Альбумины высаливание

Высаливание белков концентрированными растворами солей является одним из основных методов фракционирования белковых смесей на альбумины и глобулины. Понижения растворимости белков можно достичь также добавлением спирта и действием низкой температуры. На сочетании действия спирта, солей и охлаждения основаны способы детального фракционирования белковых смесей по Кону например, из сыворотки крови этим путем выделено свыше 12 белков. [c.369]

Одним из широко применяемых методов фракционирования белков является высаливание нейтральными солями. Впервые этим способом были отделены глобулины от альбуминов. Глобулины осаждаются при 50%-ном насыщении сернокислым аммонием, а альбумины — при более высокой концентрации. Сульфат натрия, обладая меньшей растворимостью, чем сернокислый аммоний, осаждает только глобулины. [c.59]

Высаливание. Классический метод разделения альбуминов и глобулинов сыворотки крови основан на осаждении последних, 2 М сульфатом аммония (50%-ное насыщение). Альбумины осаждаются лишь 4 М сульфатом аммония (100%-ное насыщение). Вместо сульфата аммония могут быть использованы и другие нейтральные соли — сульфат натрия, сульфат магния, смеси одно- и двухзамещенных фосфатов и др. Однако наибольшее распространение в качестве солевого осадителя - белков получил именно сульфат аммония. Это обусловлено главным образом тем, что высокая растворимость в воде сочетается у него с практической независимостью растворимости от температуры. Так, концентрация насыщенного раствора сульфата аммония при переходе от 25 к 0° снижается лишь с 4,1 до 3,9 М. Напротив, такие осадители, как, например, сульфат натрия, имеют ограниченную область применения из-за низкой растворимости при температуре, близкой к 0°. Сульфат аммония весьма удобен также тем, что не оказывает денатурирующего воздействия на самые лабильные из известных белков. [c.17]

Ход работы. Яичный белок смешать с пятикратным объемом воды и выпавший яичный глобулин отфильтровать. В полученном фильтрате определить наличие альбумина осаждением путем нагревания и применением алкалоидных реактивов, а затем для подтверждения альбуминового характера обнаруженного белка- определить границы высаливания. Для этого в девять пробирок налить (в каждую ) по 1 мл раствора белка. После этого долить различное количество воды так, как это указано в приведенной форме, а затем в первые восемь пробирок добавить возрастающий объем насыщенного раствора сернокислого аммония, а в девятую твердой соли (МН4)2304 до полного насыщения. [c.178]

Белки чрезвычайно разнообразны. При переходе от одного белка к другому не только и зменяется качественный и количественный аминокислотный состав, но наблюдаются также большие различия в ф изико-химических свойствах. Многие белки, подобно альбуминам, образуют в воде коллоидные растворы другие, например глобулины, не растворяются в воде, но растворимы в растворах нейтральных солей (поваренная соль и др.) кератин, эластин, фиброин и аналогичные им белки характеризуются полной нерастворимостью. Между белками, образующими коллоидные растворы, в свою очередь, существуют различия в отношении способности к высаливанию и осаждению. Эти различия в растворимости используются для разделения белков наряду с описанными [c.395]

ЛИОТРОПНЫЕ РЯДЫ — ряды, в которых ионы последовательно располагаются по величине их влияния на свойства растворителя в растворе или дисперсионной среды в дисперсной системе. Например, Л. р. ионов, размещенных по их возрастающему влиянию на вязкость и поверхностное натяжение Еодных растворов, на растворимость в воде, на набухание высокомолекулярных веществ (белков, пектинов, агар-агара, крахмала и др.), на застудневание водных растворов таких веществ, а также их высаливание из растворов и т. д. Расположение ионов в Л. р. зависит от их способности связывать воду, которую они отнимают от гидратированных молекул, растворенного вещества или частиц дисперсной фазы. Наиболее изучен ряд неорганических анионов SQ2-, F-, 107, Br0 , l-, 10J-, Вг- <0 и т.д., менее четко выражено отличие в Л. р. однозарядных Li+, Na+, К" , Rb+ и двузарядных Mg +, a +, Sг , Ba + катионов. Впервые Л. р. по высаливаншо яичного альбумина натриевыми солями различных кислот был установлен R 1888 г. Г. Гофмейстером. Процессы ьысаливания имеют большое практическое значение в технологии многих производств. [c.148]

Для высаливания альбумина в фильтрат добавляют тонко измельченного сернокислого аммония до насыщения, т. е. до тех пор, пока новая порция порошка останется нерастворенной. Выпадает осадок альбумина. [c.21]

В то время как одни белки выпадают из растворов при диализе, другие осаждаются при добавлении нейтральных солей (метод высаливания). Обычная процедура высаливания состоит в предварительном доведении pH раствора до изоэлектрической точки осаждаемого белка, ибо в изоэлектрическом состоянии растворимость белков минимальна. Затем к перемешиваемому белковому раствору добавляют насыщенный раствор соли (или твердую соль) до тех пор, пока не появится легкая опалесценция. После этого раствор оставляют при комнатной температуре или в рефрижераторе. Если концентрация солей очень высока, часто можно работать при комнатной температуре, так как в этих условиях размножение бактерий резко заторможено. Для осаждения белков чаще всего употребляют сернокислый натрий или сернокислый аммоний. Так, например, если доведенные до изоэлектрической точки растворы сывороточного или яичного альбумина обработать сульфатом аммония [9] или сульфатом натрия [10], то происходит медленное образование кристаллов альбумина, которые оседают на дно сосуда. Образование кристаллов обусловлено медленным испарением раствора. При избытке соли образуется аморфный осадок белка. В таких случаях кристаллы белка можно получить путем диализа белкового раствора против насыщенного раствора сернокислого аммония. [c.12]

Одним из распространенных способов разделения белков на фракции является высаливание (стр. 14). Для этого применяют большей частью сернокислый аммоний в различных концентрациях. После прибавления к раствору белка (например, сыворотки крови) сернокислого аммония до полунасыщения вьшадает фракция белков, которая носит название глобулинов. Если отфильтровать глобулины и к фильтрату продолжать прибавлять сернокислый аммоний до полного насыщения, вьшадает осадок, получивший название фракции альбуминов. Изучение альбуминов и глобулинов обнаружило разницу в их физико-химических свойствах. Оказалось, что их растворимость в воде, также как в растворах солей неодинакова альбумины растворяются в дистиллированной воде, тогда как глобулины обычно растворяются в воде только в присутствии небольшого количества солей. На основании этого отделение глобулинов от альбуминов может быть произведено и путем диализа белкового раствора. В этом случае электролиты, удерживающие глобулины в растворе, проходят через полупроницаемую мембрану. По мере обеднения раствора солями глобулины выпадают в осадок, а альбумины остаются в растворе. Точно так же при большом разбавлении растворов белка (например, сыворотки крови) дистиллированной водой сыворотка мутнеет и в осадок выпадают глобулины вследствие понижения концентрации электролитов ниже той границы, при которой глобулины могут оставаться в растворенном состоянии. В табл. 5 приведены данные о растворимости альбуминов и глобулинов. [c.50]

Высаливание белков концентрированными растворами ЫагЗО или (NH4)2S04 применяется при выделении ферментов из экстрактов тканей и является одним из методов фракционирования белковых смесей на альбумины и глобулины. Растворимость белков уменьшается также при добавлении дегидратирующих веществ (спирта, ацетона). [c.114]

Возможность отделения глобулинов от альбуминов путем высаливания сернокислым натрием или сернокислым аммонием имеет и большое практическое значение. Этот метод используется, например, при производстве так называемых очищенных и концентрированных лечебных сывороток. [c.52]

В этом разделе будут в широком аспекте рассмотрены два опубликованных обзора [119, 75]. Совокупность, которую принято называть растворимыми белками, оказывается разнородной, даже если альбумины и глобулины рассматривать по отдельности. Их можно фракционировать, а некоторые компоненты — очищать методами, традиционно применяемыми для белков, среди которых наиболее популярными являются высаливание сульфатом аммония, ионообменная хроматография и препаративный электрофорез. [c.181]

Первые попытки разделения белков плазмы были основаны на фракционном осаждении их сульфатом аммония или спиртом. Фибриноген легко может быть получен методом высаливания. Электрофоретический анализ кровяной сыворотки показывает наличие в ней четырех основных фракций, названных альбумином и а-, р- и Y- Глoбyл и нa-ми. С улучшением техники разделения было показано, что эти фракции являются не индивидуальными белками, а группами белков, обладающими одинаковылш подвижностями. Дальнейшие успехи, достигнутые в период второй мировой войны Коном и Эдсоллом , были стимулированы большим спросом на пла шу, необходимую для предотвращения шока, зависящего от поддержания осмотического давления белками сыворотки. Цельная плазма содержит протеолитические ферменты, которые в большой мере расщепляют белки плазмы, поэтому получение белковой фракции крови в сухом виде сулило большие преимущества. [c.670]

Высаливание. При добавлении растворов солей щелочных и щелочноземельных металлов происходит осаждение белков из раствора. Обычно белок не теряет способности растворяться вновь в воде после удаления солей методами диализа или гельхроматографии. Высаливанием белков обычно пользуются в клинической практике при анализе белков сыворотки крови и других биологических жидкостей, а также в препаративной энзимологии для предварительного осаждения и удаления балластных белков или выделения исследуемого фермента. Различные белки высаливаются из растворов при разных концентрациях нейтральных растворов сульфата аммония. Поэтому метод нашел широкое применение в клинике для разделения глобулинов (выпадают в осадок при 50% насыщении) и альбуминов (выпадают при 100% насыщении). [c.26]

Фракционирование белков высаливанием не свободно от недостатков. Оно не дает достаточно четкого разде тения индивидуальных компонентов смеси. Концентрации солей, осаждающие ту или иную фракцию белков нормальной сыворотки, могут отличаться от концентраций, необходимых для фракционирования сывороток, содержащих патологические белки и т. д. Несмотря на это, до сих пор высаливание широко используется в клинических лабораториях для разделения глобулинов и альбумина, так как этот прием является относительно простым и быстрым способом определения альбумин-глобулинового коэффициента (А/Г-коэффициент). [c.8]

Из 9—10% сухого остатка плазмы крови на долю белков приходится 6,5—8,5%. Используя метод высаливания нейтральными солями, белки плазмы крови можно разделить на три группы альбумины, глобулины и фибриноген. Нормальное содержание альбуминов в плазме крови составляет 40—50 г/л, глобулинов —20—30 г/л, фибриногена—2,4 г/л. Плазма крови, лишенная фибриногена, называется сывороткой. [c.568]

Можно сказать, что в этом случае происходит борьба за воду между макромолекулами и ионами. Критические концентрации высаливания обычно на 3—5 порядков превышают пороги коагуляции и измеряются уже не в миллимолях, а в молях на литр. Высаливающее действие не связано однозначно с зарядом иона, поскольку оно определяется дегидратирующей функцией. Однако многочисленные исследования показали, что наибольшее влияние на высаливание оказывает заряд аниона. Ниже приведены концентрации некоторых солей различных кислот, вызывающие высаливание яич-иого альбумина из водных растворов [c.303]

Также различно относятся они к высаливанию. Глобулин можно высолить раствором сернокислого магния, который не высаливает молочного альбумина. [c.69]

Метод высаливания, как известно, позволяет разделить сыворотку на три фракции альбумин, эуглобулин и псевдоглобулин. С введением электрофореза стало возможным выделять для повседневного клинического анализа по меньшей мере пять белковых фракций сыворотки альбумин, а-1 -,а-2-,р- и 7-глобулины. [c.9]

Содержимое пробирок отфильтровывают через бумажные фильтры. В фильтратах—альбумины. Фильтраты подкисляют 17о-ным раствором уксусной кислоты — пояиляются осадки альбуминов. Их отфилмровыиают, а в фильтратах с помоп ыо биуретовой реакции доказывают отсутствие белка. Осаждение белков путем высаливания применяется в промышленности. [c.21]

Хотя различная растворимость белков в тех или иных растворителях неоднократно использовалась для их классификации, тем не менее ни одна из предложенных до сих пор схем классификации не может считаться достаточно удовлетворительной. Впервые фракционирование растворимых белков было произведено путем высаливания сернокислым аммонием [1]. Фракция, осаждаемая сернокислым аммонием при полунасыщении раствора, была названа глобулином фракция, осаждаемая сернокислым аммонием при более высоком проценте насыщения, получила название альбумина. [c.171]

Работа 9. Высаливание и денатурация яичного альбумина [c.173]

Числа, поставленные под названиями анионов, показывают ту концентрацию в молях натриевой соли соответствующего аниона, которая производит высаливание нейтрального яичного альбумина. Роданид и иодид практически и при очень больших концентрациях не дают высаливания. Такой ряд назван лио-т р о п н ы м. Лиотропное действие связано с гидратацией ионов чем больше требуется воды для гидратации иона, тем меньше воды остается на растворимость вещества и тем легче происходит высаливание. В аналогичный ряд располагаются и катионы [c.348]

Л. р, по высаливанию яичного альбумина натриевыми солями различных кислот был установлен Г. Гофмейстером (1888). Он определял наименьшие концентрации натриевой соли, вызывающие помутнение р-ра альбумина полученные им концентрации (в скобках) представлены в ряду анионов цитрат (0,5С) тартрат (0,78) сульфат (0,80) ацетат (1,69) хлорид (3,62) нитрат (5,42) хлорат (5,52) иодид роданид. [c.486]

В 1878 г. Хаммарстену удалось с помощью высаливания насыщенным сульфатом магния отделить глобулины от альбуминов сыворотки. Это открытие резко изменило существовавшее тогда представление о сывороточных белках. Применение сульфата магния положило начало целой серии методов фракционирования белков путем высаливания. В течение нескольких десятилетий процедура высаливания была единственно доступной как в клинических, так и в научных исследованиях белков крови. На этом этапе сывороточные белки крови были охарактеризованы по их растворимости в воде и в растворах солей разной концентрации. На основании этих данных стали различать нерастворимую в воде фракцию— эуглобулин и расгворшые — псевдоглобулин и альбумин. [c.8]

Осадок альбумина центрифугируют и переносят в чистую воду. После взбалтывания в воде альбумин растворяется, чем доказывается обратимость высаливания. [c.173]

Водную вытяжку фильтруют через тройной слой марли.. Остаток мышечной ткани сохраняют для получения солевой, вытяжки, а с фильтратом проделывают биуретовую реакцию, (см., стр. 9), высаливание альбуминов сернокислым аммоли--ем (см. стр. 37) и гваяковую пробу на присутствие миоглоби-, на (см. стр. 52). [c.249]

Заряд некоторых коллоидов невелик, и иногда он бывает положителен в кислом и отрицателен в щелочном растворах. Коллоиды с небольшим электрическим зарядом не осаждаются разбавленными растворами электролитов. Эти коллоиды оса-, Ждаются при нагревании или с помощью какого-либо другого Метода дегидратации, как, например, путем прибавления концентрированных растворов солей (м-етод высаливания) или путем добавления другого растворителя, например спирта. Коллоиды, соторые не чувствительны к осаждающему действию электролитов, часто ведут себя в качестве защитных коллоидов, препятствуя осаждению других веществ. Так, дубильная кислота, желатина и альбумин действуют как защитные агенты, вероятно, путем образования защитных -пленок. [c.79]

Извлечение глобулинов. Остаток муки после выделения альбуминов обрабатывают в ступке 3 мл 10% раствора хлористого натрия и после отстаивания фильтруют. С фильтратом, содержащим глобулин, проделывают биурето-вую реакцию и реакцию высаливания (см. стр. 9 и 37). [c.286]

Белок одного яйца растворяют в 60 мл дестиллированной воды. Раствор отстаивают в течение 2 час. и отфильтровывают от выпавших волокнистых примесей. Фильтрование проводят через бумажный фильтр в вакуумной воронке, соединенной с водоструйным насосом. От фильтрата отбирают две части по 25 мл в каждой. В первую часть раствора добавляют небольшими порциями порошок сернокислого аммония и раствор тщательно взбалтывают до полного растворения каждой порции. После того как концентрация солн достигнет определенной значительной величины, из раствора начнет выделяться альбумин в виде хлопьев или сгустков. Сопоставить количество соли, необходимое для высаливания альбумина и коагуляции коллоидов. [c.173]

Кроме этих белков, в молоке были найдены и некоторые другие белки. К ним следует причислить опализин, выделенный из сыворотки женского молока высаливанием хлористым натрием. Имеются также указания на присутствие в молоке белка, похожего на проламин. Однако эти белки (кроме казеиногена, альбумина и глобулина) находятся в молоке в весьма незначительных количествах и в настоящее время мало изучены. [c.319]

Первые работы по применению правила фаз к растворам полимеров относятся к 1912 г. в качестве объекта исследования были взяты белковые вещества яичный и сывороточный альбумин и желатин. Наибольшее значение в этой области имели работы Зеренсена- и Мак Бена , которые изучали процессы высаливания белков и желатина из водных растворов солями N3. 804, (ЫН4)2304, KNOз, КаМО.- и т. д. Мак Бен писал, что растворы желатина термодинамически устойчивы в том смысле, в каком устойчивы кристаллы или растворы сахара и соли . Несмотря на наличие таких указаний, растворы желатина, так же как и других полимеров, очень долго считались коллоидными, агрегативно и термодинамически неустойчивы.ми системами. [c.306]

Далее, на колонке аналогичной смолы, но уже с низкой степенью сшивки, адсорбируют фермент. Для этого лучше всего применять Какен С-1 (SP-3) , но можно и дуолит С-10 или S-30. Ферментный белок затем очищают вытеснительной хроматографией, высаливанием сульфатом аммония и осаждением ацетоном, после чего, в случае надобности, кристаллизуют. Выход фермента по активности 5—15%. Он расщепляет в казеине — 75% пептидных связей, в клейковине пшеницы —80%, а в яичном альбумине— 87%. Большое значение для стабильности протеазы имеет присутствие в растворах иона Са, обычно прибавляемого в виде Са-ацетата. [c.208]

Этим обстоятельством воспользовались для электрофоретического анализа белкового состава биологических жидкостей. Давно было известно, что сыворотка крови неоднородна и состоит, по крайней мере, из двух белков — альбумина и глобулина, причем последний также не является однородным компонентом крови. Наличие различных фракций сыворотки устанавливалось путем высаливания ртдельных белков различными концентрациями соответствующих солей. Анализ выделенных фракций показал, что альбумин и глобулин отличаются своими изоэлектрическими пунктами. Поэтому при электрофоретическом анализе сыворотки, имеющей pH выше 7, эти белки, заряжаясь отрицательно, должны передвигаться к аноду с различной скоростью в силу различной величины своих зарядов. [c.278]

Белки типа альбумина и глобулина можно выделить не только из жидкостей тела, но такл<е и из различных органов. В этих случаях желательно предварительно удалить кровь из органов путем перфузии их изотоническим раствором хлористого натрия. Обескровленный орган после размельчения и растирания подвергается экстракции растворами хлористого натрия или буферными растворами. Белки, полученные таким способом из мышцы, описаны в разделе Мышечные белки . Многие из белков, выделенные из органов, обладают ферментативной активностью они будут рассмотрены в гл. XII. Белковые гормоны, выделенные из эндокринных желез, рассматриваются в гл. XIV. Экстракты из органов содержат белки, относящиеся главным образом к глобулинам, т. е. к тем белкам, которые выпадают в осадок при нодкислении растворов, при высаливании или при диализе против дестиллированной воды. В подобных экстрактах редко можно обнаружить белки типа альбумина. Так, например, 51,5% всего количества белков хрусталика глаза составляет глобулин и только 0,5% —альбумин остальные 48% приходятся на долю нерастворимого белка — склеропротеина. Из фракции глобулинов хрусталика выделены два белка, названные а- и -кристал-линамн [161]. [c.195]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология