МЕТОДЫ ПРОЯВЛЕНИЯ ХРОМАТОГРАММ

Проявление хроматограммы. По окончании процесса хроматографирования любым, кроме проточного, методом анализируемые вещества остаются на слое сорбента. Однако большинство определяемых соединений бесцветно, поэтому зоны хроматографируемых веществ остаются невидимыми. Их следует проявить, т. е. сделать видимыми. Поэтому пластинку по окончании процесса хроматографирования вынимают из камеры, растворитель испаряют и приступают к проявлению. Существует два способа проявления химический и физический. [c.144]

Сущность метода заключается в следующем. Раствор исследуемой смеси вводят в хроматографическую колонку — стеклянную трубку, заполненную адсорбентом, предварительно промытым, а затем пропитанным растворителем. Компоненты смеси адсорбируются в верхней части колонки, не разделяясь или разделяясь лишь частично образуется первичная хроматограмма (рис. 10.12, а). Затем ее проявляют . Для этого в колонку подают чистый растворитель (элюент), который десорбирует ранее адсорбированные вещества и перемещает их со своим потоком вниз по колонке. При движении по колонке происходят многократные акты адсорбции и десорбции, приводящие к разделению компонентов смеси в соответствии с законом адсорбционного замещения Цвета (1910 г.), который состоит в следующем если растворенные вегцества А, В, С,. .. по своему относительному сродству к адсорбенту образуют адсорбционный ряд А > В > С. .., тогда каждый из членов адсорбционного ряда вытесняет последующий и, в свою очередь, вытесняется предыдущими, бо.лее сильно адсорбирующимися. В результате на колонке образуется проявленная хроматограмма (рис. 10.12, б). Цвет применил этот метод для разделения на адсорбентах белого цвета (мел, оксид кальция, крахмал, целлюлоза) смеси пигментов листьев [c.304]

Анализ хроматограммы. Заключительной стадией хроматографического анализа смеси веществ является качественный и количественный анализ полученной хроматограммы. Хроматограмма, полученная на адсорбенте белого цвета, представляет собой серию цветных зон, расположенных в определенном порядке. Визуальное исследование такой хроматограммы дает ориентировочное представление о составе исследуемой смеси. Если разделяемые вещества флоуресцируют в ультрафиолетовом свете, расположение зон в колонке можно определить при помощи облучения ее ультрафиолетовыми лучами. Выявление зон бесцветных веществ осуществляется методом проявления хроматограммы. Для этого через хроматографическую колонку пропускают раствор, который дает окрашивание невидимых зон, или адсорбент обрабатывается перед началом хроматографирования соответствующим индикатором, который изменяет свою окраску в зависимости от среды образовавшейся зоны. [c.316]

Важнейшие методы проявления хроматограмм представлены в табл. 7, [c.92]

Выявление зон бесцветных веществ осуществляется методом проявления хроматограмм. Для этого через хроматографическую колонку пропускают раствор, ко- [c.325]

МЕТОДЫ ПРОЯВЛЕНИЯ ХРОМАТОГРАММ [c.15]

Элюентный анализ, фронтальный анализ и вытеснительное проявление. Кроме применяющегося обычно элюентного анализа, описанного выше, существует еще два основных метода проявления хроматограмм (хроматографического анализа) фронтальный анализ и вытеснительное проявление. Оба метода были разработаны Тизелиусом (в 1940 и в 1943 гг.). Условия работы с колонкой по этим трем методам соверщенно различны. Фронтальный анализ состоит в пропускании раствора через колонку из адсорбента, предварительно промытую чистым растворителем, в определении концентрации выходящего из колонки раствора и установлении зависимости между его концентрацией и объемом. Таким образом, получают характерные кривые с одной ступенью для каждого из растворенных веществ. При проявлении методом вытеснения вещества, подлежащие разделению, адсорбируются в верхней части колонки и через колонку пропускают раствор вещества, обладающего большей энергией адсорбции. Это вещество играет роль проявителя, вытесняющего вещества, подлежащие разделению, которые, в свою очередь, вытесняют друг друга. Определяют зависимость между концентрацией вещества в исходящей из колонки жидкости и ее объемом. Измерения высоты и длины каждой ступени кривой дают возможность провести качественный и количественный анализ составных частей смеси при условии, что проявитель количественно вытесняет исследуемую смесь. Методы Тизелиуса, усовершенствованные Клессоном и другими, особенно важны для разделения бесцветных веществ и при применении таких адсорбентов, как уголь. За концентрацией составных частей смеси в жидкости, исходящей из колонки, непрерывно следят по показателям преломления, электропроводности или других физических свойств. Клессон показал, что методом фронтального анализа можно осуществить количественный анализ смеси, состоящей из шести жирных кислот (на- [c.1490]

ХУЛ.З. Методы проявления хроматограмм [c.386]

Если окрашивание всех зон веществ одинаково, а табличных значений Рг оказывается недостаточно, прибегают к методу свидетелей . Он основан на том, что Rf не зависит от присутствия посторонних веществ. Поэтому если параллельно с каплей анализируемого раствора на полоску хроматографической бумаги нанести каплю раствора смеси известных веществ, то после проявления хроматограммы сравнивают положение пятен компонентов анализируемой смеси с положением пятен известных веществ и идентифицируют неизвестные вещества. [c.223]

Разновидностью распределительной хроматографии является хроматография на бумаге, широко используемая в биохимических лабораториях, в том числе клинических, для разделения пептидов, аминокислот и других веществ (рис. 1.4). В качестве стационарной фазы при этом служит вода, адсорбированная целлюлозными цепями фильтровальной бумаги. Образец помещают на одном конце бумажной полосы, этим же концом бумагу погружают в подходящую смесь органических растворителей (например, бутанол-уксусная кислота-вода в определенных соотношениях). При движении растворителя по бумаге благодаря силе капиллярности происходит разделение компонентов смеси. Проявленную хроматограмму высушивают, а местоположение каждого из разделяемых веществ определяют химическими или физико-химическими методами. [c.28]

Способы проявления хроматограмм. В основу всех хроматографических методов анализа положен принцип чередования процессов сорбции и десорбции. В соответствии с этим способы выполнения хроматографических методов различны и приводят к получению зон хроматографического разделения различного вида (полосы, пятна). Этот процесс называют проявлением хроматограмм. Сорбция в процессе хроматографического разделения веществ происходит вследствие взаимодействия вещества со стационарной фазой. Десорбция может происходить при взаимодействии подвижной фазы с веществом или со стационарной фазой. Кроме того, можно использовать и зависимость сорбционных равновесий от температуры повышение температуры приводит к десорбции. [c.344]

Имеется много примеров применения последнего метода, так как он дает возможность выбора соответствующих веществ. Из пробы можно удалять, например, кислоты, кетоны, алкины и др. На проявленной хроматограмме в этом случае отсутствует соответствующий пик (см. примеры [17]). При проведении качественных определений газохроматографическому определению сопутствует ряд вспомогательных методов. Небольшое время проведения анализа оправдывает эти затраты. Количественную оценку хро- [c.370]

Если нельзя подобрать реактивы, образующие окрашенные в разные цвета пятна компонентов разделяемой смеси, или использовать методы люминесценции и радиоавтографии, применяют метод свидетелей . Он основан на том, что коэффициент Я) не зависит от присутствия посторонних веществ. Поэтому, если параллельно с каплей анализируемой смеси на полоску хроматографической бумаги нанести каплю смеси, содержащей известные вещества, то после проявления хроматограммы можно, сравнивая положение пятен компонентов анализируемой смеси с положением пятен известных соединений, идентифицировать не- известные вещества. [c.124]

Если не дают эффекта оптические методы обнаружения веществ на хроматограммах, прибегают к химическим методам проявления. Наиболее распространенный метод проявления состоит в опрыскивании из пульверизатора пластинок растворами реагентов, взаимодействующих с определенными веществами. Мелкое разбрызгивание обеспечивает однородное нанесение реагента на пластинку и более четкое обнаружение пятен. Опрыскивание проводят в вытяжном шкафу или специальном стеклянном колпаке. [c.138]

Метод измерения интенсивности окраски пятна бумажных хроматограмм. Сущность метода состоит в том, что интенсивность окраски пятна в проявленной хроматограмме пропорциональна концентрации вещества в рас-створе, что может быть использовано в количественном анализе. Измерение интенсивности окраски проводят путем прямого фотометрирования интенсивности окраски всего пятна или только его максимально окрашенного участка с помощью специально приспособленного к из-мерению плотности окраски денситометра [96, 97]. [c.99]

Метод определения площади пятна с помощью планиметра. Для анализа на бумагу наносят с интервалами 2 см растворы, содержащие определенные концентрации веществ, которые легко разделяются на одномерной хроматограмме или легко обнаруживаются специфическими реагентами (см. стр. 97). После проявления хроматограммы контуры пятен осторожно очерчивают карандашом и их площадь определяют планиметром. Если планиметра нет, то пятна на бумаге вырезают и взвешивают. [c.116]

Наиболее старый метод адсорбционной хроматографии, так называемая классическая хроматография, или метод Цвета, по существу представляет собой адсорбционно-элюционную хроматографию. Его наиболее ответственной фазой является проявление хроматограммы, в ходе которого отдельные адсорбционные полосы компонентов смеси разделяются током растворителя так, что между ними остаются полосы адсорбента, не содержащие адсорбированных веществ (см. рис. 330, а). [c.354]

Новым вариантом адсорбционной хроматографии является проточная хроматография, которая по сравнению с классическим вариантом имеет ряд преимуществ. При выборе адсорбента, растворителя и приготовления хроматографической колонки для проведения проточной хроматографии обычно руководствуются теми же соображениями, что и при хроматографировании по методу Цвета. Различие этих методов заключается в том, что в случае проточной хроматографии процесс не оканчивается на стадии проявления хроматограммы, а продолжается дальше. Индивидуальные вещества постепенно вымываются в фильтрат, где собираются в отдельные приемники. Как правило, для того чтобы элюировать все компоненты разделяемой смеси, необходимо применять не один, а ряд растворителей, используемых последовательно в порядке их расположения в элюотропном ряду-В настоящее время проточная хроматография является наиболее широко распространенным видом адсорбционной хроматографии. [c.362]

Имеются сообщения об отделении и определении ртути методом осадочной хроматографии с применением ионообменников [7, 8]. На иодистом ионообменнике разделены смеси Ag — Hg (II) — В1 Ag - Hg (II) - РЬ Ag - Hg (II) - Си (II) РЬ - Hg (II) -В1 РЬ - Hg (II) - Си Hg (II) - Си - В1, Hg (II) - Hg (I) из азотнокислых растворов. На фосфорнокислом ионообменнике проведен анализ смесей В1 — Hg — РЬ — С(1 — Ag Hg — РЬ — Си - Сс1 - В1 В1 - Hg - РЬ - А - Си - Сс1 В1 - Hg -РЬ — Сс1 Hg — РЬ — Си — Ag. При этом катион Hg(II) обнаруживался проявлением хроматограмм специфическими реактивами (например, раствором диэтилдитиокарбамата натрия). [c.59]

Разделение красителей методом распределительной хроматографии основано на использовании различной величины их коэффициентов распределения между двумя йесмешивающимися жидкостями. При проявлении хроматограммы образуются ярко окрашенные пятна составных компонентов, и состав красителя определяют по сопоставлению этих пятен со свидетелями . [c.303]

Оптимальная величина воспроизводимости зависит от метода фотометрического детектирования, точности функционирования механической системы сканирования, уровня электрических шумов в электронной схеме фотометра, воспроизводимости нанесения пробы и хроматографического разделения, включая в случае необходимости операцию проявления хроматограммы. [c.209]

По способу для разделения примесей пробу раствора дифенилолпропана в этаноле наносили на лист ватмана № 1, пропитанный водой в качестве растворителя использовали четыреххлористый углерод, насыщенный муравьиной кислотой. Хроматографирование вели нисходящим способом для проявления хроматограммы использовали свежеприготовленную смесь водных растворов феррицианида калия и хлорного железа. Количественное определение проводили с помощью хроматометра Ланге (хроматограмму парафинировали, а затем измеряли интенсивность окраски пятен и сравнивали с калибровочным графиком). Применяли также и более простой метод, не требующий указанного прибора — метод сравнения интенсивности окраски в исследуемой и эталонной пробах. Помимо орто-пара-изомера дифенилолпропана, соединения Дианина и трис-фенола I удалось обнаружить 10 неидентифицированных примесей. На основании величины авторы предполагают, что три компонента из десяти являются фенолами с одной группой —ОН. [c.187]

Хроматография на бумаге является микрометодом. В качестве носителя неподвижной фазы применяют чистую целлюлозу в виде специальной фильтровальной бумаги. Она должна обладать высокой чистотой и очень равномерной плотностью. Отдельные сорта различаются между собой толщиной и впитывающей способностью. Неподвижной фазой в большинстве случаев служит постоянно присутствующая в целлюлозе вода. Однако неподвижной фазой на бумаге может быть и другой растворитель. Вещество наносят в определенной точке на бумагу (точка старта). Разделение происходит при прохождении по бумаге подвижной фазы (проявление). Хроматографию на бумаге проводят в закрытом сосуде, атмосфера в котором должна быть, насыщена парами всех компонентов применяемой системы растворителей. Важнейшие методы проявления хроматограмм представлены в табл. 6. Положение пятен веществ по окончании хроматографирования характеризуют значениями Rf (Ratio of Fronts — отношение фронтов) [c.78]

Денситометрическое определение всех классов соединений на основе использования обычных методов проявления хроматограмм недостаточно точно ввиду отсутствия единой для всех соединений пропорциональности оптической плотности и концентрации. Однако менее трудоемко. Исходя из этих положений, Д. И. Кузнецов и Л. И. Семенова [4] разработали методику денситометрического определения индивидуальных классов липидов, в том числе стеринов, на основе хроматографии в тонком слое силикагеля. Принцип метода заключается в том, что перед анализом к силикагелю добавляют краситель метиловый красный. Липиды проявляются в виде пурпурных пятен на розовом, а затем желтом фоне. После обесцвечивания фона парами аммиака хроматограмму фотографируют и затем фотокопии денсйтом трйрукЛ, сравнивая оптическую плотность изучаемых фракций с оптической плотностью стандарта. [c.213]

Для окисления продуктов гидролиза ХФ, которые с резорщ -ном в щелочной среде могут давать реакцию, аналогичную ХФ, в отличие от существующих методов проявления, хроматограммы вначале опрыскивают с двух сторон 0,1н. раствором иода в этиловом спирте [16]. Далее их высушивают на воздухе 10—15 мин и обрабатывают смесью 1 М раствора карбоната натрия и 15%-ного раствора резорцина (1 1). Хроматограмму помещают в сушильный шкаф при температуре 50° С на 3—5 мин, при этом па ней появляется розовое пятно ХФ с четко очерченными краями. Величина равна 0,35. Чувствительность метода 5 мкг. [c.80]

Книга состоит из двух частей — общс11 и специальной. 13 обще11 части дается классификация хроматографических методов разделения веществ и методов проявления хроматограмм, а также краткий вывод основных уравнений теории хроматографии. Большое место уделяется связи между структурой вещества и его хроматографическим поведением. Подробно описываются техника хроматографии па бумаге п методы проявления бумажных хроматограмм. [c.4]

Большие возможности в органическом анализе представляет сочетание полярографии с хроматографией — х р о м а т о п о л я-рография — где полярографические датчики анализируют последовательно выходящие из хроматографической колонки вещества. В приложении к бумажной и тонкослойной жидкостной хроматографии этим методом можно определять вещества с близкими значениями У /, избегать проявления хроматограмм, заменяя его полярографированием вдоль линии подъема раствора. [c.279]

При проявлении хроматограммы происходит разделение смешанных зон на зоны, в которых находятся индивидуальные веш,ества, и перемещение этих зон вдоль колонки (рис. 6.2). Те вещества, которые имеют большие значения коэффициентов распределения между подвижной и неподвижной фазами, пермещаются быстрее вдоль колонки и, при достаточном промывании колонки подвижной фазой, будут первыми выходить из нее. Можно собрать фракции фильтрата (элюата), содержащие отдельные компоненты смеси, и проанализировать их подходящими методами конечного определения. [c.321]

Проявление хроматограммы по классическому методу Цвета считается законченным, когда наиболее подвижная адсорбционная полоса достигает нижнего конца хроматограммы. Если при этом не происходит полного разделения адсорбционных полос, то иногда можно первую полосу вымыть и затем добиться более полного разделения остальных полос. Как правило, достигнуть полного разделения всех компонентов смеси не удается, так как некоторые полосы более или менее перекрываются. В этом случае стремятся отделить неперекрывающиеся части адсорбционных зон, а смешанные зоны разделить повторным хроматографированием, причем используемый во втором случае адсорбент должен иметь большую селективность. [c.360]

Анализ органических примесей, содержащихся в бисфеноле А, проводят методом тонкослойной хроматографии [6, с. 71]. Для этого пробу бисфенола А растворяют в трихлорэтилене при нагревании, а затем каплю полученного раствора помещают на пластинку, покрытую слоем специально приготовленного силикагеля. На пластинку наносят также капли эталонных растворов. Пластинку помещают в камеру, содержащую смесь этилаце-тата (10%) и хлороформа, и выдерживают в определенных условиях. Затем пластинку вынимают из камеры и обрабатывают раствором диазопиевой соли сульфани-ловой кислоты при этом происходит проявление хроматограммы. Этот метод — полуколичествеппый. Однако он дает возможность проконтролировать наличие нежелательных примесей. [c.46]

Разделение смеси ЗОГ, SjO , ЗдОГ, 840 и S N" возможно методом двумерной ТСХ на пластинах (20 X 20 см) типа SA и SQ (фирмы Gelman ), в качестве элюентов используют 95%-ный 1-бутанол (для разделения смеси SjO -i ЗдОГ". З4ОГ- и 3 N -ионов), или смесь (1 1) СНдОН с 1-пропанолом (для отделения ЗОГ от всех ионов). Проявление хроматограммы осуществляют опрыскиванием 8%-ным раствором нитрата серебра [960]. [c.58]

Ненасыщенные олеиновую и линолевую кислоты первоначально определяли [57, 58] путем их разделения методом хроматографии на бумаге, пропитанной смесью низкокипящих (180—190 °С) синтетических алканов. (Проявляли хроматограмму 9 1 водным раствором уксусной кислоты, насыщенным той же смесью.) Проявленную хроматограмму в течение 1 ч высушивали в атмосфере азота при температуре 60 °С. После этого ее погружали в 6,5 мл раствора 0,0022 М по Na 4 и 0,0044 М по NalOs с удельной [c.230]

Метод тонкослойной хроматографии применен для количественного определения конденсированных фосфатов [1051—1053]. При погружении проявленной хроматограммы в раствор коллодия в смеси спирта и эфира [1 i 2], содержащей глицерин, сорбционный слой покрывается пленкой и легко снимается с пластинки. Для количественного определения отдельных конденсированных фосфатов из снятого слоя вырезают зоны, содержащие пятна этих фосфатов," органическую фазу окисляют мокрым путем и содержаниеТфосфатов в отдельных фракциях находят фотометрическим методом. В качестве элюента применяют смесь GH3OH с диоксаном. [c.102]

Отделение галлия от алюминия может быть осуществлено хроматографическим методом на стеклянных пластинках, покрытых сорбентом (силикагель + гипс) [1317]. В качестве элюанта применяют смесь ацетона и концентрированной НС (100 0,5). Пятна рассматривают в ультрафиолете после проявления хроматограммы 0,5%-ным раствором оксихинолина в 60%-ном этаноле и выдерживания в парах аммиака. Открываемый минимум 1 мкг Са. Желтый флуоресцирующий осадок образуется также при взаимодействии галлия с 5-метил-7-нитрозо-8-оксихино-лином (pH 5,30—8,35) [898, 917, 919, 1390], 2-метил-8-оксихино-лином [898, 916, 917], 5-метил-8-оксихинолином (898, 916, 917] и с 7-метил-8-оксихинолином [898, 916, 917]. [c.32]