подразделить на следующие этапы 1) разрушение растительной ткани 2) растворение ДНП и РНП в экстрагенте 3) депротеинизацию 4) очистку. [c.54]

При тотальном выделении препаратов НК описанным выше способом полнота извлечения достигает 90—98%. [c.58]

При острых отравлениях сулемою наблюдается тотальный некроз эпителия извитых канальцев почек, сопровождающийся его распадом и слущиванием. Внешний вид мочи меняется, она, как правило, окрашивается кровью, содержание белка в моче увеличивается, что является признаком отравления сулемою. Обычно на второй день после отравления выделение мочи прекращается, но спустя несколько дней анурия сменяется олигурией. В тяжелых случаях отравления патологические изменения в почках быстро развиваются и через 5— 6 дней в результате острой почечной недостаточности наступает смерть. [c.253]

Рис. 1. Изменения вязкости ДНК, выделенной из зобной железы крысы, в зависимости от времени выделения после тотального облучения животного различными дозами [к].

Чтобы иметь возможность провести молекулярно-генетический анализ ДНК, нужно прежде всего получить ее в чистом виде. Типичная диплоидная клетка человека в норме содержит около 6 пг геномной и разное количество митохондриальной ДНК. Тотальная ДНК, экстрагируемая из биологических образцов, представляет собой смесь ядерной и митохондриальной ДНК. Выделение ядерной ДНК возможно только через выделение и очистку клеточных ядер. Однако, как показывает практика, присутствие митохондриальной ДНК не мешает проведению ПЦР с использованием праймеров, специфичных для локусов ядерной ДНК, и наоборот. [c.71]

Выделение больших количеств тотальной ДНК из све [c.4]

Выделение тотальной РНК из растений...... [c.4]

Фенольный метод выделения тотальной РНК из растений [c.4]

Для выделения используют небольшие объемы ночных культур. Методика включает ферментативную обработку агробактерий с последующим удалением белков из экстракта смесью фенол/хлороформ и концентрирование нуклеиновых кислот путем осаждения этанолом. Описанная ниже методика успешно использовалась для ряда штаммов агробактерий. В следующем разделе 1.12 представлены результаты расщепления суммарной ДНК, агробактерий ферментами рестрикции и примеры анализа по Саузерну последовательностей плазмид, содержащихся в различных мини-препаратах тотальной нуклеиновой кислоты агробактерий. [c.76]

Известны различные методы выделения ДНК из большинства органов некоторых видов растений. В отдельных экспериментах по трансформации может понадобиться анализ геномной ДНК (как ядерной, так и ДНК органелл) для выявления перенесенных последовательностей. В данной главе описаны методы выделения как небольших количеств нуклеиновых кислот, так и процедуры их крупномасштабного выделения. Эти методики нашли широкое применение для получения тотальной клеточной ДНК, а также ДНК из ядер и органелл. [c.238]

Выделение тотальной ДНК яз лиофилизированных тканей растений [c.239]

Метод выделения тотальной РНК из растений при помощи хлористого лития [c.269]

Контрольные нетрансформированные растения табака SRI. Тотальный белок, выделенный из растений каждого типа и [c.343]

Для подавления активности нуклеаз применяют различные ингибиторы цитрат натрия, гепарин, поливинилсульфат натрия, натриевые соли фтора, ДДС, суспензию бентонита, ионы серебра, цинка и др. Среди этих ингибиторов наиболее широким спектром действия обладают ДДС, поливинилсульфат натрия и суспензия бентонита. При тотальном выделении препаратов НК применимы все три указанных ингибитора. [c.73]

Начало четвертого периода нефтепереработки хронологически совпадает с серединой нашего столетия. Его можно было бы характеризовать как период полной химизации всей технологии переработки нефти, за исключением процесса первичной ее перегонки. Эта всеобщая, тотальная химизация нефтепереработки и увеличение удельного веса каталитических процессов направлены на решение широкого комплекса технических, технологических и технико-экономических вопросов повышение степени использования сырья, увеличение ассортимента товарных нефтепродуктов, повышение их качества, повышение выходов наиболее ценных нефтепродуктов, в том числе моторных топлив, смазочных масел, исходных и промежуточных продуктов для химической промышленности. Широкое внедрение получают водородные каталитические процессы гидрирование, гидрокрекинг, гидродесульфирование и др. Для повышения технических свойств масел налаживается производство так называемых присадок, т. е. добавок, улучшающих эксплуатационные свойства нефтяных масел, а также производство синтетических масел. Крупнозаводское оформление получают процессы производства и разделения ароматических углеводородов, а также выделения из нефтепродуктов неразветвлен-ных парафинов и их тонкая химическая очистка с целью подготовки высококачественного исходного материала для промышленности микробиологического синтеза. [c.10]

Полисахариды и вакцина брюшного тифа (10 убитых микробных тел на мышь), введенные подкожно за 24 ч до общего гамма-обдучения мышей в дозах 9,5—10,5 Гр, предотвращали гибель в среднем 10—30% животных. Весьма эффективной была комбинация полисахаридов или вакцины с цистеамином, которая вводилась за 5 мин до облучения. Антибиотики (пенициллин, стрептомицин или хлор-тетрациклин), введенные мышам за 24 ч до облучения, не проявляли никакого защитного действия [Семенов и соавт., 1968]. В более ранних опытах Рогозкина (1960) у летально облученных мышей наблюдался значительный радиозащитный эффект ауреомицина, вводимого в течение 3—5 сут или однократно перорально в дозе 100—200 мг/кг за 2—3 ч до облучения в дозе 6 Тр. Точно так же стрептомицин, ауреомицин или биомицин, вводимые отдельно в течение 3—5 сут, давали защитный эффект при тотальном облучении крыс в дозе 7,5 Гр. Однократное пероральное введение ауреомицина или биомицина (200—300 мг/кг) за 30 мин до тотального облучения крыс в дозе 7,5 Гр не обнаружило какого-либо защитного действия. Повторные пероральные введения ауреомицина или биомицина с эк-молином в течение 3 сут или их однократный прием за 2—3 ч до тотального гамма-облучения в дозе 4 Гр повышали выживаемость облученных собак на 37,5 и 35,7% при 100% гибели незащищенных животных [Рогозкин, 1960]. Защитное действие было обнаружено у полисахарида зимозана, выделенного из дрожжевых клеток [Чертков и соавт., 1973]. [c.35]

Суммарная или тотальная РНК в растительной клетке представлена тремя хорошо изученными типами молекул т-РНКг р-РНК и м-РНК. Для выделения РНК из растений в недеградированном состоянии обычно применяют различные модификации фенольно-детергентного метода. При выделении суммарной РНК 1ИЗ растений необходимо обрашать внимание на ингибицию активности РНК-азы, особенно следов ее, а также на очистку гомогената от полисахаридов и полифосфатов. [c.62]

Однако при последовательном выделении НК растворами возрастающей экстрагирующей способности ДДС неприменим, так как он обладает депротеинизирующим действием, что ведет к тотальной экстракции НК- [c.73]

Нанесение НК на колонку. Для разделения НК на обычную колонку наносят 3 мг тотального препарата. Если делят р-РНК, то на такую колонку наносят 5 мг, для анализа т-РНК и ДНК — 2 мг. Указанные количества НК растворяют в нескольких миллилитрах забуференной воды и объем доводят до 50 мл стартовым раствором. Может быть взят отдиализован-ный раствор НК после их препаративного выделения. Стартовыми растворами в зависимости от материала и целей эксперимента могут быть 0,1—0,4 М Na l pH 6,8. [c.83]

Для более глубокого исследования характера воздействия ионола на биосинтез РНК нами было проведено хроматографическое разделение препаратов тотальной РНК, выделенных из асцитных клеток животных, на колонках с метилированным альбуМином, адсорбированным на кизельгуре (МАК) в градиенте Na l [14], Выделение РНК из асцитных клеток проводили по методике Шеррера и Дарнеллга с пятикратной депротеинизацией без поли- [c.345]

Выделение ауксотрофных мутантов осуществляли тотальным отсевом выросших после обработки колоний на чашки с минимальной средой (МС), последующим отсевом невыросших на МС изолятов на сусло-агар и повторной проверке их на МС. Изоля-ты, показавшие обильный рост и спороношение только на сусло-агаре, были отобраны. Потребности ауксотрофных мутантов в факторах роста определяли по схеме Холидея [4]. [c.44]

В качестве мутагена выбрали НММ как один из наиболее эффективных мутагенов, известных в настоящее время [2]. Исходным материалом для получения мутантов служил штамм ХЛ1-3, раса 1, ранее использовавшийся для получения морфологических мутантов под действием гамма-излучения [3]. Суспензию спор двухнедельной культуры гриба (1X10 спор/мл) в фосфатном буфере (pH 5,5) обрабатывали НММ (8ным = 0,04 М) при температуре 25° время обработки от 15 мин. до 4 час. Нри рассеве спор действие мутагена снимали разведением. Обработанные мутагеном споры для учета летального действия НММ и выделения морфологических мутантов высевали на среду Чапека. Выделение ауксотрофных мутантов осуществляли методом отпечатков и методом тотального пересева. Минимальной средой (МС) для выделения ауксотрофов служила среда Чапека, полной (ПС) — среда Чапека, обогащенная кукурузным экстрактом (20 г/л). Через 3—4 дня с колоний, выросших на ПС (при отсутствии ро- [c.334]

С обнаружением отдельных генов или специфических геномных последовательностей связаны прежде всего возможности анализа микробных сообществ без выделения и идентификации отдельных его членов в чистых культурах. Методы основаны на экстракции из почвенных, осадочных или водных образцов тотальной ДНК, ее очистки и анализа с помощью градиентных гель-элект-рофорезов — термического и денатурирующего (ТООЕ/ООСЕ). Основной трудностью при экстракции тотальной ДНК является ее отделение и очистка от гуминовых веществ почвы. Однако методы, позволяющие проводить такую очистку, постоянно совершенствуются. [c.256]

Еще более важным обстоятельством представляется то, что неопластическая трансформация происходит и при трансфекции клеток линии NIH3T3 с помощью ДНК из нормальных клеток. Причиной этого явления может быть аномальная экспрессия нормальных генов. Трансформирующая способность ДНК из нормальных клеток может быть показана в экспериментах двух типов. Во-первых, при использовании для трансформации последовательностей ДНК из нормальных клеток, гомологичных вирусным онкогенам ras и mos, которые способны индуцировать неопластическую трансформацию. Во-вторых, при трансфекции тотальной геномной ДНК, выделенной из различных нормальных клеток животных. [c.325]

Рис. 36.5. Блоттинг-перенос. По методу Саузерна тотальную ДНК, выделенную из культуры клеток или ткани, обрабатывают одной или несколькими рестриктазами и полученную смесь фрагментов подвергают электрофорезу в агарозном или полиакриламидном геле. ДНК, несущая отрицательный заряд, мигрирует к аноду. Небольшие фрагменты двигаются быстрее крупных. После окончания электрофореза разделенные фрагменты ДНК подвергают мягкой денатурации, инкубируя гель в растворе щелочи. На следующем этапе гель накладывают на нитроцеллюлозный фильтр. Фрагменты ДНК переносят на нитроцеллюлозу с помощью методических приемов, разработанных Саузерном, и фиксируют полученную нитроцеллюлозную реплику тепловой обработкой. Далее реплику инкубируют с меченым кДНК-зондом, гибридизую-щимся с соответствующим комплементарным фрагментом ДНК на нитроцеллюлозном фильтре. После интенсивной промывки фильтр помещают на рентгеновскую пленку. Фиксируемые на радиоавтографе сигналы соответствуют расположению фрагментов ДНК, комплементарных последовательности зонда. Метод Нозерн-блот (для анализа РНК) принципиально не отличается от метода переноса по Саузерну (Саузерн-блог анализа). Тотальную РНК подвергают электрофорезу. Сама процедура переноса РНК из геля на фильтр несколько отличается от метода Саузерна, поскольку молекулы РНК менее стабильны, чем молекулы ДНК. Метод Вестерн-блот применяется для выявления определенных белков с помощью

После отсева колоний, выросших и а среде с аналогом, и выделения у них отдельных клонов из каждой первичной колонии проверяют по 1—2 клона на способность продуцировать нужное вещество. Если исходный штамм не продуцировал этот метаболит, то первичную оценку мутантов проводят с помощью ауксотрофной по данному метаболиту тест-культуры, отбирая для дальнейшей оценки те клоны, которые обеспечивают зоны роста, или кормление , ауксотрофных клеток. В тех случаях, когда исходная культура уже являлась продуцентом, необходима тотальная проверка всех выделенных клонов иа способность продуцировать метаболит в соответствующих условиях культивирования. Из их числа отбирают те, у которых при последующих проверках средний уровень продукции достоверно превышает средний уровень продукции исходного (родительского) штамма. При правильно выбранном аналоге для получения продуктивного мутанта обычно требуется проверить несколько сотен аналогорезистентных клонов. У отобранного продуктивного штамма часто определяют чувствительность к более высоким, чем ранее использованная, концентрациям аналога. Если такая чувствительность имеется, проводят еще один, а иногда и несколько этапов отбора на постепенно повышающихся концентрациях аналога. Нередко используют другие аналоги того же метаболита на следующих этапах отбора. [c.91]

Выделение тотальных препаратов нуклеиновых кислот из А. tumefa iens [c.76]

Кроме того, микрометоды (разд. 4.2.3.1 и 4.3.3.2) выделения, тотальной ДНК из трансформированных клеток растений позволяют получить предварительные данные о ее организации. Для таких методов требуется всего лишь 20 мг лиофилизиро-ванной либо 0,5 г свежей растительной ткани, а очистка в градиенте плотности СзС1/БЭ не применяется. Выделенная ДНК имеет достаточно большую мол. массу, однако сильно загрязнена РНК и в меньшей степени полисахаридами. Концентрацию нуклеиновой кислоты в таких неочищенных препаратах невозможно определить спектрофотометрически, однако содержание ДНК может быть определено достаточно точно очень чувствительным методом с использованием дифениламина (разд. 4.6). [c.238]

Для многих типов клеток методы выделения эукариотической мРНК сходны [2, 14]. Ниже приведены две методики выделения тотальной РНК. из растений. В большинстве из них объем буфера для гомогенизации и масса клеточного материала рассчитаны для листьев широколиственных растений, каллусов либо клеток суспензионной культуры. Методика, предусматривающая использование фенола (разд. 4.7.3.1), подходит для выделения РНК из листовых пластинок и культивируемых клеток более чем 20 видов растений. При необходимости можно оптимизировать методики для других типов растительного материала, например листьев злаков, плодов и т. д., чтобы обеспечить эффективную экстракцию РНК и соответствующую обработку экстракта. [c.265]

Качество электрофореза проверяют с помощью хемископа ), а затем гель фотографируют камерой Поляроид , снабженной красно-оранжевым фильтром. На рис. 5.1 показаны полностью рестрицированные и разделенные путем электрофореза образцы ДНК из разных источников. Полосы калибровочных фрагментов ДНК (ДНК фага 1, рестрици-рованная HitidWl) должны быть четкими и хорошо разделившимися (дорожка 1), чтобы при необходимости можно было бы построить калибровочную кривую. Если полосы разделяются плохо, разрешение можно повысить либо увеличив время, либо подобрав соответствующую концентрацию агарозы ") ). Препараты плазмидной ДНК, обработанной рестриктазой (дорожка 2), должны достаточно хорошо разделиться, чтобы дальнейшую работу, например приготовление проб (разд. 5.6) либо выделение определенных фрагментов (разд. 1.5), можно было бы проводить без затруднений и иметь незагрязненные препараты. При электрофорезе рестрицированной тотальной ДНК агробактерий обычно видно множество полос различной интенсивности (дорожка 3), тогда как при рестрикции геномной ДНК растительного или животного происхождения (дорожка 4) [c.283]

В клетках растений, выращенных на свету, в наибольшей концентрации выявляется мРНК гена СаЬ. В данном эксперименте на фильтр в виде точек наносят тотальную РНК лишь в двух концентрациях (0,1 и 1 мкг). Сравнивают относительное содержание транскриптов гена ab в недеградированных препаратах тотальной РНК, выделенной из облученных проростков. Чувствительность метода в случае молекул, выявляемых в меньшей концентрации, может быть значительно повышена благодаря использованию poly (А)+-мРНК. В меньшей степени чувствительность повышается при увеличении количества наносимой тотальной РНК, вплоть до 5 мкг на точку. [c.329]

Рис. 6.7. Контроль транскрипции гена ab под действием фитохрома в этиолированных проростках гороха. Точечный нозерн-блоттинг тотальной мРНК, выделенной из растущих на свету растений и этиолированных проростков гороха через 16 ч после различных световых обработок. А —0,1 мкг мРНК Б —

Метод выделения и электрофореза белков для вестерн-блоттинга аналогичен тому, который используют для определения активности NPT-II (разд. 6.7). Если необходимы количественные результаты, то в каждом образце следует определить концентрацию белка по Брэдфорду (приложение 61III]) и провести электрофорез, нанеся на каждую дорожку известное количество белка. В предварительных экспериментах с тотальными белковыми экстрактами количество белка, наносимого на гель, должно быть относительно велико — 500—1000 мкг на дорожку. Методика, приведенная здесь, начинается с того, что берут промытый полиакриламидный гель, содержащий разделенные белки. [c.361]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология