Нингидрин и нингидриновая реакция

Идентификация аминокислот и пептидов во фракциях. А. Нингидриновая реакция. Нингидрин реагирует со всеми аминокислотами, имеющими а-МНа-группу, давая фиолетовое окрашивание, за исключением пролина или оксипролина, в реакции с которыми нингидрин дает желтое окрашивание.Некоторые примеси (медь, кадмий и др.) могут влиять на цвет пятен. Для проявления хрома- [c.192]

Нингидриновая реакция — качественная реакция на а-аминокислоты и пептиды, основанная на образовании окрашенных продуктов при их нагревании с нингидрином. [c.202]

Нингидриновая реакция. Цветная реакция на аминокислоты и пептиды, протекающая при их нагревании с нингидрином эта реакция широко применяется для выявления аминокислот и пептидов и количественной оценки их содержания. [c.1014]

Наиболее общим методом определения концентрации пептидов является колориметрия продуктов реакции с нингидрином [2]. Это один из наиболее чувствительных колориметрических методов. Для обнаружения аминокислот и пептидов разработаны как обычный, так и полностью автоматизированный варианты, причем нингидриновый реагент не вызывает коррозии и его можно подавать обычным микронасосом. Реакция идет по свободным аминогруппам, но в некоторых случаях хромофор образуется с низким выходом. Данные по окрашиванию дипептидов можно найти в работе [3]. У всех дипептидов, содержащих в качестве Ы-концевой аминокислоты аргинин, треонин, серин, глутаминовую кислоту, глицин, фенилаланин, метионин, лейцин и тирозин, интенсивность окраски составляет 1,6-10 у лейцина эта величина составляет 1,7-10 . У дипептидов с М-концевым лизином и аспарагиновой кислотой интенсивность окраски несколько выше (на 20 и 29% соответственно), а дипептиды с Ы-концевым гистидином и триптофаном проявляются несколько слабее (42 и 67% соответственно от средней интенсивности). Дипептиды с М-концевым пролином, валином и изолейцином окрашиваются очень слабо [2,7 6,4 и 8,5% от средней (1,6- 10 ) интенсивности]. [c.391]

Предложено два микрометода (нингидриновый и нитропруссид-ный) количественного определения метионина, меченного Оба метода позволяют определять метионин с точностью 2—3%. По простоте приемов и сравнительной точности результатов определения метионина нитропруссидный метод предпочтительнее нингидринового. Реакции с нингидрином и нитропруссидом натрия могут быть использованы для испытания на подлинность метионина, меченного S . Методы внедрены в практику производственной лаборатории. [c.216]

Поскольку поглощение при этой длине волны практически линейно зависит от числа исходных аминогрупп, на основе нингидриновой реакции удалось разработать удобный колориметрический метод количественного определения аминов. Если нагревание с нингидрином проводить при pH 1—5, то количество свободной аминокислоты можно определить по объему выделившейся двуокиси углерода (полипептиды и первичные амины также дают лиловое окрашивание с нингидрином, однако в этом случае СО2 не образуется). Таким образом, нингидриновая реакция позволяет определять свободные аминокислоты даже в присутствии полипептидов. В случае имино-кислот (пролина и оксипролина) образуется продукт ярко-желтого цвета с максимумом поглощения около 440 ммк. Это позволяет использовать нин-гидриновую реакцию для определения иминокислот в белковых гидролизатах, содержащих большой избыток аминокислот. [c.48]

На основе нингидриновой реакции были разработаны методы количественного определения аминокислот, в частности метод распределительной хроматографии на бумаге, впервые внедренный в 1944 г. (А. Мартин и Р. Синдж). Эта же реакция используется благодаря своей высокой чувствительности в автоматическом анализаторе аминокислот. Впервые такой прибор сконструировали Д. Шпакман, С. Мур и У. Стейн (рис. 1.7). После разделения смеси аминокислот в колонках, заполненных специальными ионообменными смолами (сульфополистирольный катионит), ток элюента из колонки поступает в смеситель, туда же поступает раствор нингидрина интенсивность образующейся окраски автоматически измеряется на фотоэлектроколориметре и регистрируется самописцем. Этот метод нашел широкое применение в клинической практике при исследовании крови, мочи, спинномозговой жидкости. С его помощью за 2—3 ч можно получить полную картину качественного состава аминокислот в биологи- [c.42]

Проявление нингидрином. Раствор нингидрина наливают в ванночку и равномерно пропитывают им хроматограмму. Хроматограмму высушивают под тягой и выдерживают в темноте при комнатной температуре около 12 ч. В этих условиях с нингидрином реагируют все а-аминокислоты (другие аминокислоты дают реакцию при более высокой температуре — около 100°С). Проявление хроматограмм при качественной хроматографии можно ускорить, помещая последние на 5—10 мин в термостат при 60° С. Окраска, получаемая при проявлении аминокислот нингидрином, неустойчива. Ее можно закрепить, опрыскивая проявленную хроматограмму из пульверизатора раствором ацетона, содержащим азотнокислую медь. Стойкую окраску можно получить при внесении в нингидриновый реактив кадмия (с. 135) или стронция. Окраска сохраняется в течение нескольких недель при проявлении аминокислот смесью 1%-ного раствора нингид-рнна в ацетоне и 1%-ного раствора хлористого стронция в 20%-ном растворе СН3СООН (1 6). [c.129]

Нингидриновая реакция — цветная реакция на первичные или вторичные аминогруппы. Пептиды и аминокислоты при взаимодействии с нингидрином разлагаются и выделяющийся при этом аммиак образует сине-фиолетовый комплекс с нингидрином [c.436]

В процессе развития аминокислотного анализа состав нингидринового реагента неоднократно подвергался изменениям, однако основные принципы, заложенные в первых работах Мура и Стайна [10, 33], остались неизменными. Основу буфера составляет концентрированный раствор ацетата натрия с pH 5,0, что является оптимальным для полноты реакции и измерения поглощения. Водный раствор метилцеллозольва обеспечивает хорошую растворимость как органических соединений, так и неорганических солей. Восстановленный нингидрин, необходимый для запуска реакции, получают под действием хлорида олова (И). Реагент готовят и хранят в отсутствие кислорода воздуха, например в атмосфере азота. [c.338]

Условия проведения реакции с нингидрином описаны в прописи для реактива № 108. Добавление уксусной кислоты гарантирует необходимое для нингидриновой реакции значение pH около 5 даже при использовании щелочного растворителя. При более длительном нагревании и повышении температуры (110°) фон становится розовым. Чувствительность определения методом ХТС некоторых аминокислот приведена в табл. 104. [c.404]

Общепринято определять пептиды с помощью нингидриновой реакции. Добавление Сс1 к раствору нингидрина не только увеличивает ее чувствительность, но и повышает стабильность окрашивания. Ы-ацильные пептиды можно выявлять в реакции с хлором [67]. Некоторые аминокислоты выявляются реакциями специфического окрашивания, например гистидин — реакцией Паули, аргинин — реакцией Сакагуши. С помощью этих же реакций можно обнаруживать и пептиды, содержащие гистидин и аргинин. [c.38]

При хроматографическом анализе аминокислот (см. стр. 35) большое применение нашла реакция с нингидрином. Нингидрин дает окрашивание (обычно сине-фиолетовое) со всеми аминокислотами. На основе нингидриновой реакции разработаны методы количественного определения аминокислот, входящих в состав белков. [c.32]

Нингидриновая реакция. Реакция эта была нами описана уже выше в главе, посвященной аминокислотам. Белки также дают эту реакцию. При добавлении к раствору белка нингидрина и нагревании его до кипения получается синее окрашивание. Растворы белка дают, однако, менее интенсивную окраску, чем растворы аминокислот в той же концентрации. [c.282]

Как видно из уравнения реакции, в образовании цветного продукта принимает участие азот аммиака, образующегося из а-аминогруппы. Таким образом, нингидриновая реакция выявляет свободные а-аминогруппы. Чем больше свободных а-аминогрупп содержит белок, тем интенсивнее окраска, образующаяся при взаимодействии его с нингидрином. [c.32]

Нингидриновую реакцию проводят в смеси исследуемого водного раствора с бутиловым спиртом. Необходимость добавления к реакционной смеси бутилового спирта вызвана тем, что в спиртовом растворе окрашенный продукт реакции значительно более устойчив, чем в водном. Благодаря этому становится возможным проведение реакции со значительным избытком нингидрина, в то время как в водном растворе последний быстро разрушает окрашенное соединение. [c.104]

Если реакция Миллона или ксантопротеиновая реакция характерны только для тех белков, которые содержат соответственные аминокислоты, то нингидриповая реакция более универсальна и получается со всеми без исключения белками. Объясняется это тем, что нингидрин дает окрашивание (обычно сине-фиолетовое) с любой -аминокислотой, а любой белок содержит именно а-аминокислотпые остатки. На основе нингидриновой реакции разработан метод количественного определения белков и аминокислот. [c.32]

Окислительное дезаминирование а-аминокислот под действием 1,2,3-ин-дантриона - нингидрина - лежит в основе их качественного обнаружения. При этом а-аминокислота претерпевает глубокие превращения, а продукт реакции имеет характерную синюю окраску (нингидриновая реакция). Синий цвет обусловлен образованием красителя синий Руэмана [c.515]

Количественное определение аминокислот. После получения хроматограмм количественно определять отдельные аминокислоты можно двумя методами при помощи нингидриновой реакции с метилцеллосольвом (мономе-тиловый эфир этиленгликоля) и по интенсивности окраски медных производных аминокислот с нингидрином. [c.42]

Белки, а в еще более сильной степени аминокислоты и полипептиды дают синее или фиолетовое окрашивание с нингидрином (трикетогидринден-гидратом). Нингидриновая реакция характерна для аминогруппы в а-п сложении. [c.12]

Захариус и Портер [115] обнаружили по нингидриновой реакции неизвестный пик, который после соответствующего выделения был идентифицирован как смесь фруктозы и глюкозы. Дальнейшие исследования показали, что имеется ряд углеводов и безазотистых соединений, которые Дают при аминокислотном анализе нингидрин-положительные пики. [c.25]

Нингидриновая реакция характерна для а-аминогрупп. Растворы белка, а-аминокислот и пептвдов при нагревании с нингидрином дают синее или фиолетовое окрашивание. В этой реакции а-амино-кислоты и пептиды окисляются нингидрином и подвергаются окислительному дезаминированию и декарбоксилированию с образованием аммиака, альдегида и СО2. Нингидрин восстанавливается и связывается со второй молекулой нингидрина посредством молекулы аммиака, образуя продукты конденсации, окрашенные в синий цвет (комплекс Руэмана). Нингидриновая реакция используется для количественного определения а-аминокислот в аминокислотных анализаторах. [c.25]

Обычно пептиды при реакции с нингидриновым реагентом дают слабое окрашивание, так как они реагируют только свободной аминогруппой. Если же пептид подвергнуть щелочному гидролизу, то все освобождающиеся аминокислоты будут реагировать с нингидрином, давая интенсивное окрашивание. Метод [c.38]

Особенно предпочтительна комбинация нингидриновой методики и хлорирования. Вначале проводят опрыскивание нингидрином, отмечают пятна, а затем обрабатывают хлором, как указано выше предварительная обработка нингидрином не оказывает влияния на результаты. Вещества, обнаруживающиеся только при галогенировании, таким образом, можно легко отделить от соединений, дающих положительную реакцию с нингидрином. [c.412]

Все описанные специфические реакции можно проводить после обнаружения нингидрином. Однако до проведения специфического обнаружения следует снять фиолетовую окраску, вызванную нингидрином. С этой целью хроматограмму погружают в раствор концентрированной соляной кислоты в ацетоне (1 10), после чего сушат. Перед обнаружением триптофана такое обесцвечивание не обязательно, поскольку реагент на триптофан растворен в смеси кислоты с ацетоном и обесцвечивает нингидриновые пятна. Чувствительность обнаружения реагентом Паули и диметиламинобензальдегидом на хроматограммах, обработанных и не обработанных нингидрином, одинакова, а чувствительность обнаружения реагентом Сакагучи после обесцвечивания нингидриновых пятен снижается. [c.126]

При создании аминокислотных анализаторов были использованы все достижения аминокислотного анализа. Хроматография аминокислот на ионитах по существу осталась без изменений необходимо было только обеспечить подачу элюента с постоянной скоростью. Потребовалось также преобразовать нингидриновый метод детектирования в непрерывный процесс, что было достигнуто путем модификации двух хорошо известных методов. Вначале была разработана система, по которой реакцию с нингидрином проводили в проточном капиллярном реакторе [4]. Несколько позднее для проведения анализа был использован автомат для серийных колориметрических анализов, созданный фирмой Te hni on. Эти системы легли в основу двух основных моделей аминокислотных анализаторов. Таким образом, с учетом существования одно- и двухколоночных хроматографических систем возникло четыре типа аминокислотных анализаторов [c.315]

В основе кислого нингидринового метода лежит реакция пролина с нингидрином в сильнокислой среде с образованием соединения 1ч,>аоного цвета, оптическая плотность которого определяется с зеленым фильтром (490-530 нм). [c.277]

При реакции (100 °С) нингидрин — гидриндантина и аминокислот образуется двуокись углерода [104]. При попадании пузырьков этого газа в кювету может нарушиться световой поток. Поэтому пузырьки газа, образующ,иеся в результате химической реакции или по другим причинам, должны легко и быстро удаляться. По той же причине необходимо удалять из кюветы и коллоидный осадок, образующийся из солей олова и, возможно, метилцеллозольва (см. обсуждение приготовления нингидринового реагента). Плотность таких коллоидных осадков в отличие от плотности пузырьков газа в некоторых случаях настолько высока, что поток буфера не может вымыть их из кюветы. Поэтому при конструировании кюветы всегда нужно учитывать возможность их загрязнения коллоидными осадками. [c.27]

Для определения концентрации аминокислот в собранных фракциях применяется колориметрический метод, использующий цветную реакцию аминокислот с нингидрином. Разработанная методика позволяет провести от 500 до 1С00 анализов в течение недели. Чувствительность колориметрического нингидринового метода позволяет определить аминокислоту в водной или спиртовой среде при концентрации 1 10- . [c.162]

При приготовлении описанного выше нингидринового реагента нам не раз приходилось встречаться с трудностями. Эти трудности обычно приписывались качеству метилцедлозольва. Важно, чтобы метилцеллозольв не только не содержал следов перекисей (<3 млн. д.), которые мешают протеканию цветной реакции с нингидрином, но и не вызывал помутнения раствора, как это бывает с некоторыми партиями, после контакта с воздухом (особенно если последний попадает при перемешивании нингидринового реагента). При использовании такого недоброкачественного метилцеллюлоза в ходе анализов образуется белый осадок, который удерживается на внутренних стенках трубки реактора и в кюветах колориметра. Этот осадок не похож на гидриндантин, так как он нерастворим в метилцеллозольве, но растворяется в разбавленной кислоте. Для уменьшения образования этого осадка после нингидринного насоса помещают специальный фильтр. [c.55]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология