Электрофорез ячейка

Измерение скорости электрофореза выполняли в специально сконструированной кювете, схема которой дана на рис. 12.1. Рабочую стеклянную кювету 1 в виде прямоугольного парал-лепипеда с открытыми торцами длиной 20 мм и поперечным сечением 20x0,8 мм помещали между двумя сосудами 2 также прямоугольного сечения, изготовленными из оргстекда. Толщина стенок измерительной ячейки составляла 0,2 мм, что обеспечивало надежную визуализацию микрообъектов при работе с темнопольным микроскопом. Боковые емкости 2 в месте их сочленения с кюветой имели ряд отверстий диаметром 0,5 мм эти емкости прочно закреплялись на основании 3, в котором было высверлено отверстие для вхождения темнопольного объектива 4. Б нижнюю часть емкостей 2 помещали гель агар-агара 5, приготовленный на 1 н. растворе КС1 сверху заливали 0,1 и. раствор USO4 (б) и помещали медные электроды 7. Такая установка удобна в обращении в ней обеспечена герметичность сочленения боковых емкостей с измерительной камерой и возможность тщательной очистки последней после проведения исследований. На основании данных о подвижности частиц дисперсной фазы вычисляли -потенциал по формуле Гельмгольца — Смолуховского без учета поправки на поверхностную проводимость [59]. [c.202]

Рис. 90. Профиль концентрации двух разделенных веществ вдоль координаты X электрофоретической ячейки в начале электрофореза и в два последующих отрезка времени

Классический электрофорез без носителя осуществляют в U-образной ячейке, в которой на буферный раствор, содержащий белок, наслаивается чистый буферный раствор. Выбором подходящего pH достигают одинакового знака заряда белков, ко- [c.350]

В данной работе описано проведение электрофореза в ячейке со скользящими пластинами, конструкция которой предложена Мароном (рис. 62). Этот прибор хорошо зарекомендовал себя при работе с мицеллярными растворами ПАВ. [c.175]

Электрокинетические явления, происходящие в неводных дисперсных системах, в частности влияние постоянного однородного электрического поля на суспензии твердых углеводородов нефти в органических растворителях, описано в работах [104, 114]. В качестве дисперсионной среды были взяты органические растворители разной природы, многие из которых широко применяются в процессах производства масел, парафинов и церезинов (н-гексан, н-гептан, изооктан, бензол, толуол, метилэтилкетон, ацетон и др.). Поведение суспензий в электрическом поле исследовали при 20 °С в стеклянной ячейке с плоскими параллельными никелевыми электродами в интервале напряженностей до 12,5 кВ/см. Установлено, что в алифатических растворителях происходит перемещение частиц дисперсной фазы (твердых углеводородов) в сторону катода, в то время как в ароматических растворителях эти же частицы перемещаются к аноду. Для твердых углеводородов, очищенных от ароматических компонентов и смол, в дисперсных системах с той же дисперсионной средой наблюдается явление двойного электрофореза, т. е. частицы дисперсной фазы перемещаются в сторону как положительного, так и отрицательного электрода. В суспензиях твердых углеводородов, где дисперсионной средой являются полярные растворители (МЭК, ацетон), явление электрофореза выражено слабо. Для таких систем характерна можэлектродная циркуляция, сопровождаемая агрегацией частиц. Эти электрокинетические явления в суспензиях твердых углеводородов объясняются существованием двойного электрического слоя на границе раздела фаз. Двойной электрофорез и меж-электродная циркуляция объясняются [115] поляризацией частиц твердой фазы и свойственны частицам, не имеющим заряда или находящимся в изоэлектрическом состоянии с мозаичным распределением участков с различным знаком заряда. Таким образом, у частиц дисперсной фазы как в полярной, так и в неполярной среде, отсутствует электрический заряд, а если он и есть, то весьма неустойчив. [c.187]

Раствор полисахарида помещают в У-образную ячейку прибора для электрофореза, которая разделена плоскими шлифами на три секции таким образом, что ток жидкости через ее канал может быть прерван горизонтальным смещением центральной секции. При заполнении и монтировании ячейки раствор полисахарида помещают в нижнюю секцию. Одну часть центральной секции ячейки заполняют раствором полисахарида, а другую — буфером. Буфер помещают также в верхнюю секцию ячейки и в сосуды, соединенные с верхней секцией. При передвижении центральной секции в нормальное положение между раствором полисахарида и буфером образуется резкая граница. В ячейке поддерживают температуру 4 С, при которой плотность воды максимальная и конвекционные токи ничтожны. Смещение границы измеряют по фотографиям, сделанным через различные промежутки времени. Оптическое устройство работает по принципу регистрации изменения показателя преломления раствора в месте границы. [c.48]

А. Тизелиус разработал метод изучения электрофоретической подвижности белков. От прибора, предназначенного для изучения лиозолей (см. рис. 34, а), прибор Тизелиуса отличается некоторыми конструктивными особенностями. Наиболее существенное из них — применение разъемных кювет прямоугольного сечения. Этим достигается возможность наблюдения за движением неокрашенных в видимой области белков с помощью специальных оптических систем. Концентрация белков на различных участках прямоугольной ячейки регистрируется по изменению показателя преломления. Изучение градиента показателя преломления при электрофорезе дает возможность проводить качественный анализ смеси белков и их препаративное разделение по различию электрофоретической подвижности. Этот метод назван свободным электрофорезом. [c.216]

Общий принцип разделения выглядит весьма просто. На раствор электролита наносится в виде слоя (зоны) раствор, содержащий разделяемую смесь. После подачи напряжения каждый компонент смеси начинает перемещаться в соответствии со своей подвижностью. Через некоторое время каждый из компонентов, имеющий подвижность, достаточно сильно отличающуюся от таковой для других компонентов, образует свою зону на расстоянии UiS t (i —время электрофореза) от расположения исходной зоны. Следует, однако, иметь в виду, что само создание зоны приводит к возникновению скачка концентрации каждого из разделяемых компонентов на границе разделяемая смесь —исходный электролит. Поэтому сразу же начинается диффузия компонентов в свободный от них электролит. Диффузия идет на протяжении всего процесса разделения, приводя к размыванию зон. Поэтому профиль концентраций разделяемых компонентов вдоль ячейки, в которой проводится электрофорез, постепенно сглаживается, как это изображено на 330 [c.330]

Электрофоретическое разделение полисахаридов может быть осуществлено различными путями под действием электрического тока в растворе (электрофорез с подвижной границей в ячейке Ти-зелиуса) на полосках бумаги, на листах бумаги из стеклянного волокна, на лентах из чистого отбеленного шелка, на колонках, заполненных стеклянным порошком (зонный электрофорез). [c.48]

Рис. 121. Концентрация и градиент концентрации (а следовательно, и градиент показателя преломления) как функция положения в ячейке. Диаграммы даны для гипотетического случая идеального электрофореза одного вида макроионов в растворе, содержащем избыток буферного раствора. Площади под обоими пиками являются равными и пропорциональны концентрации макроионов в исходном растворе (см. Приложение В)

Использование геля как среды, где проводится электрофорез, полностью устранило трудность, связанную с броуновским движением. Червеобразные молекулы ДНК, подобно угрям, запутавшимся в рыбацкой сети, оказываются фиксированными в полимерной сетке геля. Лишь под действием электрического поля они очень медленно ползут, извиваясь, к аноду, едва протискиваясь сквозь тесные ячейки сетки. Разрешающая способность метода гель-электрофореза оказалась настолько высокой, что не слишком длинные фрагменты ДНК, отличающиеся всего на одно мономерное звено, четко отделяются друг от друга в виде хорошо различимых полосок. [c.67]

Электрофорез в градиенте концентрации. Здесь опять речь идет о методе, при котором определяющую роль играет размер молекулы белка. Носитель состоит из полиакриламидного геля возрастающей концентрации (например, от 2 до 16 или от 3 до 30 % акриламида). В этом градиенте пористости белковые молекулы тормозятся, т. е. останавливаются, по мере того как ячейки сетки становятся все более мелкими. [c.40]

Непрерывный электрофорез можно осуществлять и в растворе, но для этого необходимы специальные многокамерные ячейки с полупроницаемыми стенками из ионообменных мембран. Например, для достаточно чистого разделения бинарных смесей требуется 5-камерная ячейка. По сравнению с другими методиками электрофорез в растворе является самым производительным, но практически применим только к несложным смесям, таким как N(1 — ТЬ [731] или 5г - У "> [1026]. [c.149]

Обычно аппаратурой для определения подвижности является U-образная ячейка такого типа, как показано на рис. 120. Между раствором, который изучается, и соответствующим раствором, содержащим тот же самый растворитель и буфер, но лишенный макроионов, образуются две резкие границы. (Оба раствора обычно перед началом электрофореза подвергаются взаимному диализу, так что никаких градиентов химических потенциалов компонентов буфера в начале опыта не существует.) Затем прикладывается разность потенциала с помощью двух электродов, показанных на рис. 120, в результате чего ионы раствора будут двигаться, каждый с соответствующей скоростью. Эта скорость зависит от подвижности иона и от напряженности электрического поля [уравнение (24-3)]. [c.480]

Во время электрофореза фиксируют с помощью миллиамперметра силу тока в ячейке. Рекомендуется, чтобы сила тока не превышала 2 ма. Это предупреждает разогревание латекса. [c.76]

Наилучшим устройством для образования срезанной границы растворов двух солей оказалось приспособление в ячейке Тизелиуса, созданной специально для изучения электрофореза [49]. Применение этой конструкции ограничено областью достаточно концентрированных растворов [ 50], что вызвано чрезвычайно высокой электропроводностью растворителя, плохо поддающейся учету. Проводимость растворителя обусловлена, по-видимому, загрязнением из мелких трещин в местах вплавления оптических окошек [ 34]. [c.93]

Измерения электрофореза. Микроскопический метод. При этом методе изучаемый коллоидный раствор или суспензия помещается в специальную микроячейку для электрофореза, закрепленную на предметном стекле микроскопа [18]. Обычно применяется мелкая плоская ячейка с прямоугольным сечением, с двух сторон которой впаяно по электроду. Эти электроды соединяются с источником э. д. с., и скорость движения любой частицы определяется с помощью окулярной шкалы микроскопа. Градиент потенциала вычисляется из величины силы тока и сопротивления раствора между электродами, расстояние между которыми известно. Поскольку взвешенные частицы постепенно оседают, для изучения электрофореза была сконструирована вертикальная микроячейка. Влияние силы тяжести исключается путем наблюдения движения частицы при наложении поля сначала в одном направлении, а затем в обратном. Для изучения электрофореза применяются также ячейки цилиндрической формы, поскольку их легче изготовлять и мыть, чем ячейки с прямоугольным поперечным сечением. Однако кривизна стенок таких ячеек несколько затрудняет точное наблюдение за движущимися частицами. [c.712]

Очистку воды I контура от коллоидных взвесей можно осуществить также, используя явление электрофореза. Через электродиализную ячейку с полупроницаемыми мембранами (см. рис. 52) проходит деионизованная вода, содержащая коллоидные взвеси. В зависимости от заряда частицы осаждаются на той или иной мембране и укрупняются. Через определенный промежуток времени аппарат следует остановить, смыть с мембран коллоидные осадки и удалить их в хранилище. Такой способ очистки воды I контура может оказаться весьма перспективным. Это подтвержается опытом, полученным при работе с электрофорезным фильтром, установленным на байпасной системе очистки воды в исследовательском реакторе ВВР-М Физико-технического института им. А. Ф. Иоффе АН СССР [264]. Производительность фильтра 0,5 м ч, габариты 400X224X935 мм. Расстояние между электродами 1 см, число анодов, изготовленных из платинированного титана, — четыре, катодов из стали марки 1Х18Н9Т — пять. Мембранами служат чехлы из капроновой ткани. Напряжение на фильтре ПО—120 в, плотность тока 7,56 а/см . Схема включения фильтра в I контур реактора приведена на рис. 59, а эффективность работы фильтра — в табл. 39. [c.192]

Предельная рассеиваемая мощность. Опасность конвекции в ячейке с градиентом плотности относительно невелика она, естественно, тем меньше, чем круче градиент. Даже перегрев в центре ячейки на 10° вызывает уменьшение плотности, не превышающее 0,1% (рис. 3 предполагается, что температура на периферии близка к температуре максимальной плотности). При градиенте 0,01 г см жидкость у оси поднимается на доли миллиметра, т. е. на пренебрежимо малую величину по сравнению с шириной зоны. Все же при особо неблагоприятных условиях конвекция иногда возникает в отдельных областях, где ее можно наблюдать визуально благодаря резким изменениям показателя преломления. Тогда ток следует уменьшить. Обычно причиной, ограничивающей допустимый перегрев, является не конвекция, а зависимость подвижности исследуемых ионов от температуры. Неодинаковая скорость электрофореза по сечению ячейки приводит к искажению зон. [c.71]

Приготовление геля. Для полимеризации 30 мл разделяющего геля (12,5%) смешивают 12,5 мл раствора акриламида, 7,5 мл буфера разделяющего геля и 10 мл воды. После деаэрирования (5—10 мин на водоструйном насосе) к смеси добавляют 16 мг персульфата аммония и 18 мкл ТЕМЕД. Полученный раствор заливают либо в гелевую ячейку для вертикального электрофореза в пластине (с. 97), либо в трубки (с. 95). На поверхность раствора наслаивают воду. После полимеризации удаляют воду шприцом или фитилем из фильтровальной бумаги. Готовят смесь для концентрирующего геля. Смешивают 4 мл раствора № 1 с 5 мл буфера концентрирующего геля и добавляют [c.122]

При фронтальном электрофорезе небольшой объем раствора, содержащего разделяемые. компоненты, помещают в трубку с раствором электролита. Под влиянием приложенного поля различные компоненты двигаются к электродам с различной скоростью и разделяются на зоны. Однако после отключения электрофоретической ячейки все зоны начинают смешиваться за счет свободной диффузии. Следовательно, положение разделяемых частиц в ячейке следует оценивать в процессе их миграции. Положение различных зон обычно оценивают при помощи сложной оптической системы, которая фиксирует изменение показателя преломления на границе частей раствора, имеющих различный состав (эффект Шлирена). Для проведения таких измерений требуется дорогостоящее оборудование необходим также строгий контроль экспериментальных условий. В связи с этим большинство электрофоретических измерений в настоящее время проводят методом зонного электрофореза. [c.465]

Подобное расхождение между расчетными и экспериментальными данными можно объяснить двумя причинами. Во-первых, диффузионно-форетические силы со временем уменьшаются, и их величина значительно раньше, чем истечет время релаксации, становится ниже инерционных сил, действующих на каплю. Во-вторых, со стороны анода на отрицательно заряженную каплю действует отрицательный объемный заряд, возникший при прохождении тока через ячейку. Используя в качестве объектов исследования малополярные и вязкие среды, можно более детально изучить нестационарные процессы электрофореза. [c.24]

Клетки, выделяемые из биологических сред, крайне чувствительны к внешним воздействиям (изменениям температуры, pH и пр.) и не могут находиться в электрофоретической ячейке длительное время. Поэтому метод макроэлектрофореза, или свободного электрофореза, проводимый в и-образной трубке и длящийся около часа, оказывается мало пригодным для биологических объектов. Кроме того, для заполнения и-образной трубки необходим сравнительно большой объем материала. [c.99]

Применение 7-ячейки в КЭ не повышает чувствительность определения, так как помимо сигнала за счет светорассеяния также сильно увеличиваются шумы. Новейшие разработки этих систем показывают, что за счет сферической линзы на стороне источника света непосредственно перед изломом капилляра светорассеяние может быть минимизированно. Благодаря этому можно достигнуть улучшения чувствительности примерно в 11 раз для 7-ячейки с длиной светового пути 3 мм. При выбранной длине пути 3 мм отсутствия влияния или очень малое влияние на эффективность следует ожидать только для "широких" пиков. Из ВЭЖХ известно, что объем пика должен быть в 5 раз больше, чем объем ячейки детектора. Это означало бы для ячейки длиной 3 мм в КЭ, что пик должен иметь в капилляре ширину 1.5 см. Однако, поскольку в капиллярном электрофорезе происходит детектирование в режиме реального времени, и благодаря малому объему ячейки детектора и отсутствию соединительных элементов размывания зон не происходит, это правило, конечно, не вполне применимо. [c.37]

Макроэлектрофорез латекса в приборе Рабиновича и Фодиман. Макроэлектрофоретические измерения производят в приборах различных конструкций. Ниже описано применение видоизмененного прибора Рабиновича и Фодиман, приспособленного для латексов с плотностью полимера, меньшей плотности воды (например, латексов СКС, содержащих меньше 50% стирола в полимере). Общий вид электрофоретической ячейки представлен на рис. 34, схема установки для электрофореза — на рис. 35. [c.75]

Схема установки для электрофореза. приведена на рис. 40. Сосуд изготовлен из плексигласа и имеет размер 300 X 264 X X 10 мм. Рабочая часть сосуда наполнена кварцевым порошком и отделена от электродов полупроницаемой мембраной. Исследуемый раствор подается сверху на узком участке наполнителя при помощи шприца, работающего от моторчика, с постоянной скоростью (от 5 до 12 мл1 час см ). На платиновые электроды подается постоянное напряжение от газотронного выпрямителя на 800 в при силе тока до 1 а. В нижней части ячейки имеются отводы для отбора отдельных фракций электролита. Заштрихо- [c.300]

Аппаратура. Для электрофореза пользуются трехкамерным сосудом емкостью в 100 мл пли более. Анодом служит платина или уголь, катодом — платина. Содержимое средней ячейки механически перемешивается. Все три ячейки охлаждаются током воды с помощью стеклянных змеевиковых холодильников. Мембранами служат купрофан [393] или полотно, покрытое желатиной, продубленной 4% раствором НСОН (анод), и перга- [c.42]

В некоторых случаях белки, считавшиеся однородными, разделялись на индивидуальные компоненты при крайних значениях pH или при очень длительном электрофорезе. Для того чтобы при очень длительном опыте граница все время оставалась в поле зрения, применяют компенсацию, добавляя непрерывно с помощью автоматического приспособления буферный раствор в соответствующий электродный сосуд. При этом граница в ячейке смещается в сторону, противоположную электрофоретическому движению. Иногда удается использовать явление сужения границ на восходящей стороне, чтобы продолжать онйт неопределенно долго без уширения границ. [c.64]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология