Трипсин на казеине

Определение протеолитической активности трипсина основано на количественном определении тирозина в продуктах расщепления казеина. В качестве реагента на тирозин используется фенольный реактив, дающий с тирозином синее окрашивание, интенсивность которого определяется колориметрически. [c.52]

Рис. 12.2. Температурные зависимости гидролиза казеина свободным и связанным трипсином (быка) [5]. Реакционные смеси содержали 10 мкг свободного или 100 мкг связанного на носителе трипсина в 1,6 мл фосфатного буфера (pH 7,5). / — свободный трипсин 2 — трипсин, связанный с КМ-целлюлозой 3 — трипсин связанный с малеиновым сополимером.

Какой из двух препаратов трипсина будет иметь большую удельную активность, если 2 мг трипсина одного препарата гидролизует за 1 мин при 25 °С 200 мкмоль казеина, а 5 мг трипсина другого препарата в тех же условиях — 500 мкмоль. [c.56]

Пепсин проявляет наибольшую активность в зоне pH 1,5—2,5 в то время как трипсин при этом значении pH полностью теряет способность гидролизовать белки (например, казеин). Оптимум действия трипсина лежит при pH около 8—9. При значениях pH ниже или выше оптимальной зоны активность фермента постепенно снижается. [c.123]

Ход работы. 1. В пять пробирок наливают по 1 мл раствора казеина, по 1,5 мл фосфатного буфера, затем добавляют в четыре пробирки по 0,5 мл раствора трипсина, а в пятую пробирку (контрольную) перед добавлением трипсина вносят 3 мл ТХУ. Затем пробы инкубируют в термостате при 37 С. [c.58]

К полученным буферным растворам добавляют по 1 мл раствора казеина и по 0,5 мл раствора трипсина. Пробы перемешивают и инкубируют 15 мин при 40 °С в термостате. [c.63]

Реактивы казеин, 1%-ный раствор фосфатный буфер, 0,1 моль/л раствор (pH 8,0) ТХУ, 5%-ный раствор трипсин, 5-10 %-ный раствор в 0,005 моль/л H l гидроксид натрия, 0,5 моль/л раствор фенольный реактив. [c.58]

Материал исследования трипсин кристаллический. Реактивы казеин, 1%-ный раствор фосфатный буфер, [c.71]

Ход работы. 20 мл 4—5%-ного раствора казеина в 0,5%-ном растворе соды смешать с 2—3 мл раствора трипсина и оставить в термостате при 37° С на 30—40 мин. После этого жидкость осторожно подкислить до слабокислой (на лакмоид) реакции и отфильтровать выпавший осадок щелочного альбумината. Фильтрат нагреть до кипения, при этом выпадает в осадок белок. Жидкость фильтровать еще горячей и в фильтре открыть альбумозы и пептоны (как в предыдущей работе), а затем открыть свободный триптофан, для чего 5—3 мл гидролизата нейтрализовать уксусной кислотой, добавить 1 мл амилового спирта, и затем по каплям свежеприготовленную бромную воду. Хорошо встряхнуть. В присутствии триптофана слой амилового спирта окрашивается в красно-фиолетовый цвет. [c.189]

Обычно белковые вещества расщепляются трипсином скорее, чем пепсином, однако белки кровяной сыворотки и соединительной ткани скорее расщепляются пепсином. Переваривание белков трипсином можно наблюдать на фибрине или казеине, которые под действием трипсина претерпевают глубокое гидролитическое расщепление. [c.160]

В колбочку наливают 25—30 мл вытяжки трипсина или раствора панкреатина и помещают туда 3—5 г казеина. [c.162]

По сравнению с неорганическими катализаторами ферменты обладают более сильным действием. Так, для разложения перекиси водорода на воду и кислород без катализатора требуется энергия активации 18 000 кал. на 1 моль, при использовании в качестве катализатора коллоидной платины энергия активации понижается до 11 700 кал. на 1 моль, а при действии фермента каталазы — до 5500 кал. Для гидролиза белка казеина соляной кислотой необходимо 20 600 кал., при использовании фермента трипсина — только 12 000 кал. на 1 моль. Эти примеры можно продолжить. [c.41]

Кристаллический химотрипсин, подобно трипсину, гидролизирует как белки, так и пептоны с образованием относительно низкомолекулярных пептидов. Он расщепляет по преимуществу те пептидные связи, на которые трипсин не действует. Это следует из того, что если на казеин воздействовать трипсином, а затем, по окончании триптического гидролиза добавить химотрипсин, то гидролиз белка продолжается. Равным образом казеин, предварительно гидролизованный химотрипсином, гидролизуется дальше добавленным трипсином. В некоторых случаях химотрипсин производит даже более глубокий гидролиз белка, чем трипсин, и при этом расщепляется почти половина пептидных связей в белковой молекуле. [c.334]

Протеазы. Яды гремучих змей и гадюк в отличие от элапид и морских змей характеризуются высоким содержанием термолабильных кислых протеаз (Jimenez-Porras, 1970). Протеазы змеиных ядов активно расщепляют как природные (казеин, гемоглобин, желатин), так и синтетические (ТАМЕ и ВАЕЕ) белковые субстраты (Д. Н. Сахибов с соавт., 1972). Следует отметить, что использование синтетических субстратов позволило Tu et al. (1965, 1966) показать, что яды гадюковых и гремучих змей гидролизовали специфичные для трипсина субстраты (ТАМЕ и ВАЕЕ), но на последний действовали активнее трипсина. Почти все указанные яды не действовали на субстраты, специфичные для химотрипсина. [c.86]

Трипсин представляет собой протеолитический фермент, получаемый из поджелудочной железы животных и поступающий в продажу в виде желтоватого или желтовато-серого порошка. С водой он дает мутный раствор. Его способность к растворению белка испытывают при помощи различных протеиновых веществ, как, например, куриный белок, фибрин, желатина, пептон из шелка, казеин, эдестин, рицин, молоко, гемоглобин и т. д. Далее будут приведены только те методы, " которые являются наиболее удобными для проверки продажного трипсина. [c.533]

Эрепсин, который может содержаться в препаратах трипсина, при этом определяться не будет, так как он на казеин не действует. Л. У.] [c.534]

Протеаза из сухих семян гороха была получена в очищенном виде [70] оказалось, что по своей удельной активности она близка к трипсину, имеет оптимум pH 8,0 (с казеином в качестве субстрата) и не нуждается для активации в сульфгидрильных группах. Роль этой протеазы, однако, неизвестна. В семенах гороха содержится также протеаза с оптимумом pH, варьирующим от 6 до 7, в зависимости от используемого субстрата. Активность этой протеазы максимальна в развивающихся семенах [24]. В семядолях земляного ореха содержится протеаза с оптимумом pH 8,0, по специфичности сходная с трипсином. Активность этой протеазы несколько возрастает при прорастании [40]. [c.480]

Триптофан — твердое вещество, т. пл. 289° С, плохо растворяется в воде. Получается при гидролизе белка с помощью фермента трипсина. В казеине молока содержится около 1,85% триптофана. Животным организмом триптофан не синтезируется. Он имеет важное биологическое значение. Недостаток в пище белков, содержащих триптофан, отрицательно сказывается на состоянии животного организма. [c.251]

Сывороточный белок Сывороточный глобулин Казеин Трипсин [c.399]

Трипсин представляет собой частично очищенный протеолитический энзим из поджелудочной железы переваривает 100 частей казеина. [c.336]

Гидролиз казеина. ....... Ионы водорода. ... Трипсин. ...... 20600 12000 [c.163]

Большинство прибавленного глютамина превраща/ется в неактивную пирролидонкарбоновую кислоту при повышенно м давлении. Время выдержки при повышенном давлении и температура должны строго контролироваться. Жирар и Снелл (не опубликовано) успешно замени.та малые кмичества переваренного трипсином казеина на глютамин. Такой препарат стабилен при повышенном давлении. Известно, что такой продукт энзиматического переваривания содержит вещество (или вещества), замещающие глютамин и аспарапш для молочнокислых бактерий [69, 110]. [c.202]

При исследовании испытуемых растворов трипсина казеина берут в 2 раза больше (1 мл). Если мутность в исследуемой пробе будет равна мутности в стандартной лробе, это значит, что перевариванию подверглось 50% взятого казеина. Условно принимается, что активность раствора трипсина, вызывающая такое расщепление, равна единице, [c.50]

Хсу с соавторами [29] и Саттерли с соавторами [58] описьь вают ускоренный метод, основанный на изменении pH, наблюдаемом в результате последовательного действия смеси трипсина, химотрипсина и пептидазы, а затем проназы. Таким путем они устанавливают степень гидролиза для изучаемого белка и стандартного белка казеина. [c.577]

Секрет поджелудочной железы, так называемый трипсин, подобие пепсину также коагулирует казеин молока, и если бы дело касалос [c.66]

Сравнивая оптимальные pH для различных групп ферментов, можно вывести такое заключение для сычужного действия характерно изоэлектрическое или близкое к нему состояние казеина, для пепти-аации пепсином требуется наличие положительного заряда в казеине. Для разрушения рептонов трипсином заряд протеина должен быть изменен на отрицательный. Иными словами, химозин действует на [c.67]

Если казеин будет кислый, легко наступит процесс образовани пептонов. Нейтрализация кислого казеина, в котором могут быт1 пептоны, может повести к образованию полипептидов и аминокислот Эти процессы могут протекать не только в случае применения пеп сина и трипсина для коагуляции, но и во всех случаях ведения про цесса не в специальных условиях, так как из воздуха попадают дрожж й бактерии, имеющие все ферменты для гидролиза протеинов Д аминокислот. С указанными изменениями казеина необходимо счи таться как в технологии казеина, так и в производстве белковы пластических масс. [c.68]

Реактикы казеин, 1%-ный раствор фосфатный буфер, /15 моль/л раствор (pH 5,4—8) ТХУ. 5%-ный раствор трипсин, [c.62]

В этой связи особый интерес представляет работа Фрица, Траучолда и Верле [69] по исследованию различных ингибиторов протеаз. Сначала на сефадексе Q-50 определяли молекулярный вес нескольких новых ингибиторов. При хроматографировании на сефадексе G-75 комплекс (1 1) трипсина (мол. вес 24 000) и его ингибитора (мол. вес 6500) элюируется в объеме, соответствующем молекулярному весу 26 ООО (вместо предполагаемого 30 500). Авторы объясняют это тем, что комплекс имеет, вероятно, очень компактную структуру (полагая при этом, что ингибитор частично внедряется в молекулу трипсина). Не связанный ингибитор отделяют от смеси комплекса и протеазы на колонке с сефадексом G-50. Авторы определили отдельные компоненты и таким путем нашли константу диссоциации комплекса в различных условиях. Размывания зон, вызываемого сопутствующей диссоциацией, в данном случае не наблюдалось. Аналогичным образом Ауричио [106] доказал образование комплекса фермент — субстрат. Например, трипсин в присутствии казеина элюируется на G-100 гораздо раньше ( мол. вес 100 000), чем в отсутствие субстрата. В то же время казеин не влияет на движение по колонке других белков. [c.178]

Тот факт, что растительная протеаза (бромелаин) вполне пригодна для заместительной терапии при нарушениях функции желудочно-кишечного тракта, был установлен при помощи сравнительной гель-хроматографии гидролизата казеина на сефадексе G-25 гидролизат получали, переваривая казеин бромелаином и (или) желудочным соком с последующей обработкой трипсином [107]. [c.226]

При гидролизе казеина трипсином получается дипентид, состоящий из этого эфира и глутаминовой кислоты (фосфосерилглутамиповая кислота). Остатки фосфорной кислоты придают казеину кислый характер (изоэлектрическая точка лежит при pH 4,6—4,7). [c.452]

Примечание. Этот метод, которым пользовались авторы, открывшие триптофан, имеет не только исторический интерес. Поль, зуясь И.М, авторы выделили из казеина 1,5% триптофана. Это количество совпадает с теми, которые получены в ряде колори-метрически.х определений или выше. Только один исследователь (Дэкин [183]) получил более высокие результаты, выделив из казеина 1,7% триптофана. В обоих случаях пользовались техническим трипсином. Гопкинс и Коле [307] употребляли на 1 кг казеина 400 мл панкреатического сока. Дэкин [183] не указывает количества взятого экстракта панкреаса. Есть основания полагать, что в течение столь длительного переваривания (7—14 дней) в значительной степени гидролизуются белки панкреаса. Выделявшийся при этом триптофан считали за триптофан казеина. Наличие в панкреасе 1,4% триптофана, может быть, является причиной того, что из казеина выделяют больше триптофана, чем определяют наиболее точными колориметрическими методами. Для разрешения этого противоречия Шо и Мак-Фарлен [577] гидролизовали казеин трипсином. Но после гидролиза им удалось выделить менее 1% триптофана. Эта величина лишь немногим ниже устаксвленной колориметрически. [c.115]

Однако количество информации, заключенной в одной-единственной клетке человека, все еще намного превьннает возможности доступных в настоящее время цифровых компьютеров человек пока еще не способен выразить в цифрах все многообразие биохимических фактов и взаимосвязей. Двадцать аминокислот, из которых построены все белки-это не просто двадцать кодирующих единиц, ибо значение любой данной аминокислоты в белке может быть различным. Например, значение серина может быть обусловлено тем, что в молекуле этой аминокислоты содержится полярная гидроксильная группа, способная образовывать водородную связь. Оно может быть также связано с тем, что серин входит в качестве важного структурного элемента в состав активного центра фермента (в случае трипсина) или регуляторного центра (в случае гликоген-фосфорилазы) или же быть носителем фосфатных групп (в казеине-белке молока). Перевести четырехбуквенный язык ДНК и двадцатибуквенный язык белков на язык цифр в том случае, когда эти буквы имеют множество значений, пока еще не представляется возможным. [c.852]

Кристаллический химотрипсин, подобно трипсину, гидролизирует как белки, так и пептоны с образованием относительно низкомолекулярных пептидов. Он расщепляет по преимуществу те пептидные связи, на которые трипсин не действует. Это следует из того, что если на казеин воздей- [c.316]

Для определения триптического действия панкреатина можно, конечно, вместо молока пользоваться каким-нибудь другим белковым препаратом, в особенности если нужно получить более точные результаты. В таком случае можно применять методы, описанные при трипсине (см. ниже), или итти следующим испытанным путем. Приготовляют раствор казеина, содержание казеина в котором точно определяют весовым путем. Для этого растворяют 100 г казеина (по Н а m m а г s t е п у) в 80 мл 1 н. раствора едкого натра, доведенных водой до 2 литров, если нужно при нагревании, или 100 г казеината натрия (нутрозы) и 0 мл 1 н. раствора едкого натра разбавляют водой т 2 л при нагревании. Для исключения возможного влияния протеолитических ферментов, содержащихся в казеине, раствор его быстро нагревают до 85—90° и дают ему остыть. Для каждого определения употребляют 100 мл этого раствора. Если содержание в нем белка и было установлено заранее при предварительных опытах, то все же лучше каждый раз наряду с определением панкреатина проводить слепой опыт. Для определения в два стакана вносят по 100 мл раствора казеина, нагревают до 38— 40° и прибавляют в один из них 0,1 г мелко растертого и замешанного с 5—10 мл воды панкреатина. В обоих стаканах объем доводят водой до 250 мл, после чего оставляют стоять полчаса при 40° при частом помешивании. Затем содержимое обоих стаканов выливают в два заранее приготовленных стакана, содержащих по 150 мл Ю / -го раствора сульфата натрия, после чего в каждый стакан при непрерывном помешивании приливают тонкой струей 3—4 мл разбавленной серной кислоты (1 4). [c.525]

В СССР для определения триптической активности панкреатина применяют также метод с казеином, разработанный в биохимической лаборатории НИХФИ. Он представляет собою видоизменение метода Gros s a, описанного ниже (см. Трипсин, стр. 533), отличаясь от последнего тем, что действие панкреатина происходит при строго определенной реакции среды (рд = 8), которая регулируется боратной буферной смесью. Подробное описание метода здесь не приводится, так как он войдет в новое издание Фармакопеи СССР. Л. У.] [c.526]

Метод определения трипсина по G г о y и К о з л о в с к о м у основан на осаждаемости казеина из щелочного раствора кислотами и не-осаждаемости продуктов его переваривания. 1 г казеина (по Hammarsten y) растворяют в 1 л 0,1°/о-го раствора карбоната натрия и наливают по 10 мл этого раствора в ряд пробирок. После этого пробирки нагревают в водяной бане до 40°, прибавляют возрастающие количества исследуемого раствора трипсина и дают смесям постоять 15 минут, при 40°. Затем в каждую пробирку прибавляют по 1 капле 1°/о-ой уксусной кислоты и отмечают, содержимое каких пробирок остается прозрачным. В этих пробирках, следовательно, имело место полное переваривание казеина. Та из них, которая содержала наименьшее количество трипсина, обозначается как предельная , и за единицу переваривающей способности трипсина принимают содержавшееся в ней количество последнего, как способное в указанных условиях переварить 0,01 г казеина (т. е. количество казеина, содержащееся в 10 мл вышеназванного раствора). Если переваривающую способность обозначить через К, количество казеинового раствора — с, длительность опыта—t, а необходи- [c.533]

Метод М а п (1 е 1 Ь а и т а основан на изменении коровьего молока оно становится прозрачным благодаря тому, что казеин переваривается и жир молока не может более удерживаться в тонко распределенном эмульгированном состоянии он выделяется в каплях большего размера, вследствие чего молоко становится прозрачнее. Для выполнения определения в 10 поставленных в ряд пробирок иН1епНи1Ь а наливают по 1 мл разбавленного в 20 раз коровьего молока и прибавляют в них в возрастающем количестве (0,1—0,2—0,3 — 1 мл) 1%-ый раствор трипсина. [c.534]

Для уравновешивания колонки и элюции пептидов используются самые разнообразные растворы вода, растворы хлористого натрия, аммиака, уксусной кислоты и различные буферные растворы. Этим способом были фракционированы пептиды триптического гидролизата гемоглобина человека, а-казеина, тропомио-зина скелетной мышцы и автолизата трипсина. [c.83]

Разложение Н2О3. . -..... Инверсия сахарозы. ..... Гидролиз казеина. ...... Этиловый эфирмасляной кислоты Без катализатора Коллоидная платина Каталаза печени Ионы водорода Дрожжевая инвертаза Соляная кислота Трипсин Ионы водорода Панкреатическая липаза 18000 11700 5500 26 000 11500 20600 12 000 13 200 4200 [c.74]

Фосфорная кислота соединена эфирной связью с гидроксильной группой молекул серина. При гидролизе казеина трипсином отщепляется фосфосерилглутаминовая кислота [76, 77]. При частичном гидролизе казеина разведенной соляной кислотой получается фосфорный эфир серина [78]. [c.238]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология