Денатурация синтез

ПИРИДИН С. НэК — шестичленный гетероцикл с одним атомом азота, бесцветная жидкость с резким неприятным запахом, т, кип. 115,58° С смешивается с водой и органическими растворителями. П.— слабое основание, дает соли с минеральными кислотами, легко образует двойные соли и комплексные соединения. Получают П. из каменноугольной смолы, применяют в синтезе красителей, лекарственных препаратов, инсектицидов в аналитической химии как растворитель многих органических и неорганических веществ, для денатурации спирта. П. токсичен, действует на нервную систему, кожу. Максимально допустимая концентрация в воздухе 0,005 мг/л. [c.190]

Применяют пиридин в больших количествах в качестве растворителя, для синтеза лекарственных и красящих веществ и т. п. Пиридиновые основания добавляют к техническому спирту, чтобы придать ему неприятный запах и вкус (денатурация, стр. 115). [c.431]

Попытки расчленить и вновь реконструировать систему окислительного фосфорилирования имеют важнейшее значение в плане постанов-.ки будущих экспериментов. Однако при интерпретации результатов возникают значительные трудности. Лишь немногие из компонентов были выделены в совершенно гомогенном состоянии. Необходимо осуществить дальнейшую очистку этих компонентов и исследовать их свойства, и при этом научиться так работать с каждым белком, чтобы не вызывать его денатурации. Вероятно, мы все же можем надеяться, что придет время, когда станет возможным, смешивая многие высоко-очищенные компоненты митохондриальных мембран, реконструировать функционально активную систему переноса электронов и фосфорилирования. Такого рода эксперименты помогут также ответить на вопрос обязательно ли для окислительного фосфорилирования нужна мембрана Хотя, по мнению некоторых исследователей, проведенные эксперименты уже показали, что интактная мембрана при этом может быть и не нужна, никому еще не удавалось осуществить фосфорилирование на (ИСТИННО растворимых ферментных препаратах. Синтез АТР наблюдался лишь в тех случаях, когда соответствующие белки были встроены в фосфолипидные пузырьки . [c.410]

Исследования механизма свертывания, отвечающие второму подходу к установлению структурной организации белка, базируются на многочисленных физических, химических и биологических методах исследования, которые дают прямую или косвенную информацию о геометрических, термодинамических и кинетических аспектах процессов денатурации и ренатурации, механизме клеточного синтеза аминокислотной последовательности и взаимодействия белковых цепей с шаперона-ми. В исследованиях этого плана, как и предшествующего, надежда возлагается на то, что в результате анализа экспериментальных данных в конечном счете удастся разработать эмпирические правила, позволяющие предсказывать по известному химическому строению белка основные этапы свертывания, в первом случае, и нативную пространственную структуру, во втором. Далее, предполагается, если эти цели будут достигнуты, то станет ясно не только как возникает физиологически активная конформация, но и почему она возникает, т.е. бу- [c.77]

Предполагают, что формирование активного центра фермента начинается уже на ранних этапах синтеза белка-фермента (см. главу 14) на рибосоме, когда линейная одномерная структура пептидной цепи превращается в трехмерное тело строго определенной конфигурации. Образовавшийся белок приобретает информацию совершенно нового типа, а именно функциональную (в частности, каталитическую). Любые воздействия, приводящие к денатурации, т.е. нарушению третичной структуры, приводят к искажению или разрушению структуры активного центра и соответственно потере ферментом каталитических свойств. Если при подходящих внешних условиях удается восстановить нативную трехмерную структуру белка-фермента (ренатурировать его), то восстанавливается и его каталитическая активность. Это было показано впервые на примере рибонуклеазы поджелудочной железы (см. рис. 1.13). [c.125]

При повторных циклах тепловой денатурации, отжига и синтеза образовавшиеся новые нити ДНК выступают в качестве шаблонов (матриц) для праймеров, что вызывает экспоненциальное нарастание участка ДНК, ограниченного праймерами, входящими в состав этих фрагментов [c.205]

Основные научные работы посвящены биоэнергетике и биохимии белка. Установил (1939), что энергия окисления метаболитов кислородом используется в цепи реакций переноса электронов, где три звена сопряжены с синтезом аденозинтрифосфорной кислоты из аденозиндифосфорной кислоты и фосфата. Доказал (1952) скачкообразность денатурационного перехода белковых молекул (или их субъединиц), исходя из того факта, что при неполной денатурации часть подвергнутого воздействию вещества претерпевает глубокое превращение, а другая часть остается в исходном состоянии. Охарактеризовал (1957 — 1980) процесс образования волокон фибрина — основу свертывания крови— как многоэтапную самосборку, осуществляемую мономерным фибрином с помощью присущей ему системы специфических реактивных центров. [22, 82, 208] [c.46]

Пиридин применяют в органическом синтезе, а также в каче стве растворителя, для денатурации спирта и др. [c.774]

Метиловый спирт применяется для синтеза формальдегида (используемого в больших количествах в производстве пластических масс) уротропина и других органических соединений в сельском хозяйстве. Используется в смеси с водой в качестве антифриза — незамерзающей жидкости для радиаторов автомашин применяется как растворитель прн получении лаков для денатурации этилового спирта в качестве исходного продукта для получения диметил- [c.306]

Наконец, может иметь место случай, когда то или иное бактерицидное вещество действует так, что характер цикла сравнительно мало меняется, но постепенно уменьшается скорость новообразования различных М,, т. е. постепенно падают активность и количество ферментативных белков. Синтез их перестает тогда восполнять первичную убыль, и клетки гибнут. Такой эффект мы будем иметь, например, при температурной денатурации белка или под действием тех или иных ингибиторов. [c.331]

Пиридин используют в качестве растворителя (в том числе н для неорганических солей АдВг, Hg l2 и др.), применяют для денатурации этилового спирта (в качестве одоранта), а также как катализатор при некоторых органических синтезах. [c.369]

Интересная особенность полиаминокислотных катализаторов [88]—это обнаруженная для них тепловая денатурация, которая, как оказалось, связана с гидролизолг имидных связей, побочно образующихся при синтезе полимеров, например [c.109]

БУТИЛОВЫЕ СПИРТЫ (бутанолы) С4Н9ОН — бесцветные жидкости с характерным спиртовым запахом. Известны четыре Б. с. нормальный Б. с. (бутанол-1) СНзСН СНаСНаОН, вторичный Б. с. СН3СН2СН (ОН) СНз, изобу-тиловый спирт (СНз)2СНСН20Н и третичный Б. с. (СНз)зСОН. Все Б. с. широко применяются для приготовления растворителей, пластификаторов, лаков, этилцеллюлозы, масел, гидротормозной жидкости, смол, в синтезе моющих средств, для денатурации спирта и д . [c.50]

Метиловый спирт (метанол, или карбинол) СН3ОН. Представляет собой бесцветную жидкость со слабым характерным запахом (табл. И), с водой смешивается в любых отношениях. Ядовит, при приеме внутрь вызывает слепоту, а в больших дозах — смерть. Применяется в качестве растворителя, как горючее, для денатурации этилового спирта (стр. 115) в химической промышленности из метилового спирта получают формальдегид (стр. 150), кроме того, его используют во многих других синтезах. [c.114]

Следует отметить, что хроматография в системе ХОФ-5 является мягким способом фракционирования и очистки, по крайней мере в случае РНК. Известно, например, что нативная РНК фага MS-2, кодируюш,ая только три белка (оболочки фага, репликазу и белок А) в опытах in vitro ведет инициацию их синтеза в пропорции 70 25 5. После мягкой тепловой денатурации РНК эти синтезы инициируются уже с одинаковой скоростью, что можно объяснить утратой специфической третичной организации молекулы фаговой РНК. Оказалось, что после очистки в хроматографической системе ХОФ-5 РНК фага MS-2 полностью сохраняла нативные пропорции инициации указанныз выше синтезов. То же самое было показано и для РНК фага QP [ ampbell et al., 1980]. [c.173]

Разработанный Ферштом эмпирический подход к изучению термодинамических и кинетических аспектов свертывания белковой цепи с привлечением сайт-направленного мутагенеза позволил автору и сотрудникам проанализировать все этапы формирования трехмерной структуры белка (барназы), не содержащего дисульфидных связей [31-33]. Изучение обратимой денатурации начинается с тщательного визуального анализа трехмерной структуры белка с целью выявления остатков, которые предположительно могут играть важную роль в структурной стабилизации и кинетике свертывания. Следующий этап заключается в модификации потенциально важных для сборки межостаточных взаимодействий путем специальных химических изменений белковых цепей актуальных остатков и сайт-направленного мутагенеза. Завершается этап составлением оптимального набора и его синтеза методами генной инженерии. Далее проводятся термодинамические и кинетические экспериментальные исследования механизма ренатурации (денатурации) нативного белка и мутантов, определения констант равновесия, констант скорости и величин изменений свободной энергии Гиббса стабильных структур, промежуточных и переходных состояний. Найденные значения используются для построения энергетических профилей путей свертывания белковых цепей дикого и мутантного типов. На их основе определяются разностные энергетические диаграммы, которые показывают различия в уровнях энергии всех состояний на пути свертывания белка и мутантов. Реализация описанной процедуры приводит к эмпирическим зависимостям между важными для свертывания белковой цепи взаимодействиями боковых цепей и параметрами, по мысли Фершта, характеризующими кинетику, равновесное состояние и механизм ренатурации [И]. Каждая мутация, которая в [c.87]

Свертывание может происходить значительно быстрее, чем синтез цепи. Свертывание in vitro осуществляется чрезвычайно быстро, по крайней мере для малых белков, не содержащих дисульфидных мостиков. Нуклеаза стафилококка повторно свертывается в течение 1 с [438], а метмиоглобин — в течение 10 с [439]. Если эти величины применимы также и к условиям in vivo, свертывание цепи может происходить по крайней мере в 10 раз быстрее, чем биосинтез аминокислотной последовательности. Дисульфидсодержащие белки, например панкреатическая рибонуклеаза, повторно свертываются за время от 1 до 10 с, если дисульфидные связи не были разорваны в процессе предшеств ющей денатурации [440]. Однако если такие белки развернуты и восстановлены, последующее свертывание цепи (которое включает образование правильной системы дн-сульфидных связей) продолжается при оптимальных условиях в течение многих минут. [c.182]

Но-видимому, расплетание двойной спирали ДНК при одновременной редупликации (а также при транскрипции — при синтезе мРНК, см. 8.3) должно происходить не так, как при денатурации. Выигрыш свободной энергии при образовании новых цепей обусловливает появление значительного вращающего момента. Полимераза, перемещающаяся вдоль двойной спирали, создает локальные условия, нарушающие баланс взаимодействий между цепями. Предположительно она препятствует гидрофобным взаимодействиям оснований. [c.251]

Расплетание двойной спирали ДНК при одновременной редупликации (а также при синтезе мРНК, см. стр. 565) должно происходить не так, как при денатурации. Выигрыш свободной энергии при образовании новых цепей обусловливает появление значительного вращающего момента. Эта проблема рассматривалась в [120, 175—177], Автор работы [177] исходит из того, что [c.541]

Рис. 4.12. Получение меченого ДНК-зонда методом случайных праймеров. К денатурированной двухцепочечной ДНК, содержащей нуклеотидную последовательность, которую предполагается использовать в качестве зонда, добавляют гексануклеотиды (смесь всех возможных комбинаций из шести нуклеотидов) и отжигают смесь. Некоторые из олигонуклеотидов гибридизуются с немеченой денатурированной ДНК, и в присутствии фрагмента Кленова и четырех с1НТР (один из которых меченый [ ]) служат затравкой для синтеза комплементарной цепи. После денатурации синтезированной ДНК получают смесь меченых фрагментов ДНК, которые вместе составляют практически полноразмерную исходную ДНК-матрицу.

Во втором раунде двухцепочечную ДНК, состоящую из исходной и новосинтезированной ( длинная матрица ) цепей, опять подвергают денатурации, а затем отжигают с праймерами. Во время синтеза в этом раунде вновь синтезируются длинные матрицы , а также некоторое количество цепей с праймером на одном конце и с последовательностью, комплементарной второму праймеру, на другом ( короткие матрицы ) (рис. 5.19). Во время третьего раунда все гетеродуплексы, образовавщиеся ранее, одновременно подвергаются денатурации и отжигу с праймерами, а затем реплицируются (рис. 5.20). В последующих раундах коротких матриц становится все больше, и к 30-му раунду их число уже в Ю раз превышает число исходных цепей или длинных матриц (рис. 5.21). [c.96]

Полимеразная цепная реакция, ПЦР (Polymerase hain rea tion) Метод амплификации специфического сегмента ДНК с помощью термостабильной ДНК-поли-меразы с использованием олигонуклеотидных ДНК-зондов, комплементарных последовательностям противоположных цепей ДНК, фланкирующим амплифицируемый сегмент. Процесс состоит из серии циклически повторяющихся реакций денатурации ДНК, отжига зондов, синтеза ДНК. [c.557]

Дальнейшее развитие биохимии привело к открытию огромного числа ша-перонов, особенно у эукариот, где эти белки нередко специализируются на сборке вполне определенных структур. Эта группа белков известна также под названием белков теплового шока, поскольку их активный синтез начинается при повышенной температуре, по-видимому, для предотвращения повреждения разнообразных белков и их комплексов, претерпевающих частичную денатурацию при температуре выше допустимой. [c.114]

Таким образом, под названием ПЦР понимают основной хщкл денатурации, отжига и синтеза фрагментов ДНК в присутствии ДНК-полимеразы, дезоксирибонуклеозидтрифосфатов и праймеров Процесс по существу является цепным, так как продукты данной реакции служат матрицей для последующих реакций На первых этапах использовали в ПЦР так называемые "кле-новские фрагменты ДНК-полимеразы I Е ob (названы по фамилии ученого — X Кленова), которые оказалисьтермолабилъными, и после каждого цикла денатурации необходимо было добавлять новую порцию фермента Кроме того, гфи пониженной температуре отжига снижалась специфичность амплификации [c.205]

Рис 71 Схема полимеразной цепной реакции ПЦР) I — в классическом исполнении (а — ДНК мишень б — праймер в ПЦР в — новая ДНК г — направление амплификации дс — денатурация и синтез) II — заякоренная ПЦР (1 — мРНК 2 [c.206]

Вследствие открытия терапевтической активности сульфамидов химиотерапия сделала большие успехи. В отличие от некоторых веществ, называемых бактерицидными, или антисептическими, уничтожающими микроорганизмы обычно за счет денатурации их белков, сульфамиды обладают бактериостатическим действием. Это действие заключается в ингибировании определенных реакций, необходимых для жизнедеятельности бактерий, в результате чего размножение последних приостанавливается. Наблюдалось, что сульфаниламид и остальные сульфамиды ингибируют действие ге-аминобензойной кислоты — вещества, необходимого для жизнедеятельности бактерий (витамин Н ) (Д. Д. Вудс, 1940 г.). Сульфаниламид подменяет п-аминобензойную кислоту в биохимическом синтезе более сложного соединения, выполняющего функцию фермента фолиевой кислоты). Следовательно, сульфамиды являются антагонистами га-аминобепзойной кислоты. [c.461]

В опытах с нативной спиральной ДНК в качестве матрицы и очищенным препаратом полимеразы наблюдается образование комплекса, который состоит из матрицы и продукта реакции. Последний можно отделить от матрицы путем денатурации. Полученный продукт напоминает нативную ДНК и отличается от нее лишь в двух отношениях 1) он обладает необычной способностью восстанавливать после денатурации свою спиральную конформацию ( неденатурабильность ) и 2) под электронным микроскопом он чаще всего виден в виде разветвленной цепочки [169]. Существует предположение, что при репликации нативной ДНК новые цепи не связаны с матрхщей ковалентно, а, возможно, формируется многошпилечная или складчатая структура, восстанавливающая свою спиральную форму после денатурации [147]. И действительно, отнюдь не исключено, что фермент Корнберга не обязательно является самым важным участником синтеза ДНК в живой клетке. [c.201]

Если нативную ДНК обработать экзонуклеазой III, образуется частично одноцепочечная молекула (стр. 95). С помощью полимеразы она может быть реставрирована в нативную двухцепочечную мо.лекулу. Вновь синтезированная ДНК ковалентно связана с З -гидроксильным концом деградированной цепи матрицы. Полностью реставрированная ДНК близка к исходной нативной ДНК по форме молекулы (на электронных микрофотографиях), по результатам анализа в градиенте плотности, по способности к денатурации и по генетической активности [148]. Во время синтеза ДНК, идущего вслед за фазой реставрации молекулы, образуется структура, не связанная ковалентно с матрицей она напоминает продукт, полученный на нативной ДНК в качестве матрицы, по своей разветвленной форме, неденатурабильности и отсутствию генетической активности. [c.201]

Наиболее убедительным доказательством того, что первичная структура определяет вторичную и третичную, могут, по-видимому, служить опыты по восстановлению нативной структуры белка после денатурации ренатура-ция белка). Если, например, полностью развернуть молекулу рибонуклеазы путем восстановления четырех ее дисульфидных мостиков меркаптоэта-нолом в 8 Af мочевине, а затем вызвать реокисление таких развернутых молекул в контролируемых условиях, то молекулы (от 95 до 100%) вновь приобретают нативную конформацию, что подтверждается восстановлением не только физических свойств, но и ферментативной активности. Этот опыт схематически представлен на фиг. 42. Статистические расчеты показывают, что если бы реконструкция дисульфидных мостиков происходила совершенно произвольно, то нативную конформацию приобретало бы лишь небольшое число молекул —около 1%. В табл. 20 приведены данные по рена-турации некоторых белков. Во всех случаях, за исключением инсулина, степень восстановления нативных структур значительно превышает величину, которой следует ожидать, исходя из статистических соображений. Эти данные вовсе не означают, однако, что процесс образования дисульфидных связей в белках может протекать in vivo без направленного катализа. Реконструкция нативных белковых структур после восстановительного разрыва дисульфидных мостиков представляет собой слишком медленный процесс, не соответствующий скорости синтеза биологически активных белков [c.113]

Еще одним доказательством комплементарной природы РНК, полученной на данной ДНК-затравке, служит образование специфического комплекса при нагревании с последующим охлаждением смеси ДНК-затравки и РНК-продукта. При эквимолекулярных соотношениях два полинуклеотида образуют гибридные комплексы, причем ренатурация ДНК исключается благодаря большей стабильности гибрида. Образование гибрида специфично для ДНК-затравки и не происходит с другими дезоксинуклеиновыми кислотами, даже если они обладают сходным нуклеотидным составом. Следовательно, средний нуклеотидный состав, анализ ближайшего соседа и полная комплементарность последовательности — все говорит о доминирующей роли последовательности нуклеотидов в затравочной ДНК в определении природы ферментативно синтезированной РНК- При использовании определенной бактериальной системы Mi ro o us lysodeikti us) не было обнаружено, чтобы матрица и продукт образовывали промежуточные соединения, гибриды (в отличие от ДНК-полимеразы). Далее, после ферментативного синтеза РНК не происходит изменений в плотности матрицы и денатурации (разделении нитей) ДНК- Следовательно, либо двухспиральная ДНК действует как матрица, не раскручиваясь, либо механизм заключается в том, что функционируют небольшие одноцепочечные олигонуклеотидные участки, непосредственно прилега- [c.319]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология