Хроматографирование со свидетелем

Хроматографирование свидетеля с известной концентрацией дает возможность установить процент потерь (или возврата) витамина D при хроматографировании и внести соответствующую поправку на содержание витамина D в испытуемом растворе. [c.254]

По требованию оператора студент должен представить также образцы веществ ( свидетели ), наличие которых возможно в анализируемой пробе (исходные вещества и растворители, использованные при проведении синтеза, побочные продукты и другие примеси). Если раньше уже проводился анализ аналогичных смесей, то приводятся условия хроматографирования. [c.61]

Исследованию подвергают одну из следующих смесей 1%-ных растворов сахаров в 15%-ном спирте глюкоза f лактоза ксилоза 1- лактоза глюкоза -Ь лактоза -Н ксилоза. Так же, как и при анализе нитроанилинов, на пластинку силуфол UV-254 наносят как смесь,так и растворы свидетелей. В качестве элюента используют смесь этилацетата и 65%-ного водного раствора изопропилового спирта (1 1). После хроматографирования высушенную пластинку опрыскивают в камере (рис. 66) раствором, приготовленным из [c.65]

Так как величина Н, зависит от многих факторов (растворителя, температуры и др.), часто проводят хроматографирование в присутствии свидетелей . Для этого на расстоянии 3—4 см от капли исследуемого вещества, на той же линии старта, наносят каплю или несколько капель растворов чистых ве- [c.593]

Другим и притом весьма надежным способом идентификации компонентов смеси прн помощи бумажной хроматографии является способ свидетелей . По этому способу на расстоянии 3—4 сж в ту н другую сторону от капли смеси на той же линии старта наносят капли свидетелей . После хроматографирования и выявления пятен сопоставляют положение пятен компонентов исследуемой смеси с положением пятен заведомо известных веществ — свидетелей . [c.153]

Хроматографирование продолжается от 20 мин. до 1—2 час. Затем бумажный кружок снимают пинцетом, высушивают опускают в ванночку с реактивом, дающим окрашивание с исследуемым веществом, и точно отмечают карандашом положение компонентов смеси н свидетелей. Идентификацию вещества производят так же, как это делается в случае восходящей хроматографии н по положению пятен свидетелей . [c.158]

Однако оно в большой степени зависит от температуры, качества сорбента н состава элюента. Поэтому, если это возможно, хроматографирование проводят в присутствии так называемого свидетеля , т. е. чистого вещества, присутствие которого предполагается в исследуемом растворе. Раствор свидетеля наносится на ту же пластинку. [c.42]

Для идентификации аминокислот в исследуемом гидролизате наряду с опытными пробами (или предварительно, до анализа опытных проб) на хроматограмму наносят растворы аминокислот- свидетелей . После установления местоположения пятен отдельных аминокислот- свидетелей последние в дальнейшем на хроматограмму можно наносить в составе смесей. Смеси должны иметь известный состав и хорошо разделяться при данных условиях хроматографирования. Этим требованиям удовлетворяют смеси аминокислот следующего состава [c.128]

Хроматографирование осуществляют на кружке хроматографической бумаги диаметром 8—15 см. Из центра круга проводят окружность радиусом 1,5—2 см, на которую наносят отдельными капиллярами капли растворов свидетелей и каплю [c.49]

Для обнаружения мест нахождения радиоактивных компонентов на хроматограммах (электрофореграммах) используют авторадиографию, радиометрию (в том числе сканирование) или проводят хроматографирование (электрофорез) со свидетелем — неактивным аналогом определяемого вещества. Измерения скоростей счета должны проводиться на радиометрической установке с соответствующим детектором, выбор которого зависит от типа и энергии излучения радионуклида. При работе с препаратами, испускающими достаточно интенсивное гамма-излучение, измерения следует проводить по гамма-излучению. В этом случае удобен, например, сцинтилляционный гамма-счетчик с колодцем. Измеряют скорости счета от участков хроматограммы (электрофореграммы), содержащих основное вещество или определенную радиохимическую примесь, относят их к скорости счета от всей хроматограммы (электрофореграммы) и результат выражают в процентах. Радиохимическая чистота РФП может изменяться со временем под действием различных факторов (радиационное разложение, окисление, воздействие света, температуры и т.д.). Значения радиохимической чистоты, приводимые в фармакопейных статьях на конкретные препараты, указывают на конец срока годности данного РФП. [c.72]

При испытаниях на чистоту примеси и основное вещество в условиях хроматографирования должны иметь разные значения R . При этом условии можно судить о степени чистоты анализируемого вещества по величине и интенсивности окраски обнаруживаемых на хроматограмме пятен примесей. Содержание примесей может быть определено полуколичествен-но. Для этого на одном листе бумаги одновременно получают хроматограмму определенного количества анализируемого вещества и несколько хроматограмм образца определяемой примеси (свидетеля), взятого в различных, точно отмеренных количествах. Содержание примеси в анализируемом образце оценивают, сравнивая ее пятно на хроматограмме по совокупности величины и интенсивности окраски с пятнами свидетеля. При достаточном сходстве пятен примеси по форме и окраске с пятнами основного вещества, взятого в том же количестве, допускается использование соответствующих количеств основного вещества в качестве свидетелей при хроматографировании. Количественное определение веществ после хромато- [c.99]

Если по условиям исследования необходимо идентифицировать разделяемые аминокислоты, то на стартовую линию хроматограммы наносят также свидетелей — искомую аминокислоту или смесь аминокислот известного состава, которые легко разделяются при хроматографировании. [c.27]

Растворитель помещают в ванночку, закрепленную внутри цилиндра. Воздух в цилиндре насыщают водой и закрывают герметично стеклом. Хроматографирование проводят при 15° С. Параллельно получают хроматограмму с раствором эталонов, или свидетелей , которые наносят на ту же полосу бумаги рядом с исследуемым образцом. В качестве эталонов берут отдельные катехины или стандартный препарат чайного таннина с заранее известным составом катехина. Этим методом получены довольно четкие хроматограммы индивидуальных веществ. Метод используют для качественного анализа. [c.208]

Качественный анализ бумажных хроматограмм производится в основном такими же методами, что и анализ колоночных хроматограмм. Простым и убедительным способом анализа бумажных хроматограмм является так называемый способ свидетелей. Согласно этому способу на одной и той же полосе бумаги хроматографируют исследуемую смесь веществ и отдельно набор веществ, присутствие которых в исследуемой смеси предполагается. Растворы наносятся на бумагу в один ряд. После окончания хроматографирования и проявления зон производится визуальное сопоставление положения пятен известных веществ с положением пятен неизвестных веществ. [c.326]

Если возможно, то лучше осуществлять хроматографирование со свидетелями . Для этого на одной полосе бумаги, рядом с местом нанесения исследуемого раствора, помещают по одной или по несколько капель растворов чистых веществ, предположительно входящих в состав исходной смеси, и после хроматографирования наглядно сравнивают расположение полученных пятен (зон). Естественно, что данный прием требует применения соответственно более широкого куска фильтровальной бумаги и, следовательно, более широкого герметического сосуда для проявления хроматограммы. Если в распоряжении экспериментатора имеется лишь цилиндрический сосуд, диаметр которого меньше ширины бумаги для хроматографирования со свидетелями, то можно вести процесс на бумаге, свернутой в спиральный цилиндр, как показано на рис. 192. Разумеется, при этом бумага должна быть достаточно плотной. [c.302]

ДЛЯ подвешивания после хроматографирования. В центральное отверстие вставляют скрученный из фильтровальной бумаги фитиль длиной 1,5—2 см. На точки вокруг фитиля наносят растворы исследуемой смеси и контрольных веществ ( свидетелей ) и кладут бумагу на круглый плоский сосуд с растворителем так, чтобы фитиль был в него погружен. Весь прибор помещают в камеру того же формата. Проявляющий растворитель поднимается по фитилю и равномерно распространяется по фильтровальной бумаге, образуя фронт в виде окружности и зоны соответствующей формы (рис. 193, б). [c.303]

Коэффициент распределения для каждого соединения является характерной величиной. Для большого числа веществ значения Rj приведены в специальных таблицах, поэтому легко можно определить, какому веществу соответствует найденная величина. Значения R,f существенно зависят от температуры, растворителя, качества бумаги и других факторов. Поэтому при идентификации вещества следует для сравнения параллельно хроматографировать пробу чистого препарата этого же вещества — свидетеля . По этому способу на расстоянии 3—4 сж в ту и другую сторону от капли смеси на той же линии старта наносят капли свидетеля . После хроматографирования и выявления пятен сопоставляют положение пятен компонентов исследуемой смеси с положением пятен свидетеля . [c.84]

Все изученные пробы показали основной максимум > С-ак тивности для фракции 4, и все, кроме одной, имели значительный пик для фракций 8 или 10. Хроматограмма для С-холестерина в дистиллированной воде имеет, однако, несколько иной-вид (см. рис. 18.6,г). Там небольшие пики активности дают фракции 4, 5 и 8, а самый высокий — фракция 17 наименьшая активность наблюдалась у фракций 13 и 15. При этом неясно, почему единственное соединение в дистиллированной воде дает на хроматограмме несколько пиков. Возможно, что одной из причин является то, что дистиллированная вода была не совсем чистой. Однако более вероятным объяснением является то . что часть холестерина находилась в воде в агрегированном состоянии, а не в растворенном. Эти агрегаты и могли попасть при хроматографировании на колонке в различные фракции в соответствии с размером частиц. Тот факт, что некоторое количество вещества элюируется во фракциях, собранных после фракций, содержащих низкомолекулярные вещества vo+Vi), свидетель- [c.211]

Количественное определение спиртов ряда С] —Се по оптической плотности элюатов). При фотометрировании предварительно ютовят стандартную шкалу (табл. 41), т. е. подвергают хроматографированию свидетели , соответ ствующие 1—4—8—12—16—20 мкг каждого нз спиртов ряда С -С . [c.303]

При хроматографировании пластины с закрепленным слоем устанавливают в камере с растворителем как наклонно, так и вертикально, а пластины с незакрепленным слоем — т)лько в слегка наклонном положении. Сторону пластины, на котфой находится линия старта с нанесенными пробами исследуешх смесей и свидетелей , погружают в растворитель на 5—10 м. Процесс разделения останавливают, когда фронт растворител подойдет к противоположному от линии старта краю пластинЕ. Фронт растворителя должен продвинуться на 10—15 см. Более длительное хроматографирование приводит к заметному размывяию зон. [c.240]

Другим методом описания положения пятна является отнесение его к положению одновременно хроматографированного вещества сравнения X ( свидетеля ). Положение пятна тогда выражают равенством [c.129]

После хроматографирования на бумаге анализируемого раствора, содержащего смесь двух анионов X и Y, с применением в качестве ПФ смеси пиридина и воды (90 10 по объему) и в качестве стандарта — раствора, содержащего бромид-ионы ВГ, получено Л/ВГ) = 0,47. Л/Х ) = 0,21, Л/Y ) = 0,70. В тех же условиях для свидетелей хлорвд-ионов СГ и иодид-ионов Г навдены относительные коэффициенты подвижности (СГ) = 0,49 и / (l ) = 1,51. [c.287]

В качестве свидетелей используют свободный ДНФ, а также мо-но- и ди-ДНФ-производные лизина. Эти соединения окрашены в желтый цвет и определение их локализации на хроматограмме не требует специальной обработки. Для обнаружения свободного лизина хроматограммы обрабатывают нингидрином (с. 129). В указанных условиях хроматографирования свободный лизин располагается вблизи линии старта, далее в порядке удаления от нее следуют моно-ДНФ-про-изводное лизина (е-ЫНг-ДНФ-лизин), имеющее после обработки нингидрином буро-коричневое окрашивание, свободный ДНФ и ди-ДНФ-производное лизина. Для количественного определения моно- и ди-ДНФ-производных лизина соответствующие участки хроматограммы вырезают, элюируют 1%-ным раствором ЫаНСОз и измеряют оптическую плотность элюатов при 360 нм. [c.148]

Разделенные на хроматограмме углеводы идентифицируют по величине Rf или / ксилоэа, по окраске пятяа с проявителем и при сопоставлении со свидетелями. В последнем случае на полоску хроматографической бумаги вместе с исследуемым раствором наносят растворы известных моносахаридов. После хроматографирования и проявления местоположение известных моносахаридов сравнивают с положением определяемых моноз и устанавливают их природу. [c.74]

В этилацетатпой фракции хромотографией на Силуфоле в системе хлороформ-этил-ацетат-муравьипая кислота- вода (20 50 5 45) обнаружили на уровне свидетелей хлорогепо-вую и кофейную кислоты, а также - следы феруловой кислоты. Пятна этих веществ в УФзбб флюоресцировали голубым, а после проявления щелочью зеленовато-желтым цветом. При хроматографировании в системе хлороформ-метапол-вода (26 14 3) и обработке Силуфола 5 % спиртовым раствором хлорида алюминия было найдено четыре пятпа веществ желтой ок- [c.53]

При соблюдении постоянныш условий хроматографирования значение для кавдого соединения является величиной постоянной,, характеристической. Изменение какого- ибо условия хроматографирования (качество бумаги, чистота растворителя, тешература и т.п.) приведет к изменению величины 2.J , Если величину используют для, идентификации неизвеотнсго вещества, то целесообразно одновремга-но проводить хроматографирование соединения заведомо известного состава (свидетель). [c.68]

Основной характеристикой вещества при хроматографировании является коэффициент подвижности 7 /, который определяется как отношение пути, пройденного веществом, к пути, пройденному растворителем. В химии углеводов можно встретить и другие выражения для величины подвижности. Так, Форзит использовал в качестве свидетеля ксилозу и определял коэффициент подвижности как отношение расстояния, пройденного веществом, к расстоянию, пройденному ксилозой в тех же условиях. Браун применил в качестве свидетеля 2,3,4,6-тетраметил-глюкозу и определял подобным же образом величину Rg. [c.187]

Выполнение анализа. В две конические колбы помещают две навески полимера по 0,3 г, взятые с погрешностью не более 0,0002 г, в одну заливают 10 мл метанола (для растворения свободного додекаметилендиамина), а в другую—10 мл этанола (для растворения свободного пиромеллитового диангидрида). Интенсивно перемешивают и выдерживают при комнатной температуре 24 ч. Затем, отфильтровав осадки, экстракты упаривают до 2 мл на воздухе при комнатной температуре. Хроматографирование проводят восходящим способом на пластинках 811и1о1 в системах 1 и 2. На две пластинки наносят по 7-10 мл экстрактов и 1 %-ные растворы свидетелей на одну пластинку 1 %-ный раствор пиромеллитового диангидрида в этаноле, на другую—1 %-ный раствор додекаметилендиамина в метаноле. Пластинки опускают в камеру со смесью растворителей и проводят хроматографирование до тех пор, пока слой растворителя не достигнет линии фронта. После окончания разделения хроматограммы сушат на воздухе 24 ч, затем проявляют, опрыскивая их раствором бромфенолового синего. Визуальным сравнением интенсивности окраски пятен проб и свидетелей находят и рассчитывают содержание мономеров. Предел обнаружения примесей — не менее 0,1%. [c.202]

Методика опыта. Для хроматографирования берут полоски бумаги длиной 45—55 см, шириной 12—18 см. Полученный экстракт дубильных веществ и раствор свидетелей наносят микропипеткой на бумагу в количестве 5—10 мкг на расстоянии 6 см от конца бумаги с соблюдением интервалов между пятнами 1,5—2 см. Длительность хроматографирования составляет 16—24 ч (в зависимости от сорта бумаги). В качестве хроматографической камеры применяют обыкновенный цилиндр высотой 60 см, диаметром 20 см. [c.208]

В сухом остатке после отделения полисахаридов и упарки метанола были обнаружены простые сахара и аминокислоты. При двух-кратном хроматографировании этого остатка на пластинках Силуфол в системе хлолроформ-метанол-вода (61 32 7) на уровне свидетелей были найдены фруктоза, сахароза и следы глюкозы. В качестве проявителя использовали 20 % раствор серпой кислоты с последующим нагреванием пластинки при температуре 100-110 С до появления желто-бурых пятен. В тех же условиях хроматографирования данного остатка в системе этанол-аммиак (16 4,5) и опрыскивания пластинки 0,2 % ацетоновым раствором пингидрипа было отмечено шесть розовых пятен аминокислот. Из них четыре пятна находились на уровне нятен свидетелей аспарагиновой и глютаминовой кислот, гистидина и цистипа [4]. При этом значительно доминировали аспарагиновая и глютаминовая кислоты. [c.54]

Использование различных видов хроматографии (ВЭЖХ, ГЖХ, тех) для разделения и идентификации компонентов лекарственной формы. Например, в ТСХ-анализе применяют пластинки Силуфол УФ-254 . На них наносят раствор или хлороформную вытяжку из лекарственной формы и раствор стандартного образца вещества-свидетеля. После хроматографирования в предварительно подобранных условиях пятна на хроматограмме проявляют с помощью цветных реакций или УФ-света. Такие методики применимы в анализе мазей и аэрозолей, содержащих [c.148]

О,(ЮЗ мл, или 15 мкг. испытуемого препарата н высушивают в токе ТРПЛОРО воздуха. Скорость счета 6000—7000 umiiImuh. На стартовые линии двух других полосок наносят по 60 мкг вещества-свидетеля, приготовленного, как указано выше. Высушенные полоски вносят в хроматографическую камеру. Время хроматографирования 40 ч. [c.43]

Измеряют и сравнивают значения активпостп полученных на хроматограмме пятен исследуемого вещества и свидетеля . Допускается отклонение не более чем па 5% при тождественных условиях хроматографирования. [c.95]

Значение для каждого соединения при определенных условиях является константой. Для многих веществ эти значения часто приводятся в справочной литературе и могут применяться для идентификации веществ. В то же время значения существенно зависят от условий хроматографирования растворителя, температуры, природы и качества сорбента и др. Поэтому более надежным доказательством идентичности исследуемого вещества заведомому стандарту является совпадение величин полученных на одной хроматограмме, а не путем сравнения со справочными данными. С этой целью вещество заведомого строения, называемое свидетелем (в рассматриваемом примере — это вещества А и Б), хроматографируют совместно с анализируемым веществом или смесью. Но и при этом необходимо учитывать, что совпадение значений свидетеля и анализируемого вещества не является полной гарантией тождественности обоих веществ, так как не исключается возможность простого совпадения. Одинаковые значения полученЛ1е при хроматографии в различных растворителях, значительно повышают надежность идентификации. [c.488]

Техника хроматографирования излол ена в работе 4. В качестве исследуемой смеси и свидетелей берут глюкозу, рамнозу и арабинозу (содержание каждого компонента в смеси около 80—100 мкг). Растворитель содержит н-бутиловый спирт, ацетон и воду в соотношении 7 2 1. По окончании хроматографирования бумагу высушивают в сушильном шкафу при 110° в течение 5— [c.129]

Хроматографирование экстракта. На стартовую линию, расположенную на расстоянии 1—2 см от края пластинки, наносят калибрированной микропипеткой 0,1 М.Л анализируемого раствора и растворы свидетелей эталонных веществ на расстоянии 2 см друг от друга. Пластинку помещают в хроматографическую камеру. [c.92]

В процессе хроматографирования и элюирования, как правило, имеют место незначительные потери хроматографируемых веществ. Чтобы исключить влияние этих потерь на точность результатов, калибровочные данные мы получали в условиях проведения анализа. Для этого на хроматографическую бумагу из этанольного раствора была нанесена серия пятен с содержанием 20 40 60 80 100 120 и 140 мкг серпентина в пятне. После хроматографирования и элюирования этанолом измеряли оптическую плотность полученных элюатов каждого пятна по отношению к свидетелю — элюату из полосы чистой бумаги. Каждое значение оптической плотности, использованное для построения калибровочного графика, есть средняя величина, полученная из пяти параллельных опытов. [c.239]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология