Подвижная фаза ион-парные

Однако наиболее часто применяют ион-парную хроматографию на обращенной фазе, при которой в качестве подвижной фазы используют водный буферный раствор и органический растворитель, смешивающийся с водой, обычно метанол или ацетонитрил. В подвижную фазу добавляют противоион, заряд которого противоположен заряду молекулы, а в качестве сорбента используют силикагель с химически привитой фазой, обычно Се или i8. Иногда разделение осуществляют с применением несмешиваемой с водой механически удерживаемой фазы, например, бутанола. При разделении на обращенной фазе более стабильной, чем механически удерживаемая фаза, водные образцы могут непосредственно вводиться в колонку, что особенно важно для анализа биологических образцов. При этом нет необходимости в предварительной очистке, так как гидрофильные компоненты мгновенно вызываются из колонки. Градиентное элюирование проводят, изменяя концентрацию противоиона в подвижной фазе или меняя полярность растворителя. При изменении концентрации противоиона, который остается в неподвижной фазе, изменяется сила растворителя, а при изменении pH подвижной фазы изменяется селективность разделения. [c.75]

Попытки разделения сильных кислот и оснований методом подавления ионов оказываются неудачными из-за плохого удерживания веществ и асимметрии пиков. Соединения, остающиеся ионизированными в интервале рН=2—8, удовлетворительно разделяются методом ион-парной хроматографии, когда в подвижную фазу добавляют противоион, заряд которого противоположен заряду молекулы, и создается ион-парный комплекс, обладающий свойствами неполярного вещества. Если к ионному соединению, растворимому только в воде, добавить противоион, то образуется ионная пара, которая, обладая свойством растворяться в органической фазе, распределится между водным и органическим слоем. Возможна также адсорбция липофильной части противоиона в углеводородной фазе наполнительного материала. Очевидно, что катионы будут хорошо экстрагироваться анионами, и наоборот. [c.74]

При одинаковой молярной концентрации более выраженный модифицирующий эффект характерен для более гидрофобных ионов, с большим числом атомов углерода [59, 175, 204, 437]. В работе [58] показано, что разница в действии гомологичных ион-парных реагентов определяется различиями их собственных сорбционных свойств. Зависимость удерживания от концентрации получается одинаковой для любых модификаторов, если выражать концентрацию не в молях на литр подвижной фазы, а в молях на грамм сорбента. [c.172]

Оптимальными при ион-парном разделении на обращенной фазе являются средние значения pH. При снижении pH подвижной фазы анионы X- начинают превращаться в неионизированные кислоты и число ионных пар образца в неподвижной фазе уменьшается, а следовательно, снижается и значение к. Изменение pH оказывается мощным средством изменения селективности разделения. При высоких значениях pH значение к также падает, что аналогично уменьшению обменной емкости, так как ионы ОН- подвижной фазы начинают связывать противоионы и конкурировать с анионом образца в образовании ионных пар. Слабые кислоты или основания обычно не используют в качестве противоионов для ион-парной хроматографии. [c.79]

Для этой же цели предложено использовать триэтиламин в качестве основания, так как этот реактив доступен, растворим, удобен в работе и обладает малой химической актив-ностью. Предполагается, что сильные основания, так же как четвертичные гидроксиды, разрушают силикагелевую подложку. Подвижную фазу для ион-парной хроматографии желательно фильтровать через фильтр из стекловолокна, а после окончания работы колонку следует промывать пятикратным объемом элюента метанол — вода (50 50). [c.81]

Для препаративных разделений ион-парную хроматографию не применяют, а количество вводимого образца сопоставимо с количествами, применяемыми для распределительной хроматографии. Увеличение максимально вводимого количества может быть достигнуто за счет предварительного образования ионных пар в образце. Для некоторых ионизированных (независимо от pH) анионов и катионов не требуется добавка буфера. Кислоты обычно разделяются при рН=4—7,4, а основания — при рН=2—5. При этом значения pH подвижной фазы могут для улучшения селективности разделения варьироваться. [c.81]

В ион-парной хроматографии используют (см. разд. 8.7.1) щеточные сорбенты — силикагели с привитыми обращенными фазами 3, С , С, . Эта фаза легко превращается в катионо- или анионообменник при поглощении из подвижной фазы ионогенных поверхностно-активных веществ, например алкилсульфатов или Солей четвертичных аммониевых оснований. [c.317]

Рис. 4.42. Типичные кривые, выражающие зависимость удерживания от концентрации ион-парного реагента в подвижной фазе 1 — сорбат нейтрален 2 — ион-парный реагент и сорбат имеют одинаковые заряды 3 — заряды ион-парного реагента и сорбата противоположны.

Рис. 4.43. Типичные зависимости удерживания слабой кислоты от pH подвижной фазы. Цифры на кривых — концентрация ион-парного реагента (ммоль/л).

Соли и буферные растворы. Во многих случаях в состав подвижных фаз помимо воды и органических растворителей входят также неорганические соли или ион-парные агенты. Они могут стать источником дополнительных примесей в подвижной фазе и отрицательно сказаться на результатах. Так, ион-парные агенты могут содержать органические соединения, для [c.207]

Методы обращенно-фазовой и ион-пар- [275] ной хроматографии для исследований плазмы и мочи Удерживание как функция pH и ионной [332] силы подвижной фазы, анализ в плазме крови Исследование селективности разделе- [104] ния в режиме ион-парной хроматографии [c.297]

Все эти факторы позволяют работать при высоких давлениях, уменьшают пути внешней и внутренней диффузии, ускоряют массообмен подвижной фазы, увеличивают полноту протекания ионообменных реакций, ион-парных и других Взаимодействий, диффузию в пограничных областях и т. д. [c.226]

Алкилсульфаты натрия (алкил от Сг до С12), добавленные в подвижные фазы в количестве 0,001—0,01 моль/л, при pH 2—5 переводят обычную обращенно-фазовую хроматографию в так называемый ион-парный режим. При этом величина удерживания оснований возрастает, иногда очень значительно, а форма их пиков улучшается. [c.300]

Важным условием проведения ион-парной хроматографии является стабильность системы. Это означает в случае механически удерживаемой жидкости несмешиваемость водной и органической фаз, что достигается четким термо-статированием и предварительным насыщением подвижной фазы неподвижной. При работе с нормальной фазой при введении противоиона в неподвижную фазу необходимо предотвратить его унос неподвижной фазой за счет образования ионных пар, покидающих болонку. Противоион в этом случае добавляют в образец до введения его в хроматограф или в подвижную фазу. Поскольку в ион-парной хроматографии работают с полярными веществами, склонными к образованию хвостов, следует помнить, что в этом случае желательно применить другую подвижную или неподвижную фазу, другой противоион. Необходимо, чтобы в ион-парной хроматографии при изменении концен-трации не изменялось значение к образца, что может повлечь образование хвостов. Водная фаза должна иметь постоянную концентрацию лротивоиона и pH. Обычно используют цитратный или фосфатовый буферный раствор. Иногда противоион сам является буфером. В случае разделения при низких pH растворы сильных кислот обеспечивают достаточное буферное действие. [c.77]

При прочих неизменных условиях Е постоянна и, следовательно, повышение концентрации противоиона в подвижной фазе приводит к увеличению к при разделении на обращенной фазе. В нормально-фазной ион-парной хроматографии к также меняется за счет изменения концентрации противоиона в подвижной фазе. Значение к может регулироваться типом противоиона, например, замена гептансульфокислоты пентансуль-фокислотой может изменить к в 2—5 раз. Этот эффект ярко выражен при низких концентрациях противоиона. Крупные молекулы противоиона дают большие величины к при ион-парном разделении на обычной фазе. Так, переход от тетра-этиламмония к тетрапентиламмонию позволил изменить к на несколько порядков. [c.77]

В ион-парном разделении на обращенной фазе сила растворителя меняется за счет изменения полярности подвижной фазы. Увеличивая в смесях воды с метанолом или ацетонитри-лом содержание воды, мы увеличиваем силу растворителя и снижаем значение к для образца. В ион-парной хроматографии в качестве подвижных фаз применяют бутанол, пентанол, метиленхлорид и гексан. При этом более полярные растворители являются более сильными и дают самые низкие значения к". Сила растворителя в ион-парной хроматографии зависит от его способности стабилизировать или растворять ионы и ионные пары, в отличие от фактора полярности растворителя Р, связанного с его способностью растворять полярные неионные вещества. Сила растворителя в ион-парной хроматографии зависит от параметра Р и от его диэлектрической проницаемости е. Показателем относительной силы растворителя служит функция Р +0,25 е (табл. 3.7). [c.78]

Ион-парную хроматографию обычно применяют для анализа физиологических и биологических жидкостей, полярных соединений и веществ с несколькими ионизируемыми группами, в том числе промежуточных продуктов красителей. Расфасованные реагенты для ион-парной хроматографии, состоящие из буфера и противоиона, которые можно непосредственно добавлять в подвижную фазу, выпускает фирма Уотерс . К ним относится реактив А (0,005 М раствор тетрабутиламмонийфосфата, рН=7,5), реактив В-5 (0,005 М раствор пентансульфокислоты, рН=3,5) и реактив В-7 (0,005 М раствор гептансульфокислоты, рН=3,5). [c.80]

Подвижные фазы. Хроматографические разделения с использованием ионообменников чаще всего проводят в водных растворах, так как вода обладает прекрасными растворяющими и ионизирующшш свойствами. Под действием воды молекулы пробы мгновенно диссоцшфуют на ионы, ионо-генные группы ионообменников гидратируются и также переходят в полностью или частично диссоциированную форму. Эго обеспечивает быстрый обмен противоионов. На элюирующую силу подвижной фазы основное влияние оказывают pH, ионная сипа, природа буферного раствора, содержание органического растворителя или поверхностно-активного вещества (ион-парная хромато1рафия). [c.317]

Ион-парный реагент образует с разделяоными соединениями ионную пару в растворе, которая в соответствии со своими свойствами сорбируется на о ащенной фазе кремнийорганическим сорбентом. Гримером является разделение соматических кислот (НЯ). В подвиж фазу вводят хлорид тетрабутиламмония (ТБА), что приводит к образованию ионных пар в подвижной фазе ТБА +НК->[К ТБА ] + Н . Эти пары лучше уд >живаются поверхностью силикагеля и более селективно за счет неспецифических взаимодействий с привитыми алкильными цепями (рис. 8.29). [c.322]

Для ионогенных соединений существуют и другие варианты выбора хроматографической системы. Во-первых, это ионообменная хроматография на материалах, которые по химизму взаимодействия повторяют классические иониты. Недостатком такого режима является сравнительно невысокая эффективность разделения. Подвижная фаза, как правило, представляет собой буферный раствор. Его pH и ионная сила подбираются таким образом, чтобы обеспечить желаемые значения констант сорбции. Другой режим разделения ионогенных соединений — так называемая ион-парная хроматография. Методически суть ее сводится к тому, что в обычную обращенно-фазовую систему добавляют гидрофобные ионы, имеющие заряд, противоположный по знаку заряду разделяемых ионов. Этот прием позволяет получить пики ионогенных соединений почти идеальной формы, что редко достигается при обычной обращепно-фазовой или ионообменной хроматографии соединений данной группы. [c.35]

В литературе до сих пор не сформировалось единое мнение о механизме ион-парной хроматографии. Согласно одной модели, гидрофобные ионы модификатора сорбируются на поверхности алкилсиликагеля таким образом, что к подвижной фазе обращены заряженные группы (рис. 4.40,а реакция I). В результате образуется поверхность, обладающая ионообменными свойствами. Предполагается, что сорбция в таких системах подчиняется обычным закономерностям ионообменной хроматографии (реакция II). Такой точки зрения придерживаются авторы работ [112, 352, 402]. [c.170]

В качестве примера рассмотрим три варианта анализа карбоновых кислот. Высокополярные и гидрофильные кислоты слишком прочно удерживаются силикагелем, но не удерживаются алкилсиликагелями в обычном обращенно-фазовом режиме. Поэтому для них предпочтителен ион-парный вариант обращенно-фазовой хроматографии. Кислоты умеренной полярности вполне поддаются разделению на силикагеле, однако для улучшения формы пиков к подвижной фазе желательно добавить около 1 % уксусной кислоты. Третий вариант, пригодный для анализа больщинства кислот, кроме наиболее гидрофильных, предусматривает использование алкилсиликагеля в качестве неподвижной фазы. С целью подавления ионизации в составе подвижной фазы применяют буферные растворы с pH 2—5. [c.273]

В ряде работ изучалась сорбция динамического модификатора алкилсиликагелями. Количество этого реагента в неподвижной фазе зависит от его гидрофобности, концентрации в подвижной фазе и ее pH. При отсутствии органического растворителя в подвижной фазе либо неизменной его концентрации изотермы сорбции ион-парных модификаторов близки к ленгмюровским. [c.171]

Обычно концентрация ион-парного модификатора ири насыщении имеет порядок 100—1000 мкмоль/г [57, 237, 352]. Прп увеличении концентрации органического растворителя в подвижной фазе концентрация ионов додецилсульфата и тетрабутиламмония резко снижается [352]. Эти же авторы указывают, что сорбция ион-парного реагента на поверхности алкилсиликагеля имеет место только тогда, когда сорбент подвижной фазой не смачивается (т. е. она содержит мало органического растворителя) [349]. Если же сорбент смачивается, дополнительное введейгге в систему ион-парного модификатора способствует ускорению элюирования за счет нарастания взаимодействий в подвижной фазе. Интересные данные, указывающие на конкуренцию ион-парного реагента и органического модификатора, представлены в работе [402]. На рис. 4.41 изображена зависимость состава адсорбированной фазы на Лихросорбе RP8 от содержания н-пропанола в элюенте. Помимо н-пропанола элюент содержал 0,4% цетримида (цетилтриметиламмония бромида) pH 6,0. По мере увеличения концентрации н-пропанола в подвижной фазе его концентрация в неподвижной также увеличивалась, в то время как концентрация цетримида уменьшалась. Суммарная концентрация н-пропанола и цетримида сохраняла при этом относительное постоянство. [c.172]

На проявление модифицирующего эффекта существённое влияние оказывает pH подвижной фазы. Ассоциация модификатора с сорбатом, где бы она ни происходила, будет наиболее прочной, если оба они ионизированы. Поэтому pH подвижной фазы выбирают в зависимости от свойств сорбата и модификатора. На рис. 4.43 изображена типичная зависимость коэффициентов емкости слабой кислоты от pH подвижной фазы и концентрации модификатора. Нижняя кривая, соответствующая обычному обращенно-фазовому режиму, совпадает по форме с кривыми рис. 4.4. При добавлении в подвижную фазу динамического модификатора удерживание увеличивается. Более всего этот эффект выражен при pH около 6, где в достаточной степени ионизированы и сорбат, и модификатор. Рекомендуемые значения pH для ион-парной хроматографии приведены в табл. 4.38. [c.173]

При приготовлении подвижных фаз для ион-парной, обра-щенно-фазовой или ионообменной хроматографии получение необходимой молярной концентрации компонентов не вызывает затруднений, в то время как установка необходимого значения pH водно-органических элюентов может быть связана с затруднениями. Поэтому принято указывать значения pH не для элюента в целом, а для его водной части, до смешения с органическим растворителем. Следует одновременно иметь в виду, что ирибавление к водному буферу органического растворителя может увеличить кажущееся значение pH на 1—2 единицы, в результате чего смешанный водно-органический элюент может оказаться довольно агрессивным по отношению к химически модифицированным силикагелям. [c.208]

Предположим, что сорбат 8 — основное соединение, которое существует в протонированной форме Н5+ в используемой при разделении области pH. В подвижную фазу добавлен заряженный ион-парный реагент р+Х . Распределение сорбата между подвижной и неподвижной фазами зависит от концентрации добавленного соединения. [c.138]

Рис. 7.12. Применение модели ион-парного распределения к удерживанию энантио-меров атропина и гомоатропина. Подвижная фаза октановая кислота в 0,02 М фосфатном буфере, pH 7,0 [97] (с разрешений Mar ell Dekker In .).

Многие из уже описанных принципов образования ковалентносвязанных хиральных фаз можно реализовать путем добавления хирального селектора в подвижную фазу. Все системы такого типа можно разделить на три группы системы, в которых происходит образование комплексов металлов (ХЛОХ), системы с добавками различных незаряженных соединений и, наконец, ион-парные системы, предназначенные для разделения заряженных соединений. [c.157]

Логическим развитием метода ион-парной хроматографии [216, 217] явилось использование хирального противоиона (-Ь)-Ю-кам-форсульфокислоты в качестве хиральной добавки к подвижной фазе для разделения энантиомеров некоторых аминоспиртов [218]. Аминоспирты в протонированной форме образуют с анионом камфор-сульфокислоты вследствие электростатических взаимодействий диастереомерные комплексы. Предполагается, что в комплексе между партнерами возможны и другие типы взаимодействий, и в первую очередь образование водородной связи между кетогруппой и гидроксильной группой, что также влияет на наблюдаемое различие в хроматографическом удерживании (рис. 7.18). Разделение бы- [c.163]

Метиленхлорид является прекрасным растворителем для ион-парной хроматографии, и разделение энантиомеров по этому методу следует рассматривать как разделение лабильных диастереомерных ион-парных комплексов, т. е. хиральная дискриминавд1я происходит в подвижной фазе. Как и следовало ожидать, коэффициент емкости заметно снижается с увеличением концентрации полярного компонента в подвижной фазе. [c.164]

Полярные компоненты подвижной фазы. Эти соединения, например пентанол-1, вызывают резкое уменьшение удерживания сорбата, обычно сопровождаюшееся и ухудшением разделения. Последнее, как полагают, обусловлено конкуренцией за группы в ион-парных компонентах, способных к образованию водородных связей, что в свою очередь приводит к понижению селективности. [c.166]

В подавляющем большинстве случаев подвижная фаза состоит из двух или более компонентов. При этом один компонент подвижной фазы в системе данного типа является сорбционно неактивным, т. е. сам по себе не в состоянии вызвать элюирование введенных в колонку анализируемых веществ (растворители А). Среди остальных компонентов подвижной фазы, помимо веществ специального назначения (соли буферов, ион-парные и другие модификаторы), присутствует растворитель сорбционно активный, который сам по себе способен приводить к быстрому элюированию компонентов пробы (растворители Б). Задача выбора элюирующей силы, приемлемой для данного сорбата, сводится к определению такого соотношения компонентов А и Б, которое обеспечивает необходимые для данной задачи величины удефживанця. В зависимости от типа хроматографической системы и характера сорбатов одно й то же соединение может выступать в качестве растворителя Л или Б. Так, при анализе малополярных сорбатов на силикагеле может оказаться полезной система растворителей гексан — хлороформ. В этом случае хлороформ выступает в роли растворителя Б, т. е. увеличение его концентрации вызывает уменьшение удерживания. При хроматографии на этом же сорбенте более полярных сорбатов часто используют систему растворителей хлороформ — метанол. Однако здесь компонентом Б, определяющим подвижность зоны, является метанол, в то время как хлороформ выступает в роли компонента А, т. е. инертного разбавителя подвижной фазы. [c.306]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология