Хроматографическое пятно форма

Рис. 6-8. Пептидная карта, полученная после расщепления нормального гемоглобина человека трипсином. Каждое пятно содержит один из пептидов. Чтобы получить такую двумерную карту, смесь пептидов наносят на лист бумаги квадратной формы, проводят электрофорез в одном направлении, параллельном одной из сторон квадрата, после чего бумагу высушивают, а затем проводят хроматографическое разделение пептидов в другом направлении, перпендикулярном первому. Ни один из этих двух процессов в отдельности не позволяет разделить пептиды полностью, однако последовательное их осуществление оказывается очень эффективным способом разделения сложных пептидных смесей.

Существенный недостаток количественных методов анализа тонкослойных хроматограмм, основанных на измерении пропускания света, был связан с нелинейной зависимостью сигнала оптического детектора от количества вещества в хроматографическом пятне. Эта нелинейность обусловлена специфическим законом прохождения света в рассеивающей среде, описываемым уравнением Кубелки — Мунка, и неоднородностью пластины по толщине слоя адсорбента. Последнюю можно учесть, измеряя оптические свойства подложки непосредственно в хроматографическом пятне. Использование двухволнового метода спектрофотометрического детектирования, когда излучение одной волны Л поглощается и веществом, и адсорбентом, а другой волны Лг — только адсорбентом, позволяет выделить сигнал, связанный с поглощением излучения только анализируемым веществом. Дальнейшая обработка сигнала детектора в соответствии с уравнением Кубелки — Мунка позволяет линеаризовать зависимость оптического сигнала от количества вещества в ТСХ. Поглощение света адсорбентом может быть учтено также при спектрофотометрическом сканировании пластины на просвет и отражение. Эти принципы реализованы в лучших современных зарубежных денситометрах — флуориметрах. Менее точным, но более простым решением является линеаризация зависимости сигнал — вещество с помощью двойного логарифмирования (с использованием ЭВМ). В результате этих усовершенствований воспроизводимость результатов в современной количественной ВЭТСХ приближается к 1%. Использование двухкоординатного сканирования в случае эллипсовидных пятен (двумерное размывание зон в ТСХ) и многошагового сканирования пятен неправильной формы (дву- [c.370]

Хроматографические пятна в ТСХ (при гауссовом распределении вещества в них) имеют форму эллипса [c.268]

Рис. УП1.15. Зависимость формы хроматографического пятна при ТСХ полистирола с =2-10 а, б, в) и М- =4-105 (г, д, е) в системе циклогексан — бензол — ацетон при соотношении растворителей 12 4 0,25 (а, г), 12 4 0,5 б, д), 12 4 1 (в, е) от содержания вещества в пятне

Рис. 111.16. Зависимость формы хроматографического пятна полистирола от вида ТСХ

Рис. 111.18. Форма хроматографического пятна образцов полистирола (Мш = 8,7 X X 10 ) в бензоле на силикагеле КСК

Для разделения сополимеров близкого состава использовались слабо градиентные хроматографические системы, содержащие серный эфир, ме-тилкетон (рис. 21, 6). Эффективность ТСХ сополимеров столь высокая, что позволяет установить появление неоднородности у сополимеров азео-тропного состава при увеличении глубины конверсии. При ТСХ сополимеров СТ — ММА концентрационная зависимость формы хроматографического пятна имеет тот же характер, что и у ПС. [c.157]

В качестве растворителя в настоящей работе используется раствор 87% по объему ацетона (или изобутилового спирта), 8% концентрированной соляной кислоты и 5% воды. Изучите влияние изменения концентраций компонентов смеси на показатели хроматографического разделения катионов. Считается, что чем выше концентрация воды, тем больше скорость продвижения пятна. Проверьте это утверждение. Объясните его причину. Изучите влияние концентраций других компонентов на скорость продвижения пятен и фронта растворителя, на размеры и форму пятен и т. п. [c.442]

Тонкослойная хроматография реализуется либо с помощью закрепления сухого слоя пористого мелкогранулированного носителя неподвижной фазы толщиной 0,1—0,5 мм на одной стороне прямоугольной подложки (стеклянной, пластиковой или из алюминиевой фольги), либо на полосках крупнопористой ацетилцеллюлозы. Хроматографический процесс начинается с нанесения вблизи одного из концов пластинки (на старте ) раствора препарата в виде круглого пятна малого диаметра или тонкой полоски так, чтобы раствор полностью впитался пористым материалом носителя. Тем же концом пластинку или полоску погружают в слой жидкого элюента, налитый на дно сосуда прямоугольной формы, следя за тем, чтобы свободный уровень элюента не достигал находящегося на старте препарата (в горизонтальном варианте ТСХ на пластинку накладывают фитиль). Под действием капиллярных сил элюент начинает двигаться по всей ширине пластинки или полоски к противоположному ее концу, фронт его проходит область старта и двигается дальше, а в токе жидкости за фронтом осуществляется знакомый нам хроматографический процесс. [c.459]

Дальнейшим усовершенствованием является метод двумерной хроматографии на бумаге. Преимущество этого метода основано на том, что вещества имеют различные значения в разных растворителях. Смесь наносят сначала в угол листа фильтровальной бумаги квадратной формы, и производят хроматографирование в одном направлении. Полученные при этом пятна подвергают хроматографическому разделению в другом растворителе, повернув лист бумаги на 90° (т. е. чтобы фронт двигался в направлении, перпендикулярном движению фронта при первом хроматографировании). Для более быстрого разделения применяют метод круговой хроматографии на бумаге анализируемую смесь помещают в центр круглого листа фильтровальной бумаги, вырезают тонкую полосу по радиусу и погружают ее в растворитель. При этом полоска работает как фитиль. Вещества разделяются в виде концентрических кругов. Количество вещества, которое может быть подвергнуто разделению на круглом листе обычной фильтровальной бумаги (ватман № 1), составляет 1—50 мкг, причем скорость перемещения фронта растворителя может быть повышена центрифугированием. При работе с большими количествами веществ, бумага перегружается и образуются шлейфы и хвосты . Меньшие же количества веществ трудно обнаружить. В количествах до 1 мг вещества можно разделять, нанося смесь в виде полос параллельно краю куска бумаги при этом вместо пятен получаются полосы. Для препаративного разделения можно использовать также толстую бумагу (например, ватман № 3). [c.22]

Методы, основанные на измерении размера пятна. В обычной ТСХ широкое распространение получили полуколичественные методы, основанные на измерении параметров, характеризуюш,их форму (геометрию) хроматографических зон. Эмпирически было установлено, что в пределах величин, обычно встречающихся в ТСХ, существует линейная зависимость [c.369]

Электрофоретические разделения на полосах бумаги. Эксперименты проводятся во влажной камере на хроматографическом ватмане, смоченном каким-либо электролитом, содержащим комплексообразующий агент. Под действием электрического поля с градиентом 5—15 в см вещество из исходного пятна мигрирует к соответствующему электроду со скоростью, определяемой характером ионных форм и их соотношением, т. е., в конечном счете, концентрацией комплексообразующего агента и pH среды. После снятия электрического поля на полосе остаются разделенные зоны отдельных компонентов или их групп, которые соответствующим образом обнаруживаются и идентифицируются. [c.148]

Эфедрин (hRf 49) тоже не может быть подвергнут хроматографическому анализу с Основным растворителем (табл. 46). При использовании растворителя хлороформ—"метанол — ледяная уксусная кислота (25 + 65 + 10) пятно имеет круглую форму и окрашивается 2,7-дихлорфлуоресцеином (реактив № 42). [c.287]

Ход определения. Сначала находят, как и при анализе методом А , значения отдельных фенолов. Для этого на стартовую линию увлажненной бумаги наносят калиброванной пипеткой капли растворов отдельных фенолов. Бумагу свертывают в цилиндр и закрепляют в этой форме, соединяя язычки вверху и внизу обычными канцелярскими скрепками. Затем цилиндр помещают в камеру и проводят хроматографическое разделение при 5—7 °С, для чего камеру помещают % холодильник. Через 45—60 мин растворитель достигает верхней линии. Тогда хроматограмму извлекают из сосуда, быстро подсушивают на воздухе и сразу же опрыскивают раствором диазотированного п-нитроанилина, пользуясь распылителем, показанным на рис. 21. Появляются окрашенные пятна. Разделив расстояния от стартовой линии до пятен на путь, пройденный растворителем, получают значения отдельных фенолов. [c.236]

На подготовленный лист хроматографической бумаги марки М наносили этанольный раствор суммы алкалоидов. Хроматографирование проводили восходящим способом в системе растворителей хлороформ — изопропиловый спирт (20 1), насыщенной форма-мидом. Пятно серпентина на хроматограмме было обнаружено в У(] -свете по интенсивной сине-фиолетовой флуоресценции. [c.239]

Метод многократного сканирования желательно использовать при денситометрии хроматографических пятен неправильной, отличной от (Vn.21) формы, а при раздельной записи каждого сканирования по оси у — для отыскания распределения вещества вдоль этой оси и сравнения его количества в разных пятнах. [c.273]

По новейшим исследованиям фильтровальная бумага не является совершенно инертной по отношению к реагентам. При изготовлении бумаги образуются в составе вещества бумаги карбоксильные группы (—СООН), что обусловливает отрицательные заряды волокон бумаги и некоторую способность к обмену ионов водорода (гидроксония) карбоксильной группы на катионы различных металлов. Небольшие следы растительных масел, находящиеся на волокнах бумаги, искажают границы расплывающегося (распространяющегося) по бумаге влажного пятна, что нарушает правильную, округлую форму пятен, получаемых при капельном или хроматографическом анализе. [c.146]

Присутствие же большого избытка основного компонента может иногда изменить хроматографическое поведение малого количества примеси. Обычно это связано с изменением конечной площади пятна или его формы, но в крайнем случае может также меняться расстояние, на которое продвигается примесь. Например, в присутствии большого избытка основного компонента по отношению к исследуемой примеси последняя имеет одно значение R , в отсутствие же основного компонента идентичное количество исследуемой примеси будет иметь уже другое значение я , причем я < я . [c.268]

При определении микропримесей, когда макрокомпонент идет первым, выгодно для уменьшения концентрационных эффектов понизить концентрацию макрокомпонента в максимуме. Для этого используют метод г с размыванием хроматографического пятна в поперечном направлении. Последнее осуществляется при использовании тонкослойных пластинок такой геометрической формы, когда в определенной зоне поток элюента направлен под углом к направлению движения разделяемых компонентов. Эти условия, например, достигаются, когда сорбент нанесен на пластинку в виде конуса с вершиной в точке старта (рис. 2). [c.87]

VliL 5. Зависимость формы хроматографического пятна при ТСХ от концентрации полимера [c.305]

Известно, что вид изотермы адсорбции определяет форму хроматографической зоны [31]. Для слабой адсорбируемости (R 1) характерна вогнутая изотерма адсорбции. В этом случае нри увеличении концентрации хроматографическое пятно вытягивается вниз. Для сильной адсорбируемости R 0) характерна выпуклая изотерма адсорбции. Здесь при увеличении концентрации хроматографическое пятно вытягивается вверх. При Rf Vg изотерма адсорбции близка к линейной и форма хроматографического пятна мало зависит от концентрации (рис. VIII.15). Двумерное размывание в ТСХ приводит к дополнительным концентрационным эффектам. По бокам хроматографической зоны концентрация вещества за счет размывания уменьшается и скорость его движения определяется коэффициентом распределения, иным, чем в центральной зоне. В результате пятно приобретает заостренную форму острием вверх — при адсорбционной и острием назад — при осадительной ТСХ (рис. VIII.16). [c.305]

Имеются и другие специфические для высокополимеров концентрационные эффекты, определяющие форму хроматографического пятна. Один из них связан с осаждением полимера, которое происходит, если на пластинке имеется градиент элюента с постепенным уменьшением соотношения растворитель — осадитель. В результате, чем выше концентрация полимера в хроматографическом пятне, тем ниже концентрация осадителя, соответствующая порогу растворимости полимера, и тем больше вытянуто это пятно (рис. VIII.17) в направлении, обратном движению по пластинке. Этот эффект напоминает влияние вогнутой изотермы адсорбции на форму хроматографического пятна, хотя и определяется иными причинами, связанными с осаждением полимера в условиях градиентной ТСХ. [c.305]

Форма хроматографического пятна в ТСХ полимеров зависит также от особенностей вязкого течения раствора полимера по пластинке. В центре пятна скорость растворителя минимальна. В периферийных областях она увеличивается и достигает максимума в промежутках между хро1матографическими пятнами. В результате пятно приобретает каплеобразную форму (рис. VIII.18), характерную для струи, образующейся при обтекании препятствия вязкой жидкостью [56]. При этом задняя граница пятна дополнительно обостряется набегающим потоком жидкости, который препятствует диффузионному размыванию пятна, в то время как в передней части зоны скорость диффундирующих молекул [c.305]

Следует обратить внимание на соответствие Bf хроматографических зон для ПЭО с разными М (см. рис. VIII.24). Это полимергомологи с одинаковым числом звеньев N. Серповидная форма хроматографических пятен (см. рис. VIII.24а) связана с концентрационной зависимостью адсорбируемости полиолов, характеризуемой выпуклой изотермой адсорбции, при которой с увеличением концентрации Bf увеличивается. Следовательно, В/ боковых крыльев хроматографического пятна, где концентрация вещества уменьшается, будет меньше, чем Bf центральной части зоны полимера. В результате хроматографическое пятно приобретает своеобразную форму с резко очерченным носиком , значение Rf которого относительно В крыльев пятна может быть использовано для количественного анализа. [c.318]

Из двух последних уравнений наибольший интерес представляет (VIII.25), так как для его использования требуется лишь одна хроматограмма и, следовательно, отсутствуют погрешности, связанные с неточностью нанесения на пластинку рассчитанных количеств полимера и (За и с концентрационными эффектами, искажаюш,ими форму хроматографического пятна. Для использования уравнения (VIII.25) необходимо знание 1)гр и >гр. С этой целью был разработан эквидепситный способ получения изображений хроматографического пятна, основанный на хорошо известном в фотографии явлении Сабатье [86], которое заключается [c.324]

Из решения (8 ) следует, что хроматографические пятна в плоскости пластинки имеют эллиптическую форму, поскольку уравнение изокон-центрациопной линии с предельно регистрируемой величиной концентрации Сгр есть уравнение эллипса [c.138]

При своеобразном способе нанесения исследуемого материала на хроматографическую бумагу с помощью полиэтиленовой пленки дном нагретой на пламени стеклянной пробирки в пленке делают несколько углублений, в которые вносят примерно по 0,05 мл исследуемого материала, например кислотного гидролизата белка. На одной пленке можно разместить 3—5 проб (фиг. 39). Очень осторожно, остерегаясь размазать капли, пленку переносят для высушивания в вакуумный эксикатор. Примерно через 10—15 мин, когда капли подсохнут, пленку извлекают и на край каждого высохшего пятна наносят маленькую каплю воды заостренным концом стеклянной палочки, с помощью которой растворяют весь материал в этой капле. Лист хроматографической бумаги кладут на чистое стекло и отмечают карандашом места нанесения материала.Затем к этому участку бумаги прикладывают полиэтиленовую пленку с исследуемым материалом и с обратной стороны прижимают ее к бумаге пальцем. Если при этом площадь смоченной бумаги будет не больше 1 см , то в результате хроматографии исследуемый материал распределится небольшими пяхнами правильной формы. Этот метод нанесения обладает большими преимуществами в течение нескольких минут можно без потерь нанести 20—30 образцов. При этом отпадает необходимость готовить и мыть капилляры, применять при нанесении высушивание горячим воздухом и т. д. [c.190]

Примечание. Лишь немногие алкалоиды нестабильны в рекомендованных оснбвных растворителях. Четвертичные основания, например берберин, в таких средах обладают несколькими стабильными формами с различной растворимостью, вследствие чего при хроматографическом разделении возникают размытые пятна. Поэтому в случае четвертичных оснований диэтиламин заменяют ледяаой уксусной кислотой. [c.287]

Гораздо более удовлетворительные результаты получаются при использовании третьего приема наносится определенное количество исследуемой примеси и полученное при испытании пятно сравнивается с соответствующим пятном образца. Это более трудный путь, так как он требует знания идентичности примесей и применения стандарта сравнения. В идеальном случае примесь должна быть добавлена к исследуемому образцу высокой чистоты их следует наносить на пластинку при тех л<е самых соотношениях, так как присутствие большого избытка основного компонента может иногда изменить хроматографическое поведение малого количества примеси. Обычно это связано с изменением конечной площади пятна или его формы, но в крайнем случае может также меняться расстояние, на которое продвигается примесь. Например, это относится к дихлорофену, в котором 4-хлорфенол является возможной примесью. Например, в присутствии 99-кратного избытка дихлорофена хлорфенол в толуоле продвигается на пластинке с силикагелем с 0,2. В отсутствие основного компонента такое же количество хлорфенола будет иметь / / только около 0,1. [c.145]

Идентификация а-кетокислот в биологическом материале сопряжена с трудностями вследствие нестабильности многих а-кетокислот. Хорошие результаты дает разделение гидразонов а-кетокислот при помощи хроматографического метода. Однако 2,4-динитрофенилгидразон а-кетокислоты в ряде случаев дает на хроматограммах 2 пятна, которые, по-видимому соответствуют син- и анты-формам гидразона [c.103]

Целлюлоза, как и полиамиды, относится к числу наиболее часто применяемых органических сорбентов, особенно в распределительной хроматографии. В ТСХ используют два типа целлюлозы — природную волокнистую и микрокристаллическую. Длина волокон природной целлюлозы составляет от 2 до 25 мкм, а средняя степень полимеризации колеблется между 400 и 500. Частицы микрокристаллической целлюлозы крупнее—от 20 до 40 мкм, а средняя степень полимеризации ниже—между 40 и 200. Благодаря применению очень коротких волокон целлюлозы в форме порошка в ТСХ не получается такое быстрое растекание хроматографируемых веществ вдоль волокон, которое имеет место на целлюлозе, иопользуемой в в>и-де хроматографической бумаги, и поэтому при одних и тех же концентрациях ТСХ дает более четкие пятна и позволяет получить лучшее разделение, чем БХ. Микрокристаллическая целлюлоза химически чище, чем природная целлюлоза, хотя некоторые марки последней, например MN 300 HR, вполне сравнимы по чистоте с микрокристаллической целлюлозой. На чистой щеллюлозе проводят главным образом количественный анализ или разделение фосфорных кислот, фосфатов и т. п. Большинство марок товарной целлюлозы выпускают без связующего, поскольку адгезионные свойства ее слоев намного выше, чем у неорганических сорбентов. В некоторые марки этого адсорбента добавляют флуоресцентный индикатор. Добавка гипса может даже оказать отрицательное влияние, как, например, при разделении аминокислот, но иногда может и улучшить разделение. [c.104]

Концентрация пробы в растворе составляет 0,1—1%. Объем нанесенной пробы подбирают в зависимости от чувствительности обнаружения обычно он составляет I—10 мкл, хотя иногда наносят и большие количества. Рекомендуется, однако, наносить как можно меньшее количество пробы четкость разделения при этом увеличивается, а форма нанесенных пятен приближается к идеально круглой. Пробу наносят на расстоянии 1,5—2 см от нижнего края хроматографической пластинки, лучше всего с помощью прозрачного пластмассового шаблона для нанесения проб, так как в этом случае пробы располагаются на одной прямой и интервалы между ними равны. Расстояние между нанесенными пробами зависит от числа проб, но обычно составляет от 1,5 до 2 см. Для микроопределений расстояние между отдельными пробами может быть меньше. При нанесении пробы следует осторожно коснуться поверхности слоя кончиком пипетки и дать раствору впитаться в слой. Пробы можно наносить в виде или круглых пятен, или коротких узких полосок. Нанесение проб в виде точек может иногда привести к чрезмерному концентрированию нанесенных соединений, особенно если они растворены в неполярном растворителе, а в итоге — к образоваию хвостов , особенно при хроматографировании в таких системах, где хроматографируемые соединения плохо растворимы. В этих случаях рекомендуется нанести на концентрированное пятно каплю более полярного растворителя, или распределить пробу по большей площади, или [c.112]

После нанесения пробы хроматограмму вкладывают в хроматографическую камеру и начинают элюирование. При этом необходимо знать, какое количество вещества неподвижной фазы содержится в подвижной фазе, которая используется для элюирования. Гидрофильные элюенты, чаще всего на основе бутанола, или даже однофазные элюенты (например, смесь изопропиловый спирт — вода) содержат такое количество воды, что в ходе элюирования бумага может впитать из них необходимую воду и набухнуть. В этом случае хроматографирование можно начинать немедленно и получить в результате пятна также правильной круглой формы это обстоятельство доказывает, что разделение происходит по принципу распределительной хроматографии. Однако, если содержание воды в подвижной фазе невелико, ниже примерно 10% (а это имеет место при использовании таких систем, как бутилацетат — вода, бензол — пропионовая кислота — вода, тетрахлорметан — уксусная кислота — вода, системы Буша и др.), необходимо до начала элюирования ввести в бумагу требуемое количество полярной неподвижной фазы. С этой целью бумагу выдерживают над водой в камере с влажной атмосферой (приведение в равновесие), обрабатывают ее водяным паром, опрыскивают мелкодисперсным аэрозолем, содержащим вещества неподвижной фазы, или пропитывают влажным эфиром по методу Буша и Кроушоу [19]. [c.89]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология