Противоточное хроматографией на бумаге

Ввиду того, что различия в растворимостях полипептидов очень невелики, для выделения индивидуальных пептидов и.з смесей требуются специальные методы. К ним относятся фракционный диализ, распределительная хроматография (например, на колонке из бумажного порошка или листе бумаги), адсорбционная хроматография, ионнообменная хроматография, электрофорез и противоточное распределение по Крэйгу (т. е. распределение между двумя ограниченно смешивающимися жидкостями). Для характеристики выделенных пептидов и доказательства их однородности применяют противоточное распределение, количественный анализ аминокислотного состава и определение концевых групп полипептидной цепи. [c.383]

Изотерма, характеризующая состояние равновесия в двухфазной системе, при высоких концентрациях растворенного вещества перестает быть линейной и приобретает вид изотермы, характерной для адсорбционной хроматографии. Это, естественно, проявляется в изменении формы полосы, которая теперь уже не соответствует кривой Гаусса, а описывается кривой, деформированной в том или ином направлении. Здесь снова можно провести аналогию с противоточным распределением. Однако, если при противоточном распределении упомянутые аномалии ухудшают разделение лишь при очень высоких концентрациях (см., например, стр. 434, [124]), распределительная хроматография в этом отношении гораздо более чувствительна. В целом, сравнивая противоточное распределение, адсорбционную и распределительную хроматографию, можно сказать, что распределительная хроматография обладает наименьшей емкостью. В то время как для адсорбционных колонок оптимальное соотношение между веществом и адсорбентом составляет 1 30—1 100, для распределительной хроматографии это соотношение следует выбирать в интервале 1 1000—1 3000. Хроматография на бумаге характеризуется еще более низким значением этого отношения. [c.447]

На приборе, изображенном на рис. 478, можно осуществить разделение до 1 г смеси веществ. Положение зон бесцветных веществ можно обнаружить способами, используемыми при распределительной хроматографии (стр. 462) или противоточном распределении (стр. 429). После окончания разделения к слою геля можно, например, приложить лист фильтровальной бумаги, в которую диффундирует часть вещества с поверхностного слоя геля. Затем на бумаге можно обнаружить вещества любым из способов, применяемых при хроматографии на бумаге (стр. 462). Вещества, поглощающие свет в видимой или ультрафиолетовой области спектра, можно обнаружить следующим образом. Гель разрезают на узкие полоски параллельно стартовой линии, полоски элюируют и измеряют поглощение элюата при помощи спектрофотометра. После обнаружения разделенные вещества можно выделить из геля экстракцией или другим подходящим способом и получить их таким образом в чистом состоянии. [c.536]

Только благодаря появившимся в начале 40-х годов новым методам, вопрос об определении аминокислотного состава получил свое полное и окончательное разрешение. В настоящее время основными способами такого определения являются следующие 1) распределительная хроматография 2) ионофорез 3) электрохроматография 4) ионообменная хроматография и 5) противоточное распределение. Последним методом пользуются главным образом при разделении пептидов. Метод распределительной хроматографии на бумаге, разработанный в 1941 г. Гордоном, Мартином и Синджем, положил начало новой эры в развитии химии белка. [c.479]

Для предварительного разделения пептидов на фракции часто применяют так называемый четырех- или пятикамерный электрофорез. Он позволяет отделить основные, кислые н нейтральные пептиды друг от друга. Каждую из фракций можно подвергнуть затем разделению яри помощи ионообменной хроматографии, микропрепаративным электрофорезом на бумаге или противоточным распределением, ограничиваясь при этом несколькими миллиграммами вещества. В качестве примера представлена схема разделения химотрипсиногена, проведенная Шор-мом с сотрудниками (см. схему на стр. 517). Прекрасные результаты дает метод Хирса, Мура и Штейна— автоматическое разделение пептидов на смоле Дауэкс-50. Строение пептидов, полученных в результате разделения, устанавливают. описанными выше методами. [c.519]

Предполагалось, что дикетопиперазины вкраплены в пептидную цепь и разделяют ее на небольшие отрезки. Переломным и решаюш им явился 1941 г., когда Гордон, Мартин и Синдж предложили применять для разделения продуктов гидролиза белков метод хроматографии на бумаге. Появившиеся вслед затем методы электрофореза, противоточного распределения и метод ионообменных смол позволили исследователям получить необходимый для обоснования теории строения белка экспериментальный материал. [c.521]

