Пептиды побочная реакция расщепления

Применение. В качестве специфического реактива восстановительного рас- щепления дисульфидных мостиков, для стабилизации и регенерации сульфгидрильных групп, В качестве добавки к секвенатррным растворам, повышающей стабильность введенной пробы и способствующей последующему расщеплению дисульфидных связей [2]. Как активатор креатинкиназы в сыворотке крови и как реактив для количественного определения креатинфосфокиназы [3, 4] и расщепления дисульфидных связей в кератине [5], Восстанавливает дисуль-фидные связи в пептидах и белках в жидком аммиаке без каких-либо обна руживаемых побочных реакций [6]. [c.143]

Процесс медленного расщепления белков дрожжей выражается в росте содержания пептидов, побочного продукта расщепления белков. Через 4 года контакта вина с дрожжевым осадком концентрация пептидов становится в два раза выше, чем через 1 год их контакта. Эти побочные продукты затем вступают в реакцию с другими содержащимися в вине соединениями — винно-каменной и яблочной кислотами, спиртом и аминокислотами, в связи с чем концентрация аминокислот в вине в течение нескольких лет медленно меняется. В процессе автолиза происходит постоянное высвобождение аминокислот, сразу же связывающихся с другими соединениями и участвующих в разных химических реакциях. Аминокислоты являются предшественниками (прекурсорами) вкусо-ароматических соединений — высших спиртов, лактонов, полиаминов и эфиров аминокислот, а сами аминокислоты могут иметь сладкий вкус. Крупные молекулы белков и пептидов мог гг связываться с некоторыми обычно летучими соединениями и удерживать их в растворе, сокращая тем самым степень их участия в формировании винного аромата. Отдельные аминокислоты (цистеин и метионин) содержат серу, высвобождаемую при их расщеплении. Аромат выдержанных шампанских вин типичен для серосодержащих соединений и напоминает аромат кофе и обжаренных орехов [19]. [c.191]

Конденсация лактона гомосерина с аминогруппами носителя обычно проходит с выходом 60— 100% и не сопровождается побочными реакциями. Аналогичным образом для ковалентного присоединения пептидов используется лактон, образующийся при расщеплении пептидных связей по остаткам триптофана с помощью К-бромсукцинимида или ВЫР8-скатола (см. с. 50). [c.64]

При каталитическом гидрировании в органических растворителях (уксусная кислота, спирты, ДМФ и др.) или в водно-органическои фазе с катализаторами (палладиевая чернь, палладий на угле или палладий на сульфате бария) наряду со свободным пептидом получаются не мещающие выделению толуол и диоксид углерода. Окончание выделения СО2 означает одновременно заверщение процесса отщепления. В том случае, если в пептиде присутствуют остатки цистеина или цистина, гидрогенолитического отщепления не происходит, но его можно проводить в присутствии эфирата трифторида бора [59] или 4 г-экв. циклогексиламина [60]. Такие же условия нужно соблюдать и при деблокировании в присутствии метионина. При восстановительном расщеплении натрием в жидком аммиаке [61] наряду с желаемым пептидом образуются 1,2-дифенилэтан и небольщие количества толуола углекислота же связывается в карбонат натрия. При работе по этому методу одновременно с бензилоксикарбонильным остатком отщепляются N-тозильная, N-тритильиая, S- и О-бензильные группы, а метиловые и этиловые эфиры частично переводятся в амиды. В качестве побочных реакций наблюдается частичное разрущение треонина, частичное деметилирование метионина, а также расщепление некоторых пептидных связей, например -Lis-Pro- и - ys-Pro-. [c.103]

Метиловые эфиры (-ОМе) и этиловые эфиры (-ОЕ1) применялись в пептидном синтезе уже Фишером и Курциусом. Снятие этих защит по окончании пептидного синтеза проводят мягким щелочным гидролизом в диокса-не, метаноле (этаноле), ацетоне, ДМФ с добавлением различных количеств воды. Названные алкиловые эфиры следует применять для синтеза коротких пептидов, так как с ростом цепи гидролитическое расщепление затрудняется, а применение жестких условий гидролиза повышает опасность побочных реакций. Следует избегать избытка щелочи, в противном случае может произойти рацемизация и другие побочные реакции. Оба алкильных эфира устойчивы к гидрогенолизу и мягкому ацидолизу. При гидразиноли-зе они переходят в гидразиды, что можно использовать для дальнейшей конденсации фрагментов с помощью азидного метода. При аммонолизе метиловые и этиловые эфиры дают амиды. Это применяют в тех случаях, когда С-концевая аминокислота должна нести амидную группу. [c.117]

Карбоциклопентилоксигруппа [1281 обладает интересными свойствами. Циклопентилхлоругольный эфир [1311—устойчивое соединение, которое легко реагирует с аминокислотами в слабощелочной среде [1281. Карбоциклопентилоксигруппа отщепляется действием бромистого или хлористого водорода в нитрометане [1281 с образованием продуктов расщепления, которые лишены лакри-могенных свойств и не вступают в побочные реакции с пептидами, содержащими метионин [128]. [c.183]

Благодаря отличиям в массах соответствующих фрагментов можно различить все три аминокислоты. К сожалению, этот довольно изящный метод имеет недостатки, из-за чего область его применения ограничена. Наиболее серьезный недостаток состоит в том, что побочные продукты, которые могут образоваться при неполном восстановлении, невозможно выделить. Когда имеют дело со смесью пептидов неизвестного состава, трудно отличить истинное производное от побочного продукта, так как последний также может детектироваться в газовом хроматографе. Еще одна побочная реакция в результате разрывов пептидных связей при восстановлении может привести к появлению новых соединений (свободных аминов и альдегидов), которые еще более усложняют картину. Известно, что при восстановлении третичного амида с помощью LiAIH4 происходит расщепление амидной связи и образуются альдегиды и амины [104]. Подобные реакции расщепления уже наблюдали для пролиновых пептидов [74]. Они встречаются также в ходе восстановления пептидов другими гидридами металлов [63]. Мы вынуждены признать, что этот метод может применяться только для не слишком сложных смесей нескольких простых аминокислот. Но даже при таком ограничении его важным преимуществом является то, что для анализа требуется очень небольшое количество вещества (несколько миллиграммов). [c.341]

В дальнейшем селективное расщепление с помощью К-бромсук-цинимида и в отдельных случаях с помощью М-бромацетамида было распространено на некоторые более сложные пептиды и белки [130]. Пептидные связи, образованные карбоксильной группой триптофана (белок вируса табачной мозаики, мол. в. 18 270, альбумин быка и человека, мол. в. 70 ООО), расщеплялись в среднем на 20—40% за 15 мин, тогда как для лизоцима (мол. в. 15 ООО) подобное расщепление проходило с меньшим выходом. Полученные результаты могут быть объяснены протеканием ряда побочных реакций, характер которых определяется природой, числом и местонахождением добавочных функциональных групп. При этом реакционноснособные ЗП-гругшы и, в некоторой степени, свободные аминЭгруппы окислялись. [c.399]

Другая возможность введения заместителей в карбоксильную группу — это образование амида или гидразида. Метод защиты путем амидообразования применяется сравнительно редко, поскольку селективное расщепление амидной группировки без разрыва пептидных связей, как и в случае Ы-защнт-ных групп ацильного типа, можно осуществить далеко не всегда. Превращение кислоты в гидразид также нельзя рассматривать как вполне удовлетворительный способ защиты карбоксильной группы, так как в процессе пептидного синтеза может происходить ацилирование гидразидной группировки. Правда, эта нежелательная побочная реакция предотвращается путем блокирования гидразидной функции введением Ы-защитной группы. В настоящее время приобретает все большее значение, особенно для синтеза высших пептидов, защита карбоксильной группы с помощью солеобразования. [c.87]

Защита карбоксильной группы путем ее перевода в соответствующий сложный эфир, рассмотренная в предыдущем разделе, в известном смысле способствует активации карбоксильной функции. Обратимся теперь к С-защитным группировкам, являющимся производными гидразина. Гидразидная группа как таковая неприменима для защиты карбоксильной функции, поскольку в ее присутствии невозможно осуществить селективное ацилирование аминогруппы [2637]. В связи с этим для предотвращения побочных реакций используемые для синтеза гидразидов производные гидразина предварительно блокируют подходящей N-защитной группой. Такой прием позволяет легко осуществить переход к соответствующему гидразиду и, кроме того, делает возможным дальнейшее использование азидного метода, например в случае высших пептидов, чрезвычайно лабильных к гидразинолизу. Замещенные гидразиды целесообразно применять также в комбинации с фталильной группой, крайне чувствительной к гидразинолизу, и трифторацетильной группой, отщепляющейся при действии гидразина, что объясняется его сильно основными свойствами. Наличие гуанидиновых группировок в пептидах, содержащих остатки аргинина [890] или нитроаргинина [292], является причиной побочных реакций во время гидразинолиза в этом случае применение азидного метода также возможно лишь при использовании защищенных гидразидов. Необходимость введения дополнительной N-защитной группы является недостатком рассматриваемого метода. При выборе этой группы следует иметь в виду возможность селективного удаления любой другой защитной группировки, присутствующей в данном пептиде. Расщепление гидразидной связи с образова- [c.103]

При проведении синтезов с солями аминокислот и пептидов выбор N-защитных групп играет весьма важную роль. Так, в случае фталильной группы возможны побочные реакции, обусловленные частичным расщеплением фталимидного кольца (ср. стр. 39). Хлорангидриды тозиламинокислот легко разлагаются в водно-щелочном растворе, поскольку в этом случае амидная группировка значительно активирована (ср. стр. 43). Реакции конденсации с солями аминокислот и пептидов приобретают в настоящее время все большее значение, несмотря на указанные недостатки этого метода. Правда, иногда выходы достаточно низкие, но это в значительной мере компенсируется тем, что отпадает необходимость гидролиза сложных эфиров. Конечная стадия синтеза высших биологически активных пептидов часто представляет собой реакцию конденсации с соответствующей солью, поскольку гидролиз эфиров высших пептидов всегда сопряжен со значительными трудностями. [c.111]

Сейджер с сотр. при изучении строения инсулина (см. стр. 162) предпочитали кислотное расщепление ферментативному, так как считали, что ферменты вызывают вторичный синтез пептидов и перегруппировки пептидных связей, что может привести к неверным результатам. Однако это мнение оказалось необоснованным. Ферменты используются очень интенсивно, и до сих пор не было замечено, что их действие сопровождается побочными реакциями, в то время как кислоты могут вызывать инверсию дипептидных последовательностей и в некоторых случаях такие побочные реакции, как деструкция триптофана и перегруппировки аспарагина [c.81]

Первоначальная реакция полипептида с фепилизотиоцианатом [схема (13), реакция I] проводится в присутствии пиридина и воды при pH 8,6. Пиридин и избыток реагента удаляют повторной экстракцией бензолом и фенилтиокарбамил(ФТК)-пептид лиофилизуют для удаления всей воды. Реакцию расщепления [схема (13), II] проводят с безводным хлористым водородом в нитрометане, причем фактором, определяющим скорость реакции, является растворимость ФТК-пептида в нитрометане. Оставшийся полипептид, который нерастворим в нитрометане, отделяют затем от растворимого анилинотиазолинона. Превращение последнего вещества в фенилтио-гидантоин (ФТГ) происходит в две стадии, из которых первая — гидролиз (III) — идет очень быстро и без осложняющих побочных реакций, тогда как вторая (реакция IV) протекает медленнее и катализируется ионами водорода. Ильзе и Эдман [130] нашли, что оптимальными условиями превращения ФТК-аминокислот в тиогидантоины является нагревание при 80° и pH 1 в течение 1 час. В этих условиях получаются количественные выходы гидантоинов из большинства аминокислот, исключая глицин (выход 85%), который реагирует медленно, а также серин (20%) и треонин, которые частично теряются в побочных реакциях, включающих дегидратацию за счет р-элиминирования в боковой цепи. Несмотря на это, выход ФТГ даже из серина достаточен для удовлетворительной идентификации его на бумажных хроматограммах. [c.154]

На модельных пептидах показано, что расщепление по метионину идет с высоким выходом под действием фтороводорода [112, 133]. Реакция сопровождается Ы->-0-ацильной миграцией по остаткам серина и треонина (разд. 2.3.2). Из-за этой побочной реакции метод расщепления с помощью HF не находит применения в химии белка. [c.101]

Расщепление с помощью N-бромосукцинимида пептидной связи тирозина успешно применяется в структурных исследованиях белков и пептидов. В случае S-карбоксиметилрибону-клеазы, не содержащей триптофана, пептидные связи шести остатков тирозина расщеплялись с выходом 30—65% [148, 181]. Поскольку гистоны не имеют триптофана, но содержат тирозин, расщепление N-бромосукцинимидом находит широкое применение при анализе этих белков [19, 147]. Выход обычно неколичественный, но улучшается при избытке реагента (в последнем случае могут идти побочные реакции по остаткам гистидина и серусодержащим аминокислотам). [c.117]

Виткоп в упоминавшемся выше обзоре приводит ряд критериев, существенных для успешного осуществления избирательного расщепления пептидов, пригодного к использованию на чувствительных к химическим воздействиям белках (ферментах и т. п.) без протекания каких-либо конкурирующих побочных процессов или денатурации. таким критериям относятся следующие 1) реагент должен обладать высокой избирательностью 2) реакция должна протекать быстро 3) присоединение реагента к реакционному центру должно приводить к образованию чрезвычайно] неустойчивого промежуточного продукта 4) требование неустойчивости промежуточного продукта обусловлено необходимостью осуществления быстрой одновременно протекающей 1,5-внутримолекуляр-ной реакции замещения у единственной пептидной группы, а именно у С-пептидной группы 5) образующийся иминолактон должен немедленно распадаться на фрагмент лактона С-концевого остатка и давать концевую группу — NH2 6) вся последовательность реакций должна быстро протекать в водных буферных растворах при нейтральных или слабо кислых значениях pH и комнатной температуре. [c.389]

Для успешного проведения реакции путь с образованием оксазола является предпочтительным, так как последний в условиях кислотного алкоголиза количественно расщепляется, давая сложный эфир С-концевой аминокислоты. Расщепление оксазолинонов спиртами в кислых условиях дает свободную С-концевую аминокислоту, но главным побочным продуктом является нерасщепленный сложный эфир пептида (рис. 18.8). Метод можно использовать для идентификации С-концевых остатков в настоящее время предпринимаются попытки разработать на этой основе методику последовательного С-концевого анализа. [c.499]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология