Буфер белковый

В человеческом организме особенно большую роль играет белковый, бикарбонатный и фосфатный буфера. Белковый буфер представляет систему из протеина (Р1) и его соли, образованной сильным основанием. Компоненты этого буфера могут быть выражены как Р1 — СООН — слабодиссоциированная белок-кислота и ее соль Р1 — СООКа [c.98]

В живых организмах буферные системы поддерживают постоянство pH в крови и тканях. В процессе обмена в живом организме образуются большие количества кислых продуктов. Так, в организме человека за сутки образуется такое количество различных кислот, которое эквивалентно 20—30 л однонормальной сильной кислоты. Сохранение постоянства реакции внутри организма обеспечивается наличием в нем мощных буферных систем. В организме человека особенно большую роль играют белковый, бикарбонатный и фосфатный буферы. [c.215]

Изучение набухания желатина. В несколько маленьких пробирок или в цилиндры на 5—10 мл насыпьте по 0,5 Г порошка желатина (смесь белковых веществ животного происхождения) и в каждую прилейте по 3 мл растворов с различными значениями pH, например 2,0 4,7 7,0 10,00 и т. п. (буферные растворы или имеющиеся в лаборатории растворы кислот и щелочей известных концентраций). Желательно, чтобы один из растворов имел pH 4,7 (ацетатный буфер), отвечающий изоэлектрической точке желатина. [c.432]

Таким образом, белковый буфер действует аналогично буферным смесям, рассмотренным ранее. [c.81]

В живых клетках постоянство pH обеспечивается так называемым белковым буфером, который состоит из протеина и его натриевой соли. [c.214]

Для хроматографического фракционирования смеси молекул, не сильно различающихся по своим массам, следует ориентироваться на линейный участок графика селективности, так чтобы для крайних значений молекулярных масс разделяемой смеси веществ значения оставались в интервале 0,2—0,8. То же самое относится и к определению самих молекулярных масс методом гель-фильт-рации. Впрочем, если это определение ведут в денатурирующем буфере (6 М раствор гуанидинхлорида), то надо учесть, что благодаря рыхлой упаковке денатурированных биополимеров вся область фракционирования смещается в сторону меньших значений молекулярных масс, чем те, которые приведены в таблицах для нативных глобулярных белков. Коррекцию на деформацию (и изменение размеров) белков следует вводить и в случае использования детергентов, применяемых для улучшения растворимости. Детергенты разворачивают белковые глобулы, увеличивая их эффективные размеры, и, кроме того, связываются с белками, что приводит иногда к заметному увеличению массы. [c.134]

В этом, да и во всех остальных случаях неспецифической элюции, экспериментатор пе должен упускать из по.чя зрения возможности необратимой денатурации очищаемого белка или белкового лиганда. Нередко приходится искать компромисс между эффективностью элюции и опасностью такой денатурации. По этой причине элюированный с колонки препарат следует немедленно путем диализа или гель-фильтрации перевести в подходящий буфер, а сорбент — промыть. Выяснение эффективности того или иного метода неспецифической элюции можно провести, как обычно, с помощью предварительных опытов в пробирках. Опасность необратимой денатурации следует оцепить, наблюдая динамику инактивации раствора вещества в элюенте. Эта оценка должна предшествовать выяснению эффективности элюции, если наличие вещества в элюенте выявляется по его биологической активности. [c.408]

Фракционирование белков сыворотки крови на КМ-целлюлозе рекомендуется проводить путем создания ступенчатой элюции. Это обусловлено достаточно большими различиями в сродстве отдельных белковых фракций к иониту. Сорбция белков на колонке осуществляется при pH 4,6 ( стартовый буфер). При таком значении pH белки сыворотки крови сорбируются на слабых катионитах. [c.112]

При выделении фермента используют метод фракционирования белков путем изменения pH. Очистка фермента на этой стадии достигается за счет денатурации белков, которые отделяют центрифугированием. Изменение pH белкового раствора следует осуществлять осторожно, по возможности не использовать сильные кислоты и щелочи. Рекомендуется добавлять уксусную кислоту, трис-буфер, карбонат натрия и др. Добавление соответствующего буфера или кислоты проводят на холоде. Их вносят по каплям, по стенке сосуда, при постоянном перемешивании. После нейтрализации раствора проводят короткую инкубацию при 25—30° С, чтобы перед центрифугированием произошла полная агрегация денатурированных белков. [c.199]

Объединяют первые 5—6 фракций с самым высоким содержанием белка. Концентрируют до 15—20 мг/мл. Определяют содержание белка. Методом электрофореза определяют состав полученного препарата IgG. Диализуют против боратного буфера pH 8,4 в течение ночи при 4°С и хранят при —20°С. Здоровый кролик дает 100—200 мг IgG. Таким же образом можно получить поликлональные антитела к другим белковым антигенам. [c.309]

Применяя диализ, можно выделить из молока ту часть солей, которая находится в нем в истинном растворе. Соли кальция и фосфорной кислоты удаляются таким путем лишь наполовину, что заставляет предполагать их тесную, если не химическую, то во всяком случае коллоидную связь с белками молока. При коагуляции эта связь доказывается присутствием солей молока, особенно кальциевых и фосфорных соединений, в коагуляте. При коагуляции кислотой соли остаются в растворе, и коагулят при сжигании оставляет незначительное количество золы. Соли молока, будучи ионизированы, определяют pH последнего и наряду с белковыми веществами служат буферами системы. [c.60]

Ячейку, состоящую из короткой трубки длиной 5 см с внутренним диаметро.м 2 см, вводят в стеклянный притертый шлиф В24 и закрывают ее нижний конец одним слоем целлофана, который укрепляется при помощи резинового обруча. Нижний из двух стеклянных отростков присоединяют к резервуару буфера. Белковые фракции выходят из колонки через верхний отросток и передаются через узкую пластмассовую трубку на коллектор фракций. Предохранительная пластинка, состоящая из одного слоя целлофана с небольшими проколами, удерживается между боковыми отростками посредством полиэтиленового разъемного кольца. В процессе удаления альбулпша из колонки размером 2x50 см поддерживают скорость вытекания буфера на уровне 16 мл час. [c.263]

Полезно иметь ряд исходных буферных растворов, концентрация которых в 10 или даже в 100 раз больше, чем концентрация приготовляемых из них буферов, непосредственно используемых в опыте. Преимущества тамих концентрированных буферных растворов заключаются в том, что при хранении они занимают мало места бактерицидные добавки (например, азид) разбавляются при последующем использовании буфе ра буфер можно добавить к не содержащему буфера белковому раствору, не подвергая последний действию крайних значений pH. Но следует помнить, что при разбавлении pH изменяется (рис. 6.2, табл. 6.1). [c.248]

Если при доведении pH требуется большая точность, то темпе ратура во время приготовления буфера может иметь очень существенное значение. Часто в описаниях методов очистки ферментов констатируется, что все процедуры выполнялись при 4 °С между тем, вероятнее всего, используемые буферы смешивались при комнатной темпе1ратуре, так что истинное значение pH при 4 °С было совсем другим. Большинство рН-мет-ров имеет устройство для температурной компенсации, но это не означает, что если прибор установлен на 4°, а работа прово-ди ся при 25 °С, то будет сделана правильная компенсация — прибор ведь не может знать, какая величина dfpKJdT соответствует данному раствору. Для приготовления буфера при 4°С (обычная температура холодной комнаты) необходимо установить компенсатор температуры на 4 °С, поместить электрод в стандартный буфер при 4°С, дать ему охладиться до этой температуры и снять показания прибора при стандартной величине 4 °С. Затем нужно довести буфер, белковый раствор или другой рабочий раствор до желаемой величины pH при 4 °С. В некоторых методах, использующих изоэлектрическое осаждение в присутствии холодного органического растворителя, pH следует доводить щри температуре +2°С и его величина должна быть установлена с точностью 0,1 единицы. Единственно надежный способ выполнить эти условия — поступить так, как описано выше. Между прочим, изменение pH в присутствии органического растворителя — это еще один фактор, влияющий на величины рКа (см. разд. 3.4). [c.249]

Большое значение в поддержании постоянного pH внутри живых клеток имеет так называемый белковый буфер. Этот буфер состоит из протеина (Pt) и его соли, образованной сильным основанием Na или К. Компоненты этого буфера можно представить так Pt—СООН — слабо диссоциирующая кислота, Pt— OONa — ее соль [c.216]

Наиболее мощными буферными системами крови являются гемо-глобиновый и оксигемоглобиновый буферы, которые составляют примерно 75% всей буферной емкости крови. Буферные свойства гемоглобина по своему механизму действия идентичны белковым буферным системам кислые продукты обмена веществ взаимодействуют с калиевой солью гемоглобина с образованием эквивалентного количества их калиевых солей и свободного гемоглобина, обладающего свойством слабой органической кислоты. Кроме того, система окси-гемоглобин — гемоглобин участвует в еще одном своеобразном механизме поддержания постоянства pH крови. Как известно, венозная кровь содержит большие количества углекислоты в виде бикарбонатов, а также СО2, связанной с гемоглобином. Через легкие углекислота выделяется в воздух однако сдвига pH крови в щелочную сторону не происходит, так как образующийся оксигемоглобин является более сильной кислотой, чем гемоглобин. В тканях, в артериальной крови под влиянием низкого парциального давления кислорода оксигемоглобин диссоциирует и кислород диффундирует в ткани. Образующийся при этом гемоглобин, однако, не обусловливает изменения pH крови в щелочную сторону, так как в кровь из тканей поступает углекислота. [c.82]

По окончании элюции вещество, следует перевести в нейтральный буфер, а колонку — регенерировать. С этой целью ее можно промыть 10 объемами щелочного буфера и таким же количеством кислого (pH 8,5 и 4,5), добавив в каждый из них 0,5—1 М Na l, Ho .iie чего уравновесить посадочным буфером. Иногда от засорения колонки приходится избавляться более решительными мерами промывкой 2 М раствором КС1 с 6 М мочевиной или даже инкубацией в течение ночи в растворе проназы (разумеется, если лиганды не имеют белковой природы). [c.410]

Насос прогонял белковый раствор через колонки и далее через диализный блок (две пластины плексигласа с каналами, разделенные диализной пленкой). Первоначально ядрышковые белки вносили в систему в 2 IM растворе гуанидинхлорида в буфере (20 мМ MOPS, pH 7,4, + 10 мМ ЭДТА -f- 0,1 мМ ФМСФ) и такой же раствор подавали в каналы нижней пластины диализного блока. 1—2 мг белка, растворенные в 100 мл буфера, циркулировали в этой систе- [c.427]

Хроматография на КМ-целлюлозе и кристаллизация. 5 мл 1 М раствора триса доводят сухим MES до pH 6,5 ( 0,1) и добавляют этот раствор в обессоленные белковые фракции с таким расчетом, чтобы конечная концентрация триса составила 10 мМ. Затем раствор белка наносят на колонку (3X4 см) с КМ-целлюлозой, уравновешенную 10 мМ трисом, доведенным сухим MES до pH 6,5 ( 0,1). После нанесения белка на ионообменник колонку промывают 50—100 мл буфера (10 мМ трис-MES, pH 6,5), а затем начинают промывать колонку буфером 10 мМ КОН, доведенный трицином до pH 7,9 ( 0,1) и содержащий 3 М ацетат натрия. Скорость тока через колонку следует установить около 200 мл/ч по мере связывания белка на колонке скорость тока может значительно упасть в этом случае можно увеличить давление, подаваемое на колонку, с помощью перистальтического насоса. [c.264]

К насыщенному раствору (NH4)2S04 добавляют 2 н. NaOH и доводят pH до 7,8. При постоянном перемешивании медленно, по каплям к 50 мл сыворотки кролика добавляют 80 мл насыщенного раствора сульфата аммония (pH 7,8) и перемешивают в течение 2—3 ч. Центрифугируют суспензию при комнатной температуре 30 мин при 1500 g. Первый осадок содержит все -у-глобулины, другие глобулины и следы альбумина. Растворяют осадок в дистиллированной воде до начального объема сыворотки (50 мл). Очищают фракцию у-глобули-нов вторым и третьим осаждениями. После третьего осаждения растворяют осадок в боратном буфере (pH 8,45) до конечного объема 20— 25 мл. Удаляют сульфат аммония диализом при 4°С против боратного буфера в течение 2—3 дней со сменой буфера утром и вечером. Полученный после диализа препарат иммуноглобулинов обычно содержит небольшой осадок денатурированного белка и слегка опалесцирует. Центрифугируют при 4° С в течение 30 мин при 1400 s. В полученном препарате проверяют содержание белка и титров антител. Определяют белковый состав методом электрофореза в полиакриламидном геле в присутствии ДСН (с. 119). Если полученный препарат у-глобулинов не отвечает требованиям эксперимента по стоте, проводят дальнейшую очистку с применением ионообменной хроматографии на ДЭАЭ-целлюлозе. [c.308]

Для использования моноклональных антител в изучении белковых антигенов важно знать, с одной и той же или разными антигенным и детерминантами (эпитопами) антигена связываются полученные антитела. Эпитопную специфичность антител определяют методом их конкурентного связывания. Антитела одного клона конъюгируют с пероксидазой (с. 317). Берут 96-луночный микропланшет для ИФА и сорбируют в лунках антиген, как обычно (с. 320). После тщательной отмывки в каждую из 12 лунок вносят по 75 мкл культуральной жидкости того же или других клонов или раствор очищенных антител — 100 мкг/мл (рис. 42). Все остальные лунки содержат 50 мкл фосфатного буфера с 1%-ным БСА. Делают серийные разведения антител, перенося по 25 мкл раствора из каждой лунки в соседнюю (рис. 42) на 5—6 лунок. К каждой лунке добавляют 10 мкл меченных пероксидазой автител в концентрацию 20 мкг/мл. Инкубируют 2—4 ч при комнатной температуре при постоянном встряхивании. После тщательной [c.322]

Одним из самых важных применений электрофореза является использование его в анализе естественных смесей коллоидов, например белков, полисахаридов и нуклеиновых кислот, а также продуктов, полученных фракционной перегонкой. При электрофорезе между раствором белка и буфером в специальной У-образной трубке, снабженной электродами, образуется резкая граница, за движением которой можно проследить с помощью оптической шлирен-системы (разд. 11.10). Эти опыты обычно проводят при температуре 4° С, т. е. при максимальной плотности воды, так что температурный градиент в электрофоретической кювете, вызванный нагреванием током, сопровождается наименьшим градиентом плотности. Градиенты плотности горизонтально поперек кюветы стремятся вызвать конвекцию. На рис. 20.1 [1] показана электрофоретическая картина плазмы крови человека в буферном растворе (pH 8,6) диэтилбарбитурата натрия с ионной силой 0,10 (после 150 мин при 6,0 В/см и 1°С). Строится график зависимости градиента показателя преломления от расстояния в кювете (горизонтальная ось). Одна картина получена для той части кюветы, в которой белки опускаются вниз, а другая — для той части, где белки поднимаются вверх. Начальные положения границ указаны на рисунке тупыми концами стрелок. Различные виды белков представлены альбумином, аг, аг-, р-, у-глобу-линами и фибриногеном ф. Площадь под определенным пиком почти точно пропорциональна концентрации белка, дающего эту границу. Так, например, процент альбумина может быть получен делением площади пика альбумина на суммарную площадь всех пиков белков. е-Граница в спускающейся части и б-граница в поднимающейся части картины обусловлены не белковыми компонентами, а изменениями концентрации соли, которые возникают в опытах с обычным переносом вблизи начального положения границы. [c.603]

При электрофорезе заряженные частички под влиянием электрического поля движутся с различной, зависящей от отнотения заряда к массе скоростью к аноду или катоду н таким образом могут быть отделены друг от друга. Различают электрофорез без носителя, при котором белковые молекулы движутся непосредственно в потоке буфера, и электрофорез с носителем (зонный электрофорез), при котором в качестве носителя используют различные материалы. [c.350]

Данно и др. [57] из обезжиренной муки, суспендированной в фосфатном буфере (pH 7,0) в присутствии 0,5% ДДС-Ыа, получили нерастворимую белковую фракцию и установили, что она имеет тот же состав, что и глютенины, полученные методом Джоунса и др. [106]. На основе этих результатов Данно [56] разработал метод, позволяющий выделять чистые глютенины без восстанавливающего агента. Гофорт и Финни [82] отделяли глиадины от глютенинов, экстрагированных из клейковины 0,005 н. раствором молочной кислоты, с помощью ультрацентрифугирования при 435 000 в течение 12 ч. В таких условиях глютенин агрегируется на дне пробирки в осадке, образованном тремя различимыми слоями, тогда как глиадины остаются растворенными. [c.199]

Колбу помещают в шуттель-аппарате и при самом малом качании экстрагируют растворимые вещества. После этого содержимое колбы доводят водой до метки и хорошо перемешивают. Отбирают пипеткой Мора 10 мл болтушки, наливают в колбу Эрленмейера емкостью 100 мл, в которую прибавляют 20 мл воды, 10 мл фосфатного буфера с pH=5,5, 2 мл толуола и 10 мл 10%-ного водного раствора пептона или белкового препарата, выделенного из этой же муки. Колбу закрывают корковой пробкой и помещают в термостат для инкубации на 48 ч при температуре 35 ГС. [c.69]

Смотреть страницы где упоминается термин Буфер белковый: [c.133] [c.134] [c.128] [c.72] [c.140] [c.211] [c.227] [c.233] [c.246] [c.310] [c.332] [c.418] [c.419] [c.423] [c.425] [c.428] [c.445] [c.119] [c.316] [c.331] [c.463] [c.279] [c.44]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология