Гемоглобин титрование

Последний сомножитель в правой части (7,28) дает наклон кривой титрования гемоглобина при степени оксигенации У. Последние два уравнения совпадают с (7,24) и (7,25), если YA не меняется при изменении У, т. е. если доля связанного аниона не зависит от степени оксигенации. Опыт показывает, что действительно нет расхождения между эффектом Бора, измеренным как изменение сродства к О2 при изменении pH, с одной стороны, и освобождением протонов при оксигенации, с другой. Опыт дает [c.437]

Этот метод был использован также для исследования нативного и денатурированного додецилсульфатом натрия гемоглобина [117], а также для изучения реакционной способности сульфгидрила в сывороточном альбумине до и после денатурации солянокислым гуанидином [135] и после окисления сульфгидрильных групп ферри-цианидом [134]. Если оказывается, что прямое титрование денатурированных белков дает заниженные результаты, то к альбумину сначала добавляют избыток титрующего вещества. По окончании периода денатурации измеряют ток после добавления ряда последовательных порций реагента. Прямую линию зависимости тока от общего количества добавленного реагента продолжают до линии, соответствующей нулевому току, точку пересечения с которой принимают за конечную точку титрования. [c.393]

Когда в реакции участвуют парамагнитные ионы, концентрация соединений в растворе может определяться путем измерения магнитной восприимчивости. Магнитная восприимчивость является аддитивной величиной, складывающейся из восприимчивостей всех имеющихся в растворе компонентов. В отсутствие химических реакций магнитная восприимчивость вещества меняется линейно с его концентрацией. Если происходит реакция, возникают отклонения от линейности. Полинг с сотрудниками 34] исследовали растворы ферри-гемоглобина путем магнитного титрования. При этом определяется функция % = сь), где X — магнитная восприимчивость, а сь — концентрация комплексообразующего вещества. Таким образом можно опреде- лить состав и константы устойчивости комплексов металлов с парамагнитными центральными ионами [34—36]. [c.370]

Рис. 172. Кислотный участок кривой титрования гемоглобина как крайний случай необратимой и зависящей от времени кривой титрования . Данные относятся к гемоглобину, в котором с атомом железа связана окись углерода. Общее содержание хлорида 0,02 М при 25 °С

Пример необратимого изменения конформации, отображающегося на кривой титрования, уже был приведен для случая рибонуклеазы (см. рис. 32). Более наглядным примером может служить гемоглобин (рис. 172). Обратимая часть кривой титрования соответствует в данном случае относительно небольшому количеству групп, которые в обычных условиях титровались бы в кислой области. Гораздо большее количество титруется в необратимой области, зависящей от времени, при рН=3,5. То, что при этом pH происходит изменение конформации, подтверждается также спектрами поглощения. Природа такого изменения еще не выяснена. [c.640]

В прошлом маскировке сульфгидрильных и фенольных групп придавали особое значение, так как считали, что кислотные и основные группы белка полностью титруются в интервале значений рН от 2 до 10. Однако характер кривой титрования гемоглобина и медленность реакции белков с азотистой кислотой привели к предположению об экранировании кислотных и основных групп. Идентификация экранированных кислотных групп оказалась возможной при помощи описанного в статье VI т. II метода мгновенного титрования. Экранирование основных групп было обнаружено в результате излагаемого ниже исследования различной реакционной способности белков по отношению к. кетену и фтор- [c.274]

Число ионизованных групп в белке можно определить с помощью титрования от изоэлектрической точки кислотой или основанием кривая титрования гемоглобина лошади (рис. 5.7) типична для глобулярных белков. В табл. 5.2 приведены характерные значения рК ионизованных Е-групп белков. Точное значение р/С отдельной ионизованной группы данного белка может несколько отличаться от значения, указанного в табл. 5.2 и зависящего от электростатического окружения этой группы. Например, каждая из у-карбоксильных групп белка может иметь несколько отличное от других значение рК, но вместе эти группы дают при титровании кажущееся значение рК, приблизительно равное 4,4. Влияние локального окружения проявляется в экстремальных значениях р/С [c.137]

Изоэлектрическую точку можно найти прямым путем методами потенциометрического титрования или электрофореза. В последнем случае изо-электрическая точка определяется как такое значение pH, при котором электрофоретическая подвижность и полиионов равна нулю. Для нахождения изоэлектрической точки измеряют подвижность нолиионов при различных 5,0 е,о 7,0 з,о рн значениях pH и затем путем интер- р с. у.8. Завнспмость электро-поляции находят значение pH, при форетической подвижности и котором и = 0. Пример такого на- гемоглобина от pH среды, хождения изоэлектрической точки (для [c.145]

Получают из 3-нитрофталевой к-ты. Л.-хемилюминесцентный индикатор при кислотно-основном, окислит.-восстановит. (броматометрия и др.) и комплексонометрич. титровании. Применяют для хемилюминесцентного определения микроколичеств H Oj и ее своб. радикалов, K,[Fe( N)6], S O,, СЮ , МпО, lj, Вг , гемоглобина u(II), Со(П), N (IIJ, Fe(II), Mn(II), Ag(I), Ti(IV), Zr(lV), Hf(IV), Th(IV), e(IV), V(V), r(III), Sb(V), платиновых металлов [c.616]

В методе нейтрализации в качестве индикатора используют люминол с гемоглобином и перекисью водорода [9]. Регистрация эквивалентной точки производится на усилителе с фотоумножителем [29]. Для титрования кислот и щелочей предложено применять также люминол с красной кровяной солью и перекисью водорода [30]. Эквивалентная точка устанавливается визуально или с селеновым фотоэлементом. Люминол применяют также в комплексонометрическом титровании для определения Си +, ЭДТА, РЬ " , [18]. [c.84]

Имеется сообщение [15] об исключительно чувствительной и специфической методике для определения групп —8Н, по которой в качестве титрующего агента используется Ag (Tris)" , где Tris обозначен три(оксиметил)аминоэтан. Титрование можно проводить в водных буферных нейтральных растворах, которые не денатурируют белки и не ускоряют скорость окисления групп —SH. Титрующие смеси с pH 7,4 готовят смешением 4 мл М. раствора три(оксиметил)аминоэтана с 3,4 мл 1 М HNO3 и 0,3 мл 1 М раствора КС1. После добавления необходимого количества тиола (около 1 мкМ) раствор доводят до 30 мл и титруют, используя насыщенный электрод Hg — HgO — Ва(0Н)2, который имеет потенциал —0,10 в относительно НКЭ. При титровании небелковых групп —SH в присутствии 0,01% желатины получают более воспроизводимые отсчеты тока. Этот метод дает сведения как о числе, так и об относительной реакционной способности групп —SH в таких нативных и денатурированных белках, как альбумины, ферменты и гемоглобины. [c.392]

Комплексы, образуемые перекисью водорода с гемопротеинами, изучены более подробно, сначала методом визуальной спектроскопии, а в более поздних работах путем применения специальной техники быстрой спектрофотометрии. Все эти комплексы настолько неустойчивы, что их не удалось выделить. Показано, что и пероксидаза и каталаза образуют по три комплекса, тогда как метгемоглобин и метмиоглобип—только по одному. Эти комплексы различаются по цвету и Чанс [375] и Джордж [367] в составленных ими обзорах описали эти различия. Чанс характеризует эти комплексы как первичные, вторичные и т. д. в соответствии с характером спектров. Некоторые из этих комплексов принимают участие в ферментных реакциях. Проведено много работ для выяснения их относительных ролей. Чанс [375] указывает, что первичные комплексы наблюдаются лишь для гемопротеииов, активных как ферменты, тогда как каталитически неактивные гемоглобин и миоглобин их не образуют. Имеются также различия в константах равновесия при образовании и диссоциации обоих этих типов комплексов. С механизмом катализа при действии этих ферментов связано также то, что в отсутствие избытка перекиси водорода первичные комплексы, относительно говоря, устойчивы. Это дало возможность титрования гемопротеинов перекисью водорода с применением специальной техники такого рода исследования показали, что на каждый атом железа связывается одна молекула перекиси водорода. Ход этих реакций и форма образующихся комплексов еще не вполне выяснены. Чанс [375] и Джордж [c.352]

Методы определения магнитной восприимчивости нашли применение также и для контроля за ходом реакции. Например, уменьше ние при полимеризации этиленовых соединений числа двойных связей влечет увеличение удельной диамагнитной восприимчивости, и на этом основан был метод для контроля за ходом полимеризации 2,3-диметилбутадиена (Факхарсон, 1936). Тот же метод был применен к изучению полимеризации стирола (Бхатнагар и сотр., 1940, а затем Бордман и Селвуд, 1950) и т. д. В 1936 г. Полинг и сотр. ввели в практику магнитное титрование , при котором после прибавления каждого измеренного количества титрованного раствора измеряется восприимчивость. Таким образом, например, контролировалось восстановление диамагнитного оксигемоглобина в парамагнитный гемоглобин. [c.221]

СОСТОИТ из нескольких гетерогенных компонентов, к которым относится, в частности, у-глобулиновая фракция, или фракция антител. Около 40% крови приходится на эритроциты, которые в свою очередь на 35% состоят из гемоглобина — белка с молекулярным весом 64 500. Роль эритроцитов сводится просто к тому, чтобы не дать гемоглобину диффундировать из кровяного русла. Нормальный гемоглобин взрослого человека, обозначаемый символом НЬА, состоит из четырех по.липептидных цепей двух одинаковых а-цепей, каждая из которых содержит 141 аминокислотный остаток, и двух одинаковых более длинных р-це-пей, содержащих по 146 аминокислотных остатков. М-концевые участки этих цепей имеют следующий состав Вал-Лей-Сер-Про-Ала-Асп-Лиз-(а-цепь) и Вал-Гис-Лей-Тре-Про-Глу-Глу-Лиз-(р-цепь). С каждой цепью соединена также группа гема, несущая атом железа. Таким образом, в одной молекуле гемоглобина имеется четыре гемогруппы. Железо находится в геме в состоянии двухзарядного иона Ре +. Может возникнуть вопрос, есть ли смысл приписывать молекуле гемоглобина структуру гРа Не проще ли считать ее димером ар Однако при нормальных условиях роль переносчика кислорода в организме играет именно структура ааРг, простой димер ар способностью переносить кислород, по-види мому, не обладал бы (см. разд. 5 гл. XXII). Ряд других данных, в том числе данные по титрованию и равновесию диссоциации, о которых пойдет речь ниже, также свидетельствуют в пользу структуры агРг как наиболее простой структурной единицы гемоглобина. Пространственное строение этой единицы будет детально рассмотрено в разд. 2 гл. XV. [c.222]

Одна молекула гемоглобина содержит 38 остатков гистидина. При условии, что содержание иона бикарбоната в крови равно 0,027 экв1л, оцените, пользуясь значением рКа, приведенным в этой книге, что играет роль основного буфера крови при физиологическом рН7. Как изменится результат, если 22 остатка гистидина будут закрыты (недоступны для титрования) [c.228]

Мы не можем касаться здесь аналитической техники определения кислорода. Из реагентов, применяемых для этих целей, можно назвать белый фосфор, органические поглотители кислорода (такие, как пирогаллол или лейкосоединения красителей), медь, гипосульфит натрия и хлористый хром. Для растворов самым распространенным является, повидимому, метод Винклера в нем кислород используется для освобождения эквивалентного количества хлора (через промежуточную систему двухлористый марганец — треххлористый марганец), который легко может быть определен путем титрования иодистым калием и тиосульфатом. Если для определения кислорода применяются пирогаллол или лейкосоединения красителей (белое индиго, лейкометиленовый синий), процесс освобождения кислорода может быть прослежен колориметрически или спектрофотометрически. Подобная же методика применима при превращении гемоглобина в оксигемоглобин такой метод определения кислорода был впервые введен при исследовании фотосинтеза Хоппе-Зейлером [5] и позже использован Хиллом [64, 74]. Для тех же целей Остергаут [23, 24] предложил использовать кровь краба, содержащую гемоцианин и синеющую в присутствии кислорода. [c.254]

Магнитное титрование цианида с юглобином показано на фиг. 43. рригемоглобин фторид имеет, как жно было ожидать, момент 5,92 вляется, следовательно, чисто ион-м комплексом. Кроме того, были /чены и другие производные фер-гемоглобина его соединения с юм азида, с аммиаком, этанолом и /гимн спиртами [107], пиридином [104] и имидазолом [108]. [c.179]

Фиг. 46. Амперметрическое титрование гемоглобина человека (13,85 мг) при помощи 2-10 М раствора AgNOз[19]. Титрование начато через 2 мин после добав-ления раствора белка в титрационную смесь порции АдЫОз по 50 мкл добавляли с интервалами по 1 мин. Экстраполированное значение (вертикальная пунктирная линия) соответствует связыванию 5,9 ионов Ag на 1 молекулу гемоглобина.

НО очищать, пропуская 8 М раствор ее через слой катионо- и анионообменной смолы амберлит МВ-1 очищенные растворы мочевины можно хранить при 4° около двух недель. Проба для титрования должна содержать от 0,5 до 1,0 мкмоль SH-rpynn ее растворяют в 20—30 мл 0,2 М трис-буфера (доведенного до pH 7,2—7,4), содержащего 0,01 М КС и в случае надобности — 8 Л4 мочевину. Добавление КС способствует быстрому возвращению тока к нулю в начале титрования. На фиг. 46 приведена кривая титрования, полученная Коулом и др. [16] для гемоглобина человека. Найденное путем экстраполирования число SH-rpynn в гемоглобине составляет 5,9 на молекулу с молекулярным весом 66 ООО. [c.102]

Практическое применение методы титрования железа получили в анализах ферросилиция и силикатов [59 (19)], феррохрома и хромитов [61 (181), крови [54 (26)], гемоглобина [55 (70)], золы животных тканей [55 (9)], накипи на котлах [55 (61)], известняка [52 (46)], почв [53 (61)] и цемента [61 (42)]. Можно анализировать ванны для покрытий [62 (52)], хромировочные ванны [57 (49)], целлюлозу [57 (27)], сиккативы [60(131)], шлаки [61(77) , медные [54 (67)] и ванадиевые сплавы [59 (1)], катализаторные массы [59 (97)] и шахтные сточные воды [61 (10)]. Предложен интересный метод определения металлического железа в оксидных шлаках [61 (46)]. Анализируемый раствор обрабатывают раствором Hg b в этаноле в атмосфере СОг, причем в реакцию вступает лишь элементарное железо. После отфильтровывания осадка в фильтрате окисляют присутствующее Fe до Fe и последнее титруЮт в присутствии тирона в растворе с pH = 2, содержащем С1 -ионы. [c.239]

Если вещество с данной молярной восприимчивостью реагирует с каким-либо реагентом, который магнитно относительно инди-ферентен, и образует при этом другое вещество с другим значением восприимчивости, то может быть осуществлено магнитное титрование. Метод может быть охарактеризован примером титрования соединений гемоглобина согласно Кориеллу, Паулингу и Додсону [24]. Оксигемоглобин диамагнитен, восстановленный гемоглобин парамагнитен. Раствор оксигемоглобина титруют дитионитом ватрия N82820 ( гидросульфитом натрия), восстанавливающим [c.599]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология