Нингидрин определение аминокислот

Предлагаемый метод количественного определения аминокислот после их разделения методом электрофореза основан на их реакции с нингидрином в слабокислой среде. Получаемое в результате этой реакции производное синего цвета затем превращают путем обработки спиртовым раствором сульфата меди в стабильное медное производное оранжево-красного цвета, имеющее максимум поглощения при длине световой волны 530 нм. Это производное хорошо экстрагируется с бумажной полоски этиловым спиртом. [c.148]

Нингидрин применяется для качественного и количественного определения аминокислот в самых разнообразных случаях, например в бумажной хроматографии, при обнаруживании ракового заболевания, при определении индикана в моче, при определении туберкулеза, при обнаруживании загнивания рыбы, в судебной медицине при обнаруживании отпечатков пальцев и т. д. [c.26]

Для открытия в биообъектах и количественного определения аминокислот успешно применяется реакция их с нингидрином. На I стадии реакции образуется восстановленный нингидрин за счет окислительного дезаминирования аминокислот (параллельно происходит декарбоксилирование аминокислот) [c.41]

Один из недостатков нингидрина состоит в том, что пролин может быть легко замаскирован пятнами других аминокислот. Были описаны два реагента, лишенные этого недостатка и в то же время обеспечивающие широкий диапазон цветов при хроматографическом определении аминокислот. [c.390]

Первым методом превращения аминокислот для использования в ГХ-анализе была реакция с нингидрином. Как известно, в этой реакции наряду с окрашенными веществами и СОг образуются и упоминавшиеся выше альдегиды, имеющие на один углеродный атом меньше, чем в исходной молекуле. Опираясь на метод количественного определения аминокислот, разработанный на основе этой реакции [92], с помощью ГХ удалось разделить и идентифицировать эти летучие альдегиды [37]. Очевидно, этот метод пригоден только для тех аминокислот, которые в реакции с нингидрином дают летучие альдегиды, и, следовательно, из этой группы, естественно, исключаются Про и родственные ему аминокислоты [61]. Побочные реакции при ГХ, такие, как полимеризация, затрудняют или вообще делают невозможным идентификацию определенных аминокислот [130]. Чтобы преодолеть указанные трудности, альдегиды окисляли [3] до карбоновых кислот и хроматографировали в виде метиловых эфиров. Несмотря на отмеченные недостатки, Златкис и др. [130] указывают, что этот процесс модификации аминокислот интересен в техническом отношении. По принципу реакций, используемых в ГХ, превращение аминокислот, а затем разделение и количественное определение альдегидов, переводимых в результате каталитического гидрокрекинга в метан, может происходить [c.326]

Количественное хроматографическое определение аминокислот при разделении их на бумаге. Количество веществ, учитываемых в хроматографическом разделении, весьма мало, а количество аминокислот в каждом отдельном пятне на хроматограмме просто ничтожно. Естественно, для определения количества отдельных аминокислот при хроматографическом разделении их на бумаге нужно применять фотоэлектроколориметры и фотометры. Наиболее точно определяют количество аминокислот следующим способом на проявленной нингидрином [c.29]

Для определения аминокислот существуют разнообразные химические реакции, которые специфичны для некоторых из них (табл. 6.2). Эти реакции используются довольно редко, так как аминокислотный анализатор позволяет легко проводить качественный и количественный анализ и инструментальное детектирование этих соединений. Этим методом плохо определяется триптофан (Try) из-за его повышенной чувствительности к кислотам, поэтому его лучше идентифицировать с помощью химических реакций (табл. 6.2). Химической основой работы аминокислотного анализатора является реакция с нингидрином, описанная в опыте 20. [c.273]

Растворы аминокислот, полипептидов, пептонов, первичных аминов при нагревании с нингидрином приобретают синюю или сине-фиолетовую окраску. Эта реакция имеет особенно важное значение для определения аминокислот. Реакции между нингидрином и указанными соединениями протекают сложно. Предполагают, что сначала нингидрин восстанавливается, а аминокислоты окисляются, что сопровождается их декарбоксилированием и дезаминированием [104] [c.167]

Другие варианты определения аминокислот по реакции с нингидрином описаны в работах [127, 130—132]. [c.170]

Для количественного определения аминокислот и пептидов по приведенным выше реакциям требуется колориметр или фотометр, с помощью которых обнаруживают изменения в свето-поглощении, связанные с протеканием реакций. Поскольку нингидрин наиболее широко используется для обнаружения аминокислот и белков, он послужит основой для дальнейшего обсуждения колориметра. [c.26]

Если вещества бесцветны, они могут быть обнаружены на фильтровальной бумаге только при помощи специальных физических или химических методов. Все аминокислоты дают, например, окраску с нингидрином. Поэтому при определении аминокислот их проявляют , смачивая раствором нингидрина фильтровальную бумагу. На бумаге появляются окрашенные пятна, расположенные на разной высоте, в соответствии с тем, как распределились аминокислоты в токе жидкости. По месту положения пятна и интенсивности его окраски можно определить наличие той или иной аминокислоты и ее концентрацию в исследуемой смеси аминокислот (рис. 7). [c.35]

Для количественного определения аминокислот применяют самые разнообразные методы наиболее важные из них можно разбить на следующие группы 1) химические методы 2) ферментативные методы 3) методы с применением изотопов 4) микробиологические методы и 5) хроматографические методы. Из химических методов особое значение имеют метод с использованием азотистой кислоты (стр. 33) и методы, основанные на реакции с нингидрином (стр. 33—34). [c.39]

Нингидрин. Реакция нингидрина (трикетогидринденгидрата) с аминокислотами используется для обнаружения и количественного определения аминокислот. Нингидрин, являющийся сильным окислителем, вызывает окислительное дезаминирование аминокислоты, приводящее к образованию аммиака, двуокиси углерода, соответствующего альдегида и восстановленной формы нингидрина [c.48]

Однако попытки использовать такие методы при определении аминокислот в пробах природных вод встретили серьезные затруднения не отделенные полностью нри концентрировании окрашенные органические вещества сильно мешают определению, маскируя образующуюся окраску пятна. Поэтому более целесообразным представляется проведение реакции непосредственно в растворе. С этой целью была изучена зависимость окраски, образующейся в результате реакции аминокислот с нингидрином в водном растворе, от соотношения реагентов, величины pH раствора, температуры и времени проведения реакции. Было найдено, что реакция (при низких концентрациях аминокислот) протекает тем полнее, чем выше концентрация аминокислот. [c.64]

Количественное определение аминокислот с нингидрином. . . [c.124]

Существенные экспериментальные трудности, которые до последнего времени ограничивали исследования в области белковой химии, в значительной степени обусловливались отсутствием простых и надежных способов анализа аминокислот. Лишь благодаря развитию за последние два десятилетия ионообменной и распределительной хроматографии удалось разработать автоматический метод количественного анализа аминокислот с использованием окисления аминокислот нингидрином и фотометрирования продуктов реакции [9]. Однако стремительное развитие химии белков и пептидов, среди которых обнаружены важнейшие биорегуляторы и антибиотики, уже сейчас предъявляет новые требования по чувствительности и быстроте анализа. Сложность аппаратурного оформления и дороговизна эксплуатации, безусловно, ограничивают применение автоматического анализатора Мура и Штейна и в значительной степени обусловливают интерес к разработке новых методов аналитического определения аминокислот, свободных от указанных недостатков. [c.252]

Этот метод обычно используется для количественного определения аминокислот методом жидкостной хроматографии. Вместе с тем полученные из аминокислот альдегиды могут быть определены и методом ГЖХ [110—113]. Однако имеются сведения о том, что глицин окисляется нингидрином до формальдегида, который в условиях газохроматографического анализа полимеризуется 1114], а альдегиды, полученные из фенилаланина и метионина, обладают низкой летучестью [115]. При окислении нингидрином валина, лейцина, изо лейцина, аланина были получены соответственно изомасляный альдегид, 3-метилбутанол, 2-метилбутанол и ацетальдегид [110 . [c.41]

Количественное определение аминокислот методом элюции и последующим фотоколориметрированием [105, 106]. С помощью этого метода можно определять в растворе или гидролизате белка 0,05—0,15 мкг аминокислоты. Метод основан на реакции аминокислот с нингидрином в слабокислой среде с последующим превращением полученного в результате реакции синего производного — дикетогидринделидендикетогидриндиамина (ДИДА) в стабильное производное меди оранжево-красного цвета, имеющее максимум поглощения при 530 ммк. [c.117]

Первичные а-аминокислоты реагируют с нингидрином , давая интенсивное фиолетовое окрашивание. Реакция осуществляется в две стадии. Первоначально аминокислота окисляется до низшего альдегида или кетона с выделением аммиака и диоксида углерода. Затем аммиак взаимодействует с продуктом восстановления нингидрина и с непрореагировавшей молекулой нингидрина, образуя фиолетовое соединение. Количественное образование вещества наряду с интенсивностью его окраски делает эту реакцию очень ценной. Она широко используется как для качественного определения аминокислот (например, как опрыскиватель при хроматографии), так и для количественной оценки с помощью спектрофотоыетрических методов. Метод обладает большой чувствительностью благодаря высокой [c.295]

К 1—2 мл крови добавляют равный объем 0,04 н. раствора СНзСООН, нагревают на кипящей водяной бане 2—3 мин, охлаждают я осадок белка отделяют центрифугированием. Центрифугат сливают и упаривают досуха. Сухой остаток растворяют в 0,1—0,2 мл смеси НСООН—СНзСООН—Н2О (7 5 13), нерастворившийся осадок отбрасывают. На хроматограмму наносят 0,01—0,02 мл полученного раствора и стандартные смеси аминокислот и хроматографируют в бута-нолуксусной смеси. После разгонки хроматограммы обрабатывают нингидрином, идентифицируют аминокислоты и проводят их количественное определение. Содержание аминокислот в сыворотке крови выражают в микромолях, миллиграмм-процентах или процентах к небелковому азоту. [c.195]

Анализ аминокислотного состава включает полный гидролиз исследуемого Б. или пептида и количеств, определение всех аминокислот в гидролизате. Для гидролиза обычно используют 5,7 н. водный р-р НС1, а при анализе содержания триптофана-4 н. метансульфоновую к-ту, содержащую 0,2% ЗЧ2-аминоэтил)индола, или кипячение со щелочью. Количеств, определение аминокислот в гидролизате проводят с помощью аминокислотного анализатора. В большинстве таких приборов смесь аминокислот разделяют на ионообменных колонках, детекцию осуществляют спектрофотометрически по р-ции с нингидрином или флуориметрически с использованием флуоре-скамина или о-фталевого диальдегида. В последнем случае можно анализировать до 0,1-0,05 нмоль аминокислоты. [c.250]

Для обнаружения и количественного определения аминокислот элюат смешивают с раствором нингидрина (I) и эту смесь пропускают через нагреваемую спираль для проведения реакции по схеме (3). Продукт (пурпурный Руэмана) (2) анализируют спектро- [c.261]

На основе нингидриновой реакции были разработаны методы количественного определения аминокислот, в частности метод распределительной хроматографии на бумаге, впервые внедренный в 1944 г. (А. Мартин и Р. Синдж). Эта же реакция используется благодаря своей высокой чувствительности в автоматическом анализаторе аминокислот. Впервые такой прибор сконструировали Д. Шпакман, С. Мур и У. Стейн (рис. 1.7). После разделения смеси аминокислот в колонках, заполненных специальными ионообменными смолами (сульфополистирольный катионит), ток элюента из колонки поступает в смеситель, туда же поступает раствор нингидрина интенсивность образующейся окраски автоматически измеряется на фотоэлектроколориметре и регистрируется самописцем. Этот метод нашел широкое применение в клинической практике при исследовании крови, мочи, спинномозговой жидкости. С его помощью за 2—3 ч можно получить полную картину качественного состава аминокислот в биологи- [c.42]

Обычный метод определения аминокислот заключается в их реакции с нингидрином, которая дает интенсивно окрашенное голубое соединение, поглощение которого можно измерять при 575 нм. Этот метод используется в некоторых серийных анализаторах аминокислот, в которых исследуемые белки гидролизуются с образованием аминокислот, которые в свою очередь разделяются и измеряются спектрофотометрически. [c.653]

Элюат 2 после колонки разделяется на три потока. Один поток служит для регистрации анализов углеводов (система идентична той, которая показана на рис. 24.5). Второй поток служит для регистрации анализов нормальных пептидов (на рис. 24.6 не показан), а последний поток подвергается гидролизу следующим образом. После смешивания с 13% (вес./об.) раствором едкого натра и тщательного перемешивания азотом он пропускается через змеевик, в котором нагревается до 96 °С, затем охлаждается в змеевике 30, освобождается от пузырьков в отстойнике 26 и возвращается в распределительную магистраль в точке 24. Здесь он нейтрализуется (трубопровод 25), смешивается с раствором нингидрина в метилцеллозольве, вновь тщательно перемешивается азотом и далее подвергается обычной обработке с целью определения аминокислот. Элюаты из коло- [c.148]

Как уже отмечалось, нингидрин реагирует не только с аминокислотами, но и с аминами. Первичные амины с общей формулой РСНдННг и КР СНЫНг реагируют подобно аминокислотам, вторичные и третичные амины не взаимодействуют с нингидрином 120]. С нингидрином реагируют также гидразиды кислот [121]. ,роме нингидрина с аминами и аминокислотами взаимодействуют другие циклические трикетоны [122], а также М-бромсукцинимид [123] и 1,2-диацетилбензол [124]. Известно много способов определения аминокислот по реакции с нингидрином. Некоторые из них приведены ниже. [c.168]

Нингидринная реакция. В качестве реактива для качественного и количественного определения аминокислот широко применяется нингидрин (трикетогидринденгидрат). При нагревании с аминокислотой нингидрин восстанавливается до ди-кетооксигидриндена, а аминокислота окисляется и распадается иа альдегид, двуокись углерода и аммиак [c.784]

Кроме детекторов, предназначенных для количественного анализа аминокислот и пептидов по реакции с нингидрином или другими реагентами, дающими цветную реакцию, были описаны Также и другие детекторы. Полярографическое определение аминокислот в виде их медного комплекса основано на образовании из двух молекул аминокислоты и одного иона меди темно-синего комплекса. Этот комплекс пропускают через ячейку поляро-графа, где определяется количество меди [122]. Аминокислоты можно также определять путем использования динитрофторбен-зола с последующим фотометрическим определением ДНФ-ами-нокислот при 420 нм [123]. [c.27]

Важной реакцией, использующейся при количественном и качественном определениях аминокислот, является реакция с нингидрином, или трикетогидринденом. При нагревании большинства аминокислот с нингидрином они окисляются и распадаются на соответствующий альдегид, углекислоту и аммиак [c.190]

Аммиачная соль енольной формы этого соединения окрашена в интенсивный красно-фиолетовый или пурпурно-синий цвет. Оказалось, что в определенных пределах интенсивность окраски пропорциональна количеству аммиака, участвующему в реакции, и, следовательно, исходному количеству аминокислоты. Эта реакция широко используется для качественного и количественного определения аминокислот, особенно методом хроматографии на бумаге, и очень чувствительная позволяет устанавливать содержание тысячных долей миллиграмма аминокислот. Нингидрин может быть заменен изатином, имеющим близкое строение [c.191]

Удобной цветной реакцией на аминокислоты является взаимодействие с нингидрином (рис. 12.5) продукт реакции с15льно сопряжен и поэтому интенсивно окрашен. Нингидриковый реактив используют для обнаружения аминокислотных пятен при хроматографии на пластинках или на бумаге, а также для колориметрического количественного определения аминокислот. [c.265]

Реакция с нингидрином. При взаимодействии с нингидри-ном аминокислоты разрушаются с выделением аммиака, углекислоты и образованием альдегидов. Два остатка нингидрина, связанных друг с другом азотом аммиака, освободившегося при распаде аминокислоты, образуют сложное соединение, обладающее сине-фиолетовой окраской. Интенсивность окраски пропорциональна количеству имеющейся в растворе аминокислоты. Реакция эта очень чувствительна и широко используется в настоящее время для количественного определения аминокислот хроматографическим методом (с этим методом учащемуся предстоит знакомиться в курсе биологической химии). [c.242]

При хроматографическом анализе аминокислот (см. стр. 35) большое применение нашла реакция с нингидрином. Нингидрин дает окрашивание (обычно сине-фиолетовое) со всеми аминокислотами. На основе нингидриновой реакции разработаны методы количественного определения аминокислот, входящих в состав белков. [c.32]

Высокоэффективным методом разделения является сочетание электрофореза на бумаге с обычной хроматографией. При этом сначала через влажную бумагу, на которую нанесена смесь, пропускают ток высокого напряжения, а затем смесь хроматографируют с помощью подходящего растворителя в направлении, перпендикулярном направлению электрофореза. В результате достигается разделение первоначальной смеси в двух измерениях. Применение такого метода к продуктам ферментативного расщепления белков позволяет получить двухмерную картину, которую называют пептидной картой. Каждый белок дает характерную для него при каждом конкретном способе расщепления картину. Локализацию отдельных компонентов во многих случаях определяют с помощью специфических красителей. При определении аминокислот и пептидов в качестве такого красителя используют, например, нингидрин. Если производится элюция адсорбированных компонентов, то удобнее всего устанавливать их присутствие в элюате спектрофотометрически. Вероятно, наиболее тонким методом разделения белков следует считать иммуноэлектрофорез, при котором эффект достигается за счет использования различий в двух свойствах электрофоретической подвижности и иммунологической специфичности. [c.220]

Для количественного определения аминокислот используют пингидриновый реактив [6]. При нагревании до 100° в буферном растворе pH 5 нингидрин (I) реагирует со всеми а-аминокисло-тами за исключением цистеина [13]. [c.136]

Количественное определение аминокислот. После получения хроматограмм количественно определять отдельные аминокислоты можно двумя методами при помощи нингидриновой реакции с метилцеллосольвом (мономе-тиловый эфир этиленгликоля) и по интенсивности окраски медных производных аминокислот с нингидрином. [c.42]

Количественное определение аминокислот по интенсивности окраски медных производных аминокислот с нингидрином проводят следующим образом. Хроматограммы обрабатывают 0,5%-ным раствором нингидрина в 95%-ном ацетоне, содержащим 1% уксусной кислоты. Для хроматограмм, у которых растворителем служил фенол в фосфатном буфере, концентрацию уксусной кислоты повышают до 3%. Обработанные хроматограммы выдерживают над серной кислотой и глицерином в течение 16 часов при комнатной температуре. После этого окрашенные пятна аминокислот вырезают из хроматограмм и кладут в пробирки. В каждую пробирку наливают по 8 мл 75 /о-ного этилового спирта, насыщенного Си504 бИаО. Пробирки выдерживают в течение 1 часа в темноте и затем растворы колориметрируют на фотоэлектроколориметре ФЭК-М против контроля. При ко-лориметрировании растворов, элюированных из хроматограмм, у которых одним из растворителей служил бутиловый спирт, используют синий светофильтр, а при использовании в качестве растворителя фенола в фосфатном буфере (pH 12,0) более точные результаты получаются с зеленым светофильтром. Оптическую плотность растворов определяют по сравнению с контролем. [c.43]