Антитела также Антиген антитело, Моноклональные антитела

На иммунизацию организм отвечает синтезом очень неоднородной популяции антител, молекулы к-рых могут сильно отличаться друг от друга по сродству к антигену. Такая неоднородность объясняется участием в иммунном ответе очень большой популяции В-лимфоцитов, каждый из к-рых синтезирует лишь одну разновидность молекул антител. С помощью техники гибридом (гибридные клетки, получаемые слиянием злокачественных и нормальных анти-телобразующих клеток лимфоцитов) удается получить в больших кол-вах однородные моноклональные антитела, к-рые широко используют в качестве высокоспецифич. реагентов для обнаружения, локализации и выделения разл. в-в, а также для диагностики и лечения нек-рых заболеваний. Гомог. И. накапливаются в больших кол-вах в крови и моче больных при ряде злокачеств. поражений лимфоцитов (т. наз. миеломные И.). [c.217]

Последние данные изучения структуры генов и генных продуктов вирусов гриппа, а также информация, полученная при использовании моноклональных антител, позволили получить несколько важных сведений о поведении этого вируса. Например, ясно, что антигенный шифт не происходит вследствие прямой мутации одного подтипа в другой, в то время как антигенный дрейф осуществляется в результате точечных мутаций в генах. Однако частота мутаций поверхностных белков не превышает существенно соответствующую величину для внутренних белков. НА имеет по крайней мере четыре различающихся антигенных сайта, которые могут варьировать независимо, с патогенностью, зависящей частично от последовательности в НА, где происходит расщепление. Некоторые сегменты РНК имеют перекрывающиеся гены, использующие две рамки считывания. Результаты секвенирования подтверждают антигенную классификацию подтипов НА и NA. [c.155]

Во-первых, гетерогенностью антител по физико-химическим свойствам, в том числе по сродству к антигену. Во-вторых, сложностью определения общего количества антител, а также отдельных фракций. В-третьих, в случае поливалентных антигенов возможностью образования комплексов сложного состава, в том числе циклической структуры, в которых проявляется кооператив-ность Взаимодействия активных центров антител. Все это не позволяет применить традиционные методы для расчета истинных значений констант связывания. Более надежные данные могут быть получены для моноклональных антител и их РаЬ-фрагментов, так как в этом случае могут быть выделены индивидуальные антитела в гомогенном виде. [c.41]

Созданы и применяются в производстве высокочувствительные диагностические препараты на основе метода ИФА (иммуноферментного анализа), ДНК-зондов, внедрения полимеразной цепной реакции (ПЦР).Используются моноклональные антитела, полученные методом гибридомной технологии. Получены генетически трансформированные кролики с геном асРНК, устойчивые к вирусам лейкоза, а также трансгенные кролики с геном альфа-2 интерферона. Разработана рекомбинантная вакцина против лейкоза крупного рогатого скота на основе оспененного вектора. На культуре клеток нарабатывается антиген и производится диагностика лейкоза крупного рогатого скота. Генно-инженерные вакцины против ящура и сибирской язвы производятся в объемах, обеспечивающих потребности в них России, стран СНГ и ряда других государств мира. [c.428]

Иммуноферментный анализ, возникший более пятнадцати лет назад на пересечении иммунохимии и инженерной энзимо-логии, стал в настоящее время одним из распространенных методов исследования. Явные преимущества нового метода, к которым относится простота выполнения, доступность и стабильность реагентов, экспрессность и возможность автоматизации для проведения массовых анализов, обеспечили его прочное положение в клинической биохимии, при диагностике заболеваний растений и животных, в научных исследованиях. Благодаря успехам биотехнологии иммуноферментный анализ далее интенсивно развивался, поскольку с помощью генной инженерии были получены в высокоочищенном виде малодоступные антигены, а также ферменты-маркеры и их конъюгаты с антигенами, а с помощью клеточной инженерии — моноклональные антитела с заданной специфичностью и аффинностью. Новые направления развития иммуноферментного анализа связаны с использованием различных методов регуляции ферментативной активности при детектировании комплексов антиген — антитело. Именно этим вопросам и посвящена предлагаемая книга. [c.5]

Своеобразие рассматриваемых процессов состоит также в том, что. конечный продукт, находящийся первоначально в очень сложной смеси растворенных в воде веществ, должен быть получен со степенью чистоты, определяемой его последующим применением, т. е. с чистотой фармакопейных препаратов. Такая задача была бы крайне трудной, если бы не возможность использования специфических антител. Действительно, промышленное производство моноклональных антител из культур клеток, полученных методами клеточной инженерии (гибридомная техника), оказалось тем биотехнологическим производством, которое дало гигантский эффект в методах выделения особо чистых биопрепаратов. Иммобилизация моноклональных антител,. специфическим антигеном которых является, например, аг-интерферон, позволяет выделять последний в чистом виде из жидких смесей любого состава, пропуская их через колонку, в которой целевой продукт задерживается на твердом носителе, несущем антитело, а все остальные компоненты раствора, не дающие реакции антиген—антитело , проходят неизменными. После промывки комплекс интерферона с антителом легко разрушается и продукт получается в чистом виде. [c.28]

Чувствительность в определении единичных аминокислотных замен в случае моноклональных антител значительно выше по сравнению с антисывороткой и позволяет использовать моноклональные антитела даже для детекции тонких конформационных изменений молекулы белка. Благодаря высокой чувствительности, с которой моноклональные антитела определяют антигенные детерминанты, их можно использовать для точного установления границ и структуры детерминант, а также для идентификации и выделения чистых специфических пептидных фрагментов антигена. [c.306]

Последние достижения в развитии новейших технологических приемов значительно расширили наши возможности в определении генетического строения и молекулярной структуры вирусов, а также выявлении сходства штаммов и идентификации различий между вариантами вирусов. Наиболее важные из этих методов — клонирование и определение последовательности нуклеиновых кислот, картирование РНК и пептидов, а также антигенный анализ белков с помощью моноклональных антител. Задача последней обзорной главы данной книги — обсуждение эпидемиологии вируса гриппа в свете применения этих новых методов. Особое внимание уделено оценке последних достижений и изучению вопросов эпидемиологии, которые могут быть успешно решены при использовании молекулярных методов. [c.313]

Три типа методов ВЖХ, описанные в этой главе, дают возможность очищать и анализировать иммуноглобулины быстрее и с большей чувствительностью, чем обычные методы колоночной хроматографии. В настоящее время емкость колонок для ВЖХ не так велика, как емкость колонок для обычной хроматографии, но уже начато производство препаративных колонок. для ВЖХ. Доступны также колонки для ионообменной ВЖХ, использование которых здесь не обсуждалось. Методы получения высокоочищенных препаратов моноклональных антител и их анализа становятся очень важными не только потому, что эти препараты представляют интерес для биохимиков при исследовании регуляции иммунного ответа и связывания с антигенами, но и потому, что они все шире применяются в медицине для диагностики и лечения. Методы ВЖХ обеспечивают необходимую для решения этих задач разрешающую способность и высокую скорость проведения разделений. [c.148]

Применение мкАТ в терапии наталкивается на некоторые трудности, например на наличие в крови адресных антигенов, дефицит моноклональных антител человеческого происхождения и т. д. Тем не менее преимущества применения моноклональных антител очевидны, что обусловило производство их в промышленном масштабе. Ряд фармацевтических фирм США, Европы и Японии производят диагностические наборы, мкАТ для терапии ряда заболеваний и лабораторной техники, а также для научных исследований. [c.496]

Большинство антигенов вызывает в организме образование целого набора антител, но каждый отдельно взятый лимфоцит продуцирует лишь одно из них. Миеломы — это злокачественные новообразования иммунной системы они развиваются в результате неконтролируемой пролиферации одной линии лимфоцитов. При этом в больших количествах синтезируется один тип белков-антител. Иными словами, миеломы являются природными продуцентами моноклональных антител. По методу Миль-штейна проводят слияние нормальных (неопухолевых) лимфоцитов и клеток миеломы. Вначале полученные гибриды синтезируют смесь антител, включающую два типа антител родительских клеток, а также гибридные их формы, образующиеся путем ассоциации тяжелых и легких цепей антител двух родительских форм. Впоследств ии в результате элиминации хромосом образуются клетки, способные к синтезу антител лишь одного типа. Это могут быть либо антитела, закодированные в геноме лимфоцита, либо антитела, характерные для клеток миеломы. Скрининг и обнаружение клона, синтезирующего искомое антитело, ведут при помощи биохимических и иммунохими-ческих методов. Схема этого метода дана на рис. 7.5. [c.313]

В медицине моноклональные антитела применяют прежде всего для диагностики различных заболеваний. Такие бактериальные заболевания, как кокковые, паразитарные инфекции, малярия, а также грибки хламидии, при помощи мкАТ диагносцируются гораздо точнее, чем другими, традиционными методами. В вирусологии использование мкАТ дало возможность разработать условия антигенного анализа вирусов гораздо более информативного, чем при использовании поликлональных антител. Этот метод позволил получить уникальную информацию об антигенных детерминантах ДНК- и РНК-содержащих вирусов и их изменчивости. В частности, были идентифицированы антигенные детерминанты вирусов гриппа, полиомиелита, гепатита А и др. [c.495]

Новые возможности для специфичного выделения отдельных фрагментов белка открылись а связи с разработкой техники моноклональных антител (рис. 15). Иммуносорбенты на основе моноклональных антител к различным участкам белковой молекулы могут быть использованы для селектианого выделения пептидных фрагментов, несущих антигенные детерминанты этих антител. Поскольку в основном антигенные детерминанты находятся во фрагментах полипептидной цепи, располагающихся на поверхности глобулы, метод применяется также для изучения топографии белков. [c.56]

Выявление с помощыо прямой РИФ. Как и при ИЭМ, в данном случае происходит взаимодействие вирусных антигенов с АТ диагностической иммунной сыворотки или моноклональными антителами (см. подразд. 1.4.5). С помощью РИФ также удается обнаружить специфический вирусный антиген в культурах клеток, инфицированных вирусом. [c.267]

Радионуклиды для терапии. В последние годы в связи с ростом онкологических заболеваний активно ведутся поиск и исследование PH, которые обладали бы оптимальными для радиотерапии свойствами. Биологическое поведение PH, а именно, особенности распределения и накопления нуклидов в организме, скорость захвата и время жизни в отдельных органах, антигенные проявления, а также характеристики самих опухолевых образований (радиочувствительность размер, влияющий на проницаемость излучения близость расположения к здоровым тканям и органам степень гетерогенности поглощения радиационной дозы в зависимости от региональных изменений потока крови в опухоли) служат основой для выбора терапевтических PH. По мнению медиков радиотерапия имеет меньший риск с точки зрения возникновения вторичных нежелательных явлений, например, лейкемии, по сравнению с химиотерапией и лучевой терапией на пучках частиц. Такое заключение было сделано по результатам многолетних исследований с и Наиболее эффективной считают радиоиммунотерапию (РИТ) с мечеными моноклональными антителами (МКАТ) как дополнение к другим формам воздействия (химиотерапия, хирургическое вмешательство), особенно на начальной стадии появления опухолевых клеток. [c.350]

Помимо того что моноклональные антитела применяются как специфические реагенты в стандартных тестах, они могут использоваться и для идентификации новых, более специфических маркеров опухолей. Так, Ритсу и его сотр. (Ritz et al., il980) удалось получить моноклональные антитела к антигену клеток при остром лимфолейкозе человека. Были также выде- [c.332]

Молекулы NA вариантного вируса, селекционированного в присутствии S10/1 моноклонального антитела с изменением последовательности в положении 368 лизина на глутаминовую кислоту также были кристаллизованы. NA варианта не связывается с антителом S10/1 и дифракционный анализ показывает, как изменение последовательности влияет на форму антигенного сайта [фотография кристаллов Fab любезно предоставлена Р. olman). [c.146]

Относительно мала информация об антигенном дрейфе в NA вирусов гриппа животных и птиц. Известен антигенный дрейф среди вирусов гриппа свиней [52]. Анализ вирусов гриппа птиц с нейраминидазой N2 с использованием набора моноклональных антител к N2 человека показал, что все штаммы птиц были родственны штамму A/Jарап/305/57 человека [116]. Некоторые антигенные вариации были различимы в штаммах N2 птиц, выделенных в 1965—1981 гг., но не было постепенного антигенного дрейфа, подобного тому, что обнаружено у штаммов вирусов гриппа человека. Результаты указывают на то, что множество различных штаммов того же подтипа существуют одновременно и персистп-руют в популяции птиц. Последовательности первых 200— 300 нуклеотидов 5 -концов кДНК, транскрибированных с генов NA 20 вирусов птиц восьми из девяти подтипов NA, также не обнару- [c.146]

Однако чувствительность одностадийной схемы ниже чем двухстадийной, а контакт фермента с анализируемой средой может неблагоприятно отражаться на результатах анализа. Данная схема налагает также дополнительные требования на соотношение концентраций меченых и иммобилизованных антител с целью исключения их конкуренции за связывание с ограниченным числом антигенных детерминант на молекуле антигена. В этой связи целесообразным является использование в-анализе моноклональных антител, специфичных к различным антигенным детерминантам на мдлекуле антигена. Следует подчеркнуть, что данный метод анализа не может быть отнесен к конкурентному типу, так как формирование комплекса антигена с мечеными иди иммобилизованными антителами не [c.88]

Ситуация резко изменилась после введения неизотопных меток для регистрации реакции антиген - антитело [5 ], и особенно после применения моноклональных антител в двухцентровом им-мунометрическом анализе белков [б ]. Необходимость создания высокочувствительных методов иммуноанализа для научных исследований, а также более простых методик для проведения анализов в поликлиниках, полевых условиях и для самодиагностики также содействовала бурному развитию твердофазных методов. Носители, применяемые в этих анализах, могут быть выполнены в виде трубок, шариков, мелких гранул, микропланшетов, полосок, пленок и электродов. [c.53]

Специфичность иммуносупрессивного действия антител не очень велика. Так, например, при подавлении иммунного ответа на конъюгированный антиген моноклональными антителами против гаптена они способны также частично подавить продукцию антител против белка-носителя (М. Bruggemann, К. Rajewsky, 1982). Другие факты свидетельствуют о том, что IgG-антитела подавляют иммунный ответ как в отноигении экранированных, так и оставшихся свободными антигенных детерминант. Если допустить, что эти детерминанты доступны для антител в той же мере, что и для иммуноглобулин вых рецепторов В-лимфоцитов, необходимо заключить, что подавление иммунного ответа антителами происходит нс- [c.222]

Большое разнообразие макромолекул, изучаемых с помощью антител, включает не только естественные продукты животных н растений, но, и продукты микробного происхождения, и синтетические вещества. Приготовление поликлональной антисыворотки к определенным молекулам может включать предварительную очистку, если нельзя получить очищенный коммерческий препарат. Для компонентов клеточной поверхности современный подход — это получение моноклональных антител требуемой специфичности при этом решается проблема очистки иммуногена (см. гл. 3). С другой стороны, с помощью уже существующих антител можно очистить компоненты клеточной поверхности, а также проводить обогащение клеток, экспрессирующих антиген-мишень. Эти подходы обсуждены в гл. 5. Метод экстракции имеет большое значение в тех случаях, когда необходимо получить полиспецифическую антисыворотку к смеси иммуногенов, например экстрагированных клеточных мембран, гомогенатов тканей, разрушенных ультразвуком бактерий, вирусов и паразитов. Невозможно в этой главе привести детальное руководство по экстракции и очистке огромного разнообразия иммуногенов. Существует специальная литература, посвященная методам получения углеводных, бактериальных, вирусных, грибковых и паразитарных антигенов [21]. Очистка с помощью аффинной хроматографии описана в гл. 5, а приготовление иммуноглобулинов [c.50]

Описанный выше метод применяется для разделения экст-рапированных бактериальных и паразитарных антигенов, а также компонентов сыворотки человека. Он позволяет получать хорошие полосы бел ков с мол. массой от 150 до 10 кДа. Для ограничения этого диапазона можно изменить концентрации акриламида. Известны наборы для приготовления минигелей см. приложение). В них. входят специальные кассеты для заливки гелей. Они более экономичны с точки зрения расхода реагентов и требуют меньше времени, но одновременно снижается разрешающая способность при разделении очень сложных смесей. Компромисс состоит в использовании мини-гелей с различными концентрациями акриламида. Рис. 2.4 иллюстрирует разрешающую способность 14%-ного геля шириной 14 см при разделении экстрагированных из мембран и разрушенных белков Е. oli и микобактерий. Последние служат исходным материалом для получения как моноклональных антител, так и кроличьей полиспецифической антисыворотки. Белки Е. соИ получают следующим образом [27]. [c.62]

В целом использование моноклональных антител в экспериментальных и клинических исследованиях помогает устранить проблему, связанную с неспецифическими реакциями обычной поликлональной антисыворотки, обусловленными присутствием посторонних антител, а также связыванием с антигеном компонентов неиммуноглобулиновой природы. Однако, как было сказано выше, исследователю может потребоваться более одного препарата моноклональных антител, специфичных к определенному антигену, с тем чтобы использовать такую комбинацию антител для проведения широкого спектра экспериментов. [c.150]

Описанный метод был применен для детектирования новых антигенов на фибробластах, трансфецированных клонированными Я-2-генами (табл. 12-2). Мы обычно используем этот метод для Н-2- и 1а-типирования стимулированных Кон-А спленоцитов, которые также применяются как клетки-мишени для цитотоксических Т-клеток. Очень удобно, что эти клетки можно оставлять на холоду в течение ночи перед проведением теста связывания (табл. 12-3). Для стандартного Н-2- и 1а-типирова-ния мышей-беккроссов мы хирургически удаляем два или четыре шейных лимфатических узла и готовим клеточную суспензию. Эту суспензию можно разделить как минимум на пять порций в зависимости от набора моноклональных антител, которые будут использоваться для тестирования (если ожидают результат о наличии или отсутствии антигена, то нет необходимости считать клетки) (табл. 12-4). [c.228]

После появления подробной публикации по разработанному нами методу (Tsang et al., 1983а) и тем более с момента первого сообщения по его применению (Tsang et al., 1982) мы несколько модифицировали саму методику, что позволило повысить разрешение и сделать ее в целом менее трудоемкой. Методика, представленная в данной публикации, в настоящее время непосредственно используется в нашей и в ряде других лабораторий. Полученные с ее помощью результаты оказались весьма полезны для выявления сложных взаимодействий антиген—антитело при различных инфекциях. Данный метод был также эффективно использован для изучения ряда вопросов, связанных со специфичностью продуцируемых моноклональных антител. [c.342]

Смотреть страницы где упоминается термин Антитела также Антиген антитело, Моноклональные антитела: [c.495] [c.117] [c.183] [c.72] [c.224] [c.206] [c.116] [c.136] [c.147] [c.156] [c.247] [c.26] [c.90] [c.189] [c.48] [c.146] [c.159] [c.312] [c.424] [c.474] [c.44] [c.199] [c.246]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология