Детекторы градиентное элюирование

Для градиентного элюирования пригодны лишь спектрофотометрический и транспортный детекторы. [c.96]

Вода представляет собой важнейший растворитель в обращенно-фазной и ионообменной хроматографии. Основными примесями в воде, которые мешают проведению хроматографического процесса, являются различные соли и микропримеси углеводородов и других органических соединений. Присутствие солей недопустимо в ионообменной хроматографии, а примеси органических соединений вызывают существенные затруднения в обращенно-фазной хроматографии (особенно в градиентном элюировании) при использовании флюоресцентного и УФ-детекторов. [c.134]

Рефрактометр представляет собой недеструктивный концентрационный детектор средней чувствительности. Последняя определяется разностью показателей преломления элюента и анализируемых веществ и часто может быть повышена за счет правильного выбора подвижной фазы. В оптимальных условиях предел обнаружения для рефрактометра достигает 5 10" г/мл. Основные недостатки рефрактометрических детекторов— практическая невозможность использования при градиентном элюировании и необходимость тщательной стабилизации температуры. Для работы на максимальной чувствительности нужно поддерживать температуру элюента и обеих ячеек кюветы, с точностью до 10 -10 °С, что затруднительно даже при помещении кюветы в металлический блок с большой теплоемкостью и использовании эффективных теплообменников. Последние, в свою очередь, увеличивают мертвый объем между колонкой и кюветой детектора, что приводит к дополнительному размыванию хроматографических зон и снижению эффективности разделения. [c.153]

УФ детектор можно использовать при градиентном элюировании, а также для определения в-в, не поглощающих УФ излучение. В этом случае в элюент добавляют в небольщой концентрации в-во, поглощающее УФ излучение, тогда анализируемое в-во, не поглощающее УФ излучение, дает отрицат. пик. Иногда используют ИК и сканирующие ИК спектрофотометры. [c.27]

Следует заметить, что необходимость использования подвижных фаз с довольно высокой ионной силой ограничивает применение потенциометрических детекторов в жидкостной хроматографии практически только анализом неорганических соединений и не позволяет использовать градиентное элюирование. По этой причине потенциометрическим детекторам трудно конкурировать с детекторами других типов. [c.574]

Требования к чистоте растворителя при градиентном элюировании значительно выше, чем при изократическом. В процессе градиентного элюирования примеси, содержащиеся в растворителях, концентрируются в начале колонки и вымываются из нее по мере возрастания элюирующей силы подвижной фазы. При этом наблюдается сильный дрейф нулевой линии, а некоторые примеси элюируются узкими зонами и регистрируются детектором в виде самостоятельных пиков. В изократическом режиме примеси в начале эксперимента также могут концентрироваться на сорбенте, но в системе достаточно быстро устанавливается динамическое равновесие, и нулевая линия выравнивается на каком-то определенном уровне сигнала детектора. Этот сигнал во многих случаях можно скомпенсировать электрически, но при этом соответственно уменьшается линейный динамический диапазон детектора. [c.132]

Благодаря высокой чувствительности детекторов, применяемых в современных жидкостных хроматографах, для анализа достаточно нескольких микролитров вещества. Разделение осуществляется в короткие промежутки времени за счет использования колонок малых размеров и высоких скоростей элюирования (давления на входе в колонку до нескольких сотен атмосфер). При применении некоторых типов детекторов (спектрофотометрических, транспортных и др.) можно управлять ходом разделения путем регулируемого изменения температуры, давления или состава элюента в ходе анализа. Программируемое изменение состава элюента (градиентное элюирование) плодотворно реализовано, например, в уже отмечавшейся методике ЛЭАХ [123, 124] (см. рис. 1.1). На применении транспортного детектора и смеси трех растворителей в качестве подвижной фазы основан способ [c.33]

Для создания определенного pH и поддержания на необходимом уровне готовят соответствующий буферный раствор. Если это возможно, то буферный раствор подбирают таким образом, чтобы его функциональная группа была похожа на функциональную группу образца. Так, ацетатный буферный раствор приемлем для анализа карбоновых кислот, фосфатный — для люирования нуклеотидов. Большое значение имеет чистота буферного раствора, так как он не должен детектироваться выбранным детектором, что особенно важно при работе в режиме градиентного элюирования. Чистота буферного раствора зависит от фирм-производителей, и даже разные партии одной фирмы могут различаться по составу. Каждая новая партия буферного раствора тестируется двумя холостыми хроматографическими опытами перед использованием. Второй опыт показывает, существуют ли вещества, отложившиеся в колонке в процессе регенерации или в течение последних стадий предыдущего градиента. Хотя большинство разделений проводят в водных буферных растворах, иногда добавляют органический растворитель (метанол, этанол) в количестве 3-10% для повышения селективности и улучшения растворимости образца. При этом концентрация растворителя не должна быть велика, чтобы не выдать осаждения буферной соли, о чем будет свидетельствовать появление течи в системе и увеличение сопротивления в колонке. [c.38]

Нередко в состав системы для ГВЭЖХ приходится добавлять дорогое устройство для эффективной дегазации растворителей продуванием гелия, действием вакуума на растворитель, подаваемый через специальные полупроницаемые трубки и т.д. Это связано с тем, что при смешении плохо дегазированных растворителей всегда выделяются пузырьки, так как растворимость газа в смеси растворителей обычно отличается от суммы растворимостей в чистых растворителях. Это особенно опасно при градиенте низкого давления, так как пузырек газа, попавший в клапанную систему и в насос, полностью нарушает их работу. Наконец, в градиентной системе существует довольно заметный объем от места формирования градиента растворителя до места его поступления в колонку обычно этот объем составляет от 1 до 3 мл или больше, поэтому состав растворителя, поступающего в колонку, отличается от того, который формируется в это же время. При работе на колонках малого диаметра (1—2 мм) и при небольших расходах растворителя (10—200 мкл/мин) это приводит к еще большим отличиям. Затруднительно гомогенное смешение сильного и слабого растворителей, поступающих в смеситель недостаточно эффективное смешение и неоднородность потока вызывают заметное увеличение шумов, что мешает использовать чувствительные шкалы детектора. Наконец, при градиентном элюировании практически исключается использование рефрактометрического детектора, так как изменение показателя преломления при изменении состава растворителя приводит к нарушению его работы. [c.66]

Если при градиентном элюировании используют другой тип детектора, например флюориметрический, высокие требования к чистоте растворителей остаются, но меняется их направленность — не должно быть флюоресцирующих примесей. О пригодности растворителей для работы судят также, осуществляя холостой градиент. [c.68]

Рефрактометры состоят из измерительной ячейки н ячейки сравнения фференциальный рефрактометр). Рефрактометрический детектор значительно менее чувствителен, чем, напрнмер, УФ-детектор- Его высокая температурная чувствительность также является существенным недостатком, поскольку детектор должен очень точно термостатироваться,—если возможно, до 0,001 С- Этот детектор не подходит для градиентного элюирования. Он используется для соединений, которые не поглощают свет в УФ-области, например для сахаров- [c.272]

У ф. Детектор работает при одной и той же длине волны, соответствующей наиболее интенсивной линии ртутной лампы низкого давления Я = 253,7 им. Флуоресцентная приставка позволяет возбуждать излучение с X = 280 нм. УФ-Детектор наиболее чувствителен, если молярные коэффициенты светопоглощения компонентов высоки, а элюент не поглощает в ультрафиолетовой области спектра. В последнем случае можно использовать метод градиентного элюирования. Объем проточной кюветы этого детектора меньше 10 мкл. При Я = 254 нм можно отфеделять шобые ароматические соединения, большинство кетонов и альдегидов ( = 20 -10 ). УФ-Детектор [c.330]

В области разделения малых молекул с помощью аналитической ЖХ градиентное элюирование стало ценным средством при исследовании сложных смесей или групп соединений с неизмеримой хроматографической полярностью. Успехи приборостроения, в частности создание систем подачи растворителя и систем смешения, совершенствование конструкции детекторов, а также контроль работы приборов на основе микропроцессоров сделали возможным высокий уровень воспроизводимости в схемах разделения с непрерывным градиентом. Микропрепаративное ЖХ-разделение, выполняемое на аналитическом оборудовании, может реализовать эти возможности. Однако при переходе в область препаративной и макропрепаративной хроматографии значительно уменьшаются возможности создания сложных градиентов и контрольных устройств, пригодных для работы с большими объемами и высокими скоростями подвижной фазы, которые бы воспроизводили точно градиенты, характерные при работе с аналитическими приборами. В таких ситуациях обычно рекомендуют использовать подходящую последовательность изокра-тического и ступенчатого градиентного элюирования, если оно вообще возможно (см. разд. 1.6.2.2.5). Выгоды такого подхода [c.67]

НОГО таким об])азом. Конкретное обозначение может быть или не быть основано на характеристиках, важных в препаративпой ЖХ. Например, квалификация для пестицидов обычно рклю-чает проверку на наличие соединений, влияющих на отклик электронозахватного детектора в газохроматографическом анализе, что не важно в препаративной ЖХ. Квалификация для ЖХ имеет различные значения в случае различных растворителей. Для водорастворимых растворителей, используемых в обращенно-фазной ЖХ, проверяется уровень поглощения в УФ-области или наличие флуоресцирующих загрязнений, которые дают фоновый щум или становятся видны при градиентном элюировании. В случае других органических растворителей более важными факторами, определяющими их маркировку для жидкостной хроматографии, могут быть тип, наличие или отсутствие конкретных стабилизаторов, содержание воды, показатель преломления, особые загрязнения и т.д. [c.95]

Другой метод измерения основан на законе отражения света (закон Френеля), согласно которому интенсивность отраженного света, падающего на поверхность границы раздела жидкости и стекла, пропорциональна углу падения и разности показателей преломления двух сред. Преимуществом детекторов, работающих на этом принципе, является меньший объем ячеек (<3 мкл), в связи с чем они могут работать при небольших расходах элюента и с высокоэффективными колонками. Oднal 0 yв твитeль-ность таких детекторов в 50—100 раз ниже вствительности других типов РМД, поэтому они более пригодны для градиентного элюирования. Так как детектирование проиЬходит на границе раздела жидкости и стекла, для получения стабильной работы детектора необходимо следить за чистотой стекла. [c.273]

Весьма важный узел жидкостного хроматографа представляет собой система подготовки и подачи элюента. В нее входят резервуар с элюентом, где должна быть предусмотрена возможность дегазации растворителя (в вакууме, при нагревании или ультразвуком), а также соответствующие фильтры для удаления воды и взвещенных твердых частиц из органических растворителей. Система подачи элюента должна обеспечить, во-первых, беснульсацион-ный поток жидкости через колонку и детектор. Пульсация или монотонное изменение скорости потока элюента приводит к невоспроизводимости удерживаемых объемов, что, в свою очередь, затрудняет качественный и количественный анализ. Кроме того, пульсация потока элюента искажает работу детектирующих систем, это также отражается на погрешности измерений и чувствительности анализа. Система подачи элюента должна обеспечить, во-вторых, возможность изменения в сравнительно широком диапазоне скоростей потока (в пределах двух порядков) в-третьих, возможность работы при высоких давлениях, необходимых для сокращения времени разделения, и, в-четвертых, возможность работы в режиме градиентного элюирования. [c.316]

Работа с насадочными капиллярными колонками в ЖХ связана с рядом технических трудностей, аналогичных тем, с которыми сталкивается исследователь при работе с безнасадоч-ными капиллярными колонками Для достижения очень малых объемных скоростей подачи элюента (1 мкл/мин и меньше) применяют деление потока [54 ] Осуществляется также ступенчатое градиентное элюирование [56] Пробы либо непосредственно вводятся в колонку [56], либо применяется метод деления пробы [54] Для детектирования используются модифицированные УФ-спектрометры [54-56] и флуоресцентные спектрометры [56], а также электрохимические детекторы [57] [c.77]

Рис 7-17 Разделение с использованием градиентного элюирования примесей содержащихся в дистиллированной воде находившейся в контакте с порошком угля Колонка 0,5 м х О 22 мм (внутр диам) неподвижная фаза силикагель модифицированный ОДС (5 мкм) подвижная фаза ацетонитрил/вода, измене ние состава фазы в процессе разделения показано на рисунке, обьемная скорость 1 04 мкл/мин проба 2 5 мл дистиллированной воды, находившейся в контакте с порошком угля Предколонка 10 м х О 2 мм (внутр диам ) непоя вижная фаза силикагель модифицированный ОДС (15-30 мкм), детектор УФ> длина волны 225 нм [c.174]

Другим недостатком детекторов по теплоте адсорбши является то, что при использовании метода градиентного элюирования из-за адсорбции некоторых компонентов градиентных элюентов неизбежно возникает дрейф нулевой пинии. [c.218]

Преимуществом УФ-детекторов является высокий отклик на большинство представляющих интерес материалов. Многие органические соединения, представляющие практический интерес в биологии, медицине и в промышленном органическом синтезе, содержат ароматические группировки, поглошаюшие в УФ-области. Хотя УФ-детекторы не являются универсальными по отклику, они очень селективны по отношению ко многим важным веществам. Кроме того, поскольку многие элюенты не поглощают в УФ-области (по крайней мере, в значительно широком диапазоне), УФ-детекторы отличаются высокой чувствительностью в хроматографии с градиентным элюированием например, могут быть эффективно использованы градиенты с пентаном, метиленхлоридом и ааетонитрилом. УФ-спектры практически не зависят от температуры, образцы в детекторе не разрушаются, а при сканировании по всему диапазону длин волн часто становится возможной идентификация элюируемых пиков по спектру. Таким образом, УФ-цетектор имеет существенные преимущества перец рефрактометром и детектором по теплоте адсорбции. Кроме того, сконструированы и эффективно используются /21/ детекторы с малым мертвым объемом ячеек ( < 10 мкл) и короткими коммуникациями, соединяющими детектор с колонкой. [c.220]

Широкий диапазон величин удерживания отдельных компонентов, составляющих нефтепродукты, и вытекающая отсюда необходимость применения многоступенчатого градиентного элюирования, трудно совмещаются с хроматографическим оборудованием, применяемым для высокоэффективной ЖХ. Эти трудности прежде всего связаны с тем, что градиентные растворители кроме необходимой элюирующей силы должны еще быть совместимы с детектором. Так, при работе с рефрактометрическим детектором необходимо, чтобы используеш>1е растворители имели одинаковые показатели преломления при работе с УФ-детектором они не должны поглощать УФ-излучения в области соответствующих длин волн. Иначе говоря, особенности состава нефтепродуктов требуют совершенно особого подхода к методическому и аппаратурному оформлению хроматографического процесса. [c.5]

Для анализа метолом молекулярной жидкостной хроматографии. Современная элементная база. Автоматизированная микропроцессорная система для обработки результатов анализа с выводом данных на тепловую печать. Температура термостата до 100°С. Модели Цпет-3010 и Цвет-3030" имеют по два детектора (спектрофото-метрический, область длин волн 200...700 нм, и рефрактометрический), которые могут работать одновременно. Модели Цвет-3040" и Цнст-3050" снабжены системой градиентного элюирования. [c.101]

Абсорбция в ИКобласти спектра также может быть ишользована для детектирования в жидкостной хроматографии. По своей чувствительности ИК-детекторы близки к дифференциальным рефрактометрам, но выгодно отличаются от них нечувствительностью к изменению моле куляршй массы разделяемого вещества. Выбор подвижных фаз при использовании ИК-де-тектора ограничен, так как трудно найти растворитель, не поглощающий в анализируемой области длин волн. В табл. 17 приведены области поглощения различных типов связей. При по ре соответствующих растворителей возможно использование ИК-детекторов и при градиентном элюировании. Для анализа нефтепродуктов ИК-детекторы применяют редко [44,45] ив основном для получения качественной характеристики о составе выделяемых групп. [c.64]