Флуоресценция методы измерения

Для выяснения тонкой структуры спектров флуоресценции их исследуют при низких температурах (например, при температуре жидкого азота 77 К), при этом подбирают растворители, в которых наиболее отчетливо проявляется структура спектров. Этот метод измерения квазилинейчатых спектров в твердой матрице при низких температурах был предложен Э. В. Шпольским. Особенно успешно он был применен к исследованию полициклических ароматических углеводородов. Получаемые квазилинейчатые спектры флуоресценции ароматических углеводородов в растворах алифатических углеводородов являются очень характерными и позволяют получать информацию о колебательной структуре основного электронного состояния ароматических углеводородов. Квазилинейчатые спектры флуоресценции обладают рядом важнейших свойств. Прежде всего квазилинейчатые спектры в каждом случае носят ярко выраженный индивидуальный характер (специфичность). В отличие от обычных размытых спектров поглощения и флуоресценции они существенно различаются даже у близких по строению молекул. Это отличие оказывается значительным и для изомерных молекул. Другая важная особенность квазилинейчатых спектров заключается в очень высокой селективности таких измерений. Благодаря малой ширине и высокой интенсивности линий квазилинейчатые спектры позволяют определять индивидуальные соединения в сложной смеси даже тогда, когда они входят в многокомпонентную смесь в ничтожно малых концентрациях. Третьей характерной особенностью квазилинейчатых спектров флуоресценции является чрезвычайно высокая чувствительность методов, основанных на их применении. Измерение квазилинейчатых спектров позволяет при прочих равных условиях увеличить чувствительность люминесцентных измерений примерно в 100 раз. [c.72]

Другим методом измерения времени жизни флуоресценции является фазовый метод. Так как испускаемая флуоресценция запаздывает по сравнению с возбуждающим светом, то при возбуждении флуоресценции пульсирующим светом возникает сдвиг фаз а, который измеряется экспериментально и из которого вычисляют время жизни флуоресценции, связанное с v соотношением [c.63]

Люминесцентный метод характеризуется исключительно ВЫСОКОЙ чувствительностью и специфичностью. Для веществ с высоким коэффициентом экстинкции (е 10 ) и большим квантовым выходом флуоресценции (около 1) можно обнаружить до 10 ° М этих веществ, Поскольку часто спектры флуоресценции растворов органических веществ представляют собой размытые широкие полосы, то для увеличения информации, получаемой из спектров флуоресценции, проводят измерения в парах. В этом случае спектры имеют определенную структуру, т. е. содержат узкие характерные полосы. [c.161]

Для выяснения тонкой структуры спектров флуоресценции их исследуют при низких температурах (например, при температуре жидкого азота 77 К) При этом подбирают растворители, в которых наиболее отчетливо проявляется структура спектров. Этот метод измерения квазилинейчатых спектров в твердой матрице при низких температурах был предложен [c.161]

Метод импульсного фотолиза может быть использован для изучения флуоресценции (интенсивности, тушения флуоресценции). При помощи импульсного фотолиза очень удобно исследовать замедленную флуоресценцию. Для измерения флуоресценции в установке импульсного фотолиза в самом простом варианте исключается зондирующий свет. Если для измерения флуоресценции использовать дополнительную отражающую полупрозрачную пластинку, расположенную на пути зондирующего луча, то в одном эксперименте одновременно можно измерять оптическую плотность поглощения короткоживущих продуктов, например триплет-триплетное поглощение, и интенсивность флуоресценции. [c.296]

Вторая группа методов измерения ККМ основана на добавлении в р-ры дополнит, компонентов и их солюбилизации (коллоидном растворении) в мицеллах ПАВ, к-рую можно регистрировать с использованием спектральных методов, флуоресценции, ЭПР и др. [c.96]

Методы измерения длительности флуоресценции [c.271]

По сравнению с классической ТСХ ВЭТСХ является значительно более быстрым методом, легче поддающимся стандартизации. В настоящей главе детально рассмотрены различные методы введения проб в ТСХ-систему и способы прямого фотометрического детектирования ВЭТСХ-пластинок (методы измерения отражения, пропускания, одновременного измерения пропускания и отражения, способы детектирования, основанные на возбуждении и гашении флуоресценции). Стандартное отклонение результатов этого метода не превышает 2,5%. Эффективность ВЭТСХ проиллюстрирована иа практических примерах. Одновременно с этим изложены основные требования к оборудованию, применяемому для количественного детектирования ВЭТСХ-пластинок. [c.173]

Методы измерения интенсивности поглощения УФ-излучения и гашения флуоресценции [c.187]

Метод измерения отражения и гашения флуоресценции можно применить также для определения ТСХ-пятен веществ, поглощающих УФ-излучение. Последний метод можно рекомендовать для проявления пятен веществ, поглощающих УФ-излучение. Однако с точки зрения количественного детектирования метод гашения флуоресценции имеет ряд недостатков и ограничений по сравнению с методом отражения. [c.187]

Методы измерения интенсивности флуоресценции [c.191]

Оптические методы. В связи с быстрым развитием ВЭТСХ, которая позволила стандартизировать многие стадии хроматографического процесса и привела к получению воспроизводимых результатов, стало возможным использовать точные количественные методы оценки разделенных веществ на тонкослойных хроматограммах. Этому также способствовали создание и выпуск рядом фирм специальных приборов для количественных определений в ТСХ. Оптические сканирующие методы основаны на измерении исходного излучения, прошедшего через слой сорбента (поглощение), отраженного от него (отражение), сочетании поглощения и отражения, флуоресценции, гашении флуоресценции. Возможно измерение пропускания света с длиной волны только больше 325 нм, так как стекло (подложка) и слой адсорбента поглощают УФ-излучение. Измерение по методу отражения можно проводить по всей области спектра от 196 до 2500 нм (ив области УФ-излучения). [c.370]

Трудности измерения возбужденных состояний продуктов рекомбинации связаны с чувствительностью методов измерения возбужденных состояний в грубом окружении. Например, молекулы кислорода и азота не являются полярными молекулами, колебательные состояния которых сильны. Их возбужденные электронные состояния обладают длительным временем жизни и излучают не очень сильно. Следовательно, должны использоваться другие методы, такие как, например, индуцированная лазером флуоресценция или лазерная многофотонная ионизация. Для исследования рекомбинации на некоторых поверхностях очень эффективны молекулярные пучки. В частности, они могут быть использованы для изучения времени пребывания адсорбированных атомов или молекул на поверхности. Измерения позволяют определить функцию распределения по скоростям и скорость рекомбинации. Информация о распределении частиц на поверхности может дать основу для моделей, учитывающих возбужденное состояние частиц при гетерогенной рекомбинации. [c.35]

Люминесцентный метод, основанный на гашении озоном ярко-синей флуоресценции люминола. Измерение длины погашенного слоя индикаторного порошка [c.208]

Примером неорганического флуориметрического определения является массовый клинический метод измерения иона магния в сыворотке крови, в моче, после того как он образует комплекс с 8-оксихинолином. Эта методика заключается в добавлении пробы сыворотки крови или мочи к забуференному раствору (pH = 6,5) 8-оксихинолина. Флуоресценцию полученного хелатного комплекса измеряют при 510 нм при возбуждении излучением длиной волны 380 нм. Единственным мешающим ионом является кальций, который можно удалить осаждением с оксалатом калия. Результаты сравнимы с теми, что получаются методами атомной абсорбции и пламенной эмиссионной спектрометрии. [c.664]

Люминесценцией тела в данной спектральной области называют избыток излучения над температурным при условии, что это избыточное излучение обладает конечной длительностью, превышающей период световых колебаний (определение С. И. Вавилова). В старой литературе было принято называть флуоресценцией явления люминесценции, длящиеся очень недолго после прекращения возбуждения фосфоресценцией называли процессы с длительным послесвечением. После того как были разработаны методы измерения длительности свечения от миллиардных долей секунды до сколь угодно больших значений, это разделение потеряло строгий физический смысл и имеет сейчас не больше значения, чем понятия теплого и холодного в учении о теплоте. Сохранение этих слов в научной терминологии оправдано только тем, что они удобны и привычны для быстрой качественной характеристики явлений. Точная и строгая классификация явлений люминесценции была дана С. И. Вавиловым (см. примечание к стр. 16 книги Прингсгейма 8], указанной в дополнительной литературе). По Вавилову, явления люминесценции можно разделить на следующие три группы [c.93]

Прямая количественная флуорометрия на пластинках. Непосредственное количественное определение на пластинках пятен флуоресцирующих соединений может проводиться как методом измерения флуоресценции, так и методом гашения флуоресценции, основанным на гашении флуоресценции вещества, предварительно нанесенного на сорбционный слой. Ошибки первого метода находятся приблизительно в пределах 3—5%, второго — 5-8%. [c.43]

Как видно из табл. 1, воспроизводимость результатов при измерениях флуоресценции лучше, чем при сканировании по методу гашения. Даже применение опрыскивающего реагента в сочетании с методом измерения флуоресценции сравнительно мало влияет на воспроизводимость результатов. [c.110]

Второй метод измерения основан на определении степени модуляции двух сигналов [191]. Очевидно, что чем больше время жизни флуоресценции, тем меньше степень ее модуляции. Степень модуляции в пучке возбуждающего света (ms) и в пучке флуоресценции (ш/) связаны с соотношением [c.254]

Основным недостатком люминесцентных методов измерения скорости реакций является значительное влияние ионов-гасителей на люминесценцию растворов. Кроме того, при анализе ряда солей, поглощающих в области возбуждения флуоресценции реактива, может наблюдаться эффект внутреннего светофильтра, снижающий чувствительность анализа. [c.43]

Для флуориметрического определения свинца предложен метод измерения зеленой флуоресценции его хлоридных комплексов при охлаждении растворов до —70° С [12]. [c.90]

Таким образом, в качестве аналитического метода измерение флуоресценции можно использовать только для очень разбавленных растворов, концентрации которых гораздо ниже, чем при измерении поглощения. При измерении флуоресценции [c.154]

Методы дифракции рентгеновского излучения и флуоресценции применены финской фирмой Оутукумпу Электронике для определения химического состава золы и содержания твердого в пульпе [94]. Эта же задача в работе [95] решается с помощью других методов измерение плотности по ослаблению излучения от s по рассеянию у-излучения и флуоресцентному излучению Fe определяли зольность и содержание железа, по прохождению и замедлению нейтронов — водорода и пустой фракции. [c.40]

Другой пример сильного взаимодействия белка с ДНК—регуляция оперона белком-репрессором. Наиболее изученным примером является 1ас-оперон Е. соИ [25]. Ген-регулятор кодирует синтез белка 1ас-репрессора, который затем связывается с соседним оператором. Связывание с белком-репрессором малой молекулы— индуктора, например изопропилтио-р- )-галактопиранозида, вызывает диссоциацию репрессора с операторного участка. Последующая транскрипция трех соседних генов оперона приводит к биосинтезу трех ферментов — Р-галактозидазы, галактозопермеазы и тиогалактозидтрансацетилазы. 1ас-Репрессор представляет собой тетрамерный белок, состоящий из идентичных субъединиц по 347 аминокислот каждая. Сродство репрессора к последовательности ДНК оператора зависит от ионной силы константа диссоциации в клетке, вероятно, менее 10 " моль/л . Структура участка связывания ДНК в 1ас-репрессоре до сих пор не выяснена, однако удаление трипсином 59 остатков с Л -конца и 20 остатков с С-конца предотвращает связывание. Несколько больше известно об участке связывания индуктора. Измерения флуоресценции показывают, что находящийся в участке связывания индуктора остаток триптофана при связывании перемещается в менее полярное окружение. Изучение изменения флуоресценции методом остановленного потока показывает, что процесс связывания проходит в две стадии. Быстрая начальная стадия подчиняется, как и ожидалось, кинетике второго порядка. Более медленная стадия мономолекулярна и, по- [c.569]

Метод измерения отражения и гашения флуоресценции можно также применять при ТСХ веществ, поглощающих УФ-излучение. Метод гашения флуоресценции позволяет определять только вещества с максимумом поглощения выше 240 нм, так как максимум возбуждения обычно используемого флуоресцентного индикатора находится около 280 нм. Сравнивая эти методы, можно сказать, что наилучшие результаты дает количественное детектирование по отражению по сравнению с пропусканием и гашением флуоресценции. Наиболее эффективным методом количественного анализа является измерение интенсивности флуоресценции веществ в слое сорбента. Это — высокоселективный, высокочувствительный (особенно при использовании лазерных флуоресцентных детекторов) метод анализа с широким интервалом линейной зависимости количество вещества — интенсивность флуоресценции, не зависящий от формы зоны. Широкие возможности метода флуоресцентного детектирования в ТСХ связаны с возможностями дерийатиза-ции веществ до или после ТСХ с превращением их в флуоресцирующие производные или инициированием флуоресценции разделенных веществ электрохимическими или химическими методами. [c.371]

Ошибки, возникаюш,ие вследствие переноса сорбента с веществом, обычно зависят от того, каким способом производится измерение при помощи спектрофотометрии, колориметрии или методом флуоресценции. При колориметрических способах измерения элюированного вещества колебания ошибки измерений составляют 1,0— 5,2% [21], для спектрофотометрии —, в среднем около 5,3%, тогда как для флуорометрическото метода измерений при переносе вещества с тонких слоев — 3,5—9%, а в некоторых случаях 15%. [c.45]

Точность метода измерения гашения флуоресценции ниже, чем точность прямого измерения флуоресценции, и стандартные отклонения /38, 39/ составляоот 4-7%, Чувствительность метода гашения суже, чем чувствительность, достигаемая при использовании большинства обычных обнаруживающих реагентов, и примерно равна 5-10 мкг. Как и в случае измерения флуоресценции, в зависимости от того, происходит гашение без предварительного опрыскивания или после опрыскивания флуорогенными реагентами, например родамином В можно различить два случая /40/. [c.175]

За последние годы число работ, носвященных флуоресцентным реакциям (т. е. приему II), значительно возросло, одновременно изменился и их характер флуоресцентные реакции разрабатывают с неменьшей тщательностью, чем обычные аналитические, например, колориметрические.. Все чаще их используют для количественных определений элементов, присутствующих в минимальных количествах, и применяют для этого объективные методы измерения интенсивности флуоресценции с помощью высокочувствительных фотоэлектрических фотометров. [c.165]

Во всех этих уравнениях и — число молей частиц I (с молекулярным весом Л/ ) в единице объема. Весовая концентрация в граммах на единицу объема равна С = игМг. Наиболее демократичной мерой среднего молекулярного веса является величина Мп, поскольку каждая молекула учитывается в этом случав только один раз, независимо от ее веса. При вычислении величин Му, ш более тяжелые молекулы вносят больший вклад, иначе говоря, учитываются с большим статистическим весом (особенно сильно это сказывается на величине МСреднечисленный молекулярный вес определяют исходя из данных по осмотическому давлению или на основании результатов анализа концевых групп, а также с помощью рентгеноструктурных и электронно-микроскопических измерений. Для определения средневесового мо.декулярного веса используют данные по светорассеянию, по дисперсии диэлектрической постоянной, по деполяризации флуоресценции и, наконец, но седиментации. Методом измерения вязкости получают среднюю величину молекулярного веса, хотя и достаточно близкую, но все же пе равную Л/и,. [c.141]

Для ряда важных соединений метод измерения фосфоресценции при 77 К неприменим либо вследствие слишком низкой ее эффективности, либо потому, что она расположена в инфракрасной области спектра, где спектрофосфориметры нечувствительны. Для таких веществ триплетные энергии можно получить из измерений замедленной флуоресценции типа Е или Р. Например, хлорофилл а и хлорофилл Ь в пропиленгликоле при умеренных скоростях поглощения света испускают только замедленную флуоресценцию типа Е [114], и измерения зависимости ее эффективности и времени жизни от температуры дают все необходимые данные для вычисления разности энергий (АЕ) между триплетным и первым возбужденным синглетным уровнями. Эффективность замедленной флуоресценции типа Е выражается уравнением (123), которое можно записать в виде [c.307]

Лигнин и лигнинсульфоновые кислоты можно определять физическими методами измерением оптической плотности в видимой и в УФ-областях спектра, а также измерением флуоресценции. Химические методы определения этих веществ основаны на использовании фенольных свойств лигнина. Некоторые реактивы [c.180]

В фосфоресценции можно использовать синхронное сканирование [24]. Сдвиг в длине волны между монохроматорами для возбуждающего и испускающего излучений должен соответствовать разности энергий между уровнями и Л, что усло-. жняет данный метод по сравнению с синхронным сканированием в методе измерения флуоресценции, но его преимущество, заключающееся в хорошем разрешении смеси определяемых веществ, сохраняется. [c.167]