Перекристаллизация до достижения постоянной температуры плавления — вероятно, самая простая методика очистки и характеристики чистоты твердых кристаллических веществ. Обычно этого бывает вполне достаточно, но в ряде случаев применение этой или какой-нибудь другой характеристики гомогенности вещества но одному единственному критерию может привести к серьезным ошибкам. Так, например, образование смешанных кристаллов может сильно затруднить разделение двух веществ, в то же время четкая температура плавления, не меняющаяся при перекристаллизации, будет создавать видимость чистоты вещества. Необходимо использовать, по крайней мере, два метода очистки, например хроматографию и кристаллизацию, при этом в первом случае можно менять адсорбенты, а во втором — растворители для перекристаллизации. Чтобы выявить скрытые смеси, проводят операции до тех пор, пока не перестанут изменяться все физические свойства, которые могут быть определены. Практически обычно добиваются постоянства температуры плавления и оптического вращения (для жидкостей — температуры кипения и показателя преломления), а также прекращения изменений тонкой структуры ИК-спектра. Если это возможно, то дополнительно проводят хроматографирование на бумаге (до получения одного пятна в разных системах растворителей) и сравнение экспериментальных и расчетных данных при противоточном распределении. [c.29]

В плане этих общих подходов электромиграционный метод близок к хроматографии (те же два основных направления повышения эффективности разделения) — поиск методических приемов лучшего разрешения зон при постоянных Кс и использование химических превращений с целью увеличения Кс. Похожи и основные схемы практического осуществления процесса разделения на колонке, на бумаге, в тонком слое. Возникший на заре развития электромиграции метод подвижной границы внешне аналогичен фронтальному анализу в хроматографии. В этом случае движение разделяемых ионов в электрическом поле происходит непосредственно из раствора их смеси. В наиболее распространенном случае зонного электрофореза просматривается общность с проявительным режимом элюирования в хроматографии. Узкая полоса исходной смеси веществ в среде определенного электролита разделяется на индивидуальные зоны. Существует внешняя аналогия противоточного и двухмерного электромиграционного разделения с соответствующими способами осуществления хроматографического процесса. Поэтому при всем принципиальном различии методов по природе химических процессов, лежащих в их основе, хроматографию и электрофорез иногда даже рассматривают как смежные методы [95]. [c.243]

Для разделения смесей кислот, выделенных из жиров гидролизом, применяют разнообразные методы, например кристаллизацию при низкой температуре, образование комплексов с мочевиной и с циклическими декстринами (клатратное разделение — см. гл. 4), противоточную экстракцию и хроматографию в различных формах, но главным образом хроматографию на бумаге и газожидкостную хроматографию. Последний метод наиболее перспективен. [c.393]

Если предположить, что хроматография на бумаге представляет собой процесс непрерывной противоточной экстракции, а распределение вещества между двумя несмешивающимися жидкими фазами близко к состоянию равновесия, то зависимость скорости перемещения зоны вещества а и фронта растворителя Ь представится формулой, применяемой в теории противоточной экстракции [c.454]

В заключение необходимо отметить, что за последнее десятилетие достигнуты большие успехи в анализе, выделении и идентификации катехинов. Разработаны методы их количественного определения при помощи хроматографии на бумаге и методы препаративного выделения нри помощи хроматографии на колонках силикагеля и целлюлозы. Для предварительного разделения многокомпонентной смеси катехинов чайного растения применено противоточное распределение. Однако препаративное выделение катехинов все еще остается сложной задачей для экспериментатора. В будущем необходимо подобрать более эффективные системы растворителей для противоточного распределения, а также попробовать применить слабые адсорбенты (например, полиамиды или родственные им полимеры) для колоночной хроматографии катехинов. [c.92]

Для разделения смеси изомеров использованы методы хроматографии на бумаге или силикагеле, газо-жидкостной хроматографии, низкотемпературной кристаллизации и противоточной экстракции. Строение выделенных изомеров доказано данными ИК- и ЯМР-спектроскопии в " . [c.15]

Анализ. Для разделения различных П. применяют ионообменную и гелевую хроматографию, электрофорез в жидкой среде или на бумаге, иммуноэлектрофорез в агаровом или полиакриламидном геле, а также фракционное осаждение, экстракцию и противоточное распределение. [c.15]

При изучении однородности антибиотиков методом хроматографии на бумаге следует постоянно иметь в виду возможность ошибок при неправильном истолковании результатов. Особенно осторожно необходимо оценивать выводы об однородности вещества, сделанные на основании- наличия на хроматограммах только одного пятна даже при хроматографировании в нескольких системах. Дело в том, что данные хроматографии на бумаге нельзя подвергнуть математической обработке, в отличие, например, от метода противоточного распределения. [c.24]

Для этой цели чаще всего применяется хроматография на бумаге или на колонке, но может быть использовано и противоточное экстрагирование по Крейгу [98]. [c.413]

Расшифруем некоторые из записанных таким образом способов разделения, приведенных на рис. 8. Два движения, обеспечивающих различные скорости движения частиц смеси, расположенные под прямым углом друг к другу, запишутся как W°W . При этом могут в одном направлении двигаться все частицы, а в другом только часть из них. Как пример такого способа разделения можно привести комбинации электрофореза с хроматографией на бумаге. Похожего эффекта разделения можно достичь включением вместо движения с равным углом. Практически этот случай реализуется, например, в хроматографии на бумаге с вращающимся бумажным барабаном или при сочетании свободного электрофореза с седиментацией. Вклад достигается здесь механическим перемещением всего разделяющего наполнителя поперечно к направлению движения W. При этом все частицы движутся в обоих направлениях. Время разделения (при лучшем его качестве) значительно уменьшается при использовании схемы противотока По этой схеме организованы, например, про-тивоточный электрофорез или газохроматографический метод, при котором против тока газа-носителя движется разделяющий наполнитель (вниз по вертикальной колонке). Схема W°V позволяет при непрерывном ее исполнении разделить только два компонента. Для того чтобы можно было осуществлять непрерывное противоточное разделение многочисленных компонентов, реализуют схему ГО ОУ У . Движение У выносит отдельные частицы из противотока. [c.47]

Титус [4] подробно описал получение 5-этил-5-( 1-метилбу-тил)барбитуровой-2-С кислоты по методу, в основных чертах совпадающему с описанным. Однородность препарата была установлена методами хроматографии на бумаге ( -бутиловый спирт, содержащий 1% аммиака) [5] и противоточного распределения (хлороформ и водный буферный раствор при pH 9,5). [c.124]

Для определения содержания "8 в смеси различных типов пенициллина применяются также методы разделения, основанные, главным образом, на хроматографиче-ской адсорбции во, распределительной хроматографии и (в том числе — на бумаге ч ) и противоточном распределении . [c.514]

В классический период развития органической химии, длившийся почти столетие, экспериментатор обходился, как правило, небольшим числом сравнительно простых типовых методов. Для овладения экспериментальной техникой тех лет достаточно было научиться осуществлять синтез нескольких десятков соединений, так как основные операции выделения и очистки веществ часто повторялись и мало отличались друг от друга. За последние десятилетия арсенал методов и приемов, применяемых в органической лаборатории, неимоверно вырос. Особенно много принципиально нового введено в методы выделения веществ, эффективность которых неизмеримо возросла благодаря внедрению различных видов хроматографии, противоточного распределения, электрофореза и т. д. Появился целый набор специальных приемов для работы в микро- и полу-ми кромасштабах. Такие методы, как хроматография в тонких слоях и на бумаге, в сочетании с физическими методами идентификации и контроля позволили органикам непрерывно следить за ходом химических реакций или процессов разделения веществ. [c.5]

Для полноты укажем, что процессы распределения веществ между двумя жидкими фазами при многократном повторении лежат в основе еще одного важного метода хроматографии— распределительной хроматографии. В распределительной колоночной хроматографии, внешне не отличающейся от адсорбционной, один из растворителей пропитывает материал (силикагель, крахмал, целлюлозу), наполняющий колонку, причем этот материал является лишь носителем одного растворителя. Исследуемая смесь наносится вверху колонки. Второй растворитель протекает через колонку и в процессе течения происходит многократное распределение разделяемой смеси вещества между двумя растворителями и, в результате — полное разделение компонентов. В качестве носителя неподвижной фазы может быть взята фильтровальная бумага. Развитая на этой основе хроматография на бумаге (Мартин, Синг) получила исключительное значение для целей анализа. Наконец, многократрюе использование (до 250—1000 раз) распределения между двумя жидкими фазами, без применения носителя, также широко распространено в виде метода противоточного распределения (Крэйг). [c.129]

После разъединения полипептидных цепей белка удается выделить отдельные цепи в чистом виде, что сложнее сделать в случае длинных полипептидных цепей [306], чем коротких цепей, для выделения которых в чистом виде можно применять различные методы, например хроматографию на бумаге [320] и на колонке [219, 277], противоточное распределение [331] и ионофорез [10, 266]. В окисленном инсулине, в котором обе цепи сильно различаются по кислотности из-за неодинакового аминокислотного состава, разделение цепей удается осуществить фракционированием солей [263], ионофо-эезом [143, 263], распределительным хроматографированием 6] или противоточным распределением [190, 240]. Окисленный химотрипсин, содержащий три пептидные цепи, дает три фракции с характерными свойствами, позволяющими разделять их. комбинацией метода осаждения при pH 6 и ионообменного хроматографирования створимого вещества. [c.177]

Хроматография на бумаге возникла как вариант распределительной хроматографии на столбике целлюлозы. Фильтровальная бумага является носителем неподвижной фазы, а система растворителей — подвижной фазой, которая перемещается по хроматограмме под действием капиллярных сил. В ячейках бумаги протекает процесс, в какой-то мере аналогичный противоточному распределению. Скорость перемещения определяемого вещества по бумаге выражают величиной Рр (см. разд. 2.7). На значение Рр оказывают влияние следы посторонних ионов в растворителях, изменение температуры, неоднородность бумаги и т. д. Значения Нр для различных веществ в большинстве случаев пропорциональны их коэффициентам распределения. Консден, Гордон и Мартин [4] выявили зависимость между коэффициентом распределения и скоростью перемещения анализируемого соединения она описывается уравнением [c.21]

Полученные таким обраэом липиды Содержат часто также свободные аминокислоты и пептиды, сахар и другие гидрофильные природные вещества, которые попадают в экстракт при добавлении веществ, способствующих растворению, например лецитинов. Отделение этих примесей затруднительно. Для отделения липидов от нелипидов пригодна хроматография на колонках с целлюлозой по Леа и Родесу [70] и препаративная хроматография на бумаге с применением растворителей, описанных Вестлеем, Вреном и Митчеллом [139]. Рекомендуется противоточное распределение [9, 53, 105]. [c.146]

Как и в случае других распределительных методов — противоточного распределения [1], распределительной хроматографии с обращенной фазой на колонках [118] или на пропитанной бумаге [117] — при ХТС на гидрофобизованных слоях определенные насыщенные и Ненасыщенные соединения перемещаются в виде одного пятна. Например, одно пятно образуют метилолеат ( j8, одна двойная связь) и метилпальмитат ( ie, насыщенное соедине- [c.170]

Хебулаговая кислота и корилагин являются первыми таннинами, полученными в чистом кристаллическом состоянии они были выделены из миробалана и диви-диви (О. Т. Шмидт, 1948 г.). Для очистки этих соединений применялись современные хроматографические методы — хроматография на бумаге и противоточное распределение. [c.189]

ПО анализу и температуре плавления смешанной пробы была идентифицирована как метилэтилсульфон H3SO2 H2 H3. Аналогичный результат был получен при введении диэтилдисульфида морским свинкам. Затем были проведены опыты с применением S-этильных соединений, меченных Радиоактивный сульфон сравнивался с радиоактивными концентратами мочи, полученными при помощи хроматографии на бумаге и противоточного распределения. В трех различных системах растворителей препараты давали пятна, почти одинаковые по положению. Этот результат, был подтвержден методом противоточного распределения. [c.237]

Дез-(Asp )-Val -Ангиотензин II [1824]. Это соединение получено конденсацией карбобензоксинитро-ь-аргинина и эфира гексапептида H-Val-Tyr-Val-His-Pro-Phe-OMe карбодиимидным методом. Защищенный гексапептид очищали противоточным распределением (60 переносов метанол/вода/хлороформ/бензол, 3 1 3 1) проверка с помощью хроматографии на бумаге показала, что даже очищенный гексапептид содержал около 20% примесей. Свободный гептапептид, полученный каталитическим гидрогенолизом, кислотным гидролизом и очищенный противоточным распределением (100 переносов), имел такую же активность, как и Gly -Val -ангиотензин.II (50% активности природного гормона). [c.85]

Ундекапептид (I 8—18) получали взаимодействием Н 8—13 и Н 14—18 (N, N -дициклогексилкарбодиимид, 3 дия). Путем противоточного распределения (60 переносов) ундекапептид (I 8—18) выделяли в чистом виде с выходом 60%, затем его гидрировали и получили гомогенный (по данным хроматографии на бумаге) аминоэфир (К 8—18). Последний коиденсиро- [c.245]

Аналогичным образом из тиомочевины-С получена [2] 5-этил-5- ( 1-метилбутил) -2-тиобарбитуровая-2-С кислота. Винтерсом описаны [3] методы хроматографии на бумаге и на колонке, а также противоточного распределения соединения. [c.124]