Обнаружение аминокислот на хроматограмме

Реакция аминокислот с нингидрином имеет большое значение для обнаружения аминокислот на хроматограммах и для их [c.33]

Положение веществ на хроматограммах определяют после их обработки какими-либо реактивами, дающими цветные реакции с изучаемыми соединениями. Для обнаружения органических кислот используют различные индикаторы, для большинства сахаров — аммиачный нитрат серебра, для аминокислот — растворы нингидрина или изатина. После обработки бумаги теми или иными реактивами на хроматограмме появляются окрашенные пятна соответствующих соединений. [c.32]

Эта очень чувствительная реакция используется для обнаружения а-аминокислот на хроматограммах и в спектрофотометрическом анализе при количественном определении а-аминокислот. [c.413]

На одной колонке ТФА-производные природных аминокислот можно разделить только с помощью программирования температуры [16, 38, 131]. Наряду с такими хорошо известными параметрами, как скорость нагрева, поток газа, тип и количество жидкой фазы, важную роль играет и длина колонки [16]. Ее чрезмерное увеличение приводит к худшему разрешению очевидно, в основе подобных эф ктов лежат структурные различия аминокислотных производных. В табл. 15 указаны условия для наилучшего разделения. Как видно из хроматограммы фиг. 74, даже в специально подобранных условиях полное разделение достигается не во всех случаях. Тем не менее такой анализ вполне удовлетворителен для качественного обнаружения аминокислот. Ярким примером эффективности данного метода послужила качественная идентификация всех аминокислот, входящих в состав рибонуклеазы [16]. [c.331]

ОБНАРУЖЕНИЕ АМИНОКИСЛОТ НА ХРОМАТОГРАММЕ [c.403]

Реакция с нингидрином. Важнейшим способом обнаружения аминокислот на хроматограммах и в растворе является их реакция с нингидрином, которая протекает при нагревании с образованием газообразного СО2, аммиака и альдегида. [c.58]

Ниже приведены частные качественные реакции для обнаружения на хроматограмме отдельных аминокислот. [c.169]

Метод бумажной хроматографии широко используется в фармацевтическом анализе. Чаще всего его применяют для оценки доброкачественности лекарственных средств при испытании их на чистоту и обнаружение примесей. Разработаны методики, позволяющие определять подлинность и количественное содержание лекарственного вещества в препарате сравнением бумажных хроматограмм его и стандартного образца (целанид, препараты, содержащие индивидуальные аминокислоты и смеси аминокислот). [c.211]

Несслера аммиак, образующийся при реакции оксиаминокислот с перйодатом (стр. 21), дает с реактивом Несслера желтую окраску. Аргинин выявляется на хроматограмме в виде красных пятен, если обработать ее щелочным раствором 1-нафтола и затем опрыскать раствором гипохлорита (реакция Сакагути). Нитропруссидную реакцию можно с успехом использовать для обнаружения цистеина и цистина эти аминокислоты (после обработки цианидом) при опрыскивании хроматограммы раствором нитропруссида образуют красные пятна. Цистеин, метионин и некоторые другие восстанавливающие вещества могут быть идентифицированы в виде белых пятен на розовом фоне при обработке хроматограммы реактивом с йодистой платиной. Триптофан дает с реактивом Эрлиха пурпурную окраску, если хроматограмму прогреть при 100° в течение нескольких минут. Эти и другие методы обнаружения аминокислот на хроматограммах подробно описаны в книге Блока и др. [157]. [c.44]

Если вещества, подвергаемые хроматографированию на бумаге, бесцветны, то для обнаружения образовавшихся зон следует, после высушивания хроматограммы, применить соответствующий реагент, раствором которого обрызгивают бумагу при помощи пульверизатора. В случае хроматографирования смеси аминокислот обычно применяют нингидрин, вещества кислотного или основного характера обнаруживают соответствующим индикатором, иногда пользуются разбавленным раствором перманганата и т. п. Нередко лучшие результаты можно получить при рассматривании хроматограммы в ультрафиолетовом свете. [c.303]

Для обнаружения и идентификации аминокислот на хроматограммах помимо нингидринового теста могут быть использованы и другие цветные реакции. Так, гистидин и другие имидазольные производные можно обнаружить в виде красных пятен, применяя диазореакцию по Паули или варианты этой реакции. Пролин и оксипролин обнаруживаются в виде синих [c.42]

Проявление. Для обнаружения пятен аминокислот высохшую полоску равномерно смачивают раствором нингидрина и, высушив на воздухе (под тягой), прогревают 2—3 мин в сушильном шкафу при 70—90° С, следя за тем, чтобы полоска не прикасалась к стенкам шкафа. В процессе прогревания на хроматограмме выступают пятна, соответствующие местам локализации аминокислот (рис. 6,в). Нижнее пятно соответствует гликоколу, верхнее — лейцину. Измеряют расстояние от места нанесения аминокислот до середины каждого из пятен и от места нанесения аминокислот до отмеченной карандашом границы, до которой поднялся по бумаге растворитель. Вычисляют коэффициенты подвижности аминокислот (/ /). Для этого делят путь, пройденный аминокислотой от места нанесения, на путь, пройденный растворителем (также считая от места нанесения). [c.41]

Подкисленный или подщелоченный перманганат калия окисляет очень многие соединения, образуя при этом пятна от желтой до белой окраски на фиолетовом фоне хроматограмм. После сушки фон становится коричневым, а через несколько суток даже исчезает. Для обнаружения веществ кислотного или основного характера также пригодны кислотно-основные индикаторы в водном или спиртовом растворе. Раствором динитро-фенилгидразина обнаруживают вещества, содержащие карбонильную группу. В частности, с ним интенсивно реагируют ароматические альдегиды и кетоны. Раствор нингидрина — очень чувствительный реагент на аминокислоты и вообще алифатические амины. [c.95]

Для обнаружения и количественного определения аминокислот по окончании разделения высушенные хроматограммы обрабатывают 0,5%-ным раствором нингидрина в ацетоне. Аминокислоты проявляются в виде фиолетовых пятен пятна вырезают, окрашенный комплекс извлекают спиртовым раствором сернокислой меди и интенсивность окраски измеряют при длине волны 575 ммк. По калибровочным кривым, построенным для каждой аминокислоты, находят концентрацию компонентов смеси. Определение цистина производят после превращения его в цистеиновую кислоту путем предварительного окисления белка надмуравьиной кислотой (см. гл. IV, 1). [c.44]

Все р-(пиримидил-4)аланины в УФ-области обнаруживают интенсивное поглощение, характерное для пиримидиновых производных, а также дают положительную нингидринную реакцию на а-аминогруппу, но не обычного лилового цвета, а различных других оттенков — от серо-зеленого до ярко-красного. Последнее обстоятельство весьма облегчает обнаружение р-(пиримидил-4) аланинов иа хроматограммах и форе-граммах и позволяет легко отличать их от аминокислот иных типов. [c.337]

Для обнаружения аминокислот и пептидов применяют иингидрин. Сухую хроматограмму (рис. 8.40) пофужают в раствор нингидрина в ацетоне, обычно 0,2%-ный (при этом достагается однородное покрытие бумаги реагентом), сушат непродолжительное время. При комнатной температуре пятна аминокислот проявляются примерно через 1 ч, а их окраска достигает максимальной интенсивности примерно за 8 ч. Пятна пептидов обнаруживаются медленнее. Проявление ускоряется, если ф0мат0фамму нафевают при 50—60 С в сушильном шкафу. [c.336]

Нингидрин — нитрат меди для аминокислот. Для обнаружения аминокислоты сухую иластинку, прогретую 10 мин. при 100°С, опрыскивают свежеприготовленной смесью (50 3) двух растворов раствора 0,2%о нингидрина в 50 мл абсолютного этанола, 10 мл ледяной ук-суспох ( кислоты и 2 мл 2,4,6-коллидина и 1%-ного раствора Си(ХОз)2. ЗНаО в абсолютном спирте,Затем хроматограмму нагревают 4 мин. при 110°С. Обнаруженные пятна следует тотчас пометить. [c.169]

Чаще всего для обнаружения аминокислот и пептидов применяется нингидрин (гидрат трикетогидриндена), так как он образует окрашенные продукты. Самый простой метод обнаружения заключается в следующем. Сухую хроматограмму погружают в раствор нингидрина в ацетоне, чаще всего 0,2%-ный (при этом достигается однородное покрытие бумаги реагентом), сушат в течение непродолжительного времени и помещают в большой ящик, стенки которого опрыскивают спиртовым раствором лимонной кислоты, чтобы исключить попадание на них аммиака. При комнатной температуре пятна аминокислот обнаруживаются примерно через час, и их окраска достигает оптимальной интенсивности примерно за 8 ч. Пятна пептидов обнаруживаются медленнее, поэтому лучше всего выдержать хроматограмму в этом ящике до следующего дня. Появление цветных пятен ускоряется, если хроматограмму нагревают при 50—60 °С. [c.125]

Патаки [112, ИЗ] применил новый метод обнаружения аминокислот в систематическом анализе пептидов. Он разделял аминокислоты на силикагеле О, используя смесь н-пропапол— вода (7 3), после этого высушивал пластинки и опрыскивал их буферным раствором, содержавшим 8,4 г бикарбоната натрия и 2,5 мл 1 н. раствора гидроксида натрия в 100 мл раствора, и 10 %-ным (масса/объем) раствором динитрофторбензола в метаноле. Затем накрывал хроматограмму чистым стеклом, закреплял его двумя полосками полиэтилена, пропущенными по углам хроматограммы, очищенным от адсорбента, и нагревал ее в темноте при 40°С в течение 1 ч. Далее оп охлаждал хроматограмму и помещал ее в баню с эфиром на 10 мин. На обработанной таким образом и высушенной хроматограм. 1е можно размечать пятна. После разделения аминокислот в одном направлении и превращения их в диаминофенилпроизводпые их можно подвергнуть хроматографическому раздел.ению в другом направлении с одним из уже упоминавшихся растворителей. [c.500]

В распределительной хроматографии открылись новые возможности применения органических реагентов в двух направлениях 1) в качестве органических жидкостей, расслаивающихся с водой, например хлороформ, н. бутиловый спирт, фенол и др. 2) для обнаружения разделяемых компонентов смеси веществ на хроматограмме, например нингидрин для обнаружения аминокислот, коевая кислота, оксин для о-бнаружения катионов и др. В первом случае мы получаем каждый раз два слоя, из которых один представляет слабый раствор органической жидкости в воде, второй — слабый раствор воды в органической жидкости. В распределительной хроматографии сравнительно редко применяют простые растворители. Обычно употребляют смеси нескольких индивидуальных веществ, например, бутиловый спирт—бензоилаце-тат — раствор азотной кислоты или ацетилацетон — соляная кислота — ацетон, и многие другие. Для приготовления таких смесей чаще всего применяют различные спирты, галоидозамещенные, органические кислоты, амины, кетоны, алифатические, гомоциклические и гетероциклические соединения, часто в смесях с водными растворами кислот или оснований, в зависимости от концентрации последних, имеющими различные значения pH. Метод распределительной хроматографии широко применяют в неорганическом анализе для разделения смесей катионов или анионов. [c.84]

Реакция с нингидрином. Эта реакция имеет большое значение для обнаружения аминокислот на хроматограммах и их количественного определения. Больщинство аминокислот реагирует с нингидрпном с образованием соответствующего альдегида, двуокиси углерода и аммиака, которые доступны количественному определению. При этом раствор окрашивается в интенсивный сине-фиолетовый цвет. Механизм этой реакции еще но выяснен окончательно. [c.42]

К счастью, несколько иная методика измерения была разработана рядом хроматографистов, одним из которых был Г. Поллок, работающий в том же самом Научном центре в Эймсе. Основанный на газовой хроматографии, метод Поллока требует всего лишь нескольких микрограммов пробы и может быть применен к сложным смесям атаино-кислот. Первым этапом методики была этерификация аминокислот чистым (только одним энантиомером) 7 -2-бутанолом. Полученный эфир имел два асим метрических центра и мог существовать в виде-двух диастереомеров ЯЯ и где первая буква относится к конфигурации спирта, а вторая — к конфигурации аминокислоты. Затем эфиры были переведены в амиды обработкой трифторуксусным ангидридом для уменьшения полярности амино-группы и повышения летучести производных аминокислот, что позволило проводить успешное их хроматографирование. Используя капиллярные колонки, имеющие характеристики, приведенные на рис. 17-16, Поллок получил хроматограмму смеси диастереомерных производн ых аминокислот. Заметим, что каждая аминокислота дает пару пиков. Эксперименты доказали, что каждый пик отвечает одному из двух диастереомеров и что характеристики удерживания диастереомеров, которые отличаются только конфигурацией при асимметрическом углеродном атоме, как оказалось, были вполне достаточными, чтобы можно было проводить их разделение на газохр оматографической колонке. Таким образом, относительные количества Я- и 5-энантиомеров для некоторых отличающихся между собой аминокислот можно было определить хроматографированием,, сравнивая относительные высоты ЯЯ- и 5-пиков для каждого производного аминокислоты, причем для обнаружения требуется всего несколько нанограммов каждой аминокислоты. [c.585]

Большим преимуществом двухмерной распределительной хроматографии является возможность обнаружения больших количеств компонентов в исследуемой смеси. Например, на двухмерной хроматограмме, проявленной раствором нингидрина, отмечается положение шестидесяти различных веществ. Метод одномерной распределительной хроматографии был использован Г. А. Критским для обнаружения нуклеиновых оснований ами-лофосфазы (фосфорилазы), а также инозина. Т. А. Федорова и А. С. Коникова использовали этот метод для определения свободных аминокислот в различных органах и тканях. [c.163]

На хроматограммах были обнаружены глюкозамин и, по-видимому, глюкоза, а также аминокислоты глутаминовая кислота, гликокол, оксипролин, аланин, пролин, валин, фенилаланин, лейцин и одно неидептифицированное вещество, содержащее азот (рис. 39). Наличие следов глюкозамина в гидролизатах из граптолитов указывает на то, что в граптолитах сохранились следы хитина. Присутствие среди обнаруженных аминокислот оксипро-лина, а также высокое содержание азота (3,15%) в граптолитах подтверждают животное происхождение и хитиновый состав [c.153]

Регулируемая селективность масс-спектрометра как хроматографического детектора означает следующее параллельно с хроматограммой анализируемого образца по полному ионному току могут быть записаны одна или несколько хроматограмм по заранее выбранным значениям miz (так. называемые масс-фрагменто-граммы) . Следует подчеркнуть, что предел обнаружения в этом методе примерно в 100 раз меньше, чем по полному ионному току, что обусловлено снижением уровня шумов. Такой прием дает возможность даже в сложных смесях легко обнаруживать присутствие веществ, дающих в масс-спектрах сигналы с характеристичными массовыми числами, и широко применяется при анализе следов галогенсодержащих соединений в воздухе (на фоне относительно большого количества углеводородов), аминокислот в виде их летучих производных, метаболитов лекарственных препаратов и т. д. Для повышения чувствительности масс-фрагментограммы, как правило, записывают по массовым числам максимальных сигналов в спектрах анализируемых веществ. [c.201]

Рис. 174. Двумерная хроматограмма смеси, содержащей по 0,5 цг ФТГ-аминокислот, МФТГ и ДФТГ в 0,5 [1л метанола или ацетона. Восходящий метод хлороформ — метанол (90 4- 10) в направлении 1, хлороформ — муравьиная кислота (100 + 5) в направлении 2 обнаружение хлор/толи-дин или УФ-свет (270 жд). Видно, что только 3 из 13 пятен содержат несколько компонентов. По поводу исследования пятен 9,2 и 13 см. текст, рис. 173 и на рис. 175.

На рис 7-7 изображена хроматограмма, полученная при градиентном элюировании смеси даисилпроизводных аминокислот, разделение проводилось на колонке, заполненной силикагелем, модифицированным ОДС [9] Предел обнаружения (при отношении сигнал/шум - 2) составлял около 0,1 пмоль [c.166]

Кроме того, была установлена пространственная конфигурация лейцина и треонина, обнаруженных в гидролизатах аэроспорина Это было достигнуто путем обработки бумажных хроматограмм препаратом оксидазы -аминокислот. Последняя полностью разрушила лейцин, тогда как треонин остался неизмененным. Отсюда следует, что первый из них имеет -конфигурацию, а второй является /-формой. Однзко этим методом не удалось установить пространственное строение а, 7-диаминомасляной кислоты (511), так как контрольные опыты показали, что -форма этого соединения устойчива к действию оксидазы -аминокислот. [c.369]

Дженкинсон и Тинслей [19] идентифицировали с помощью хроматографии на бумаге состав аминокислот, гидролизат которых был получен в ходе изучения аминокислот растительного происхождения, выделенных из компоста. Десять мл гидролизата, содержавшего приблизительно 1 мг связанного азота, запаривали досуха при пониженном давлении, растворяли в 5 мл воды и снова упаривали досуха. Остаток растворяли в 1,5 мл воды и центрифугировали. Осветвленную жидкость в количестве 0,04 мл наносили на бумагу Ватман № 1. Разделение проводили элюентом, предложенным Вольфом [20]. Хроматограмму проявляли, окуная лист в 0,2%-ный раствор нингидрина в ацетоне. Были идентифицированы следующие аминокислоты цистеиновая, аспарагиновая, глутаминовая, лизин, аргинин, глицин, гистидин, серии, аланин, тирозин, пролин, валин, треонин, изолейцин, лейцин и фенилаланин. Метионин не поддавался определению, поскольку его трудно было отделить от глицина в описанных системах растворителей. Метио-нин-5-оксид тоже не отделялся от валина. Хроматограммы опускали в 0,1%-ный раствор изатина в ацетоне для обнаружения про-лина и подтверждения отсутствия оксипролина. Детектирование и определение содержания пептида с остатком лизина в середине цепи проводили с помощью 2,4-динитрофторбензола [21]. Эта реакция протекает, поскольку е-аминогруппа, в отличие от а-амино-группы лизина, свободна и может вступать в реакцию. [c.306]

ФТГ-аминокислоты детектируют на тонкослойных хроматограммах с помощью хлор-толидиновой реакции. Чувствительность этой реакции 0,5. WK2 ФТГ-аминокислоты. Для обнаружения ФТГ-аминокислот рекомендуется также [8] йодазидная реакция. ФТГ-аминокислоты можно детектировать по гашению флюоресценции люминофоров, свечение которых возбуждается ртутной линией X 254 ммк, поскольку фенилтиогидантоиновая группировка имеет интенсивную полосу поглощения при X 270 ммк. Чувствительность указанного метода составляет 0,1—0,2 мкг ФТГ-аминокислоты. Из отечественных люминофоров для указанных целей подходят Л-27, Л-29, К-36 и Л-34, которые добавляют в количестве 5—10% к сорбционной массе перед нанесением на пластинку. [c.315]

ЦИММЕРМАНА РЕАКЦИЯ — цветная реакция о-фталевого альдегида с аминокислотами, проводимая в щелочной среде с последующим подкнсленпем. Реакцию дают глицин, аланин, аспарагин, аргинин, цистин, триптофан и аммонийные соли. Окрашивание варьирует от красного до фиолетового окрашенные продукты, образующиеся из глицина и триптофана и с солями аммонпя, извлекаются хлороформом, продукты реакции др. аминокислот в хлороформ не переходят. Реакция используется для количественного определения глищша, гл. обр. после выделения его из смеси аминокислот бумажной илп колоночной хроматографией, а также для выявления пятен гл1щина на бумажных хроматограммах и обнаружения солей аммония. Предложена В. Циммерманом в 1930. [c.430]

Ацетат цинка и изатин растворяют в изопропаноле, нагревая смесь в водяной бане при 80° после этого реактив следует хранить на холоду. После опрыскивания хроматограммы одним из указанных реактивов бумагу прогревают при 80—85° в течение 30 мин. Избыток изатина можно быстро отмыть водой. Реактиве пиридином дает с аминокислотами разнообразное окрашивание (табл. 2), но с кислым реактивом окрашивание бывает более интенсивным (чувствительность для пролина — 3-15 молъ1см ). 0,2%-ный раствор изатина в н-пропаноле был использован для обнаружения пролинсодер-жащих пептидов, в которых остаток пролина несет свободную имино-группу (Монье и Ютис [33]). [c.25]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология